NGHIÊN CỨU TẠO DÒNG BIẾN DỊ HÌNH THÁI TRÊN CÂY ĐỊA LAN TÍM HỘT (CYMBIDIUM LA BELL “ANNA BELLE”) IN VITRO BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA 60CO

106 657 0
NGHIÊN CỨU TẠO DÒNG BIẾN DỊ HÌNH THÁI TRÊN CÂY ĐỊA LAN TÍM HỘT (CYMBIDIUM LA BELL “ANNA BELLE”)  IN VITRO BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA 60CO

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN HUỲNH PHƯƠNG UYÊN NGHIÊN CỨU TẠO DỊNG BIẾN DỊ HÌNH THÁI TRÊN CÂY ĐỊA LAN TÍM HỘT (CYMBIDIUM LA BELL “ANNA BELLE”) IN VITRO BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾU XẠ GAMMA 60CO Chuyên ngành: Di truyền học Mã số chuyên ngành: 60 42 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS LÊ QUANG LUÂN Tp Hồ Chí Minh, Năm 2011 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Tỷ lệ đóng góp tác nhân đột biến tạo giống trồng  Hình 1.2 Sự phát triển chọn giống đột biến qua giai đoạn  Hình 1.3 Tỷ lệ giống đột biến châu lục vào năm 2011  Hình 1.4 Tỷ lệ loại đột biến giới vào năm 2009  Hình 1.5 Một số loài hoa đột biến giới  Hình 1.6 Mơ hình gây tạo đột biến Malaysia Nhật Bản  Hình 1.7 Giống hoa cúc đột biến cơng nghệ xạ Việt Nam  Hình 1.8 Quy trình chọn giống Chimera phương pháp chiếu xạ kết hợp ni cấy in vitro  Hình 1.9 Hình ảnh mơ tả Địa lan  Hình 1.10 Một số giống Địa lan thương phẩm Việt Nam   Hình 1.11 Sơ đồ nguyên lý kỹ thuật RAPD Hình 2.1 Cây Địa lan Tím hột dùng nghiên cứu  Hình 2.2 Sơ đồ xử lý mẫu Địa lan  Hình 2.3 Sơ đồ khảo sát ảnh hưởng xạ gamma 60Co lên Địa lan  Hình 2.4 Sơ đồ gây tạo biến dị in vitro Địa lan Hình 3.1 Mẫu Địa lan tái sinh từ chồi đỉnh cành phát hoa  Hình 3.2 Sự hình thành callus Địa lan  Hình 3.3 Ảnh hưởng chất ĐHST lên hệ số nhân PLB  Hình 3.4 Sự hình thành protocorm Địa lan  viii Hình 3.5 Ảnh hưởng chất phối hợp BA (2mg/l) với NAA TDZ lên hệ số nhân PLB mơi trường MS  Hình 3.6 Ảnh hưởng chất ĐHST lên nhân chồi Địa lan  Hình 3.7 Cụm chồi Địa lan hình thành mơi trường MS sau tuần  Hình 3.8 Khả tái sinh hoàn chỉnh Địa lan mơi trường  Hình 3.9 Cây tái sinh Địa lan hồn chỉnh  Hình 3.10 Quy trình nhân nhanh in vitro Địa lan Tím hột  Hình 3.11 Ảnh hưởng xạ Gamma Co-60 lên mẫu Địa lan in vitro  Hình 3.12 Mẫu PLB bị chết sau chiếu xạ liều cao  Hình 3.13 Các chồi đỉnh PLB bị chết sau chiếu xạ liều thấp  Hình 3.14 Sự hình thành phơi từ mẫu PLB địa lan sau chiếu xạ  Hình 3.15 Các dạng biến dị chlorophyll Địa lan  Hình 3.16 Các dạng biến dị dài Địa lan  Hình 3.17 Các dạng biến dị ngắn Địa lan  Hình 3.18 Các dạng biến dị nhiều Địa lan  Hình 3.19 Các dạng biến dị bẹ màu tím Địa lan  Hình 3.20 Cây chiếu xạ theo dõi nhà lưới  Hình 3.21 Hình ảnh DNA Địa lan gel  Hình 3.22 Kết RAPD-PCR với primer OPD-07  Hình 3.23 Mối quan hệ di truyền dòng nghiên cứu  ix Danh mục cơng trình Tác giả DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ Cơng trình liên quan đến đề tài: Nguyễn Huỳnh Phương Uyên, Võ Thị Thu Hà, Lê Quang Ln (2011) Nghiên cứu tạo dịng biến dị hình thái in vitro địa lan Tím hột (Cymbidium La Bell “Anna Belle”) phương pháp chiếu xạ γ-co-60, Tuyển tập Hội nghị KH&CN Hạt nhân Lần thứ IX Nguyễn Huỳnh Phương Uyên, Võ Thị Thu Hà, Nguyễn Quốc Hiến, Nguyễn Thị Thúy Loan, Lê Quang Luân (2009), Nghiên cứu hiệu ứng kích thích tăng trưởng β-oligochitosan chế tạo kỹ thuật xạ Địa lan (Cymbidium Labell “Anna Belle”) in vitro, Kỷ yếu Hội nghị KH&CN Hạt nhân Lần thứ VIII, Nha Trang Lê Quang Luân, Võ Thị Thu Hà, Nguyễn Huỳnh Phương Uyên, Võ Duẩn, Nguyễn Thị Thúy Loan (2009), Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hài đặc hữu Việt Nam (Paphiopedilum delenatii), Kỷ yếu Hội nghị KH&CN Hạt nhân Lần thứ VIII, Nha Trang Lê Quang Luân, Nguyễn Huỳnh Phương Uyên, Võ Thị Thu Hà, (2011) Nghiên cứu tạo dòng biến dị in vitro lan Hài (Phiopedilum) xạ ion hóa, Tuyển tập Hội nghị KH&CN Hạt nhân Lần thứ IX 79 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số giống đột biến số nước giới năm 2011  Bảng 1.2 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro Địa lan gần giới  Bảng 1.3 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro Địa lan Việt Nam Bảng 2.1 Các nghiệm thức khảo sát khả tạo callus  Bảng 2.2 Các nghiệm thức khảo sát khả nhân nhanh PLB với nồng độ chất ĐHST khác nhau  Bảng 2.3 Các nghiệm thức khảo sát khả nhân nhanh PLB phối hợp chất ĐHST  Bảng 2.4 Các nghiệm thức khảo sát khả nhân chồi  Bảng 2.5 Các nghiệm thức khảo sát khả tái sinh hoàn chỉnh  Bảng 2.6 Ký hiệu mẫu thực phản ứng RAPD-PCR Bảng 3.1 Tình trạng mẫu chồi đỉnh Địa lan sau khử trùng tuần  Bảng 3.2 Tình trạng mẫu phát hoa Địa lan sau khử trùng tuần  Bảng 3.3 Khả tạo callus từ PLB Địa lan  Bảng 3.4 Ảnh hưởng chất ĐHST lên hệ số nhân PLB  Bảng 3.5 Ảnh hưởng phối hợp chất ĐHST đến hệ số nhân PLB  Bảng 3.6 Ảnh hưởng chất ĐHST lên nhân chồi  Bảng 3.7 Khả tái sinh hồn chỉnh Địa lan loại mơi trường  Bảng 3.8 Các dạng biến dị in vitro Tím hột sau chiếu xạ gamma  Bảng 3.9 Các dòng biến dị qua thời gian theo dõi nhân dòng đến M1V2  vi Bảng 3.10 Khả biến dị in vitro chồi lan sau chiếu xạ gamma  Bảng 3.11 Nồng độ độ tinh DNA Địa lan  Bảng 3.12 Các đoạn mồi thể tính đa hình phản ứng RAPD-PCR  Bảng 3.13 Tổng số phân đoạn DNA phản ứng RAPD  Bảng 3.14 Hệ số tương đồng di truyền dòng Địa lan biến dị  vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism BA Benzynladenine DNA Deoxyribonucleic acid ĐHST Điều hòa sinh trưởng IAEA International Atomic Engnergy Agency KC Knudson C LD50 Lethal Dose 50% LS Linsmaier and Skoog MS Murashige and Skoog NAA α-naphthaleneacetic acid OD Optical Density PCR Polymerse Chain Reaction PLB Protocorm like body RAPD Random Amplified Polymorphic DNAs RFLP Retriction Fragment Length Polymorphisms TBE Tris-Boric acid-EDTA TDZ Thidiazuron UV Ultraviolet VW Vacine and Went v MỤC LỤC Trang phụ bìa Mục lục i  Danh mục chữ viết tắt v  Danh mục bảng vi  Danh mục hình vẽ, đồ thị viii  Mở đầu 1  Chương TỔNG QUAN 3  1.1 Phương pháp tạo giống trồng phóng xạ 3  1.1.1 Các khái niệm chung 3  1.2.2 Lịch sử chọn giống đột biến 4  1.1.3 Đột biến tác nhân gây đột biến 5  1.1.3.1 Vai trò chọn giống phương pháp vật lý 5  1.1.3.2 Các tác nhân gây đột biến hiệu tạo đột biến 6  1.1.3.3 Cơ chế gây đột biến phóng xạ 8  1.1.3.4 Hiệu ứng sinh học xạ lên thể sống 9  1.1.4 Thành tựu công nghệ xạ việc chọn tạo giống 11  1.1.4.1 Tình hình nghiên cứu đột biến giới 11  1.1.4.2 Tình hình nghiên cứu đột biến Việt Nam 15  1.1.5 Chọn giống phương pháp chiếu xạ kết hợp nuôi cấy in vitro 17  1.2 Tổng quan địa lan (Cymbidium) 19  1.2.1 Nguồn gốc phân bố 19  1.2.2 Đặc điểm phân loại học 20  i 1.2.3 Đặc điểm hình thái Địa lan 20  1.2.4 Tình hình nghiên cứu Địa lan 22  1.2.5 Giá trị Địa lan tình hình sản xuất Việt Nam 25  1.3 Sơ lược nuôi cấy mô tế bào thực vật 26  1.3.1 Lịch sử thành tựu đạt nuôi cấy mô thực vật 26  1.3.2 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 27  1.3.3 Tầm quan trọng nuôi cấy mô tế bào thực vật 29  1.3.3.1 Ý nghĩa sinh học 29  1.3.3.2 Ý nghĩa thực tiễn 30  1.4 Ứng dụng thị phân tử chọn lọc dòng biến dị 30  1.4.1 Vai trò thị phân tử chọn giống trồng 30  1.4.2 Ứng dụng thị RAPD chọn giống 31  CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 35  2.1 Vật liệu 35  2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 35  2.1.2 Dụng cụ thiết bị 35  2.1.3 Hóa chất 37  2.1.4 Các điều kiện thí nghiệm 37  2.2 Phương pháp nghiên cứu 38  2.2.1 Nội dung Hoàn thiện quy trình ni cấy in vitro Địa lan Tím hột 39  2.2.1.1 Thí nghiệm Khảo sát điều kiện khử trùng tạo mẫu ống nghiệm 39  ii 2.2.1.2 Thí nghiệm Khảo sát khả hình thành callus từ PLB 40  2.2.1.3 Thí nghiệm Khảo sát khả nhân nhanh PLB 41  2.2.1.4 Thí nghiệm Khảo sát khả nhân chồi Địa lan 42  2.2.1.5 Thí nghiệm Khảo sát khả tái sinh hoàn chỉnh từ chồi in vitro Địa lan 43  2.2.2 Nội dung Khảo sát ảnh hưởng xạ gamma lên Địa lan 43  2.2.2.1 Thí nghiệm Ảnh hưởng xạ gamma 60Co lên sinh trưởng phát triển mẫu Địa lan 43  2.2.2.2 Thí nghiệm Gây tạo, xác định phân lập biến dị 45  2.2.3 Nội dung Phân tích đa dạng di truyền số dòng biến dị kỹ thuật RAPD 46  2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 48  CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49  3.1 Hoàn thiện quy trình ni cấy in vitro Địa lan 49  3.1.1 Điều kiện khử trùng tạo mẫu ống nghiệm 49  3.1.2 Khảo sát khả hình thành callus từ PLB 51  3.1.3 Khảo sát khả nhân nhanh PLB 52  3.1.4 Khảo sát khả nhân chồi Địa lan 56  3.1.5 Khảo sát khả tái sinh hoàn chỉnh 59  3.2 Ảnh hưởng xạ gamma lên Địa lan in vitro 62  3.2.1 Ảnh hưởng xạ gamma 60Co lên sinh trưởng phát triển mẫu Địa lan 62  3.2.2 Gây tạo, xác định phân lập biến dị 65  iii ... ? ?Nghiên cứu tạo dịng biến dị hình thái địa lan Tím hột (Cymbidium La Bell “Anna Belle”) in vitro phương pháp chiếu xạ gamma 60Co? ?? tiến hành Mục đích nghiên cứu là gây tạo chọn lọc dịng Địa Lan. .. lan Tím hột dùng nghiên cứu? ? Hình 2.2 Sơ đồ xử lý mẫu Địa lan? ? Hình 2.3 Sơ đồ khảo sát ảnh hưởng xạ gamma 60Co lên Địa lan? ? Hình 2.4 Sơ đồ gây tạo biến dị in vitro Địa lan Hình 3.1 Mẫu Địa lan. .. biến dị ngắn Địa lan? ? Hình 3.18 Các dạng biến dị nhiều Địa lan? ? Hình 3.19 Các dạng biến dị bẹ màu tím Địa lan? ? Hình 3.20 Cây chiếu xạ theo dõi nhà lưới  Hình 3.21 Hình ảnh DNA Địa lan gel  Hình

Ngày đăng: 22/07/2014, 16:16

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan