B ăGIỄOăD CăVÀăĐÀOăT O TR NGăĐ IăH CăNỌNGăNGHI PăHÀăN I KIMăVĔNăV N NGHIÊN C U D CH T H C M T SỐ LOÀI U TRÙNG SÁN LÁ TRUY N LÂY QUA CÁ CHÉP (Cyprinus carpio) VÀ BI N PHÁP PHÒNG, TR Chuyên ng̀nh: Ký sinh trùng Vi sinh vật học thú y M̃ ś: 62 64 01 04 TịMăT TăLU NăỄNăTIẾNăSĨ HÀ N I, 2013 Cơngătrìnhăđ TR Ng iăh căthựcăhi năt i: NGăĐ IăH CăNỌNGăNGHI PăHÀăN I ngăd n:ă PGS TS.ăNguy năVĕnăTh PGS TS.ăNguy năTh ăLan Ph năbi nă1:ă PGS.TS.ăPhanăĐ chăLân H iăThúăY Ph năbi nă2:ă TS.ăBùiăQuangăT Vi năNghiênăc uăNuôiătrồngăth yăs năI Ph năbi nă3:ă TS.ăLêăVĕnăKhoa C căThúăY Luận án đ̃ bảo vệ trước h i đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Trường họp tại: Trường Đại học Nông nghiệp H̀ N i V̀o hồi giờ, ng̀y tháng năm 20 Cóăth ătìmălu năánăt i: - Thư viện Qúc gia - Thư viện Trường Đại học Nông nghiệp H̀ N i M Đ U Tính c p thi t c a đề tƠi nghiên c u Đối với nuôi trồng thuỷ s n (NTTS) Việt Nam, nuôi cá n ớc truyền thống xét nhóm lồi chiếm nửa s n l ợng nuôi Tổng diện tích ni cá n ớc truyền thống c n ớc năm 2010 222.500 đ t s n l ợng 444.895 t n, vùng Đồng sơng Hồng (ĐBSH) có diện tích ni lớn nh t gần 80.000 đ t s n l ợng 243.000 t n (Tổng cục Thuỷ s n, 2011) Trong lồi cá ni ghép truyền thống, cá chép lồi cá có ch t l ợng thịt thơm, ngon đ ợc nhiều ng i tiêu dùng lựa chọn chế biến nhiều ăn Trong q trình ơng, ni cá chép chứa ẩn nhiều lo i u trùng sán (ATSL) có nguy truyền lây sang ng i động vật sử dụng thực phẩm không đ ợc n u đủ nhiệt Trong lo i ATSL truyền lây qua cá có tác h i mức độ nguy hiểm khác đư có nhiều tác gi tập trung nghiên cứu nh ng chủ yếu phân lo i dựa đặc điểm hình thái u trùng nên có nhiều điểm nhầm lẫn, thiệt h i hộ dân ơng cá chép giống bị nhiễm ATSL Centrocestus formosanus gây bệnh kênh mang r t lớn từ tr ớc đến ch a có biện pháp xử lý có hiệu qu Xu t phát từ lý đư thực đề tài: “Nghiên c u d ch t học số loài u trùng sán truyền lây qua cá chép (Cyprinus carpio) bi n pháp phòng, tr ” Mục tiêu nghiên c u Tìm phân bố lo i ATSL truyền lây cá chép hệ thống nuôi, giai đo n phát triển cá tác h i ATSL nhằm góp phần c nh báo v n đề an tồn thực phẩm có nguồn gốc thủy s n, đặc biệt v n đề bệnh truyền lây; Phân biệt đ ợc số ATSL truyền lây ph ơng pháp sinh học phân tử cá góp phần phân lo i xác lồi ATSL; Tìm biện pháp phịng trị bệnh kênh mang gây góp phần gi m thiểu rủi ro cho ng i nuôi cá cá chép ATSL Ý nghĩa khoa học vƠ thực ti n c a đề tƠi Đề tài thực có ý nghĩa khoa học gi ng d y, nghiên cứu dịch tễ ATSL truyền lây qua cá giai đo n phát triển hệ thống ni cá chép khu vực phía Bắc, Việt Nam Đặc biệt nghiên cứu gi i trình tự gen, so sánh lồi sán có ý nghĩa khoa học chuyên sâu v n đề phân lo i sán ph ơng pháp sinh học phân tử xây dựng ph hệ Thử nghiệm thành công việc sử dụng thuốc hoá ch t điều trị bệnh kênh mang cá chép ATSL gây có ý nghĩa thực tiễn cơng tác phịng trị bệnh nguy hiểm Những đóng góp c a Lu n án tr Lần xác định tình hình nhiễm ATSL giai đo n sinh ng cá chép hệ thống nuôi n ớc ta cách đồng bộ; Áp dụng sinh học phân tử phân lo i ATSL liên kết đ ợc giai đo n phát triển sán truyền lây qua cá Việt Nam vòng đ i; Lần đ a biện pháp điều trị bệnh kênh mang cá chép ATSL gây cá có hiệu qu , m h ớng xử lý bệnh truyền lây nguy hiểm cá Ch ng T NG QUAN TÀI LI U 1.1 T ng quan vùng nghiên c u Vùng Đồng sông Hồng (ĐBSH) gồm 11 tỉnh thành phố: Vĩnh Phúc, Hà Nội, Bắc Ninh, Hà Nam, H ng Yên, H i D ơng, Qu ng Ninh, H i Phịng, Thái Bình, Nam Định Ninh Bình với tổng số dân lên tới 20 triệu ng i chiếm tới 22,8% tổng dân số tồn quốc, có tổng diện tích 16.700 km2, diện tích NTTS năm 2010 127.571 s n l ợng đ t 392.277 t n (Trong diện tích ni cá n ớc 89.651 đ t s n l ợng 281.773 t n) Trong tỉnh đề tài lựa chọn (Hà Nội, Bắc Ninh, H i D ơng H ng Yên) để nghiên cứu nuôi thuỷ s n n ớc ngọt, nơi có diện tích s n l ợng thuỷ s n lớn vùng (Tổng cục Thuỷ s n, 2011) 1.2 Khái ni m d ch t học vƠ ph ng pháp nghiên c u d ch t học Dịch tễ học đ ợc hiểu khoa học nghiên cứu phân bố tần số mắc chết bệnh tr ng với yếu tố quy định phân bố yếu tố Có nhiều ph ơng pháp nghiên cứu đ ợc áp dụng nghiên cứu dịch tễ học, áp dựng ph ơng pháp mô t 1.3 T ng quan đối t ợng nghiên c u 1.3.1 Hình thái, phâ n loại đặc điểm sinh học cá chép Về phân lo i cá chép: Bộ cá chép: Cypriniformes Họ cá chép: Cyprinidae ài: Giống cá chép: Cyprinus Lồi cá chép: Cyprinus Hình 1.1 Cá chép (Cyprinus carpio ) carpio (Linnaeus, 1758) Cá chép đối t ợng nuôi n ớc truyền thống, lâu đ i 1.3.2 Các giai đoạn phát triển cá chép Cá chép bột, cá chép h ơng, cá chép giống, cá chép th ơng phẩm 1.3.3 Hệ thống ương, nuôi cá chép Đối với cá chép giai đo n ơng từ cá bột lên cá h ơng chủ yếu ơng ao đ t cách gây màu t o thức ăn tự nhiên có dùng thêm thức ăn bổ sung cám công nghiệp, đến giai đo n cá chép giống cá chép th ơng phẩm hộ th ghép Dù ni đơn hay nuôi ghép, cá đ ợc nuôi ao đ t dùng cám cơng nghiệp phế phụ phẩm nơng nghiệp kết hợp ao có th vịt, lợn b mặt ao, có sử dụng thêm nguồn ch t th i từ chăn nuôi, thức ăn rơi vưi, thức ăn thừa để tận dụng, sử dụng n ớc x bể Biogas để gây màu t o thức ăn tự nhiên, th ruộng ơng nuôi cá chép chủ yếu với mục đích tận dụng mặt n ớc, tận dụng thức ăn tự nhiên…, gần khu vực phía Bắc đư xu t hình thức ni cá chép lồng thức ăn cơng nghiệp ni cá chép giịn 1.4 T ng quan ký sinh trùng ký sinh cá chép Một số nghiên cứu tác gi Hà Ký, Bùi Quang Tề, 2007 KST ký sinh cá chép khu vực phía Bắc, Việt Nam khu vực miền Trung cho th y cá nhiễm nhiều lo i KST 1.5 T ng quan lo i sán truyền lơy qua cá Sán truyền lây qua cá bao gồm sán ruột nhỏ: Haplorchis pumilo, H taichui, C formosanus sán gan nhỏ: C sinensis O viverrini 1.6 D ch t học loƠi u trùng sán truyền lơy qua cá 1.6.1 Vòng đời sán truyền lây qua cá Vòng đ i sán truyền lây qua cá đ ợc tóm tắt, mơ l i hình 1.2 Nguồn: Dự án FIBOZOPA Hình 1.2 Vịng đ i c a sán truyền lơy qua cá 1.6.2 Đặc điểm hình thái số ấu trùng sán ký sinh cá Nguồn: Dự án FIBOZOPA Hình 1.3+1.4 ATSL ruột nhỏ Haplorchis pumilio & H taichui 1.7 T ng quan gen ITS2 động v t vƠ sán Hệ gen nhân chiều h ớng b o tồn r t cao có giá trị giám định Trong nhân tế bào có nhóm gen quan trọng 5,8S; 18S; 28S vùng nucleotide nối gen ITS1 ITS2 (Internal transcribed spacer) đ ợc dùng phân tích phân lo i (Lê Thanh Hịa, 2002) (Hình 1.5) ITS-2 Intergenic spacer (IGS) 28S 18S 5.8S 5.8S 28S 18S 18S Internal transcribed spacer (ITS) ITS-2 5.8S 3SF 28S BD2R Nguồn: Lê Thanh Hịa, 2002 External transcribed spacer (ETS) Hình 1.5 Vùng gen ribosom c a h gen nhơn t bƠo (18S - 5,8S - 28S) vƠ điểm bám m i (3SF - BD2R) nhơn đo n gen ITS2 1.8 T ng quan nghiên c u u trùng C formosanus cá n ớc ta nghiên cứu loài cịn ít, dừng l i mức độ phân lo i, điều tra vùng phân bố, đặc điểm hình thái, đặc điểm sinh học, đánh giá mức độ nhiễm Trong nh h ng ATSL song chủ lên sinh tr ng phát triển cá r t lớn nhu cầu ng tìm ra h ớng xử lý hiệu qu ch a đ ợc nghiên cứu i ni 1.9 Phịng b nh t ng hợp u trùng sán cá ni Áp dụng biện pháp phịng bệnh tổng hợp cho cá nuôi 1.10 Ngăn chặn vƠ xử lý u trùng sán ký sinh cá Hiện t i thuốc Praziquantel đ ợc lựa chọn làm thuốc điều trị sán truyền lây qua cá cho ng i nhiễm sán tr ng thành, gần Nguyễn Thị Lan Anh (2010) Viện Thú Y đư dùng thuốc để điều trị sán ruột nhỏ cho chó Năm 1991 ơng Cheng đư dùng thuốc để điều trị sán ruột nhỏ C formosanus ng i đư thành công (Cheng, 1991) Praziquantel đ ợc dùng để điều trị thành công sán gan nhỏ O viverrini sán ruột nhỏ H taichui liều điều trị, dùng liều 40 mg/kg khối l ợng thể (Pungpak cs., 1998) C u trúc phân tử Praziquantel (Hình 1.7) Hình 1.7 C u trúc phơn tử c a Praziquantel (C19H24N2O2) Cơ chế tác dụng: Praziquantel đ ợc sán h p thu nhanh làm tăng tính th m màng tế bào dẫn đến m t canxi nội bào, làm co cứng tê liệt hệ sán nhanh chóng Đặc biệt Praziquantel bị phân hủy sinh học nhanh, không tồn d mô, cá sau 24 - 48 gi điều trị Do sử dụng Praziquantel r t an tồn, khơng gây h i cho cá môi tr ng nuôi, không nh h sống xung quanh ng ng đến sức khỏe ng 1.11 Một số hoá ch t th i sử dụng nh môi tr ng dùng điều tr b nh KST Trong NTTS Sulphat đồng - CuSO4 H2O; Formalin - Formol (36 38%) th ng dùng ph ơng pháp ngâm, tắm cho ĐVTS để diệt KST sát trùng nguồn n ớc nuôi thuỷ s n Ch ng NÔI DUNG & PH NG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 Nội dung nghiên c u - Nghiên cứu u trùng sán ký sinh cá chép; - Gi i trình tự gen ITS2 số lồi sán ruột nhỏ; - nh h ng u trùng sán lên sinh tr ng cá chép; - Biện pháp phòng bệnh u trùng sán cho cá ni; - Thử nghiệm thuốc hố ch t điều trị bệnh kênh mang cá chép 2.2 V t li u, th i gian vƠ đ a điểm nghiên c u Cá chép giai đo n phát triển (cá bột, cá h ơng, cá giống & cá th ơng phẩm), đ ợc sinh s n, ơng, nuôi hệ thống cá ao, cá lồng, cá ruộng tự nhiên t i địa ph ơng Bắc Ninh, Hà Nội, H i D ơng H ng Yên th i gian từ tháng năm 2009 đến tháng năm 2012 đ ợc thu mẫu sống đ ợc đ a phịng thí nghiệm Bộ mơn NTTS, Khoa Chăn nuôi & NTTS, Tr ng ĐH Nông nghiệp Hà Nội để kiểm tra ATSL, theo dõi sinh tr ng thử nghiệm thuốc, hoá ch t điều trị bệnh Mẫu sán ruột nhỏ tr ng thành u trùng (cercariae, metacercariae) Haplorchis spp đ ợc đối tác tham gia dự án FIBOZOPA cung c p đ ợc l u giữ cồn 70oC b o qu n l nh - 20oC sử dụng Gi i trình tự gen đ ợc thực t i Phịng Miễn dịch, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Khoa học Việt Nam từ đầu năm 2006 đến 2012 2.3 Ph ng pháp nghiên c u 2.3.1 Phương pháp thu mẫu Cá bột: 1230 mẫu cá bột 1-3 ngày tuổi đ ợc thu từ 41 bể cá để đ ợc kiểm tra ATSL Cá h ng: 3600 đ ợc thu định kỳ từ 30 ao tuần theo dõi Cá chép giống: 54 lần thu mẫu với 1536 cá có khối l ợng trung bình 10,55  1,51 g/con từ hệ thống ni cá từ tự nhiên Trong có 37 lần thu với 1070 mẫu cá chép giống thu vụ Xuân-Hè 17 lần thu với 466 mẫu cá chép giống vụ Thu-Đông Cá chép th ng phẩm: 254 mẫu cá th ơng phẩm đ ợc thu từ hệ thống ni có khối l ợng trung bình 979,48  314,81 g/con Mặc dù kích cỡ mẫu cá chép th ơng phẩm có khác xong mẫu chúng tơi thu tồn mang cá 100g thịt để tiến hành ph ơng pháp tiêu tìm ATSL 2.3.2 Phương pháp ép mơ tiêu Áp dụng ph ơng pháp ép mô tiêu (WHO., 1995; Thu et al., 2007; Chi et al., 2008) để tìm ATSL ATSL metacercariae thu đ ợc số đem phân lo i hình thái, số b o qu n cồn 70% để nghiên cứu sinh học phân tử phục vụ cho tách chiết DNA theo ph ơng pháp PCR 2.3.3 Nhận dạng ấu trùng sán ATSL C formosanus đ ợc nhận biết theo Eun-Taek Han et al., 2008 ATSL gan nhỏ C sinensis, sán ruột nhỏ H taichui H pumilio chúng có giác bám bụng, nh ng ATSL C sinensis khơng có gai móc, cịn taichui có 14 gai móc H pumilio có 32 gai móc (Hong et al., 2002) H 2.3.4 Phương pháp giải trình tự gen ITS2 sán ruột nhỏ 2.3.4.1 Tách chiết DNA Mẫu sán ruột nhỏ tr ng thành u trùng sán đ ợc tách chiết DNA tổng số QIAamp DNA kit (QIAGEN Inc., USA) 2.3.4.2 Mồi Primers, phản ứng khuếch đại PCR Mồi cung c p cho vùng gen nhân ITS2 sử dụng nh mô t Blair et al., 1999; Le et al., 2006; Le et al.,2008 Sơ đồ hệ gen nhân, điểm bám mồi mồi dùng đ ợc mơ hình 1.7 2.3.4.3 Giải trình tự gen ITS2 S n phẩm PCR đ ợc tinh s ch QIAquick Purification kit (QIAGEN Inc.) đ ợc dòng hóa vào vector pCR2.1TOPO lựa chọn DNA plasmid kết hợp Sau tách dòng, ADN plasmid tái tổ hợp đ ợc gi i trình tự tự động máy ABI-3100 Avant Genetic Analyzer sử dụng kỹ thuật gi i trình BigDye Terminator Cycle 2.3.4.4 Phân tích trình tự gen xây dựng phả hệ Chuỗi nucleotide đ ợc xử lý ch ơng trình SeqEd1.3, sau so sánh sử dụng ch ơng trình AssemblyLIGN v1.9c phân tích dùng MacVector8.2 (Accelrys Inc.) máy tính Macintosh 2.3.5 Phương pháp theo dõi ảnh hưởng ATSL (C formosanus) lên sinh trưởng cá chép hương cá chép giống Theo dõi nh h ng cá nhiễm ATSL ruột nhỏ lên sinh tr ng đ ợc thực bể kính có điều kiện mơi tr ng, chế độ dinh d ỡng chăm sóc c cá nhiễm không nhiễm ATSL ruột nhỏ C formosanus sau th i gian nuôi 1; 2; 3; tuần tiến hành cân, đo chiều dài kiểm tra có mặt ATSL ruột nhỏ C formosanus mang 2.3.6 Thử nghiệm điều trị bệnh kênh mang cá chép Bố trí thí nghiệm sử dụng ph ơng pháp tắm, ngâm cá hoá ch t diệt ký sinh trùng thông th ng: CuSO4, Formalin thử nghiệm dùng thuốc tẩy sán gan nhỏ ng i (Praziquantel) trộn thức ăn cho cá ăn Tổng số 1620 cá giống bị bệnh kênh mang đ ợc bố trí 54 bể thí nghiệm, bể 30 để tiến hành thử thuốc, hoá ch t Các lơ thí nghiệm nồng độ thuốc đ ợc bố trí lặp lần, sử dụng bể kính nh phần theo dõi nh h ng ATSL lên tốc độ sinh tr ng 2.3.7 Phương pháp tính tốn xử lý số liệu Tính tỷ lệ nhiễm (TLN), c ng độ nhiễm (CĐN) ATSL ứng dụng phần mềm Excell, 2007 Minitab để xử lý thống kê sinh học th ng Tác gi Sommerville (1982) theo dõi nh h ng ATSL ruột nhỏ cá cho th y ch a có sai khác tốc độ sinh tr ng, hệ số tiêu tốn thức ăn hiệu qu kinh tế cá nhiễm không nhiễm ATSL ruột nhỏ H pumilio 3.1.3 Kết kiểm tra ấu trùng sán cá chép giống B ng 3.6+3.7 K t qu kiểm tra ATSL ký sinh H thống nuôi Số cá kiểm tra (con) TLN ATSL (%) cá chép giống CĐN TB (ATSL/cá) 156 26,28a 4,52 8,00a  2,46 360 28,33a 8,40a Cá - Lợn 300 27,00a Cá - Lúa 240 N ớc x KSH 180 Nuôi CN 300 Cá tự nhiên Cá - Vịt  3,76  3,24 26,25a  3,62 16,11b  2,12 17,00b  1,28 23,89  4,33 1536 7,49a Bi n động (ATSL/cá)  2,12  1,86 6,00b  2,34 1-17 1-14 1-12 4,48c  1,20 1-15 6,90  1,79 1-8 4,31c  1,28 1-10 1-17 Các ký tự cột khác có sai khác có ý nghĩa mức P < 0,05 Kết qu kiểm tra ATSL 1536 cá chép giống có 367 cá có nhiễm ATSL cho TLN (23,89%), CĐN TB (6,90 ATSL/cá) TLN & CĐN ATSL cao hệ thống nuôi kết hợp cá-vịt, cá-lợn, cá-lúa cá chép cỡ cá giống nhỏ tự nhiên TLN & CĐN ATSL th p hệ thống nuôi công nghiệp hệ thống nuôi sử dụng n ớc x KSH TLN & CĐN ATSL có khác biệt lớn có ý nghĩa nhóm hệ thống ni B ng 3.8 ThƠnh ph n loƠi vƠ tỷ l ATSL ký sinh cá chép giống Tỷ l nhi m ATSL (%) STT H thống nuôi C formosanus H pumilio H taichui C sinensis Cá tự nhiên Cá - Vịt Cá - Lợn Cá - Lúa N ớc x KSH Nuôi CN 19,87 23,89 22,67 20,00 12,22 14,67 21,79 23,33 21,67 21,67 12,78 14,00 5,77 5,56 4,00 2,50 2,22 3,00 7,05 6,11 4,67 3,33 1,67 3,00 TLN TB (%) 19,47a  4,56 19,53a  4,57 3,91b  1,54 Các ký tự hàng khác có sai khác có ý nghĩa mức P < 0,05 11 4,36b  2,03 Trong lồi ATSL tìm th y ký sinh cá chép giống bao gồm loài (3 loài sán ruột nhỏ loài sán gan nhỏ) hầu hết hệ thống nuôi cá tự nhiên giống nh giai đo n cá chép h ơng song TLN CĐN lồi hệ thống ni khác có khác Kết qu kiểm tra đ ợc chúng tơi tổng hợp b ng 3.8 hình 3.4 Qua kết qu tổng hợp b ng 3.8 cho th y TLN C formosanus (19,47  4,56%) H pumilio (19,53  4,57%) cao cá hệ thống nuôi cá tự nhiên, H ta ichui C sinensis có TLN th p (3,91  1,54 4,36  2,03%) Báo cáo Ph m Cử Thiện & cs., 2009 khơng tìm th y ATSL ruột nhỏ loài H ta ichui ATSL gan nhỏ C sinensis cá Chép giống Tác gi Trần Thị Kim Chi cs., 2008 cho th y TLN H pumilio 45,2% C formosanus 16,3% Từ số l ợng ATSL thu thập đ ợc s số mẫu cá nhiễm ATSL chúng tơi tính đ ợc CĐN lo i ATSL hệ thống ơng nuôi cá giống đ ợc thể hình 3.4 Hình 3.4 C ng độ nhi m ATSL ký sinh cá chép giống Từ hình 3.4 cho th y CĐN ATSL cao đ ợc tìm th y cá chép giống thu từ tự nhiên, thu từ hệ thống nuôi kết hợp cá-vịt, cá-lợn, cá-lúa Trong CĐN cao nh t tìm th y ATSL ruột nhỏ H pumilio ký sinh cá chép giống nuôi kết hợp với th vịt CĐN th p tìm th y KSH ni cơng nghiệp 12 hệ thống ni có n ớc x Trong q trình nghiên cứu dịch tễ học ATSL ký sinh cá chép giống chúng tơi đư theo dõi tình hình nhiễm ATSL theo mùa ơng ni cá giống khu vực phía Bắc Trong thực tế vụ Xuân-Hè vụ ơng giống lồi cá n ớc nói chung cá chép nói riêng Kết qu theo dõi đ ợc tổng hợp b ng 3.11+3.12 B ng 3.11+3.12 K t qu kiểm tra ATSL cá chép giống theo mùa Số cá kiểm tra Xuân-Hè/ Thu-Đông H thống nuôi Tỷ l cá nhi m ATSL (%) Xuân - Hè Thu - Đông 80/76 35 17,11 Cá - Vịt 240/120 31,25 22,5 Cá - Lợn 210/90 28,57 23,33 Cá - Lúa 240/0 26,25 - N ớc x KSH 120/60 20 8,33 Nuôi CN 180/120 19,44 13,33 Cá tự nhiên TLN&CĐN TB 1070/466 26,64a  6,18 17,60b  6,30 CĐN TB (ATSL/cá) Xuân - Hè 9,64a  2,42 9,73a  2,12 8,58a  1,89 6,00  2,20 Thu - Đông 4,46b v 1,43 4,70b  1,22 4,38b  1,12 - 5,00a  1,44 2,00b  0,94 7,68a  2,25 4,05b  1,20 5,00a  1,32 2,81b  0,88 Các ký tự hàng khác có sai khác có ý nghĩa mức P < 0,05 Kết qu kiểm tra ATSL ký sinh cá chép giống theo mùa nhận th y TLN & CĐN ATSL mùa có sai khác lớn có ý nghĩa (p < 0,05) TLN & CĐN cao hệ thống nuôi kết hợp cá-vịt, cá-lợn cá tự nhiên; TLN CĐN th p hệ thống nuôi sử dụng n ớc x KSH nuôi công nghiệp TLN ATSL cá chép giống vùng ĐBSCL theo mùa mà tác gi Ph m Cử Thiện cs., 2009 cho th y mùa m a TLN (17,1%) cao mùa khô (4,9%) Kết qu kiểm tra 1070 mẫu cá chép giống vụ Xuân-Hè, 466 mẫu cá chép giống vụ Thu-Đông năm từ 2009 - 2012 cho th y vụ Xuân-Hè có 285 mẫu cá nhiễm ATSL (26,64%), vụ Thu-Đơng có 82 mẫu nhiễm ATSL (17,60%), xu t chủ yếu ATSL ruột nhỏ loài C formosanus (240/285 mẫu = 84,21%; 59/82 mẫu = 71,95%), tiếp đến H pumilio (238/285 mẫu = 83,51%; 62/82 mẫu = 75,6%), tần xu t bắt gặp H taichui (48/285 mẫu = 16,84%; 12/82 mẫu = 14,63%) C sinensis (53/285 mẫu = 18,59%; 14/82 mẫu = 17,07%) Tỷ lệ loài ATSL ký sinh cá chép giống vụ Xuân-Hè, Thu-Đông đ ợc thể hình 3.5 & 3.6 13 Hinh 3.5 Tỷ l loƠi ATSL ký sinh cá chép giống vụ Xuơn-Hè Hình 3.6 Tỷ l loƠi ATSL ký sinh cá chép giống vụ Thu-Đông B ng 3.14 Thành ph n loƠi vƠ tỷ l ATSL ký sinh cá chép giống vụ Xuân-Hè H thống nuôi Số cá Tỷ l nhi m ATSL (%) kiểm tra (con) C formosanus H pumilio H taichui C sinensis Cá tự nhiên 80 27,50 30,00 8,75 10,00 Cá - Vịt 240 28,33 26,67 6,25 7,50 Cá - Lợn 210 24,76 23,81 4,29 4,76 Cá - Lúa 240 20,00 21,67 2,50 3,33 N ớc x KSH 120 15,00 16,67 3,33 2,50 Nuôi CN 180 17,78 15,56 3,89 3,33 TLN TB (%) 22,43 a  5,45 1070 22,24 a  5,63 4,49 b  2,29 4,95 b  2,92 Các ký tự hàng khác có sai khác có ý nghĩa mức P < 0,05 Trong vụ Xuân-Hè, TLN C formosanus & H pumilio cao hệ thống ni kết hợp cá tự nhiên; cịn hệ thống nuôi sử dụng n ớc x KSH ni CN TLN lồi ATSL có th p sai khác có ý nghĩa TLN H taichui C sinensis nhìn chung th p hệ thống Tuy TLN chung C sinensis th p xong cá tự nhiên vụ Xuân-Hè có TLN lên đến 10% số cá kiểm tra điều đáng ph i l u ý ATSL gan nhỏ, lo i ký sinh trùng truyền lây nguy hiểm, có nguy gây ung th gan CĐN sán tr ng thành cao ng i gia súc (Nguyễn Văn Đề & cs., 2006) 14 B ng 3.15 CĐN ATSL ký sinh cá chép giống vụ Xuơn-Hè Số cá kiểm tra (con) Cá tự nhiên 80 Cá - Vịt 240 Cá - Lợn 210 Cá - Lúa 240 N ớc x KSH 120 Nuôi CN 180 CĐN TB (ATSL/cá)* H thống nuôi C ng độ nhi m TB (ATSL/cá) C formosanus 5,00a  1,42 5,24a  1,34 4,62a  1,28 3,81b 1,12 3,17c  0,98 2,72c  0,86 4,30m  1,02 H pumilio 5,21a  1,36 5,00a  1,22 4,90a  1,24 3,40b  1,18 2,70b  1,20 2,50b  0,88 4,16m 1,23 H taichui 2,57a  0,68 1,47c  0,54 1,78b  0,58 1,17d  0,25 1,25d  0,32 1,29d  0,26 1,60n  0,53 C sinensis 2,00a  0,34 1,78a  0,28 1,40b  0,32 1,38 b  0,24 1,33 b  0,20 1,50 b  0,22 1,62n  0,27 Các ký tự cột (*: hàng) khác có sai khác có ý nghĩa mức P < 0,05 Qua kiểm tra cá chép giống vụ Xuân-Hè CĐN ATSL loài cho th y: CĐN cao nh t ATSL ruột nhỏ C formosanus ký sinh mang cá chép giống hệ thống cá-vịt H pumilio ký sinh cơ, vây đầu cá cá tự nhiên CĐN ATSL loài H taichui C sinensis th p B ng 3.17 ThƠnh ph n loƠi vƠ TLN ATSL ký sinh cá chép giống vụ Thu-Đông H thống Số cá kiểm tra (con) nuôi Cá tự nhiên 76 Cá - Vịt 120 Cá - Lợn 90 N ớc x KSH 60 Nuôi CN 120 TLN TB (%) 466 C formosanus 11,84 15,00 17,78 6,67 10,00 12,66 a  4,32 Tỷ l nhi m ATSL (%) H pumilio H taichui 13,16 2,63 16,67 4,17 16,67 3,33 5,00 0,00 11,67 1,67 13,30 a  5,06 2,58 b  1,61 Các ký tự hàng khác có sai khác có ý nghĩa mức P 0,05 0,41  0,02 0,35  0,02 > 0,05 37,69  0,51 34,94  0,78 < 0,05 0,71  0,03 0,56  0,03 < 0,05 34,59  0,83 41,41  1,50 43,03  0,48 50,16  0,48 31,55  0,50 < 0,05 37,66  0,80 < 0,05 38,15  0,92 < 0,05 41,38  0,41 < 0,05 0,54  0,04 1,17  0,12 1,43  0,05 2,02  0,07 0,45  0,01 < 0,05 0,72  0,04 < 0,05 0,83  004 < 0,05 1,15  0,04 < 0,05 3.4 Bi n pháp phòng b nh u trùng sán cách t ng hợp Từ kết qu nghiên cứu dịch tễ học u trùng sán truyền lây qua cá chép với việc theo dõi ho t động ơng, nuôi cá đư đ a biện pháp phòng bệnh tổng hợp: Chuẩn bị ao, chuẩn bị cá giống qu n lý chăm sóc cá sau th 3.5 K t qu thử nghi m điều tr b nh kênh mang cá chép giống Qua việc sử dụng CuSO4 Formaline để điều trị thử nghiệm ATSL C formosanus ph ơng pháp ngâm tắm nồng độ thử nghiệm không cho kết qu , sau điều trị cá bị kênh mang, ATSL sống ho t động bình th ng Trong trình dùng thuốc Praziquantel điều trị cho th y 1-2 ngày đầu trộn thuốc cá có tốc độ ăn gi m so với bình th ng sau đến ngày thứ cá ăn m nh dần lên, thể cá nhanh nhẹn với liệu trình thử nghiệm ngày với l ợng thuốc dùng kết qu đ ợc thể tóm tắt b ng 3.29 21 B ng 3.29 K t qu điều tr b nh kênh mang cho cá chép ATSL C formosanus ph ng pháp trộn thuốc Praziquantel vƠo th c ăn Praziquantel (mg/kg thức ăn) Nội dung theo dõi Lần nhắc l i 30 30 30 Tổng số u trùng 212 271 237 Số u trùng chết 77 93 85 135 178 152 Số cá thí nghiệm 30 30 30 Tổng số u trùng 186 215 293 Số u trùng chết 186 215 293 Số u trùng sống 0 Số cá thí nghiệm 30 30 30 Tổng số u trùng 273 208 184 Số u trùng chết 273 208 184 Số u trúng sống 75 Số u trùng sống 50 Số cá thí nghiệm 25 0 Trong trình dùng thuốc điều trị cho th y sau dừng dùng thuốc mang cá xẹp dần l i, lô dùng thuốc nồng độ cao mang cá hết biểu kênh mang cá ho t động bình th ng nh ch a bị bệnh Đối với thử nghiệm thuốc Praziquantel chó, mèo Nguyễn Thị Lan Anh (Viện Thú Y) năm 2010 cho th y dùng thuốc nồng độ cao 75 mg/kg thể trọng làm cho chó, mèo có ph n ứng phụ (nôn, mửa, bỏ ăn biểu say thuốc) Cịn thử nghiệm cá chúng tơi với liều l ợng liệu trình nh ch a th y có biểu ph n ứng phụ Kết qu từ b ng 3.29 cho th y nồng độ thuốc 50 75 mg/kg thức ăn cho ăn ngày liên tục qua theo dõi th y cá khỏi bệnh tiêu diệt 100% ATSL lô thử nghiệm thuốc th p (25mg/kg thức ăn) th y t ợng kênh mang có gi m nh ng v n nhiều ATSL ch a bị tiêu diệt sau liệu trình điều trị (455/710 u trùng chiếm tới 64,09%), ATSL ho t động soi d ới kính hiển vi Kết qu kiểm tra u trùng sống chết đ ợc thể hình 3.13 & 3.14 22 Hình 3.13 ATSL C formosanus sống ký sinh mang cá chép giống Hình 3.14 ATSL C formosanus ch t sau điều tr thuốc Praziquantel Praziquantel gây khơng bào nhiều nơi ATSL sau phân hủy làm ATSL bị tiêu diệt nhanh chóng mơ mang đ ợc gi m áp lực đè nén làm cho cá hết biểu kênh mang K T LU N VÀ KI N NGH K T LU N Có lo i ATSL đ ợc tìm th y ký sinh cá chép h ơng, cá chép giống cá chép th ơng phẩm bao gồm loài ATSL ruột nhỏ (C formosanus, H pumilio & H taichui) loài ATSL gan nhỏ C sinesis Trong TLN & CĐN cao C formosanus H pumilio, th p H taichui C sinensis; Ch a phát th y ATSL nhiễm giai đo n cá chép bột cá h ơng d ới tuần tuổi khẳng định, khơng có truyền lây ATSL từ cá chép bố mẹ sang cá chép bột; Tỷ lệ CĐN ATSL truyền lây tăng theo th i gian phát triển cá chép h ơng, cá chép giống (cá tuần tuổi có tỷ lệ CĐN: 9,66 17,3%; 3,1 4,2 ATSL/cá; cá chép giống có TLN 23,89% CĐN 6,9 ATSL/cá) Tỷ lệ CĐN ATSL cá chép giống vụ Xuân-Hè (26,64%; 7,68 ATSL/cá) cao vụ Thu-Đông (17,6%; 4,05 ATSL/cá), hệ thống nuôi kết hợp cá tự nhiên (26,25 - 28,33%) cao hệ thống nuôi sử dụng n ớc x KSH (16,11%) nuôi công nghiệp (17%) C formosanus ký sinh mang gây nhiều thiệt h i cho cá chép h ơng cá chép giống; 23 Kết qu gi i trình tự gen ITS2 sán ruột nhỏ Haplorchis spp giai đo n cercaria e, metacercariae sán tr ng thành đ ợc thu từ ốc, cá, chó mèo, ng i Nam Định, Nghệ An Việt Nam vùng Đông Bắc Thái Lan cho th y có sai khác độ dài đo n gen ITS2 sán ruột nhỏ loài H taichui H pumilio Đối với H taichui, gen ITS2 có độ dài 445 - 446 bp cịn mẫu sán H pumilio 290 bp Bằng phân tích ph hệ liên kết vật chủ vòng đ i sán rút ngắn đ ợc nghiên cứu vòng đ i Cá chép h ơng chép giống bị bệnh kênh mang có tốc độ sinh tr ng gi m 50% khối l ợng 20% chiều dài sau tuần theo dõi; Các hoá ch t thơng th ng nh CuSO4, Formaline khơng có tác dụng điều trị bệnh kênh mang ATSL loài C formosanus gây ra; Bệnh đ ợc điều trị thành công dùng Praziquantel trộn thức ăn với liều 50; 75 mg thuốc/kg thức ăn liệu trình ngày liên tục KI N NGH Cần xác định xác ngày tuổi cá bắt đầu nhiễm ATSL kho ng tuần thứ đến tu n thứ 3; Cần có thử nghiệm tồn t i hay không ATSL ph ơng pháp chế biến thực phẩm thông th cho ng ng để đ a khuyến cáo cụ thể i tiêu dùng s n phẩm; Kết qu gi i trình tự gen ITS2 sán ruột nhỏ giai đo n cercariae, metacercariae sán tr ng thành mà ch a có giai đo n trứng sán có điều kiện cần bổ sung cho hồn thiện tồn vịng đ i ruột nhỏ truyền lây qua cá; liều điều trị 25 mg Praziquantel/kg thức ăn cho kết qu điều trị ch a triệt để cần có thử nghiệm kho ng hẹp liều điều trị từ 25 - 50 mg thuốc/kg thức ăn kết luận sát thực tế cần có thử nghiệm số lo i thuốc điều trị sán khác; Cần có nghiên cứu chuyên sâu biến đổi mô bệnh học tổ chức mang cá nhiễm ATSL ruột nhỏ loài C formosanus 24 DANHăM CăCỌNGăTRỊNHăợÃăCỌNGăBỐăC AăTỄCăGI LIểNăQUANăợẾNăLU NăỄN Kim Van Van, Truong Dinh Hoai, Kurt Buchmann, Ander Dalgaard & Nguyen Van Tho (2012) Efficacy of Praziquantel against Centrocestus formosanus metacercariae infections in common carp (Cyprinus carpio Linnaeus, 1758), Journal of Southern Agriculture, 43(4), pp 520-523 2.ăKimăV năV nă&ăNguy năV năTh (2012) Nghiên cứu dịch tễ ấu trùng sán truyền lây qua cá chép gíng (Cyprinus carpio) hệ th́ng ni, Tạp chí Khoa học Phát triển – Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội, 10(5), tr 389-394 Kim V năV nă&ăNguy năTh ăLan (2012) Nghiên cứu dịch tễ ấu trùng sán truyền lây cá chép b t, chép hương (Cyprinus carpio), Tạp chí NN&PTNT, 21, tr 63-68 4.ăKimăV năV nă&ăNguy năV năTh (2013) Nghiên cứu dịch tễ ấu trùng sán truyền lây qua cá chép gíng (Cyprinus carpio) theo mùa, Tạp chí Khoa học Thú y, 20(1), tr 74-81 5.ăKimăV năV n,ăPhanăTr ngăBìnhă&ăNguy năTh ăLan (2013) Nghiên cứu dịch tễ ấu trùng sán truyền lây qua cá chép thương phẩm, Tạp chí Khoa học Thú y, 20(3), tr 69-73 ... đư thực đề tài: ? ?Nghiên c u d ch t học số loài u trùng sán truyền lây qua cá chép (Cyprinus carpio) bi n pháp phòng, tr ” Mục tiêu nghiên c u Tìm phân bố lo i ATSL truyền lây cá chép hệ thống nuôi,... i sán truyền lơy qua cá Sán truyền lây qua cá bao gồm sán ruột nhỏ: Haplorchis pumilo, H taichui, C formosanus sán gan nhỏ: C sinensis O viverrini 1.6 D ch t học loƠi u trùng sán truyền lơy qua. .. truyền lơy qua cá 1.6.1 Vòng đời sán truyền lây qua cá Vòng đ i sán truyền lây qua cá đ ợc tóm tắt, mơ l i hình 1.2 Nguồn: Dự án FIBOZOPA Hình 1.2 Vòng đ i c a sán truyền lơy qua cá 1.6.2 Đặc điểm