Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện tượng vô sinh, hiếm muộn đang là vấn đề được quan tâm theo dõi và điều trị trong các cơ sở y tế ở Việt Nam. Trước đây hiện tượng vô sinh,hiếm muộn ít được thấy ở người Việt Nam, nhưng những năm gần đây hiện tượng này gia tăng và gây ra nhiều tổn thất về vật chất và tinh thần. Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), có khoảng 810 % các cặp vợ chồng có liên quan đến vô sinh hiếm muộn (WHO, năm 2010). Tại Việt Nam, theo thống kê của Bộ y tế vào những năm 80, hiện tượng vô sinh xảy ra trong khoảng 810%, hiện nay tỉ lệ này đã gia tăng nhưng chưa có con số thống kê. Hiện tượng vô sinh xảy ra có thể do nhiều nguyên nhân và xảy ra trên một trong hai đối tượng hoặc cả hai đối tượng cùng lúc. Trong khi vô sinh không rõ nguyên nhân chiếm 10% thì vô sinh gây ra do phía người vợ chiếm khoảng 35%, do phía người chồng chiếm khoảng 30%, và do cả vợ lẫn chồng chiếm 25%. Các nguyên nhân gây vô sinh ở nữ giới chủ yếu là do tổn thương vòi trứng, rối loạn rụng trứng, lạc nội mạc tử cung . Nguyên nhân gây ra vô sinh ở nam giới thường do giảm chất lượng và số lượng tinh trùng, hoặc không có tinh trùng. Bên cạnh các hiện tượng lâm sàng, với sự phát triển của khoa học, nguyên nhân dẫn đến vô sinh hiếm muộn được đánh giá rộng và sâu hơn ở mức độ di truyền tế bào và di truyền sinh học phân tử với những bất thường nhiễm sắc thể hay bất thường về gen. Ở mức độ di truyền tế bào, bộ nhiễm sắc thể được quan sát về số lượng, hình dạng, cấu trúc, và các chuyển đổi đoạn giữa các nhiễm sắc thể để đánh giá hiện tượng vô sinh, hiếm muộn và tư vấn cho việc lựa chọn phương pháp công nghệ hỗ trợ sinh sản cần thiết. Với kỹ thuật nhiễm sắc thể đồ, bộ nhiễm sắc thể dễ dàng được thu nhận và quan sát thông qua nuôi cấy tế bào lympho trong môi trường đặc biệt; thu hoạch tế bào và nhuộm băng đặc trưng GTG (Giemsa trypsin Gbanding). Các hình ảnh của bộ nhiễm sắc thể sẽ được phân tích và ghi nhận theo danh pháp quốc tế. Sử dụng kỹ thuật nhiễm sắc thể đồ, đề tài nghiên cứu : “Khảo sát bất thường nhiễm sắc thể trong vô sinh hiếm muộn” được thực hiện trên nhóm đối tượng có liên quan đến vô sinh hiếm muộn với các biểu hiện như vô sinh nguyên phát, sẩy thai liên tiếp, thai lưu hay thất bại trong thụ tinh ống nghiệm, trong khu vực thành phố Hồ Chí Minh, cụ thể là các trường hợp theo điều trị tại các bệnh viện thành phố HCM. Mục tiêu của đề tài nhằm: Mô tả các bất thường nhiễm sắc thể xảy ra trên người có hiện tựơng vô sinh, hiếm muộn. Tầm soát loại bất thường nhiễm sắc thể phổ biến liên quan đến vô sinh, hiếm muộn Khảo sát tỉ lệ bất thường nhiễm sắc thể liên quan đến vô sinh hiếm muộn .
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÕ TRẦN THỤC ĐOAN KHẢO SÁT BẤT THƯỜNG NHIỄM SẮC THỂ TRONG VÔ SINH HIẾM MUỘN Chuyên ngành: DI TRUYỀN Mã số: 60 42 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. NGUYỄN THỊ HUỆ TP. HỒ CHÍ MINH – NĂM 2011 Lôøi caûm ôn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS. Nguyễn Thị Huệ - Trường Đại học Quốc tế, người thầy đã tận tình hướng dẫn và động viên giúp đỡ tôi có thể hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin được gởi lời cám ơn trân trọng đến BS. Phan Thanh Hải- Giám Đốc Trung Tâm Y khoa Medic đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi có thể hoàn thành đề tài nghiên cứu. Tôi xin chân thành cám ơn đến các Thầy, Cô thuộc Bộ môn di truyền, khoa Sinh học, trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên đã dạy đỗ, tạo nền tảng kiến thức cơ bản để tôi có thể tiếp cận kiến thức khoa học góp phần rất lớn vào việc học tập và nghiên cứu. Tôi xin cảm ơn các bạn học viên cao học khóa 19- chuyên ngành Di truyền đã chia sẽ những kinh nghiệm trong học tập và nghiên cứu. Xin cám ơn các bạn đồng nghiệp tại phòng Di truyền tế bào – Trung Tâm Y Khoa Medic đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu. Cuối cùng, tôi xin gởi lời cám ơn sâu sắc đến những người thân trong gia đình đã luôn bên cạnh ủng hộ và là chỗ dựa tinh thần vững chắc cho tôi. Xin chân thành cảm ơn Võ Trần Thục Đoan i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH x CHỮ VIẾT TẮT xiv ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1 3 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Di truyền học nhiễm sắc thể 3 1.1.1 Hình thái học nhiễm sắc thể : 3 1.1.2 Kiểu nhân (nhiễm sắc thể đồ) 3 1.1.3 Nghiên cứu kiểu nhân ở người 4 1. 2 Biến ñổi cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể 9 1.2.1 Bất thường số lượng nhiễm sắc thể: 9 1. 2.2 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể 10 1.2.2.1 Cơ chế: 11 Các bất thường cấu trúc của NST có thể ảnh hưởng đến 1, 2 NST hoặc nhiều hơn. Các bất thường cấu trúc NST thường xảy ra do bất thường của quá trình tiếp hợp và trao đổi chéo giữa các NST tương đồng trong quá trình giảm phân hoặc do đứt gãy xảy ra trên NST trong nguyên phân hoặc giảm phân [1]. 11 1.2.2.2 Biến đổi cấu trúc trên một nhiễm sắc thể 11 1.2.2.3 Biến đổi cấu trúc giữa các nhiễm sắc thể 14 ii 1.2.2.4 Hậu quả của các đột biến nhiễm sắc thể lên chất liệu di truyền. 18 1.3 Vô sinh, hiếm muộn 19 1.3.1 Khái niệm vô sinh, hiếm muộn: 19 1.3.2 Các nguyên nhân vô sinh ở nam 20 1.3.3 Các nguyên nhân vô sinh nữ 21 1.4 Bất thường di truyền trong vô sinh ở nam và nữ. 22 1.4.1 Bất thường nhiễm sắc thể ở nam vô sinh 22 1.4.1.1 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể Y 22 Mất đoạn trên nhiễm sắc thể Y 23 1.4.1.2 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể thường 24 1.4.2 Bất thường nhiễm sắc thể trong vô sinh nữ 24 1.4.2.1 Bất thường nhiễm sắc thể giới tính 24 1.4.2.2 Bất thường nhiễm sắc thể thường 25 1.5 Bất thường nhiễm sắc thể trong sẩy thai liên tiếp 25 1.5.1 Bất thường số lượng NST 25 1.5.2 Bất thường cấu trúc NST 26 1.6 Một số nghiên cứu về bất thường nhiễm sắc thể trong vô sinh hiếm muộn 27 1.6.2 Chuyển đoạn nhiễm sắc thể ở các cặp vợ chồng thất bại thụ tinh ống nghiệm. 29 1.6.3 Kết quả Nhiễm sắc thể đồ của các cặp vợ chồng sẩy thai liên tiếp tại Thổ Nhĩ Kỳ 30 1.6.4 Chuyển đoạn cân bằng ở các cặp có liên quan đến sẩy thai tự nhiên 31 Nghiên cứu này của nhóm tác giả thuộc khoa Di truyền y học, Đại học Mashhad (Iran). Mục đích của nghiên cứu là xác định tần số của chuyển đọan cân bằng trên 153 cặp vợ chồng được chỉ định của bác sĩ sản phụ khoa. Tần số của chuyển đoạn nhiễm sắc thể cân bằng là 9.8% trong đó 3.3% là chuyển đoạn Robertson [31]. 31 1.6.5 Sẩy thai tái phát liên quan đến sự bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể ở bố mẹ. 31 1.6.6 Bất thường nhiễm sắc thể trên những bệnh nhân sẩy thai liên tiếp và hiếm muộn. 33 iii 1.7 Hệ thống danh pháp quốc tế về di truyền tế bào người (ISCN 2009) 35 1.7.1 Một số ký hiệu và thuật ngữ viết tắt 36 Một số ký hiệu và thuật ngữ viết tắt được sử dụng trong mô tả của nhiễm sắc thể và bất thường nhiễm sắc thể được liệt kê ở Bảng 1.8. 36 1.7.2 Nguyên tắc sắp xếp các bất thường nhiễm sắc thể trong một Nhiễm sắc thể đồ 37 1.7.3 Một số khái niệm trong mô tả Nhiễm sắc thể đồ bằng danh pháp di truyền 37 1q41h Đoạn dị nhiễm sắc chất trên nhiễm sắc thể 1 tại băng 1q4139 CHƯƠNG 2 40 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.2 Vật liệu và Phương pháp nghiên cứu 40 2.2.1 Vật liệu 40 Dụng cụ: 40 Thiết bị : 41 Hóa chất: 42 2.2.2 Thiết kế phương pháp nghiên cứu 43 2.2.3 Chuẩn bị môi trường 44 2.2.4 Quy trình nuôi cấy 46 2.2.5 Thu hoạch cụm mitose 46 2.2.6 Quy trình nhuộm band G (sử sụng Trypsine và Giemsa) 47 2.2.6.1 Nguyên tắc: 47 2.2.6.2 Quy trình nhuộm band – G 48 2.2.7 Đọc và phân tích kết quả Nhiễm sắc thể đồ 49 CHƯƠNG 3 50 iv KẾT QUẢ BIỆN LUẬN 50 3.1. Phân nhóm ñối tượng nghiên cứu 50 3.2. Các bất thường nhiễm sắc thể quan sát ñược trong nhóm vô sinh hiếm muộn 51 Nam 53 Nữ 53 Bất thường 53 Nhiễm sắc thể đồ 53 Tần số 53 Bất thường 53 Nhiễm sắc thể đồ 53 Tần số 53 Số lượng 53 46,XY/47,XXY 53 1 53 Số lượng 53 47,XXX 53 1 53 Nhiễm sắc thể Marker 53 - 53 Nhiễm sắc thể Marker 53 47,XX,+mar 53 1 53 Chuyển đoạn 53 46,XY,t(1;9)(q43;q34) 53 1 53 Chuyển đoạn 53 v 46,XX,t(2;8)(q32;q24.1) 53 46,XY,t(1;9)(p11;q12) 53 1 53 Biến thể chiều dài 53 46,XY,9qh+ 53 5 53 Biến thể chiều dài 53 46,XX,9qh+ 53 3 53 46,XY,16qh+ 53 3 53 46,XY,Yqh- 53 9 53 46,XY,Yqh+ 53 2 53 46,XY,14ps+ 53 1 53 46,XY,1qh+ 53 3 53 46,XX,1qh+ 53 3 53 Đảo đoạn 53 46,XY,inv(9)(p12q13) 53 4 53 Đảo đoạn 53 46,XX,inv(9)(p12q13) 53 3 53 vi 46,XY,t(1;9)(q43;q34) 54 47,XX,+mar 54 46,XY,t(1;9)(p11;q12) 54 46,XX,t(2;8)(q32;q24.1) 54 46,XY,1qh+ 54 46,XX,1qh+ 54 3.2.1 Bất thường NST ở Nam 55 3.2.2 Bất thường nhiễm sắc thể ở Nữ 55 3.2.3 Mô tả các kiểu bất thường NST 55 3.2.3.1 Các kiểu Nhiễm sắc thể đồ cân bằng 55 3.2.3.2 Các kiểu Nhiễm sắc thể đồ không cân bằng 61 Chuyển đoạn Robertson 62 Các cá thể mang bất thường chuyển đoạn Robertson có kiểu hình hoàn toàn bình thường mặc dù có 45 chiếc NST. Tuy nhiên, nguy cơ khi tạo giao tử bất thường là 50% nên hợp tử hình thành sẽ thừa một chiếc NST (trisomy) hoặc thiếu một chiếc NST (monosomy). Hầu hết các hợp tử hình thành không thể tồn tại ngoại trừ trường hợp trisomy 21 (Hội chứng Down) có thể sống đến trưởng thành như người bình thường nhưng thiểu năng trí tuệ. 62 Sự đa hình (Polymorphic chromosomal Variants) 63 3.3 Mối liên quan giữa bất thường NST và hiện tượng vô sinh quan sát trên các cặp vợ chồng 66 3.4 Khảo sát cấu trúc nhiễm sắc thể trên nhóm sinh sản bình thường 72 CHƯƠNG 4 74 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 74 KẾT LUẬN 74 ĐỀ NGHỊ 75 vii TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 PHỤ LỤC ① ①① ① Hình 1.1: 46,XY,Yqh- ① Hình 1.2: 46,XY,Yqh+ ① Hình 1.3: 46,XY,1qh+ ② Hình 1.4: 46,XY,9qh+ ② Hình 1.5: 46,XY,16qh+ ③ Hình 1.6: 46,XY,14ps+ ③ Hình 1.7: 46,XY,inv(9)(p12q13) ④ Hình 1.8: 46,XY,t(1;9)(q43;q34.1) ④ Hình 1.9: 46,XY/47,XXY ⑤ Hình 1.10: 46,XY,t(1;9)(p11;q12) ⑥ Hình 1.11: 46,XY,t(6;13)(q22;q21.3) ⑥ Hình 1.12: 46,XY,t(6;9)(q27;p12) ⑦ Hình 1.13: 46,XY,t(5;11)(p14;p12) ⑦ Hình 1.14: 46,XY,t(11;22)(q24;q13) ⑧ Hình 1.15: 46,XY,t(2;7)(p13;p15) ⑧ Hình 1.16: 46,XY,t(7;8)(q22;q24.2) ⑨ Hình 1.17: 46,XY,t(7;14;?)(q11.2;q11.2;?) ⑨ Hình 1.18: 45,XY,rob(14;21) ⑩ Hình 1.19: 45,XY,rob(13;14) ⑩ Hình 1.20: 46,XX,9qh+ ⑪ Hình 1.21: 46,XX,1qh+ ⑪ Hình 1.22: 46,XX,inv(9)(p12;q13) ⑫ viii Hình 1.23: 47,XXX ⑫ Hình 1.24: 47,XX,+mar ⑬ Hình 1.25: 46,XX,t(2;8)(q32;q24.1) ⑬ Hình 1.26: 46,XX,t(2;13)(q33;q33) ⑭ Hình 1.27: 46,XX,t(2;13)(q33;q33) ⑭ Hình 1.28: 46,XX,t(4;17)(q12;q21) ⑮ Hình 1.29: 46,XX,t(5;12)(p14;q23) ⑮ Hình 1.30: 46,XX,t(5;10)(q35;10q) ⑯ Hình 1.31: 46,XX,t(5;22)(p14;p11) ⑯ Hình 1.32: 46,XX,t(6;11)(q15;q23) ⑰ Hình 1.33: 46,XX,t(7;10)(q22;p13) ⑰ Hình 1.34: 46,XX,t(9;10)(q34;p15) ⑱ Hình 1.35: 46,XX,t(16;20)(q24;q13.1) ⑱ Hình 1.36: 46,XX,1qh+,inv(11)(p13q13) ⑲ [...]... Tần số bất thường NST trên các nhóm khảo sát 67 Bảng 3.6 Bất thường Nhiễm sắc thể đồ trên nhóm STLT ≥ 5 lần 68 Bảng 3.7 Bất thường Nhiễm sắc thể đồ trên nhóm IVF thất bại 69 Bảng 3.8 Nhiễm sắc thể đồ nhóm vô sinh nguyên phát 69 Bảng 3.9 Tần suất và tỉ lệ % đột biến trên nhiễm sắc thể trên nhóm vô sinh hiếm muộn 71 Bảng 3.10 Tần số và kiểu bất thường Nhiễm sắc thể đồ... bại trong thụ tinh ống nghiệm, trong khu vực thành phố Hồ Chí Minh, cụ thể là các trường hợp theo điều trị tại các bệnh viện thành phố HCM Mục tiêu của đề tài nhằm: • Mô tả các bất thường nhiễm sắc thể xảy ra trên người có hiện tựơng vô sinh, hiếm muộn • Tầm soát loại bất thường nhiễm sắc thể phổ biến liên quan đến vô sinh, hiếm muộn • Khảo sát tỉ lệ bất thường nhiễm sắc thể liên quan đến vô sinh hiếm. .. Đa bội thể Euploidy Đa bội thể nguyên Monoploid Thể đơn bội Triploid Thể tam bội Tetraploid Thể tứ bội Aneuploidy Đa bội lệch Monosomy Thể đơn nhiễm Trisomy Thể tam nhiễm Tetrasomy Thể tứ nhiễm Double trisomy Thể tam nhiễm kép Nullosomy Thể vô nhiễm 1 2.2 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể Khuyết tật cấu trúc nhiễm sắc thể bao gồm vật liệu di truyền bị mất, thêm, hoặc đảo ngược trong nhiễm sắc thể hoặc... của người gồm 46 nhiễm sắc thể, tạo nên 22 cặp nhiễm sắc thể thường (autosome) và 1 cặp nhiễm sắc thể giới tính 22 cặp nhiễm sắc thể thường được chia thành bảy nhóm ký hiệu từ A-G, dựa vào kích thước và vị trí trên nhiễm sắc thể [1] Như vậy, cặp nhiễm sắc thể số một là lớn nhất sau đó đến cặp số 2 và cứ tiếp tục như vậy, tuy nhiên cặp nhiễm sắc thể số 21 lại nhỏ hơn cặp nhiễm sắc thể số 22 do mang... với những bất thường nhiễm sắc thể hay bất thường về gen Ở mức độ di truyền tế bào, bộ nhiễm sắc thể được quan sát về số lượng, hình dạng, cấu trúc, và các chuyển đổi đoạn giữa các nhiễm sắc thể để đánh giá hiện tượng vô sinh, hiếm muộn và tư vấn cho việc lựa chọn phương pháp công nghệ hỗ trợ sinh sản cần thiết Với kỹ thuật nhiễm sắc thể đồ, bộ nhiễm sắc thể dễ dàng được thu nhận và quan sát thông... lympho trong môi trường đặc biệt; thu hoạch tế bào và nhuộm băng đặc trưng GTG (Giemsa trypsin G-banding) Các hình ảnh của bộ nhiễm sắc thể sẽ được phân tích và ghi nhận theo danh pháp quốc tế Sử dụng kỹ 2 thuật nhiễm sắc thể đồ, đề tài nghiên cứu : Khảo sát bất thường nhiễm sắc thể trong vô sinh hiếm muộn được thực hiện trên nhóm đối tượng có liên quan đến vô sinh hiếm muộn với các biểu hiện như vô sinh. .. kỳ Độ phân giải cao 12502000 băng tương ứng với nhiễm sắc thể ở giai đoạn giữa prophase [7] 9 Hình 1.6 Quy ước vạch băng trên nhiễm sắc thể người [9] 1 2 Biến đổi cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể 1.2.1 Bất thường số lượng nhiễm sắc thể: Mỗi một loài có số lượng nhiễm sắc thể ổn định trong bộ nhiễm sắc thể (ploidy) của mình Tế bào chứa bộ nhiễm sắc thể với số lượng ổn định của loài được gọi là chuẩn... băng nhiễm sắc thể cho phép xác định một số đột biến của chúng Ví dụ như nhiễm sắc thể hiếm khi thay đổi hình dạng như là mất hoặc thêm vào một phần trong một nhiễm sắc thể hoặc thay đổi một số đoạn với một nhiễm sắc thể không tương đồng khác Mặt khác số lượng nhiễm sắc thể có thể thay đổi trong kiểu nhân do các sai sót trong qúa trình phân chia tế bào, ví dụ nhiễm sắc thể không phân chia, đột biến nhiễm. .. Bảng 1.1 Các dạng bất thường về số lượng nhiễm sắc thể [4] 10 Bảng 1.2 Hậu quả đột biến nhiễm sắc thể 19 Bảng 1.3 Chuyển đoạn nhiễm sắc thể trên nhóm STLT và IVF thất bại 29 Bảng 1.4 Kết quả bất thường Nhiễm sắc thể đồ cân bằng và không cân bằng 30 Bảng 1.5 Chuyển đoạn cân bằng liên quan đến sẩy thai tự nhiên 31 Bảng 1.6 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể khảo sát ở các cặp vợ chồng... giảm phân Chuyển đoạn tương hổ với cả hai nhiễm Chuyển đoạn tương hổ chỉ với một sắc thể tái sắp xếp nhiễm sắc thể tái sắp xếp Chuyển đoạn Robertson (tổng số=45 Chuyển đoạn Robertson (tổng số = 46 NST) NST) Nhiễm sắc thể đều Nhiễm sắc thể vòng 1.3 Vô sinh, hiếm muộn 1.3.1 Khái niệm vô sinh, hiếm muộn: Vô sinh là không có khả năng mang thai sau một năm giao hợp thường xuyên mà không sử dụng các biện pháp . nam vô sinh 22 1.4.1.1 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể Y 22 Mất đoạn trên nhiễm sắc thể Y 23 1.4.1.2 Bất thường cấu trúc nhiễm sắc thể thường 24 1.4.2 Bất thường nhiễm sắc thể trong vô sinh. các bất thường nhiễm sắc thể xảy ra trên người có hiện tựơng vô sinh, hiếm muộn. • Tầm soát loại bất thường nhiễm sắc thể phổ biến liên quan đến vô sinh, hiếm muộn • Khảo sát tỉ lệ bất thường. 1.4.2.1 Bất thường nhiễm sắc thể giới tính 24 1.4.2.2 Bất thường nhiễm sắc thể thường 25 1.5 Bất thường nhiễm sắc thể trong sẩy thai liên tiếp 25 1.5.1 Bất thường số lượng NST 25 1.5.2 Bất thường