LAMIVUDIN Lamivudinum N NO N H 2 O S HOH 2 C C 8 H 11 N 3 O 3 S P.t.l: 229,3 Lamivudin là (-)-1-[(2R,5S)-2-(hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-5-yl]cystosin, phải chứa từ 98,0 đến 102,0% C 8 H 11 N 3 O 3 S tính theo chế phẩm khan và không có dung môi. Tính chất Bột kết tinh trắng hoặc gần như trắng, tan trong nước. Định tính A. Phương pháp quang phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2). Phổ hồng ngoại của chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại của lamivudin chuẩn (ĐC). B. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (Phụ lục 5.3). Trên sắc ký đồ của dung dịch thử ở phần thử giới hạn đồng phân phải cho pic chính có thời gian lưu tương ứng với pic của lamivudin trên sắc ký đồ của dung dịch kiểm tra độ phân giải. Độ hấp thụ ánh sáng Đo độ hấp thụ của dung dịch chế phẩm trong nước có nồng độ 50,0 mg/ml tại bước sóng 440 nm trong cốc đo có độ dày 4 cm (Phụ lục 4.1). Tính độ hấp thụ riêng của chế phẩm bằng cách chia độ hấp thụ đo được cho nồng độ dung dịch (g/l) và chiều dày cốc đo (cm). Không được quá 0,0015 Nước Không được quá 0,2% (Phụ lục 10.3) Giới hạn đồng phân đối quang của lamivudin Không được quá 0,3%. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (Phụ lục 5.3). Pha động: Dung dịch amoni acetat 0,1 M - methanol (95 : 5). Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 25 mg chế phẩm hòa tan trong nước và pha loãng thành 100,0 ml với cùng dung môi . Dung dịch phân giải: Hòa tan bột trong lọ hỗn hợp phân giải lamivudin A (ĐC) với 5 ml nước. Chuyển dung dịch thu được sang bình định mức dung tích 10 ml, tráng lọ bằng 2 ml nước, chuyển vào bình định mức, thêm nước vừa đủ đến vạch và lắc đều. Điều kiện sắc ký: Cột phân tích (25 cm x 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh silica gel gắn beta cyclodextrin (5 m). Nhiệt độ cột ở 20 o C. Detector quang phổ tử ngoại đặt tại bước sóng 270 nm. Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút. Thể tích tiêm: 10 l. Cách tiến hành: Tiêm dung dịch phân giải, ghi lại sắc ký đồ. Thời gian lưu tương đối của pic đồng phân đối quang lamivudin so với lamivudin khoảng 1,2. Độ phân giải giữa hai pic ít nhất phải bằng 1,5. Tiến hành sắc ký với dung dịch thử, ghi lại sắc ký đồ. Tính toán hàm lượng (%) của đồng phân đối quang lamivudin trong chế phẩm dựa trên diện tích pic tương ứng so với tổng diện tích các pic lamivudin và đồng phân đối quang lamivudin trên sắc ký đồ của dung dịch thử. Dung môi tồn dư Phương pháp sắc ký khí (Phụ lục 5.2). Dung dịch chuẩn nội: Cân chính xác khoảng 80 mg 2-pentanon (TT), cho vào bình định mức dung tích 100 ml, thêm hỗn hợp gồm methyl sulfoxid - nước (1 : 1) vừa đủ đến vạch. Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 5 g chế phẩm cho vào bình định mức dung tích 100 ml, thêm 10,0 ml dung dịch chuẩn nội, hòa tan trong hỗn hợp gồm methyl sulfoxid - nước (1 : 1), thêm hỗn hợp gồm methyl sulfoxid - nước (1 : 1) vừa đủ đến vạch. Dung dịch đối chiếu: Cân chính xác khoảng 100 mg ethanol khan (TT), 100 mg isopropyl acetat (TT), 50 mg methanol (TT) và 50 mg triethylamin (TT) cho vào bình định mức dung tích 100 ml, pha loãng vừa đủ đến vạch với hỗn hợp gồm methyl sulfoxid - nước (1 : 1). Hút 10,0 ml dung dịch thu được cho vào bình định mức dung tích 100 ml, thêm 10,0 ml dung dịch chuẩn nội, thêm hỗn hợp gồm methyl sulfoxid - nước (1 : 1) đến vạch, trộn đều. Điều kiện sắc ký: Cột phân tích (50 m x 0,53 mm) được tráng pha tĩnh là dầu dimethylpolysiloxan với bề dày là 5 m. Khí mang hydro với áp suất 5 psi, đặt ở chế độ chia dòng. Tốc độ dòng khí mang 320 ml/phút. Detector ion hoá ngọn lửa Buồng tiêm đặt ở chế độ chia dòng, thể tích tiêm 0,5 l. Chương trình nhiệt độ: Nhiệt độ cột ban đầu ở 70 o C trong 3 phút, tăng dần nhiệt độ với tốc độ 30 o C/phút tới 200 o C, duy trì nhiệt độ này trong 6,5 phút. Nhiệt độ buồng tiêm duy trì ở 150 o C và nhiệt độ detector duy trì ở 250 o C. Cách tiến hành: Tiêm lần lượt dung dịch đối chiếu và dung dịch thử, ghi lại sắc ký đồ. Tính toán hàm lượng của từng dung môi tồn dư trong chế phẩm dựa vào tỷ lệ diện tích pic đáp ứng giữa chất cần phân tích và chất chuẩn nội thu được từ dung dịch thử và dung dịch chuẩn. Không được quá 0,2% ethanol; 0,2% isopropyl acetat; 0,1% methanol và 0,1% triethylamin. Tổng các dung môi không được quá 0,3%. Tạp chất liên quan Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (Phụ lục 5.3). Dung dịch amoni acetat 0,025 M, pha động, dung dịch phân giải và điều kiện sắc ký giống như phần định lượng. Dung dịch thử: Dung dịch thử ở phần định lượng. Dung dịch acid salicylic đối chiếu: Cân chính xác khoảng 25,0 mg acid salicylic (TT) hoà tan trong vừa đủ 100,0 ml pha động. Pha loãng từng bước để thu được dung dịch có nồng độ 0,25 g/ml với pha động. Cách tiến hành: Tiêm lần lượt 10 l dung dịch acid salicylic đối chiếu và dung dịch thử, ghi lại sắc ký đồ. Tính toán hàm lượng của acid salicylic dựa vào nồng độ acid salicylic, diện tích pic đáp ứng trên sắc ký đồ dung dịch đối chiếu và diện tích pic tương ứng với acid salicylic trên sắc đồ dung dịch thử. Tính toán hàm lượng từng tạp chất khác dựa vào diện tích pic trên sắc ký đồ của dung dịch thử so với tổng diện tích các pic đáp ứng trên sắc đồ của dung dịch thử. Hàm lượng acid salicylic không được quá 0,1%; tạp chất có thời gian lưu tương đối so với lamivudin khoảng 0,4 không được quá 0,3%; tạp chất có thời gian lưu tương đối so với lamivudin khoảng 0,9 không được quá 0,2%. Từng tạp chất khác không được quá 0,1% và tổng các tạp chất không được quá 0,6%. Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (Phụ lục 5.3). Dung dịch amoni acetat 0,025 M: Hòa tan 1,9 g amoni acetat (TT) trong 900 ml nước, điều chỉnh pH đến 3,8 ± 0,2 bằng acid acetic (TT), thêm nước vừa đủ 1000 ml. Pha động: Dung dịch amoni acetat 0,025 M - methanol (95 : 5), điều chỉnh nếu cần thiết. Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 25,0 mg chế phẩm hòa tan trong pha động, pha loãng đến vừa đủ 100,0 ml với cùng dung môi. Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 25,0 mg lamivudin (ĐC) hòa tan trong pha động, pha loãng thành 100,0 ml với cùng dung môi. Dung dịch phân giải: Hòa tan bột trong một lọ hỗn hợp phân giải lamivudin B (ĐC) với 2 ml pha động. Dung dịch acid salicylic: Cân acid salicylic (TT), hòa tan trong pha động để thu được dung dịch có nồng độ 60 µg/ml. Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh là octadecyl silica gel (5 m). Nhiệt độ cột ở 35 o C. Detector tử ngoại đặt tại bước sóng 277 nm. Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút. Thể tích tiêm: 20 l. Cách tiến hành: Tiêm dung dịch phân giải, ghi lại sắc ký đồ. Hệ số phân giải giữa lamivudin và đồng phân không đối quang của lamivudin (có thời gian lưu tương đối so với lamivudin khoảng 0,9) ít nhất phải bằng 1,5. Tiêm dung dịch chuẩn vào cột sắc ký, ghi lại sắc ký đồ. Độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic của 6 lần tiêm lặp lại không được lớn hơn 2,0%. Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn và dung dịch thử với thời gian rửa giải ít nhất phải bằng thời gian lưu của acid salicylic. (Thời gian lưu của acid salicylic được xác định bằng cách tiêm dung dịch acid salicylic). Tính toán hàm lượng của C 8 H 11 N 3 O 3 S trong chế phẩm dựa vào diện tích pic đáp ứng thu được từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn và dựa vào hàm lượng C 8 H 11 N 3 O 3 S của lamivudin chuẩn. Bảo quản Đựng trong đồ bao gói kín, tránh ánh sáng. Nhãn Phải quy định rõ thời hạn sử dụng và điều kiện bảo quản. Loại thuốc Kháng virus. Chế phẩm Viên nén, lọ bột uống. . LAMIVUDIN Lamivudinum N NO N H 2 O S HOH 2 C C 8 H 11 N 3 O 3 S P.t.l: 229,3 Lamivudin là (-)-1-[(2R,5S)-2-(hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-5-yl]cystosin,. lượng (%) của đồng phân đối quang lamivudin trong chế phẩm dựa trên diện tích pic tương ứng so với tổng diện tích các pic lamivudin và đồng phân đối quang lamivudin trên sắc ký đồ của dung. phân giải, ghi lại sắc ký đồ. Hệ số phân giải giữa lamivudin và đồng phân không đối quang của lamivudin (có thời gian lưu tương đối so với lamivudin khoảng 0,9) ít nhất phải bằng 1,5. Tiêm dung