I. ĐẶT VẤN ĐỀ • Vi sinh vật trên bề mặt mắt (OS) góp phần cho các bệnh nhiễm trùng và tự miễn dịch của mắt. • Phân tích toàn diện hệ vi sinh vật trên OS là không thể vì vẫn còn nhiều hạn chế kỹ thuật. • Nghiên cứu này nhằm mục đích khám phá sự đa dạng thực sự của hệ vi sinh vật trên OS của con người. Tìm hiểu hệ vi sinh vật ở kết mạc II. KHẢO SÁT THỰC TẾ • Nghiên cứu của Viện Mắt Bascom Palmer (Hoa Kì) phần nào làm rõ hệ vi sinh vật có trong kết mạc người khỏe mạnh.  12 chi đại diện cho hệ vi sinh vật thường gặp ở kết mạc gồm: + Pseudomonas + Propionibacterium + Bradyrhizobium + Corynebacterium + Acinetobacter + Brevundimonas + Staphylococci + Aquabacterium + Sphingomonas + Streptococcus + Streptophyta + Methylobacterium  47 Chi khác chiếm <4% trong phân loại của hệ vi sinh vật có trong kết mạc. => Một vài chi trong các chi trên là tác nhân gây bệnh ở mắt. 1. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH KHẢO SÁT 2. KẾT QUẢ THU ĐƯỢC • Tổng cộng 39,7 triệu cặp base (bp) tương ứng với mức trung bình 16,8 nghìn 16S rRNA gene đọc cho mỗi mẫu. • Tổng số đạt chất lượng -115.003 lần đọc (trung bình chiều dài, 236 bp) được sử dụng trong phân tích sâu hơn của các thành phần hệ vi sinh vật kết mạc. 2.1 THÀNH PHẦN CÁC VI KHUẨN TRÊN KẾT MẠC Bằng phần mềm phân loại RDP, DNA ở các đại diện vi khuẩn cho kết quả 90% độ tin cậy. Cyanobacteria (0,21%) và Bacteroidetes(0,16%) không được xem là vi sinh thường qui kết mạc. Ở cấp độ chi, có 69,3% tất cả trình tự được phân loại thành 59 chi vi khuẩn Pseudomonas, Bradyrhizobium, Propionibacterium, Acinetobacter Corynebacterium là phong phú nhất, chiếm 58% tất cả các trình tự phát hiện và đọc được 2.2 KHẢ NĂNG GÂY BỆNH MẮT CỦA VSV • Tác nhân gây bệnh ở mắt gồm 12 chi phổ biến: Pseudomonas, Acinetobacter, Propionibacterium, Corynebacterium, Staphylococcus, Streptococcus, và Sphingomonas. Sáu chi khác — Gordoni, Kocuria, Pantoea, Oligella, Ralstonia và Delftia . • Hệ vsv ở người khỏe mạnh là 24 chi bao gồm các loài mang mầm bệnh phổ biến. • Trên thực tế chỉ có Chrysobacterium, Enterobacter, Flavimonas, và Nocardia gây bệnh ở mắt nổi tiếng nhưng lại không được tìm thấy trong cuộc khảo sát. Chỉ khi hệ miễn dịch yếu hay do tác nhân môi trường thì với đột biến nhất định, các vsv cơ hội mới biểu hiện bệnh. 3. THẢO LUẬN KẾT QUẢ Trình tự 16S rRNA từ mẫu vsv mắt • Phân loại theo phân loại vi khuẩn bằng cách sử dụng phân loại RDP với một ngưỡng cắt có độ tin cậy 90% và được tiếp tục phân tích cho các phép đo đa dạng sinh thái • Áp dụng MDA trước khi xây dựng thư viện amplicon 16S bằng cách sử dụng protocol V2 GenomiPhi • Sử dụng mức cắt 3% như là tham số lựa chọn để phân biệt “cấp độ loài“ phylotypes vi khuẩn nonredundant (OTUs) trong phân loại RDP-II -> xác định được trung bình 2.137 phylotypes cho mỗi mẫu 3.1 Thành phần cộng đồng vi khuẩn ở kết mạc sụn mí • Xác định thành phần loài vi khuẩn ở hệ vsv mắt của con người, trình tự 16S rRNA đã được phân loại tại phylum và mức chi • Staphylococci, Propionibacterium và các loài Corynebacterium (các cuộc điều tra sinh học trước đây) • Pseudomonas, Propionibacterium và Bradyrhizobium, Staphylococcus spp(4%)[giải trình tự gene 16S rRNA] Does the OS Microbiome Have a core of Ubiquitous Species?  Kết mạc khỏe mạnh là thuộc địa của loài hằng định nội môi. [...]... DNA, nhận diện/xác định các vi khuẩn) bao gồm vi khuẩn hội sinh, vi khuẩn môi trường, vi khuẩn sinh bệnh cơ hội • Sử dụng gene 16S rRNA d a trên trình tự gene đặc trưng cho vi khuẩn ở bề mặt mắt để giải quyết các vấn đề về hệ vi sinh vật mắt  Nghiên cứu này thiết lập sự hiện diện c a một cộng đồng vi khuẩn a dạng ở các hệ vsv mắt bình thường ở người nhưng vai trò c a cộng đồng hệ vsv mắt bản đ a. .. Sphingomonas, Bradyrhizobium, Brevundimonas, Aquabacterium, Streptophyta và Methylabacterium • Bốn chi không bị phát hiện trong cuộc khảo sát này: Chrysobacterium, Enterobacter, Flavimonas, và Nocardia 4 Ý NGH A • Biết được các tác nhân gây bệnh • Biết được vi sinh vật trên bề mặt mắt góp phần cho các bệnh nhiễm trùng và tự miễn dịch c a mắt • Vi sinh vật trên bề mặt mắt là a dạng (phát hiện d a trên... năng c a môi trường • Sự tương tác vật lý với vi sinh vật ở da, r a mí mắt, tay • Tiếp xúc với "bụi" các hạt trong không khí và nước bị ô nhiễm có thể đóng góp rất nhiều cho các loài vi sinh vật ngoại sinh 3.3 Ảnh hưởng c a vi c lấy mẫu • Mẫu từ các cá thể cùng với áp lực tăm(miếng gạc) khác nhau  sự hiện diện vi sinh vật khác nhau • Tăm bông mềm   Firmicutes (tụ cầu) và Actinobacteria (Corynebacterium... nhỏ mắt khi ch a có chỉ định • Khi đã bị bệnh thì cách ly sinh hoạt chung như khăn mặt, chậu nước TÀI LIỆU THAM KHẢO • • • • Qunfeng Dong and Valery I Shestopalov (2011), Diversity of bacteria at healthy human conjunctiva, Department of biological Sciences, University of North Texas, 52(8): 5403-13 Michal Bukowski, Benedykt Wladyka and Grzegorz Dubin (2010), Exfoliative Toxins of Staphylococcus aureus,... Conjunctiva • Kết mạc là một lớp màng mỏng, trong suốt bao bọc quanh nhãn cầu và được mi mắt bảo vệ • Vi m kết mạc là vi m màng bao phủ tròng trắng c a mắt và lớp sau mi mắt 4 Các nguyên nhân lây nhiễm do S.aureus • S.aureus chiếm từ 30% - 50% trong cơ thể người khỏe mạnh • Người mang nhiều S.aureus có nguy cơ tăng các bệnh nhiễm trùng sau này • Yếu tố lây nhiễm: bụi bặm, dụng cụ, tay bẩn dấy vào mắt •... S.aureus sản xuất và tiết ra nhiều protein khác, bao gồm cả coagulase, protein A, α-toxin, β-toxin , γ-toxin, δ-toxin và leucocidin tất cả đều đóng góp tính độc hại c a vi sinh vật 7 Cơ chế gây bệnh Thời gian phát triển c a vi khuẩn chia làm 2 pha: • Giai đoạn I: Sự nhân lên c a các tế bào S.aureus mà ko gây ra phản ứng miễn dịch c a cơ thể • Giai đoạn II: S aureus vẫn tiếp tục phân chia mà không gây bất... ở mức độ dòng ch a phân tích được mức độ loài nên ở tác nhân gây bệnh không xác định được là loài nào -Ngoài ra còn có nhiều nguyên nhân gây vi m kết mạc: do nhiễm virus, dị ứng, những phản ứng độc hại bỏng h a chất ở mắt, ký sinh trùng, nấm ĐỀ NGHỊ NGHIÊN CỨU Mục tiêu c a đề tài mới tiếp nối: -Hệ vi sinh vật thường qui phân loại mức độ loài trên qui mô lớn - Dịch tễ học vi sinh vật gây bệnh kết mạc. .. (DNA gyrase) và topoisomerase IV - Sau 65 giờ, S.aureus đã bị tiêu diệt (tính từ lúc sau 2 giờ nhiễm trùng) Như vậy, chúng ta có thể nói rằng điều trị kháng sinh vi m kết mạc do vi khuẩn cấp tính chỉ là vấn đề tốc độ và không cần 9 Phòng Ng a • Thường xuyên vệ sinh mắt bằng thuốc nhỏ mắt – đặc biệt là sau khi bơi, đi đường bụi • Vệ sinh tay khám và chú ý khử trùng dụng cụ để tránh trở thành trung gian... bệnh c a một số vi sinh vật NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI MỚI Tên đề tài: Tỷ lệ vi khuẩn đề kháng kháng sinh gây vi m kết mạc ở người 1 Vi khuẩn Staphylococci (Tụ cầu khuẩn) • Cầu khuẩn Gram (+), xếp thành chùm nho, có khi đứng riêng lẻ hoặc từng đôi hoặc bốn • Kích thước 0,8-1µm • Không di động • Không sinh bào tử • Thường không có nang, chỉ có một số chủng có nang 2 Vi sinh vật gây bệnh Staphylococcus aureus... c a vi khuẩn trong y tế và bệnh tật là không biết -> cần được điều tra gi a các nhóm dân cư TỔNG KẾT - Điểm mạnh: tìm ra được những vi sinh vật có thể xem là thường qui và tiềm ẩn nhiều bệnh cơ hội hiện diện trong mắt -Hạn chế: ngoài những vi sinh vật tìm được còn có một số loài gây bệnh nguy hiểm ch a tìm thấy (tụ cầu, Neisseria Gonorrheae….) - Họ chỉ thí nghiệm ở một quốc gia nhất định -Vẫn chưa . sự a dạng thực sự c a hệ vi sinh vật trên OS c a con người. Tìm hiểu hệ vi sinh vật ở kết mạc II. KHẢO SÁT THỰC TẾ • Nghiên cứu c a Vi n Mắt Bascom Palmer (Hoa Kì) phần nào làm rõ hệ vi sinh. hơn c a các thành phần hệ vi sinh vật kết mạc. 2.1 THÀNH PHẦN CÁC VI KHUẨN TRÊN KẾT MẠC Bằng phần mềm phân loại RDP, DNA ở các đại diện vi khuẩn cho kết quả 90% độ tin cậy. Cyanobacteria (0,21%). sinh vật có trong kết mạc người khỏe mạnh.  12 chi đại diện cho hệ vi sinh vật thường gặp ở kết mạc gồm: + Pseudomonas + Propionibacterium + Bradyrhizobium + Corynebacterium + Acinetobacter