bài phúc trình thực hành hóa sinh

Do đó khi thêm iod vào thì iod sẽ tác dụng với phần tinh bột chưa bị thủy phân , tạo dung dịch có màu cam đậm- Ống 3, ống 4, ống 5: sau thời gian là 10,15 và 20 phút, thì lượng hồ tinhbộ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NAM CẦN THƠKHOA DƯỢC

BÀI PHÚC TRÌNH THỰC HÀNHHÓA SINH

Lớp: DH22DUO04Nhóm: 02 Tiểu nhóm: 05Sinh viên thực hiện:

Họ và tên sinh viên MSSV1 Nguyễn Phú Quý 220801 2 Ngô Thị Hoàng Quyên 2266173 Nguyễn Như Quỳnh 2251244 Nguyễn Hoài Thân 225846

5 Nguyễn Thị Thúy Vy 224783

Cần Thơ - 2023BÀI 2:ENZYME

J Thí nghiệm 1: Tính đặc hiệu của enzyme

1 Hóa chất

- Dung dịch saccharose1%- Dung dich tinh bột 1%- Dung dịch Fehling A, B- Nước bọt pha loãng 1/102 Tiến hành thí nghiệm

Đun cách thủy 370C trong 10 phút

Đun sôi ở bếp cách thủy 1000C trong 5 phút3 Nhận xét và giải thích thí nghiệm

Ống 2: Hiện tượng: Dung dịchcó màu xanh dương do

có màu của thuốc thửFehling

- Do saccharose làđường đoi nên khôngcó tính khử nên khôngphản ứng với thuố thửFehling nên chỉ cómàu xanh dương củathuốc thử Fehling.

Phương trình hóa học:

J Thí nghiệm 2: Thủy phân tinh bột bằng amylase

1 Nguyên tắc:

∙ Tinh bột khi có mặt của amylase sẽ bị thuỷu phân thành các Dextrin.∙ Thời gian thủy phân càng dài thì càng tạo ra các Dextrin với phân tử lượng càng nhỏ và cuối cùng là mantose

∙ Các sản phẩm tạo thành ở mức đọ thủy phân khác nhau từ tinh bột tạo thành màu khác nhau với iod

2 Hóa chất và dụng cụ2.1 Hóa chất 1 ml nước bọt∙ 19 ml nước cất∙

Dung dịch hồ tinh bột 1%∙ Dung dịch iod ∙

2.2 Dụng cu: - 5 ống nghiệm

- 1 cốc có mỏ3 Cách tiến hành

1 ml hồ tinh bột + 0,5ml dd nước bọt 1/20 (1 ml nước bọt + 19 ml nước cất)

* Ống 1: sau 1 phút, 1 giọt iod 1% * Ống 2: sau 5 phút, 1 giọt iod 1% * Ống 3: sau 10 phút, 1 giọt iod 1% * Ống 4: sau 15 phút, 1 giọt iod 1% * Ống 5: sau 20 phút, 1 giọt iod 1%

4 Nhận xết và giải thích kết quả* Nhận xét:

Ống 1 Hiện tượng: Trong ống nghiệm dung dịch có màuđen tím

Ông 2 Hiện tượng: Trong ống nghiệm dung dịch có màucam đậm

Ống 3 Hiện tượng:Trong ống nghiệm dung dịch có màuvàng

Ống 4 Hiện tượng: trong ống nghiệm dung dịch có màuvàng nhạt

Ống 5 Hiện tượng: Trong ống nghiệm dung dịch có màuvàng rất nhạt

* Giải thích :

- Ống 1:Do ban đầu enzyme chưa thủy phân tinh bột nên khi thêm iod

vào, dung dịch có màu đen tím, chứng tỏ là tinh bột chưa thủy phân tác dụng với enzym.

- Ống 2: Sau 5 phút, một phần tinh bột trong ống nghiệm đã bị enzyme

thủy phân Do đó khi thêm iod vào thì iod sẽ tác dụng với phần tinh bột

chưa bị thủy phân , tạo dung dịch có màu cam đậm

- Ống 3, ống 4, ống 5: sau thời gian là 10,15 và 20 phút, thì lượng hồ tinh

bột trong ống nghiệm đã bị thủy phân hoàn toàn tạo thành các Dextrin thời gian càng dài , lượng Dextrin bị enzyme thủy phân thành các dextrin với phân tử lượng càng nhỏ và cuối cùng là mantose Mà các dextrin với phân tử lượng nhỏ mà mantose không cho phản ứng tạo màu với iod Do đó cho màu vàng nhạt dần là do dextrin chưa bị phân hủy thành các phân tử thấp tác dụng với iod giảm dần

BÀI 3: HÓA HỌC CHUYỂN HÓA LIPID VÀ ỨNG DỤNG

J Thí nghiệm 3.2.1: Khảo sát tính hòa tan lipid

Cho vào 2 ống nghiệm các dung dịch sau:

Nhận xét Giải thích

trong nước tạo các hạtnhũ tương ( tách 2 lớp- lớp dầu nổi phía trênvà lớp nước nằm phía

Vì dầu ăn (Lipid) làchất không phân cựcmà nước là dung môiphân cực nên dầu ănkhông tan trong nước

tạo thành nhũ tươngỐng 2 Dầu ăn tan trong alcol

( ether)

Vì dầu ăn là chấtkhông phân cực màalcol(ether) là dungmôi không phân cực

nên dầu ăn tan đượctrong alcol (ether)

J Thí nghiệm 3.2:Phản ứng xà phòng hóa

 Cho vào bình nón: 1ml dầu ăn + 5ml NaOH 10% trong alcol Đậy bằng phễu: Đun trên bếp điện khoảng 10-15 phút, thỉnh thoảng lắc đều bình Khi dầu tan hết trong NaOH , lấy phễu ra, tiếp tục đun cho đến khô sẽ được xà phòng.

 Hòa tan xà phòng trong 10ml nước, đun cho tan rồi chia thành 2 phần: - lấy 1 nửa cho vào ống nghiệm đun sôi, thêm 10 giọt HCl đậm đặc,tiếp tục đun sẽ có phần đặc nổi lên trên và phần lỏng ở dưới

- còn một nửa để lại làm phản ứng nhũ tương hóa.* Kết quả:

Dung dịch tách thành 2 lớp: phần đặc nổi lên trên là xà phòng và phần lỏng phía dưới là tạp chất gồm glycerol, NaCl, Việc cho HCl vào ống nghiệm nhằm để trung hòa lượng NaOH dư có trong phản ứng.

J Thí nghiệm 3:Sự nhũ tương hóa

∙ Nhũ tương dầu trong nước là 1 nhũ tương không bền, khi cho thêm một chất nhũ tương hóa như: Xà phòng, muối mật, Na2CO3, sẽ được nhũ tương bền.

Cho vào 3 ống nghiệm∙

Nhận xét Giải thíchỐng 1 Tách hạt nhỏ, khi cho

Na2CO3 vào làm đụchỗn hợp dầu trongnước, kèm theo hạt li ti

bám vào thành ốngnghiệm

Dầu ăn( Lipid) là chấtkhông phân cực, chỉ

tan trong dung môikhông phân cực, mànước là dung môi phân

cực nên dầu ăn khôngtan được trong nước

trong nước cất, cho xàphòng vào hỗn hợp, 1phần xà phòng lắngxuống đáy, một nổi

trên mặt nước

trong nước cất , tạothành các hạt nhũtương không bền

*** Giải thích vai trò của muối mật trong tiêu hóa và hấp thu mỡ ở ruột Muối mật có vai trò quan trọng trong tiêu hóa và hấp thu mỡ bởi vì: - Muối mật có tác dụng làm giảm sức căng bề mặt của các hạt mỡ trong thức ăn,đóng vai trò như xà phòng kết hợp với photpholipid làm vỡ các giọt mỡ trong quá trình nhũ tương hóa mỡ, tạo thành các hạt micelle, nhờ đó hỗ trợ hấp thu mỡ.

- Nhờ đó các hạt micelle có vai trò chuyên chở lipid đến niêm mạc ruột non để lipid được hấp thu Nếu không có muối mật, 40% lipid trong thức ăn sẽ bị mất theo phân

J Thí nghiệm 4 Tìm các thể ceton trong nước tiểu:

+ Cho vào 1 ống nghiệm : - Nước tiểu 10 giọt- Acid acetic đậm đặc 2 giọt- Natri nitroprussiat 10% 2 giọt

+ Trộn đều, nghiêng ống nghiệm 45 , nhỏ cẩn thận theo thành ống 0nghiệm 15 giọt amoniac đậm đặc

+ Sau vài phút, nếu có thể ceton sẽ thấy phần màu tím ở mặt phân cách hai dung dịch

ceton trong nước tiểu (+)

- Bình thường không có các chất ceton trong nướctiểu

- Có trong các trường hợp:

+ Bệnh tiểu đường nặng hoặc điều trị bằng insulin không đủ liều, bệnh nhân đe dọa bị hôn mê.

+ Nhịn đói lâu, nôn nhiều

+ Vận động cơ nhiều, Cushing,

Ống 2: nước tiểu nhóm Không có sự thay đổi màu, không có thể ceton trong nước tiểu (-)

BÀI 4: HÓA HỌC CHUYỂN HÓA GLUCID VÀ ỨNG DỤNG

- Dung dịch naphtol 1% trong alcolhol 90% 3.Tiến hành

Dung dịch

glucid 1ml glucose 1% 1ml fructose 1% 1ml hồ tinh bột1%

Lắc đều

4.Hiện tượng và giải thích

* Ống nghiệm 1 và 2: có xuất hiện lớp phân cách màu tím giữa 2 phânlớp trong dung dịch

* Ống nghiệm 3:Không xuất hiện lớp phân cách màu tím giữa 2 phân

lớp trong dung dịch

¶ Xét về cường độ màu của các ống nghiệm thì ống nghiệm chứa fructose > glucose > hồ tinh bột

¶ Ý nghĩa của phản ứng Molish :Dùng để phân loại các nhóm carbohydrat và phân biệt nhóm carbohydarat với những chất khác dựa vào cường độ màu của chúng

*Do các glucose, fructose dưới tác dụng của acid sunfuric đặc chúng sẽ bị khử nước cho ra 5- hydroxylmethyl furfural và các chất này trong môi trường acid sẽ phản ứng thân điện tử và cho ra phức tím

* do fructose có cấu trúc vòng 5 cạnh nên trong môi trường acid đặc sẽbị phá vỡ thành furfural, glucose có cấu trúc vòng 6 cạnh nên bền hơn còn hồ tinh bột khá bền vì có lk -1,4 glicozidα

J 4.2 Phản ứng Fehling

1.Nguyên tắc

Môi trường kiềm mạnh, các MS ở dạng enediols không bền, dễ dàng ∙khử các kim loại mạnh như Cu2+, Ag+, Hg2+ Các nối đôi bị cắt đứt tạo thành những hỗn hợp đường - acid.

2.Thuốc thử

∙ Thuốc thử Fehling gồm 2 dung dịch

Dung dịch A - CuSO4 kết tinh 35g - H2SO4 đậm đặc 5ml - Nước cất vừa đủ 1000ml

Dung dịch B - KOH/NaOH 135g- Nước cất vừa đủ 1000ml- Natri kali tartrat 150g3.Tiến hành

∙ Làm trên 5 ống nghiệm

Dung dịch Ống 1 Ống 2 Ống 3 Ống 4 Ống 5

0,5 mlglucose

0,5 mlfructose

0,5 mllactose1%

0,5 mlsacchaaros

e 1%

0,5 ml hồtinh bột

1%Đun sôi cách thủy 3 phút

4.Hiện tượng, giải thích và phương trình phản ứng

Khi dùng, trộn haii dung dịch A và B với thể tích bằng nhau, natri kali ∙tartrat sẽ hòa tan Cu(OH)2 do CuSO4 trong môi trường kiềm sinh ra Tạomột phức Cu2+ alcolat màu xanh thẫm, lần lượt cung cấp Cu2+ cho phản ứng oxy hóa khử

(Thứ tự ống nghiệm từ phải qua trái)

* * Ứng dụng của phản ứng Fehling : được ứng dụng trong sinh hóa lâm sàng để kiểm tra tình trạng lượng đường có trong nước tiểu của bệnh nhân tiểu đường

J Thí nghiệm 4.3: Phản ứng SELIWANOFF

1 Nguyên tắc

- Fructose và những cetohexose khác nhau tạo thành hydroxyl methyl - furfural, khi đun nóng với acid vô cơ, chất này tác dụng với resorcinol cho phức màu đỏ.

- Các aldose cũng có thể tạo thành hydroxylmetyl-furfural khi đun nóng với acid nhưng phản ứng xảy ra rất chậm, nên phản ứng Seliwanoff có tính đặc hiệu cho cetose.

+ Resorcinol 0,05g

+ HCl pha loãng 1/3 100ml3.Tiến hành

Lần lượt cho vào 2 ống nghiệm

Dung dịch đường 0,5 ml fructose 1% 0,5 ml glucose 1%Đun sôi cách thủy 10 phút

4 Hiện tượng và giải thích

- Ống 1 xuất hiện màu đỏ anh đào, vì dưới tác dụng của HCl đặc và t các 0 cetol hexose và cetol pentose tạo thành hydroxyl metyl furfural và furfural Các chất này ngưng tụ với resorcinol tạo thành sản phẩm ngưng tụ có màu đỏ anh đào

- Ống 2:Không xảy ra hiện tượng Các aldose cũng có thể tạo thành hydroxylmetyl - furfural khi đun nóng với acid, nhưng phản ứng xảy ra chậm

J Thí nghiệm 4.4: Thủy phân saccharose 1.Nguyên tắc

Saccharose không có tính khử, nhưng khi thủy phân bằng acid thì ∙saccharose biến thành glucose và fructose có tính khử.

2.Tiến hành

- Tạo dịch thủy phân: Cho vào ống nghiệm 2ml dung dịch saccharose 1%và 4 giọt HCl 1N, đun sôi cách thủy 5 phút lấy dịch thủy phân này làm phản ứng Fehling và Seliwanoff.

- Tiến hành trên 4 ống nghiệm

Dung dịch thuốc thử Phản ứng Fehling Phản ứngSeliwanoff

3 Hiện tượng và giải thích

- Ống 1: tạo kết tủa đỏ gạch do khi thủy phân saccharose bằng acid tạo thành glucose và fructose đều có tính khử nên phản ứng được với thuốc thử Fehling

- Ống 2: Không hiện tượng Do Saccharose không có - OH bán acetal nênkhông có tính khử Không phản ứng với thuốc thử Fehling→

- Ống 3: tạo kết tủa màu đỏ anh đào Do thủy phân Saccharose có tạo ra fructose ( có nhóm ceton)

- Ống 4: tạo kết tủa đỏ anh đào Do thuốc thử Seliwanoff có chưa 1/3 HCl pha loãng , trong điều kiện đun cách thủy 10 phút saccarose bị →thủy phân tạo fructose.

( Thứ tự ống nghiệm xếp theo thứ tự tù phải sang trái)

JThí nghiệm 4.5: phản ứng màu Polysaccharid

(tác dụng của iod trên tinh bột)

Dung dịch xuất hiện có màu xanh dương tím

* Để phân biệt giữa monosacharid, disaccharid và polysaccharid thì+ Cho vào 3 ông nghiệm tương ứng với từng chất có thể tích bằng nhau

+ Nhỏ 5-10 giọt thuốc thử lugol ( ống 3 xuất hiện màu xanh dương tím, 2 ống còn lại không có hiện tượng)

+ tiếp đến nhỏ 5-10 giọt thuốc thử Fehling ( ống 1 xuất hiện kết tủa

đỏ gạch, ống còn lại ống disaccharid)

J Phản ứng 4.6: Phản ứng glucose trong nước tiểu ( Phương pháp Benediet)

1.Nguyên tắc

Glucose có trong aldehyde sẽ khử Cu Thành Cu , tạo oxy đồng 2++chất(Cu2O) tủa màu đỏ gạch

2 Thuốc thửThuốc thử benediet

- Dung dịch A + Natri citrat 173g + Na2CO3 200g + Nước cất đun nóng 700ml - Dung dịch B + CuSO4.5H2O 17.3g + Nước cất 100ml Đổ dd B từ từ vào dd A, lắc dều thêm nứơc cất vào vừa đủ 1000ml⁕

Đun sôi cách thủy⁕

Thuốc thử phải không có tủa đỏ⁕

nihydrin 0,2% sẽ cho màu xanh tím.

Nihydrin là 1 chất oxy hóa nên có thể tạo nên phản ứng khử⁕

carboxyl oxy hóa của acid amin với H2O Sau đó, nihydrin bị khửlại tác dụng lại với NH3 vừa được phóng thính và kết hợp với 1phân tử nihydrin thứ 2, tạo thành sản phẩm ngưng kết có màu xanhtím.

Đây là phản ứng chung cho các protid và acid amin tự do Phản⁕

ứng này cho phép nhận dạng tất cả các acid amin có NH2 và COOH tự do Ngoại trừ prolin và OH prolin tác dụng với nihydrincho màu vàng.

+ Cả 3 ống nghiệm đều xuất hiện màu xanh tím

+ Các acid amin và peptid khi phản ứng với nihydrin sẽ bị dezamin hóa, oxy hóa và decarboxyl hóa tạo NH3, CO2 và aldehyde tương ứng.

JThí nghiệm 5.2: Phản ứng Biuret ( xác nhận các kiên kết peptid)

- Dung dịch lòng trắng trứng 1 ml - Dung dịch NaOH 40% 0,5 ml

- Dung dịch CuSO 1% 3 giọt4Lắc đều

3 Hiện tượng và giải thích

Xuất hiện dung dịch màu tím hồng Trong môi trường kiềm các protein có thể chứa 2 lk peptid trở lên, có thể phản ứng với CuSO , tạo 4thành phức có màu xanh tím, tím hồng, tím đỏ Tùy thuộc vào độ dài của mạch peptid

JThí nghiệm 5.3: Phản ứng tủa protein bởi nhiệt và môi trường acid yếu

1.Nguyên tắc

Protein hòa tan trong nước hình thành dung dịch keo, trong đó có tiểu phân protein tích điện cùng dấu và mang lớp áo nước ( hydrat hóa) Nhờ tích điện cùng dấu nên các tiểu phân protein đẩy nhau và nhờ có lớp áo nước nên chúng ngăn cách nhau, vì vậy dung dịch keo được bền vững.

Nếu mất 2 yếu tố trên thì các tiểu phân protein do chuyển động sẽ gặp nhau, dính vào nhau thành những hạt to và kết tủa

 Làm mất điện tích của protein bằng cách Thêm chất điện giải: NaCl, (NHÄ 4)2SO 4,

Đưa pH của môi trường chứa protein về pHi đẳng điện của Äprotein

Các tiểu phân protein khi đã mất điện tích chỉ còn lớp áo nước thì Ädễ bị kết tủa, nếu làm mất lớp áo nước thì protein sẽ kết tủa

 Làm mất lớp áo nước của protein bằng cách

Thêm chất khử nước vào môi trường chứa proteinÄ

Làm biến tính protein bằng cách đun sôi, thêm acid hay kiềm Ämạnh hoặc muối kim loại nặng.

2 Tiến hành Cho vào 5 ống nghiệm

Lòng trắng trứngđã thẩm tích

Đun sôi cách thủy

3 Hiện tượng và giải thích

- Ống 1: xuất hiện kết tủa trắng đục, protein bị ảnh hưởng bởi t và 0bị mất lớp áo nước bên ngoài nhưng vẫn tích điện

- Ống 2: xuất hiện kết tủa trắng đục, vì khi cho 2 giọt acid acetic vôsẽ tạo nên môi trường acid yếu, nhóm -COO sẽ bị ức chế phân li nên tiểu phân protein mất điện tích, pH môi trường đạt gần tới điểm đẳng điện

- Ống 3: không xuất hiện kết tủa

- Ống 4: có kết tủa trắng đục nhanh và nhiều Khi cho 5 giọt acid acetic 10% và 2 giọt NaCl bão hòa sẽ tạo nên môi trường trung hòa về điện Nên tạo kết tủa

- Ống 5: Dung dịch kết tủa chậm trong môi trường kiềm.( Không kết tủa).

J Thí nghiệm 5.4: Phản ứng tủa bởi acid mạnh và không đun nóng

1 Nguyên tắc

Các acid vô cơ mạnh (HNO H3,2SO4, HCl, ) và các acid hữu cơ (acid trichloracetic, acid sufosalicylic) có tác dụng làm biến tính và kết tủa đại đa số protein.

2.Tiến hành

¶Acid vô cơ (Ống 1)

Cho vào ống nghiệm 2 ml dd lòng trắng trứng, để nghiêng ống nghiệm 45 , nhỏ từ từ lên thành ống nghiệm cho chảy xuống01ml HNO đặc.3

¶ Acid hữu cơ (Ống 2)

Cho vào ống nghiệm các dung dịch sau và trộn đều Lòng trắng trứng 2ml Dung dịch acid trichloracetic 3% 1ml3 Hiện tượng và giải thích

- Ống 1: Khi thêm HNO đặc vào lòng trắng trứng thấy xuất hiện 3

kết tủa màu vàng là sản phẩm của polynitro thu được trong quá trình nitro

hóa nhân thơm trong protein.

- Ống 2: Khi cho acid trichloracetic vào lòng trắng trứng có kết tủa trắng đục xuất hiện là do acid trichloracetic đã làm biến tính và tạo kết tủa.

JThí nghiệm 5.5: Tìm protein trong nước tiều

Phương pháp đông kết

Tủa protein bằng acid yếu + đun nóng

- Cho vào ống nghiệm 5 ml nước tiểu, đem đun sôi trong 2 phút

- Sau đó thêm vào khoảng 3-5 giọt acid acetic 1% - Nếu trong nước tiểu có protein thấy trầm hiện ( tủa) Phương pháp Heller

Tủa protein bằng acid mạnh và không đun

- Cho vào ống nghiệm 2ml nước tiểu, sau đó nghiêng ống nghiệm và cho vào từ từ 1 ml HNO đặc3

- Quan sát ở mật phân cách chất lỏng thấy protein kết tủa như 1 đám mây mờ.

⁂ Hiện tượng, giải thích và biện luận kết quả

Phương pháp đông tụ

Nếu trong nước tiểu có protein thấy trầm hiện Có hiện tượngtrên là bởi vì pH=pH phân tử protein không tích điện nên chúng không icó sức đẩy tĩnh điện và chúng dễ dính lại với nhau tạo kết tủa

Phương pháp Heller

Nếu trong nước tiểu có protein quan sát được ở 2 mặt phân cách chất lỏng thấy protein kết tủa như 1 đám mây mờ Do HNO đặc làm3 biến tính protein có trong nước tiểu tạo kết tủa