1 MỞ ĐẦU Trong những năm gần đây, mặc dù có những khó khăn nhất định (đặc biệt là nghề nuôi tôm sú), song nghề nuôi trồng thủy sản ở nước ta vẫn được mở rộng và có những bước phát triển đáng khích lệ. Các đối tượng đưa vào nuôi trồng ngày càng đa dạng, trong đó có các loài cá biển (cá chim vây vàng, cá chẽm, cá hồng ) hay các loài động vật thân mềm (hải sâm, nghêu, trai ngọc, ốc hương…). Vì vậy việc sản xuất thức ăn phục vụ cho nuôi trồng thủy sản cũng đa dạng (kể cả thức ăn tươi sống, thức ăn tổng hợp) và được chú trọng đầu tư hơn. Với giá trị dinh dưỡng khá cao (Brown & ctv, 1991) [20] cùng với mùi vị đặc trưng (mùi tanh)…, vi tảo là nguồn thức ăn tươi sống không thể thiếu trong công nghệ sản xuất giống cũng như nuôi thương phẩm của các đối tượng nuôi trồng thủy sản. Trong đó, tảo silic (Bacillariophyceae) là lớp có nhiều loài được nuôi trồng để làm thức ăn cho các đối tượng thủy sản. Tuy nhiên, các loài tảo silic hiện đang được nuôi trồng phần lớn là các loài tảo silic trung tâm (Centrales) có đời sống trôi nổi, trong khi các loài sống đáy, sống bám (tảo silic lông chim Pennales: Navicula sp., Nitzschia sp., Amphora sp. …) ít được chú ý đến. Với lối sống đáy, sống bám, chúng có thể là thức ăn phù hợp cho giai đoạn sống đáy, sống bám của các đối tượng nuôi, đặc biệt là động vật thân mềm (Mollusca). Có thể nói rằng, trong công nghệ nuôi trồng vi tảo làm thức ăn cho các đối tượng nuôi trồng thủy sản, tảo giống được xem là một khâu quan trọng của qui trình nuôi. Nó ảnh hưởng đến hiệu quả nuôi sinh khối tảo cũng như tỷ lệ sống của đối tượng nuôi (khi chúng sử dụng tảo làm thức ăn). Mặc dù hiện nay trên thế giới cũng như ở nước ta đã có khá nhiều phương pháp phân lập, lưu giữ giống tảo thuần chủng (Nguyễn Thị Hương, 2001) [5], (Tôn Nữ Mỹ Nga, 2007) [11]. Song việc lựa chọn được phương pháp phân lập cũng như phương pháp lưu giữ phù hợp với các loài tảo silic lông chim sống đáy, sống bám còn ít được nói đến. Do vậy, các loài tảo silic lông chim như Nitzschia sp., Navicula sp., vẫn phải nhập từ nước ngoài (Trung Quốc, Úc) và với giá thành nhập rất cao. Vì thế, cần phải nghiên cứu và 2 hoàn thiện các phương pháp phân lập, lưu giữ thích hợp cho từng loài tảo silic sống đáy, sống bám này. Để góp phần vào việc nghiên cứu phân lập và lưu giữ giống tảo thuần chủng của một số loài tảo silic lông chim, trong thời gian từ ngày: 27/07/2007 đến 8/11/2008 tôi được Khoa Nuôi trồng thủy sản phân công thực hiện đề tài: “Phân lập và lưu giữ giống tảo silic lông chim Nitzschia longissima” với các nội dung chính sau: 1. Phân lập giống tảo Nitzschia longissima thuần chủng bằng một số phương pháp khác nhau. 2. Lưu giữ giống tảo Nitzschia longissima trong các điều kiện khác nhau. Mục đích của đề tài: Phân lập và lưu giữ được loài tảo Nitzschia longissima thuần chủng. Ý nghĩa của đề tài: Là cơ sở khoa học cho việc phân lập và lưu giữ cho các loài tảo silic lông chim nói chung và loài Nitzschia longissima nói riêng. Ngoài ra, còn bổ sung giống tảo silic lông chim Nitzschia longissima thuần chủng cho ngân hàng tảo giống. Trong quá trình thực hiện đề tài, do thời gian ngắn và còn gặp một số khó khăn về điều kiện thí nghiệm, trình độ chuyên môn lại có hạn nên không thể tránh khỏi những thiếu sót. Song được sự hướng dẫn của Ths. Tôn Nữ Mỹ Nga nên tôi đã hoàn thành được nội dung của đề tài tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn đến sự giúp đỡ quý báu này. Nha trang, tháng 10 năm 2008 Sinh viên thực hiện Lê Hoàng Bảo Châu 3 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Phân loại và đặc điểm sinh học chủ yếu của tảo Silic 1.1.1. Hệ thống phân loại (Hoek & ctv, 1995) [27] Ngành: Heterokontophyta Lớp: Bacillariophyceae Bộ: Pennales Bộ phụ: Biraphidineae Họ: Nitzschiaceae Giống: Nitzschia Loài: Nitzschia longissima Hình 1.1: Hình dạng tế bào Nitzschia longissma [1]. (độ phóng đại 400 lần) 1.1.2. Một số đặc điểm sinh học chủ yếu 1.1.2.1. Đặc điểm hình thái cấu tạo của Nitzschia longissma (Trương Ngọc An, 1993) [1] Tế bào có hình que rất dài, vỏ mỏng, sống riêng rẽ . Mặt vỏ tế bào hình que thẳng, trục dài trung bình 440 µm. Đoạn giữa mặt vỏ phình to ra, có dạng hình thoi, 4 dài khoảng 1/4 đến 1/3 trục dài, chiều ngang 16µm . Hai đầu tế bào nhỏ đều, thẳng, chiều ngang 4-5 µm. Trên mặt vỏ có đường vân ngang (16 đường). Mỗi tế bào có hai thể sắc tố dạng bản nằm ở đoạn phình ra của tế bào. - Cấu tạo vách tế bào: Vách tế bào được cấu tạo bằng silic (SiO 2 .nH 2 O) và pectin, gồm 2 tầng, tầng ngoài (silic) và tầng trong (pectin). - Sắc tố và thể sắc tố: Thể sắc tố dạng bản, số lượng ít, kích thước lớn, gồm chlorophyll (a và c), fucoxanthin, carotenoit. - Nguyên sinh chất: Là chất sống căn bản của tế bào, có tính lỏng, nhớt, đàn hồi, và trong suốt. - Nhân: Mỗi tế bào có một nhân, thường có dạng hình cầu, kích thước phụ thuộc vào giai đoạn sinh trưởng và phát triển của tế bào. Nhân nằm trên cầu nguyên sinh chất chạy qua trung tâm tế bào. Nhân có màng nhân cố định chứa một hay nhiều hạch nhân, quá trình phân chia không giảm nhiễm (Lê Viễn Chí, 1996) [2]. - Chất dự trữ: Dạng giọt dầu màu da cam với kích thước nhỏ. 1.1.2.2. Sinh sản Theo Trương Ngọc An (1993) [1], tảo silic thường có các kiểu sinh sản sau: - Sinh sản phân cắt theo kiểu nắp hộp: Hai mảnh vỏ tách rời nhau ra. Mỗi mảnh vỏ đều chứa chất tế bào với nhân và thể màu. Bất cứ mảnh nào của tế bào mới được hình thành về sau chúng tự tạo nên mảnh vỏ dưới. Như vậy, sau một số lần phân chia sẽ dẫn đến sự giảm kích thước tế bào (từ 1/2 -1/3 kích thước ban đầu). - Sinh sản bằng bào tử nghỉ trong điều kiện bất lợi: Các hình thức sinh sản bằng bào tử như bào tử nghỉ, bào tử phục hồi độ lớn (do quá trình phân cắt kiểu nắp hộp dẫn đến sự giảm kích thước tế bào sau nhiều lần phân chia). + Sự hình thành bào tử sinh trưởng (Auxospore) Khi kích thước tế bào giảm, tảo silic phải tiến hành phục hồi lại kích thước ban đầu bằng cách phân chia đặc biệt hình thành bào tử sinh trưởng. 5 + Bào tử ngủ (Resting spore) Các loài tảo gần bờ trong bộ tảo silic trung tâm thường có hình thức sinh sản bằng bào tử ngủ như chi tảo lông gai (Chaetoceros), chi tảo chuỗi thẳng (Melosira), v.v… Hình thành bào tử ngử để duy trì sự sống trong điều kiện bất lợi của môi trường như: nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp, muối dinh dưỡng thiếu…. Ngoài ra, tảo silic còn có hình thức sinh sản hữu tính (đẳng giao ở tảo silic lông chim và noãn giao ở tảo silic trung tâm) (Đặng Thị Sy, 2005) [12], (Hoek & ctv, 1995) [27]. 1.1.2.3. Sinh trưởng của vi tảo Trên thế giới và ở Việt Nam có nhiều công trình nghiên cứu về sự sinh trưởng của tảo Silic. Những nghiên cứu về các giai đoạn sinh trưởng của tảo Silic phải kể đến công trình của Đặng Ngọc Thanh (1974) [14], Fluks và Main (1991) [28], Tô Huệ Mỹ (1989) [9], Sato (1991) [30] và (Hoek & ctv, 1995) [27]. Cũng như các ngành tảo khác, chu kỳ sinh trưởng của tảo Silic cũng trải qua 5 pha (Tô Huệ Mỹ, 1989) [9]: - Pha gia tốc dương: Tảo bắt đầu thích nghi với môi trường nuôi, hấp thụ chất dinh dưỡng và tiến hành phân cắt tế bào nhưng tốc độ tăng trưởng quần thể chậm. - Pha logarit: Ở pha này mật độ hay sinh khối tế bào tăng lên với tốc độ nhanh nhất, theo cấp số nhân do tảo hấp thụ chất dinh dưỡng mạnh và tăng tốc độ sinh sản. - Pha gia tốc âm: Được đặc trưng bởi tốc độ tăng trưởng chậm dần so với pha logarit. - Pha cân bằng: Sinh khối tảo không tăng và đạt mật độ cực đại. Quá trình quang hợp và phân chia tế bào vẫn xảy ra trong suốt pha này, nhưng số lượng tế bào mới sinh ra gần ngang bằng với số lượng tế bào chết đi. Do đó, không có sự tăng trưởng của tảo. - Pha tàn lụi: Sinh khối tảo giảm đi một cách rõ rệt do khả năng sinh sản của tảo mất dần sau khi đạt mật độ cực đại. Như vậy, các pha sinh trưởng khác nhau, tốc độ sinh trưởng của tảo cũng khác nhau. Ngoài ra, tốc độ sinh trưởng của tảo nói chung và tảo Silic nói riêng còn 6 phụ thuộc vào loài tảo nuôi và sự thay đổi của các yếu tố môi trường như: cường độ và chế độ ánh sáng (Guillard, 1975) [23], nhiệt độ (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], (Coutteau P.,1996) [21], muối dinh dưỡng (Hoàng Thị Bích Mai, 1995) [7], (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], mức độ xáo trộn hoặc sục khí môi trường nuôi (Coutteau P.,1996) [21], (Guillard, 1975) [23], (Fulk W. & Main K. L., 1991) [28]. 1.1.2.4. Phân bố: Theo Trương Ngọc An (1993) [1], loài tảo Nitzschia longissima là loài thuộc tính ven bờ, phân bố ven biển châu Âu, Nhật Bản, Trung Quốc, Indonesia. Ở các vùng biển Việt Nam loài này cũng thường xuất hiện, nhưng số lượng không nhiều. Còn trong các ao nuôi tôm sú ven biển Khánh hòa (Cam Ranh, Nha Trang, Ninh Hòa, Vạn Ninh), Nitzschia longissima được xem là loài chiếm ưu thế về mật độ tế bào (Hoàng Thị Bích Mai, 2005) [8]. 1.2. Thành phần sinh hóa của tảo Thành phần sinh hóa của vi tảo được Brown và ctv (1991) [20] bổ sung trong bảng 1.1. Bảng 1.1. Thành phần của vi tảo (tính theo khối lượng khô của tế bào). Protein 30-55% Thành phần aminoacid tương tự trứng gà Cacbohydrat 10-30% Chủ yếu là polysaccharid Lipid 10-25% Các acid béo: 20-40% lipid tổng số Phospholipid: 10% lipid tổng số Khoáng 10-40% Silic (tảo Khuê), phospho, natri, canxi Acid nucleic 4-6% RNA:DNA = 3:1 Giá trị dinh dưỡng của những loài tảo khác nhau rõ rệt giữa các loài, và ngay giữa các dòng trong cùng một loài cũng khác nhau (Enright và ctv, 1986; Ryther và Goldman, 1975.Trích theo Hà Lê Thị Lộc) [6]. Chẳng hạn như các loài thuộc ngành vi tảo Prymnessiophyceae và ngành Eustigmatophyta có hàm lượng lipid là 17% 7 khối lượng khô tế bào. Trong khi các loài thuộc giống Navicula và Nitzschia (tảo Silic) có hàm lượng lipid cao nhất, với giá trị trung bình là 18% khối lượng khô tế bào (Hà Lê Thị Lộc, 2000) [6]. Trong lipid của tảo có chứa một số axit béo không no, có thể mạch ngắn hay mạch dài, rất quan trọng cho động vật tiêu thụ tảo, ngay cả con người cũng không thể tổng hợp được axit béo không no này: DHA (Docosahec xaenoic-acid) chiếm 0,2-11%, EPA (Eicosapentaenoic - acid) chiếm 7- 34% khối lượng khô của tảo. Đối với 2 loài tảo Navicula sp. và Nitzschia sp., EPA chiếm 1-5%, AA rất cao, chiếm hơn 20% khối lượng khô. Ngoài ra, ở Navicula sp., DHA chiếm 0,2-1%, và Nitzschia sp. chiếm 1-5% khối lượng khô (Arnaud & ctv) [19]. Tuy nhiên, giá trị dinh dưỡng của tảo có thể bị thay đổi rất lớn ở các pha sinh trưởng hay ở các điều kiện nuôi khác nhau (ánh sáng, nhiệt độ, độ mặn, pH, muối dinh dưỡng, …). Vào cuối pha logarit, tất cả các loài chứa khoảng 30-40% protein, 10-20% lipid, 5-15% cacbohydrat (Brown M. R., 1991) [20]. Vì vậy, chúng ta cần xác định thời gian thu hoạch thích hợp để có tảo đạt giá trị dinh dưỡng cao nhất. 1.3. Ảnh hưởng của một số yếu tố sinh thái đến sự phát triển của tảo 1.3.1. Ánh sáng Ánh sáng là nguồn năng lượng chính cho quá trình quang hợp của vi tảo. Ánh sáng ảnh hưởng không chỉ đến sự phát triển số lượng của vi tảo, mà còn ảnh hưởng đến thành phần hóa sinh của vi tảo. Hầu hết các loài vi tảo sử dụng trong nuôi trồng thủy sản thích ứng với cường độ ánh sáng từ 50 đến 300 µEm -2 s -1 , tương ứng với thời gian chiếu sáng 12-18 giờ/ngày (Gilbert B., 1990) [22]. Brand và Guillard (1981) (trích theo Thinh, 1999) [31], khi nghiên cứu trên 22 loài tảo cho thấy có một số loài tảo không tăng trưởng trong điều kiện chiếu sáng liên tục. Một số loài tăng trưởng tốt nhất ở chế độ 14 giờ, cũng có một số thích nghi với thời gian chiếu sáng 12 giờ trong ngày. Navicula và Nitzschia thích nghi với thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], (Nguyễn Đình Trung, 2004) [16]. 8 1.3.2. Nhiệt độ Nhiệt độ có thể ảnh hưởng đến cấu trúc tế bào, tốc độ phản ứng trao đổi chất, sinh trưởng, quá trình quang hợp, mật độ phân bố, cường độ hô hấp, kích thước tế bào và sự thích nghi của loài. Vi tảo có thể sống được trong khoảng nhiệt độ 16-30 o C. Ở nhiệt độ cao hơn 35 o C và thấp hơn 16 o C, vi tảo phát triển rất kém (Hà Lê Thị Lộc, 2000) [6]. Tuy nhiên, nhiệt độ được coi là thích hợp cho sự phát triển của hầu hết các loài vi tảo là khoảng 20-25 o C (Coutteau, 1996) [21]. Một số loài sinh trưởng ngoài tự nhiên ở nhiệt độ thấp, nhưng khi nuôi cấy trong phòng thí nghiệm thì lại thích nghi với độ mặn cao hơn. Chẳng hạn, Skeletonema costatum ngoài tự nhiên sinh trưởng tốt ở nhiệt độ 12-13 o C và 14-20 o C, trong khi nuôi cấy trong phòng thí nghiệm thì nhiệt độ tối ưu cho sự sinh trưởng của chúng là 20-30 o C (Fogg, 1965) (trích theo Phan Thị Thu Trang, 2006) [15]. Navicula sp. và Nitzschia sp. có thể phát triển trong khoảng nhiệt độ 10-35 o C, trong đó, nhiệt độ tối ưu cho Nitzschia sp. là 20-30 o C, và Navicula sp. là 26-31 o C (Lê Viễn Chí, 1996) [2], (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15]. 1.3.3. Độ mặn Các loại tảo khác nhau có khả năng thích nghi đối với các độ mặn khác nhau. Có những loài tảo có khả năng phát triển tốt trong môi trường có độ mặn cao đến hơn 35 ppt, nhưng cũng có những loài chỉ sống được trong môi trường có độ mặn chỉ vài phần ngàn. Hầu hết, các loài tảo sinh trưởng và phát triển được trong khoảng độ mặn 12-40 ppt, nhưng phát triển tốt hơn trong khoảng 20-35 ppt (Ukeles, 1976; Duerr & Misui, 1982. Trích theo Fulks & Main, 1991) [28]. Tại Việt Nam, các công trình nghiên cứu của Hoàng Thị Bích Mai (1995) [7] cho thấy loài tảo Chaetoceros sp. thích hợp phát triển ở độ mặn 20-35 ppt, tốt nhất ở 30 ppt, còn Skeletonema costatum lại thích hợp phát triển ở độ mặn thấp từ 15-25 ppt,… Tảo Chaetoceros gracilis có thể phát triển tốt như nhau trong khoảng độ mặn 10-35 ppt (Tôn Nữ Mỹ Nga, 2006) [9]. Hầu hết, các loài tảo thuộc giống Nitzschia, Navicula đều là những loài rộng muối, chúng có thể sinh trưởng ở độ mặn dao động từ 5-35 ppt (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], (Cao Thị Xoan, 2005) [17]. Trong 9 thực tế, Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản III đã nuôi Navicula sp. ở độ mặn 25-28 ppt. Trong điều kiện bị sốc mặn, khả năng điều hòa áp suất thẩm thấu, duy trì cân bằng nội môi của tế bào tảo sẽ bị ảnh hưởng. Độ mặn cao có thể ảnh hưởng trực tiếp tới hoạt tính quang hợp, hô hấp, tốc độ sinh trưởng của tế bào tảo (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15]. 1.3.4. pH pH được coi là yếu tố biến đổi nội tại. Sự biến đổi của nhiệt độ cũng như ánh sáng đều tác động đến pH thông qua quá trình quang hợp của tảo. pH của môi trường quá cao hoặc quá thấp đều làm chậm tốc độ tăng trưởng của vi tảo. Mỗi loài tảo sinh trưởng tối ưu trong môi trường có pH nhất định. pH tốt đối với hầu hết các loài tảo trong khoảng 7-9, và thích hợp nhất từ 8,2-8,7 (Ukeles 1971. Trích theo Fulks và Main, 1991) [28]. Khoảng pH này cũng thích hợp cho Navicula sp. và Nitzschia sp. (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], (Cao Thị Xoan, 2005) [17]. Tuy nhiên, có những loài chịu được khoảng dao động pH khá rộng, như Isochrysis galbana có thể phát triển tốt trong khoảng dao động pH từ 5-9 (Fulk & Main, 1991) [28]. 1.3.5 Các yếu tố dinh dưỡng Dinh dưỡng là yếu tố vô cùng quan trọng, ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của vi tảo cả về số lượng và chất lượng. Mật độ tế bào tảo nuôi thường cao hơn nhiều so với mật độ tảo trong tự nhiên, nên việc bổ sung dinh dưỡng vào môi trường nuôi là cần thiết. Thành phần dinh dưỡng đa lượng cần thiết cho tảo nuôi gồm các muối nitơ, photpho, silic… Các nguyên tố vi lượng tác động đến quá trình trao đổi chất của vi tảo. Môi trường bổ sung dinh dưỡng cho tảo đang được sử dụng phổ biến hiện nay cho tảo Silic là môi trường L và L1 (Guillard, 1975) [23]. Ở Việt Nam, môi trường bổ sung dinh dưỡng của Hoàng Thị Bích Mai (1995) rất phù hợp cho tảo silic, đang được sử dụng phổ biến tại các cơ quan nghiên cứu và trại nuôi tôm sú Nha trang (Hà Lê Thị Lộc, 2000) [6]  Nitơ: 10 Mặc dù nitơ chỉ chiếm từ 1-10% khối lượng cơ thể trong hầu hết các loại tảo, nhưng nhu cầu nitơ rất quan trọng đối với sự phát triển của tảo. Khi mà amon được sử dụng như nguồn nitơ duy nhất cho tảo thì môi trường pH sẽ giảm nhanh, gây ra một số hiệu ứng phụ ảnh hưởng tới sinh trưởng của tảo. Mzapharov và ctv (1974) (trích theo Phan Thị Thu Trang) [15] cho biết tảo có khả năng sử dụng đạm dưới dạng 3 hợp chất: Amoni, nitrat, và nitrit. Mỗi loài có nhu cầu sử dụng hàm lượng nitơ khác nhau. Hàm lượng nitơ bổ sung tốt nhất cho tảo Chaetoceros gracilis là 12,41-17,41 ppm (Tôn Nữ Mỹ Nga, 2006) [9]. Đối với Navicula sp. và Nitzschia sp., nhu cầu này từ 10-45 ppm, và tốt nhất ở 30 ppm (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], (Cao Thị Xoan, 2005) [17].  Photpho: Photpho có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng và phát triển của tảo. Chức năng chính của photpho là tham gia vào việc hình thành nhiều hợp chất hữu cơ có vai trò là những khâu chuyển hóa trung gian hoặc những chất có ý nghĩa then chốt trong trao đổi năng lượng và trao đổi chất. Hàm lượng photpho cần bổ sung cho hầu hết các loài vi tảo từ 2,5-15 ppm (trích theo Hà Lê Thị Lộc) [6], cho loài Chaetoceros gracilis là 2,27-3,27 ppm (Tôn Nữ Mỹ Nga, 2006) [9]. Đối với Navicula sp. và Nitzschia sp., hàm lượng photpho bổ sung tối ưu khoảng 10 ppm (Phan Thị Thu Trang, 2006) [15]. Lượng photpho nhiều quá hay ít quá đều không tốt cho sự phát triển của tảo (Hà Lê Thị Lộc, 2000) [6].  Silic: Silic vừa là yếu tố tạo sinh, vừa là nguyên tố tạo nên vỏ silic của tảo Silic. Theo Nguyễn Trọng Nho (1972) (trích theo Phan Thị Thu Trang, 2006) [15], silic rất cần cho việc xây dựng vỏ tảo Khuê. Nếu thủy vực tồn tại nhiều tảo Khuê thì trong thời kỳ tảo Khuê phát triển mạnh, hàm lượng silic sẽ giảm nhiều, do đó sẽ hạn chế sự phát triển cực đại của tảo. Một số tác giả khác chỉ ra rằng khi thiếu silic, tảo Khuê vẫn phát triển bình thường nhưng cấu trúc tế bào sẽ bị thay đổi và khó khăn cho việc xác định loài (trích theo Hoàng Thị Bích Mai, 1995) [7]. Cấu trúc phức tạp của vỏ silic giúp cho tảo có khả năng sử dụng đầy đủ ánh sáng mặt trời (trích theo [...]... khác trong đó có F2 để phân lập, lưu giữ hay nuôi sinh khối tảo silic lông chim Nhờ đó, môi trường dinh dưỡng dùng cho phân lập tảo silic sẽ phong phú, đa dạng hơn 3.2 Lưu giữ tảo trong các điều kiện khác nhau Sau khi phân lập được tảo Nitzschia longissima thuần chủng, ta phải tiến hành lưu giữ để duy trì tảo giống trước khi đem ra nuôi sinh khối Để tảo sinh trưởng tốt sau khi lưu giữ thì môi trường dinh... thái và thời gian lưu giữ phải phù hợp với loài Nitzschia longissima là vấn đề rất cần thiết 3.2.1 Lưu giữ tảo trong môi trường dinh dưỡng và nhiệt độ khác nhau ở dịch nuôi dạng lỏng Để xác định môi trường dinh dưỡng và nhiệt độ lưu giữ thích hợp cho Nitzschia longissima, 4 lô thí nghiệm lưu giữ tảo ở môi trường dinh dưỡng và nhiệt độ khác nhau trong dịch nuôi lỏng đã được bố trí Sau khi lưu giữ tảo. .. trình nghiên cứu sâu đến phương pháp phân lập và lưu giữ các loài tảo sống đáy, sống bám như Navicula sp., Nitzschia sp… thì còn quá ít ỏi Không những thế, việc ứng dụng các phương pháp phân lập, lưu giữ giống tảo đang được sử dụng ở nhiều nước trên thế giới vào công nghệ phân lập, lưu giữ cũng như nuôi đại trà vi tảo ở Việt Nam còn chưa phổ biến Vì thế, các loài tảo dùng làm thức ăn cho đối tượng nuôi... lượng tảo vừa thu được (Từ 0,5l đến 1l, 2l, 5l) Phân lập bằng các phương pháp Nuôi cấy trên môi trường thạch (agar) Pha loãng Kiểm chứng mức độ thuần chủng: Tách tảo ra khỏi môi trường phân lập và nuôi tảo trong các ống nghiệm (V = 10ml), xác định độ thuần chủng Tảo giống thuần chủng Phương pháp phân lập thích hợp Hình 2.1: Sơ đồ quá trình phân lập tảo giống thuần chủng 20 Tảo giống thuần chủng Lưu giữ. .. được tảo thuần chủng khi pha loãng Nitzschia longissima khá lâu, đó có thể là do mật độ tảo Nitzschia longissima ban đầu thấp và mẫu phân lập còn có nhiều loài tảo khác như tảo lam, tảo lục… Khi phân lập Nitzschia longissima bằng môi trường dinh dưỡng F2: Đĩa có độ pha loãng 10-1: Quan sát thấy lẫn nhiều loài tảo khác 10-2: Quan sát thấy lẫn nhiều loài tảo khác 10-3: Quan sát thấy lẫn nhiều loài tảo. .. mật độ tế bào tảo Nitzschia longissima được đưa ra nuôi sinh khối sau khi lưu giữ ở môi trường dinh dưỡng và nhiệt độ khác nhau (trong dịch nuôi lỏng) Ở cả 4 lô thí nghiệm, tảo đều lên đẹp, quan sát thấy dịch tảo có màu vàng nâu đặc trưng cho tảo silic, đặc biệt ở lô 1 và lô 3 Khi quan sát mật độ tế bào tảo Nitzschia longissima ở lô 1 và 2 (tảo được đưa ra nhân sinh khối sau khi lưu giữ ở môi trường... tảo, đặc biệt là tảo lục Chlorella sp., tảo lam Trichodesmium sp So sánh với phương pháp phân lập giống tảo thuần chủng trên thạch thì phương pháp pha loãng phù hợp với Nitzschia longissima hơn Điều này có thể do khi phân lập trên thạch Nitzschia longissima có gai dài, mảnh, lại sống đáy, nên khi lấy tảo ra khỏi bề mặt thạch, tảo bị tổn thương và đã ảnh hưởng đến sự phát triển của tảo Từ kết quả phân. .. longissima Đưa tảo giống vào lưu giữ với thời gian khác nhau (2 tuần và 4 tuần) Thời gian lưu giữ thích hợp Hình 2.2: Sơ đồ quá trình lưu giữ tảo giống 2.2.2 Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị, nước và môi trường thí nghiệm 2.2.2.1 Dụng cụ thí nghiệm - Lưới vớt thực vật nổi, động vật nổi và các chai nhựa để thu mẫu - Đĩa petri để phân lập tảo, bình nón 100 ml, 250 ml, 500 ml, 1000 ml để lưu giữ và nuôi thí nghiệm Ngoài... QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập tảo Nitzschia longissima bằng các phương pháp khác nhau 3.1.1 Phân lập bằng phương pháp nuôi cấy trên môi trường thạch Sau 8-9 ngày phân lập, quan sát, ta thấy xuất hiện các quần lạc có màu vàng nâu mọc rải rác trên đĩa thạch có bổ sung môi trường dinh dưỡng HBM – 95 và F2 Hình 3.1: Quần lạc tảo mọc trên các đĩa thạch Đưa quần lạc tảo Nitzschia longissima lên... chúng ta cần lưu ý có nên dùng phương pháp phân lập trên thạch để phân lập giống các loài tảo có phần phụ phát triển hoặc là sống tập đoàn hay không Vì thế, cần phải có những thực nghiệm về phương pháp này cho các loài tảo có hình thái khác nhau để có kết quả đúng đắn hơn 3.1.2 Phân lập bằng phương pháp pha loãng Kết quả phân lập tảo Nitzschia longissima bằng môi trường dinh dưỡng HBM-95 và F2 cho kết . khoa học cho việc phân lập và lưu giữ cho các loài tảo silic lông chim nói chung và loài Nitzschia longissima nói riêng. Ngoài ra, còn bổ sung giống tảo silic lông chim Nitzschia longissima thuần. sản phân công thực hiện đề tài: Phân lập và lưu giữ giống tảo silic lông chim Nitzschia longissima với các nội dung chính sau: 1. Phân lập giống tảo Nitzschia longissima thuần chủng bằng một. phương pháp khác nhau. 2. Lưu giữ giống tảo Nitzschia longissima trong các điều kiện khác nhau. Mục đích của đề tài: Phân lập và lưu giữ được loài tảo Nitzschia longissima thuần chủng. Ý