BÁO CÁO THÍ NGHIỆM SINH HỌC TẾ BÀO

1 TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG

2 TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG

1.Nguyễn Thị Nguyệt Anh 62300213

2.Nguyễn Anh Đức Duy 62300234

3.Nguyễn Khã Ngọc 62300293

3

MỤC LỤC

3

MỤC LỤC 4

MỤC LỤC HÌNH 5

MỤC LỤC BẢNGBÀI 1: KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC VÀ CÁCH SỬ DỤNG 6

4

MỤC LỤC HÌNH

HÌNH 1.1: CẤU TẠO KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC 7

HÌNH 1.2: CẤU TRÚC TẾ BÀO ĐỘNG VẬT ĐIỂN HÌNH 8

HÌNH 1.3: THAO TÁC TẠO TIÊU BẢN 10

HÌNH 3.3: TẾ BÀO BIỂU BÌ HÀNH VỚI GIỌT DUNG DỊCH KNO3 5% 24

HÌNH 3.4: TẾ BÀO HÀNH SAU KHI THẤM DUNG DỊCH KNO3 VÀ THAY BẰNG NƯỚC CẤT 24

HÌNH 3.5: KHỐI LƯỢNG TRỨNG BAN ĐẦU 27

HÌNH 3.6: KHỐI LƯỢNG TRỨNG SAU KHI NGÂM ACETIC ACID 27

HÌNH 3.7: KHỐI LƯỢNG TRỨNG SAU KHI NGÂM NACL 27

HÌNH 3.8: KHỐI LƯỢNG TRỨNG SAU KHI NGÂM NƯỚC CẤT 27

5

HÌNH 4.1: PHẢN ỨNG XANTHOPROTEIC 31

HÌNH 4.2: PHẢN ỨNG BIURÉT 32

HÌNH 4.3: QUAN SÁT TINH BỘT BẰNG KÍNH HIỂN VI 40X 33

HÌNH 4.4: QUAN SÁT TINH BỘT BẰNG KÍNH HIỂN VI 10X 33

HÌNH 5 1: ẢNH 2 ỐNG NGHIỆM CÂY THỦY SINH 42

HÌNH 5 2: ẢNH 2 ỔNG NGHIỆM CÂY THỦY SINH DƯỚI ÁNH SÁNG TRẮNG 42

HÌNH 5 3: KẾT QUẢ SẮC KÍ 44

HÌNH 5 4: DỊCH LỌC 3G LÁ SẠCH + 5ML CỒN + 20ML ACETON 44

HÌNH 5.5: THÍ NGHIỆM ĐỊNH TÍNH ENZYME DEHYDROGENASE 46

HÌNH 5 6: DỊCH KHOAI TÂY + H2O2 1% 47

6

BÀI 1: KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC VÀ CÁCH SỬ DỤNG I MỤC TIÊU BÀI HỌC:

Bài học trang bị cho sinh viên các kiến thức:

 Cấu tạo của kính hiển vi, cách sử dụng và những điểm cần chú ý khi sử dụng kính hiển vi

 Kiến thức về tế bào Eukaryote và Prokaryote

 Thực hành quan sát tế bào hành lá, tế bào biểu bì lá lẻ bạn, tế bào nấm

men Saccharomyces cerevisiae, tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis

 Các ốc điều chỉnh sơ cấp (ốc chỉnh thô)

 Các ốc điều chỉnh vi cấp (ốc chỉnh tinh): để điều chỉnh rõ nét của vật

b) Hệ thống quang học:

 Thị kính

 Vật kính

 Tụ quang: để tập trung ánh sáng vào vật

 Hệ thống đèn chiếu sáng hoặc gương phản quang

_Về mặt lý thuyết, kính hiển vi quang học cho phép nhìn thấy một vật có kích thước từ 0,2µm Thực tế, chỉ có thể thấy vật có độ lớn từ 0,3µm – 0,5um

7

_Các vật kính sử dụng trong kính hiển vi quang học có độ phóng đại x10, x20, x40, x60, x90, x100

_Thị kính thường có độ phóng đại x10 hoặc x15 _Vì vậy, độ phóng đại của kinh được tính như sau:

Độ phóng đại kính = độ phóng đại vật kính x độ phóng đại thị kính

2 Cách sử dụng:

_ Sử dụng kính hiển vi để quan sát mẫu vật ở trạng thái sống

_ Độ rõ của vật phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trong đó có yếu tố nguồn sáng Nguồn sáng có thể là nguồn sáng tự nhiên (dùng gương phản xạ), hoặc nguồn sáng điện Trong trường hợp dùng gương phản xạ ta điều chỉnh gương để có nguồn sáng tốt

_ Đặt tiêu bản lên bàn kính, nâng bàn kính lên sát vật kính có độ phóng đại nhỏ (x10, x20), sau đó vừa nhìn qua thị kính, vừa điều chỉnh ốc sơ cấp, từ từ hạ vật kính xuống cho đến khi thấy mẫu vật trong tiêu bản Sau đó, chỉnh ốc thứ cấp để thấy rõ ảnh của vật

_ Khi đã xác định vị trí cần xem, đổi vật kính sang độ phóng đại lớn hơn

(x40 hoặc x60) Sau đó điều chỉnh ốc thứ cấp để nhìn thấy rõ ảnh của vật

Hình 1.1: Cấu tạo kính hiển vi quang học

8

3 Những điểm cần chú ý khi sử dụng kính hiển vi:

_Không đụng tay vào các thấu kính Khi thấu kính bẩn, lau nhệ bằng vải bông mềm, sạch, tránh làm xước thấu kính

_Bỏ tiêu bản ra khỏi kính hiển vi khi đã sử dụng xong Lau sạch đầu kính trên vật kính bằng xylen (lưu ý không sử dụng quá nhiều xylen để lau vì xylen độc hại và làm tan chất gắn vật kính)

_Bảo quản kính hiển vi ở trạng thái sạch và khô _Không xoay các ốc điều chỉnh quá nhanh và mạnh

4 Tế bào Eukaryote và prokaryote:

a) Tế bào Eukaryote: còn gọi là sinh vật nhân thực, sinh vật nhân điển

hình hoặc sinh vật có nhân chính thức (danh pháp: Eukaryota hay Eukarya)

là một sinh vật gồm các tế bào phức tạp, trong đó vật liệu di truyền được sắp đặt trong nhân có màng bao bọc Sinh vật nhân chuẩn gồm có động vật, thực vật và nấm - hầu hết chúng là sinh vật đa bảo - cũng như các nhóm đa dạng khác được gọi chung là nguyên sinh vật (đa số là sinh vật đơn bảo, bao gồm

động vật nguyên sinh và thực vật nguyên sinh)

Hình 1.2: Cấu trúc tế bào động vật điển hình

9

b) Tế bào Prokaryote: hay sinh vật tiền nhân hoặc sinh vật nhân nguyên

thủy (Prokaryote) là nhóm sinh vật mà tế bào không có màng nhân Tuy nhiên, trong tế bào của một số loài Planctomycetales, ADN được bao bọc

bởi một màng đơn Đặc điểm chính để phân biệt với các sinh vật nhân chuẩn

được các nhà sinh học phân tử sử dụng trình tự gene mã hóa cho rRNA

- Tiêu bản nhuộm nấm men S.cerevisiae, vi khuẩn Bacillus subtilis

b) Ý nghĩa và vai trò của hóa chất

_Chất bảo quản mẫu: Glycerin có khả năng tạo ra môi trường không thuận lợi cho sự phát triển của vi khuẩn và nấm, do đó nó được sử dụng như một chất bảo quản mẫu trong các nghiên cứu vi sinh vật Glycerin có khả năng bảo quản mẫu trong thời gian dài mà không làm thay đổi tính chất của chúng

_ Chất phụ gia trong phân tích sinh hóa: Glycerin có tính chất hòa tan tốt trong nước và có thể được sử dụng như một chất phụ gia trong các phương pháp phân tích sinh hóa Nó có thể được sử dụng trong các phản ứng

nghiệm

_ Chất bảo quản trong mô học: Glycerin được sử dụng trong mô học để bảo quản và lưu trữ mẫu mô Khi mô được ngâm trong glycerin, nó giúp ngăn chặn quá trình hủy hoại mô, giữ cho mô được bảo quản tốt hơn và duy trì cấu trúc và tính chất của nó

_ Tạo độ nhớt: Glycerin có tính chất nhớt và có thể được sử dụng để điều chỉnh độ nhớt trong các dung dịch hoặc môi trường thí nghiệm Điều này có thể hữu ích trong các nghiên cứu về nhiễu loạn chuyển động và sự tương tác giữa các hạt nhỏ trong các hệ thống phức tạp

Tiến hành:

a) Quan sát tế bào hành lá

Hình 1.3: Thao tác tạo tiêu bản

11

Các bước thực hiện:

Bước 1: Cho một giọt glyxerine (hoặc nước cất) lên lame

Bước 2: Dùng đầu kim mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì

củ hành Đặt lớp biểu bì chìm trong một giọt glyxerine (hoặc nước cất)

Bước 3: Đậy lamelle, quan sát dưới kính hiển vi Thao tác tạo tiêu bản:

_Dưới vật kính nhỏ, ta thấy những tế bào biểu bì có hình thoi dài, xếp liền nhau Dịch chuyển tiêu bản, chịn những điểm tỏa sáng và rõ nhất đeẻ quan sát ở vật kính lớn

_Vật kính lớn hơn ( x40 ) ta thấy:

_Vách tế bào: dưới kính hiển vi ta thấy một đường ngăn cách giữa hai tế bào cạnh nhau tạo thành

_Tế bào chất: nằm ở xung quanh nhân và sát màng tế bào

_Không bào: là những khoảng trống trong tế bào chất, rất khó nhận biết vì không bào thường chứa đầy dịch tế bào nên không phân biệt được ranh giới giữa tế bào và tế bào chất

Kết quả:

12

b) Quan sát tế bào biểu bì lá lẻ bạn Các bước thực hiên:

Bước 1: Cho một giọt glycerine (hoặc nước cất) lên lame

Bước 2: Dùng đầu kim mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì

mặt dưới lá Đặt lớp biểu bì chìm trong một giọt glycerine (hoặc nước cất)

Bước 3: Đậy lamelle, quan sát dưới kính hiển vi

Kết quả: Thấy có vách ngăn giữa các tế bào rõ, không bào to, các hạt lục

lạp và khí khổng của lá

Hình 1.5: Tế bào hành tím 10X

Hình 1.4: Tế bào hành tím 40X

13

Hình 1.6: Tế bào biểu bì lá lẻ bạnHình 1.7: Tế bào biểu bì lá lẻ bạn

14

c) Quan sát tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae

Các bước thực hiện:

Bước 1: Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch

Bước 2: Sử dụng que cấy đã khử trùng lấy nấm men trong ống nghiệm cho

vào giọt nước cất trên lame

Bước 3: Từ từ đậy lame, tránh tạo bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi

d) Quan sát tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis

Các bước thực hiện:

Bước 1: Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch

Bước 2: Sử dụng que cấy đã khử trùng lấy vi khuẩn trong ống nghiệm cho

vào giọt nước cất trên lame

Bước 3: Từ từ đậy lame, tránh tạo bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi

15

BÀI 2: MỘT SỐ THIẾT BỊ THÔNG DỤNG VÀ THAO TÁC CƠ BẢN TRONG THÍ NGHIỆM SINH HỌC TẾ BÀO PHÂN TỬ

I MỤC TIÊU BÀI HỌC

Bài học trang bị cho sinh viên các kiến thức:

 Biết đƣợc các dụng cụ và thiết bị trong phòng thí nghiệm của thí nghiệm sinh học tế bào – phân tử

 Biết đƣợc cách sử dụng các dụng cụ và các thiết bị trong phòng thí nghiệm sinh học tế bào – phân tử

 Hiểu đƣợc công dụng của từng loại dụng cụ và biết đƣợc những dụng cụ đặc trƣng

Hình 2.1: Eppendorf

 Lưu ý: Cần rất thận trọng khi hút các dung môi hữu cơ không để gần

nguồn nhiệt (đèn cồn), không hấp khử trùng (trừ khi có chỉ định của hãng sản xuất), tuyệt đối không được điều chỉnh thể tích dưới ngưỡng tối thiểu và trên ngưỡng tối đa cho phép

Hình 2.2: Cách sử dụng Eppendorf

17

c) Pipet: Dùng để đong, hút dung dịch có độ chính xác cao hơn Có rất

nhiều loại pipet thủy tinh khác nhau như pipet Pasteur, pipet chia vạch thông

thường,

_Hiện nay trong các phòng thí nghiệm nghiêm cấm việc hút pipet bằng

miệng, thay vào đó ta dùng quả bao cao su, quả bóp hút 3 van, hoặc dùng

pipet hút tự động (pipet aid)

Hình 2.4: Một số loại pipet

Hình 2.3: Cấu tạo và một số loại Micropipette

18

d) Burét: Dùng trong các thí nghiệm chuẩn độ để xác định nồng độ các

chất

_Khi dùng cần lưu ý khóa cửa burét nên bôi vaselin để không bị rít

_Tuyệt đối khí khi chuẩn độ không để có bọt khí, nên cầm khóa burét bằng tay trái còn tay phải cầm lắc khi chuẩn độ

_Mắt nhìn thẳng burét khi đọc thể tích và burét phải được kẹpthẳng

19

Hình 2.6: Hình ảnh máy lắc ổn nhiệt

b) Tủ hút khí độc (tủ cấy vô trùng): được sử dụng khi cần thao tác trong

điều kiện vô trùng

+Tủ phải luôn được giữ sạch bề mặt thí nghiệm được khử trùng bằng cồn +Trước và sau sử dụng thanh trùng đều phải bật đèn tử ngoại ( đèn UV )

trong ít nhất 15 phút

20

c) Tủ lạnh: Là tủ mát (40C) hoặc tủ lạnh sâu (-200C ) dùng để giữ các sinh

phẩm, hóa chất cần giữu ở nhiệt độ lạnh

Hình 2.7: Hình ảnh tủ hút khí độc (tủ cấy vô trùng)

21

d) Máy li tâm: dùng để thu nhận các phần tử khác nhau trong một dung

dịch, có hai phương pháp ly tâm:

+ Ly tâm phân đoạn (ly tâm vùng): Phuong pháp này tách các phần tử + Ly tâm đẳng tỷ trọng: Đây là phương pháp phân tách các phần tử vật chất dựa vào tỷ trọng của chúng Phương pháp này cho hiệu quả phân tách rất cao, các phân đoạn được phân tách rất thuần khiết

3 Kết quả và thảo luận

_Qua từng thí nghiệm và tìm hiểu các phương pháp và các cách sử các thiết bị trong phòng thí nghiệm sinh học tế bào – phân tử chúng ta đã hiểu hơn và biết cách sử dụng và những lưu ý khi sử dụng thiết bị trong phòng thí nghiệm

_Áp dụng những kiến thức đã được học và nắm bắt tốt kĩ thuật để áp dụng vào thực tiễn sau này

Hình 2.8: Hình ảnh tủ lạnh

Hình 2.9: Hình ảnh máy ly tâm

21

BÀI 3: VẬN CHUYỂN NƯỚC QUA MÀNG I MỤC TIÊU BÀI HỌC:

Bài học trang bị cho sinh viên các kiến thức:

 Tính bán thấm của màng nguyên sinh, các kiến thức về dung dịch ưu trương, nhược trương, đẳng trương

 Quan sát và ghi nhận hiện tượng phản co nguyên sinh

 Cách xác định nồng độ dung dịch dựa trên sự thay đổi kích thước mô

II LÝ THUYẾT:

1 Đặc điểm màng bán thấm (màng thấm chọn lọc):

_ Màng bán thấm là 1 loại màn sinh học cho phép 1 số phân tử hay ion qua màng bởi cơ chế khuếch tán và đôi khi chuyên biệt bằng khuyếch tán có trợ lực _ Tốc độ vận chuyển qua màng tùy thuộc vào áp suất, nồng độ và nhiệt độ của phân tử hay chất tan cũng như độ thấm của màn đối với mỗi chat tan

_ Tùy thuộc vào màn và chất tan, độ thấp có thể thay đổi theo kích cỡ, độ tan, tính chất hóa học của chất tan Tốc độ thấm và độ thấm của màng được xác định tùy vào cấu trúc của màng

2 Co nguyên sinh và phản co nguyên sinh:

_ Co nguyên sinh là một quá trình diễn ra trong tế bào thực vật, trong đó tế bào chất bị co rút lại và tách khỏi thành tế bào thông qua quá trình thẩm thấu

_ Quá trình ngược lại là phản co nguyên sinh, xảy ra khi tế bào ở trong môi trường nhược trương, tức áp suất thẩm thấu của môi trường ngoài cao hơn bên trong tế bào và điều này khiến nước thấm từ ngoài vào trong tế bào

22

_ Thông qua việc quan sát sự co và phản co nguyên sinh thì có thể xác định được tính trương của môi trường tế bào cũng như mức độ dung môi thẩm thấu qua màng tế bào

_ Có hai dạng co nguyên sinh nếu xét theo bề mặt khoảng không giữa màng tế bào và vách tế bào, đó là co nguyên sinh lồi và co nguyên sinh lõm

Hình 3.1: Minh họa tế bào thực vật trong các môi trường ưu trương, đẳng trương và nhược trương

23

- Dung dịch nước muối 5% - Nước cất

a) Thí nghiệm 1: Hiện tượng co nguyên sinh và phản co nguyên sinh

 Dùng kim mũi mác tách lấy một lớp tế bào biểu bì hành có màu đỏ đặt lên lame với 1 vài giọt nước, đậy lamelle

 Xem kính ở bội giác nhỏ, tất cả tế bào có màu đỏ đồng đều Tại một phía của lamelle ta nhỏ giọt dung dịch KNO3 5% và phía đối diện đặt miếng giấy thấm để rút nước Quan sát hiện tượng, ghi nhận kết qủa và giải thích

 Sau đó, tại một phía của lamelle, nhỏ vài giọt nước cất và phía đối diện đặt miếng giấy thấm để rút nước, lập lại vài lần, quan sát, ghi nhận hiện tượng và giải thích

24

Hình 3.2: Tế bào biểu bì hành có màu đỏ đặt lên lame với 1 vài giọt nước

Hình 3.3: Tế bào biểu bì hành với giọt dung dịch KNO3 5%

Hình 3.4: Tế bào hành sau khi thấm dung dịch KNO3 và thay bằng nước cất

Giải thích hiện tượng:

 Khi cho dung dịch KNO3 5% vào tiêu bản, môi trường bên ngoài trở lên ưu trương, nước thấm từ tế bảo ra ngoài làm tế bảo mất nước, chất nguyên sinh co lại, lúc này màng sinh chất tách khỏi thành tế bào gây ra hiện tượng co nguyên sinh ở tế bào biểu bì hành tím

25

 Khi cho thêm nước cất vào tiêu bản, môi trường ngoài nhược trương làm nước lại thấm vào trong tế bào làm tế bào từ trạng thái co nguyên sinh trở lại trạng thái bình thường tạo nên phản co nguyên sinh

Thí nghiệm 2: Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương dựa trên sự biến đổi

 Để qua 24h, vớt trứng ra cân khối lượng và ghi nhận lại

 Cho 2 quả trứng vào 2 cốc thủy tinh Cho nước muối vào cốc thủy tinh 1, nước cất vào cốc thủy tinh 2

 Sau 8h, cân trọng lượng trứng và ghi nhận

26

Giải thích hiện tượng:

Trứng để trong môi trường hypertonic (ưu trương) sẽ bị mất nước và nhẹ hơn khối lượng ban đầu, trứng để trong môi trường hypotonic (nhược trương) sẽ nhận thêm nước và nặng hơn khối lượng ban đầu

Khối lượng trứng ban đầu

Khối lượng trứng sau ngâm acetic

acid

Khối lượng trứng trong nước muối

Khối lượng trứng rong nước cất

Trứng 1: 63.12g Trứng 2: 64.26g

Trứng 1: 83.55g Trứng 2: 95.38g

Trứng 1: 98.93g Trứng 2: 90.66g

Bảng 3 2: Thí nghiệm trứng

27

Hình 3.7: Khối lượng trứng sau khi ngâm NaCl

Hình 3.8: Khối lượng trứng sau khi ngâm nước cất

Hình 3.6: Khối lượng trứng sau khi ngâm acetic acid Hình 3.5: Khối lượng trứng ban đầu

28

BÀI 4: THÀNH PHẦN HƯU CƠ CỦA TẾ BÀO EUKARYOTAE I MỤC TIÊU BÀI HỌC:

Bài học trang bị cho sinh viên các kiến thức:

 Các thành phần hữu cơ của tế bào Eukaryotae

 Làm thí nghiệm và nhận biết các thành phần hưu cơ của tế bào Eukaryotae

II LÝ THUYẾT 1 Protid

_Protid là đại phân tử cấu tạo gồm những monomere là các acid amin nối với nhau bằng liên kết peptid ( - CO - NH -) Protein trong tế bào hiện diện ở cả tế bào chất lẫn trong nhân liên kết với DNA

2 Glucid

_Glucid là nhóm hợp chất hữu cơ phổ biến ở Động Thực vật và Vi sinh vật Glucid là thành phần cấu tạo nên tế bào của các sinh vật, tùy loài mà chúng chiếm những tỷ lệ khác nhau Dựa vào cấu tạo mà glucid được chia thành 2 loại chính:

_Glucid đơn giản: cấu tạo gồm một đơn vị đường đơn, được gọi là monosaccharid, gồm có glucose, fructose,