Bộ Nơng Nghiệp Phát triển Nơng thơn Chương trình hợp tác nông nghiệp phát triển nông thôn (CARD) 013/06VIE Thay phân bón hố học N chế phẩm vi sinh cố định đạm cho họ đậu để tăng thu nhập cho nông dân bảo vệ môi trường MS6: Báo cáo Chế phẩm Nốt sần Chất lượng cao Tháng năm 2009 Mục lục Thông tin viện 2 Liên lạc Tóm tắt dự án Tóm tắt điểm bật Nội dung báo cáo 5.1 Giới thiệu hai chủng rhizobium Úc vào Việt nam 5.2 Qui trình sản xuất chế phẩm, QA sử dụng 16 5.3 Kết đánh giá trình diễn đồng ruộng 32 Thơng tin quan tham gia dự án Tên dự án: Thay phân bón N hóa học chế phẩm vi sinh cố định đạm cho họ đậu Việt nam để tăng thu nhập cho nông dân cải thiện mơi trường Cơ quan Việt nam chủ trì dự án Viện Nghiên cứu Dầu Cây có dầu (OPI) Chủ nhiệm dự án Việt nam Ths Trần Yên Thảo Cơ quan Úc NSW Department of Primary Industries Đại học Sydney Nhân phía Úc Dr David Herridge Dr Roz Deaker Bà Elizabeth Hartley Ông Greg Gemell Thời gian bắt đầu Tháng 3/2007 Thời gian hòan tất (đầu tiên) Tháng 3/2009 Thời gian hòan tất (sửa đổi) 11/2009 Giai đoạn 12/2008 – 9/2009 Cán liên lạc Tại Úc: trưởng nhóm Tên: Chức vụ: Cơ quan Dr David Herridge Nhà Khoa học cao cấp Sở nghành Công nghiệp NSW Telephone: 02 67631143 02 67631222 Fax: david.herridge@dpi.nsw.gov.au Email: Tại Úc: cán quản lý Tên: Chức vụ: Cơ quan Mr Graham Denney Quản lý Tài Sở nghành Công nghiệp NSW Telephone: Fax: Email: 02 63913219 02 63913327 graham.denney@dpi.nsw.gov.au Tại Việt nam Tên: Ths Trần Yên Thảo Telephone: Chúc vụ: Cơ quan Cán nghiên cứu Viện Nghiên cứu Dầu Cây có dầu (OPI) Fax: Email: 08 9143024 – 8297336 08 8243528 yenthao@ioop.org.vn yenthao9@yahoo.com Tóm tắt dự án Nơng dân Việt nam bón phân đạm cho họ đậu đậu tương lạc mà không nhiễm chế phẩm vi sinh cố định đạm rhizobia Thay phân đạm hoá học chế phẩm vi sinh tiết kiệm cho nông dân Việt nam khoảng 50-60 triệu đô la Úc/năm dùng vào đầu tư phân N hoá học, lúc, thúc đẩy mở rộng diện tích sản xuất họ đậu Cũng có lợi ích mơi trường sử dụng chế phẩm Dự án có mục tiêu tăng sản xuất chế phẩm vi sinh cố định đạm rhizobium thông qua tăng cường lực sản xuất, thực chương trình bảo đảm chất lượng sản phẩm mức độ quốc gia (QA) tăng cường nghiên cứu phát triển R&D Tham gia dự án Viện Nghiên cứu Dầu Cây có dầu (OPI), Viện Khoa học Nông nghiệp Miền nam (IAS) Viện Quốc gia Nơng hố Thổ nhưỡng (NISF; đổi tên Viện Nơng hố Thổ nhưỡng (SFI)) Cơ quan Úc tham gia dự án Sở Các nghành Công nghiệp NSW Trường Đại học Sydney Sử dụng chế phẩm vi sinh cố định đạm nông dân tăng lên thông qua phát triển thực chương trình khuyến nơng hiệu chương trình đào tạo ho cán nghiên cứu, cán khuyến nông MARD nông dân Lợi ích chế phẩm cố định đạm sinh học trình diễn đồng ruộng thảo luận hội thảo, hội nghị đầu bờ ấn khuyến nơng Để chắn tính ổn định sản xuất sử dụng, dự án có tham gia cơng ty tư nhân việc marketing “sản xuất thử” với mục đích cơng ty mở rộng sản xuất việc cung cấp chế phẩm tăng dần lên lúc công nghệ thị trường phát triển Những điểm bật Ảnh hưởng hai chủng rhizobium Úc Việt nam sản xuất họ đậu suất, phân tích so sánh chủng địa phương chủng Úc Phần dự án đánh giá chủng quốc tế quí Việt nam so sánh chúng với chủng địa phương Các chủng địa phương nhập có nguồn gốc từ viện nghiên cứu Việt nam, từ NifTAL (USA), ALIRU (Australia), DOA (Thailand), Hàn quốc Achentina Một số chủng sử dụng sản xuất thương mại chế phẩm chủng CB1809 (đậu tương) NC92 (đậu phộng) Úc Chúng tơi thực hai thí nghiệm: thí nghiệm chậu thí nghiệm ngồi đồng ruộng Trong thí nghiệm chậu, có 13 nghiệm thức cho đậu phộng (11 chủng, đối chứng có bón phân N khơng nhiễm, đối chứng khơng bón phân N khơng nhiễm) có 18 nghiệm thức cho đậu tương (17 chủng, đối chứng có bón phân N khơng nhiễm, đối chứng khơng bón phân N khơng nhiễm) Tất chủng làm tăng nốt sần đậu tương đậu phộng suất so sánh với đối chứng Có tương quan chặt số lượng nốt sần, trọng lượng nốt sần sinh khối tương quan giữ nốt sần chiều cao thấp Các chủng tốt NC92 (chủng sản xuất thương mại Úc) , GL1 GL2 (chủng địa phương) đậu phộng, chủng CB1809 (chủng sản xuất thương mại Úc), SL2, SL1, CJ2 U110 (chủng thương mại trước Mỹ) đậu tương Tổng số thí nghiệm đồng ruộng 2007–09 36 thực 10 tỉnh nước Các thí nghiệm thực vùng trồng họ đậu Việt nam, từ vùng núi cao phía bắc, vùng Duyên hải miền Trung đến vùng đất cao Miền nam Đồng Sơng Cửu Long Các tỉnh tham gia thí nghiệm Sơn La, Nghệ An, Bình Định, Bình Thuận, Daklak, DakNong, Tây Ninh, Đồng Tháp, An Giang Trà Vinh Có nghiệm thức thí nghiệm: Nơng dân, khơng bón phân N Nơng dân, bón phân N Nhiễm với chủng Úc CB1809 (đậu tương) NC92 (đậu phộng), khơng bón phân N Nhiễm với chủng địa phương: SL1 (đậu tương) GL1 (đậu phộng), khơng bón phân N Nhiễm với chủng địa phương: SL2 (đậu tương) GL2 (đậu phộng), khơng bón phân N Các chủng Úc có hoạt tính cao theo nghĩa tăng nốt sần, suất sinh khối suất hạt So sánh với nghiệm thức không nhiễm, CB1809 NC92 tăng nốt sần đậu tương đậu phộng trung bình 58%, sinh khối 30% suất hạt 29% So sánh với chủng địa phương Việt nam, chủng, CB1809 NC92, tăng nốt sần đậu tương đậu phơng trung bình 22% Năng suất sinh khối tăng trung bình 10% suất hạt 13% Qui trình sản xuất chế phẩm vi khuẩn nốt sần chất lượng cao bao gồm QA, đóng gói, bảo quản, phân phối áp dụng đồng ruộng Trong suốt năm dự án, công nghệ sản xuất chế phẩm nốt sần ba viện nghiên cứu, OPI and IAS) phát triển Mục tiêu sản xuất chế phẩm vi khuẩn nốt sần chất lượng cao, >5 x 108 rhizobia/g tạp nhiễm cao x 108 vi khuẩn tạp nhiễm/g Một số chi tiết qui trình cơng nghệ khác viện phụ thuộc vào sở vật chất kinh nghiệm Ở mức độ cơng nghệ sản xuất chế phẩm ứng dụng có thay đổi cho phù hợp từ công nghệ nước mà công nghiệp sản xuất chế phẩm thành cơng, Mỹ Úc Dự án định CB1809 NC92 sử dụng cho sản xuất chế phẩm vi khuẩn nốt sần cho đậu tương lạc Việt nam thí nghiệm thực vùng canh tác nước cho thấy chủng chủng tốt Chúng làm tăng trọng lượng nốt sần, tăng suất sinh khối hạt so với chủng địa phương thử nghiệm Trong tương lai, đánh giá chủng cần thiết để cố gắng phát triển chủng tốt Dự án đề xuất chủng cung cấp hàng năm từ phòng Quản lý Chất lượng (QA) độc lập cho quan nhà nước tư nhân sản xuất chế phẩm với qui trình trì giống sản xuất giống Chi tiết phần 5.2 Than bùn nguồn chất mang cho sản xuất chế phẩm Việt nam tương lai gần Chi tiết xem mục 5.2 có nguồn than bùn khác nhau, tính hiệu có khả tăng cường tính hiệu Các dẫn chi tiết nêu pH lượng nước thích hợp chất dùng cho sản xuất Một thí nghiệm hồn tất so sánh phương pháp khử trùng than bùn khác Sau than bùn khử trùng số mẫu sử dụng trực tiếp để xác định tạp nhiễm Các mẫu than bùn khác cấy vào môi trường Glucose Pepton lỏng sau dịch lỏng đánh giá mức độ nhiễm vi sinh vật sau giờ, 24, 36 72 Các mẫu nhiễm với rhizobium sau xác định số lượng mẫu theo thời gian Nghiệm thức tốt theo nghĩa có số lượng rhizobium cao có số lượng vi sinh vật tạp nhiễm thấp nghiệm thức khử trùng autoclave 60 phút chiếu xạ gamma liều lượng 30 kGy Hiện Việt nam chưa có tiêu chuẩn chất lượng riêng cho chế phẩm vi khuẩn nốt sần mà có tiêu chuẩn cho phân bón vi khuẩn cố định đạm Tuy nhiên, quan trọng để có chương trình QA cho chế phẩm vi khuẩn nốt sần (rhizobia) Một số cải thiện Tiêu Chuẩn Quốc gia Việt nam cho Phân bón Vi sinh vật Cố định đạm (TCVN 6166-1996) thực để làm cho phù hợp chế phẩm vi khuẩn cố định đạm rhizobia, dựa vào cơng nghệ sản xuất địi hỏi hiệu Tiêu chuẩn sử dụng cấu trúc tốt dễ hiểu tiêu chuẩn Tên cho tiêu chuẩn đề xuất Tiêu chuẩn Quốc Gia Việt nam Cế phẩm vi khuẩn nốt sần họ đậu Tiêu chuẩn bao gồm chi tiết yêu cầu kỹ thuật chế phẩm, bao gồm nhãn hiệu hàng hoá phương pháp tiến hành báo cáo Kết trình diễn đồng ruộng hiệu trình diễn việc tăng cường hiểu biết nơng dân Tổng số 168 trình diễn thực A total of 168 10 tỉnh Trình diễn đồng ruộng bao gồm hai nghiệm thức: +nhiễm khơng hay có sử dụng phân bón N liều lượng thấp Kết Phụ lục Một cách tổng quát, sử dụng chế phẩm vi khuẩn nốt sần làm tăng thu nhập nơng dân, trung bình 4.500.000VNĐ/ha Múc độ tăng thay đổi tuỳ theo địa diểm Ở Bầu Đồn, Tây Ninh nông dân trồng lạc lợi khoảng 500.000VNĐ/ha Châu Thành, Trà Vinh nông dân thu lợi cao nhiều 14.200.000VNĐ/ha Tương tự đậu tương, lợi nhuận tăng thêm 11.640.000VNĐ Dương Minh Châu, Tây Ninh Tại tỉnh Đồng Tháp nông dân thu lợi từ chế phẩm trung bình 4.900.000VNĐ/ha Tại Đồng Tháp, làng Phú Hữu, huyện Châu Thành, thực trình diễn diện tích đất lớn (61.5 ha) với tham gia 120 nông dân, suất tăng trung bình 12.5%, tương đương với 300 kg hạt/ha Nơng dân thu lợi khoảng 4.900.000 VNĐ/ha so với lối canh tác cũ dùng phân bón N hố học Các trình diễn đồng ruộng thực song song với hoạt động đào tạo khuyến nơng có kết tốt cải thiện hiểu biết nông dân lợi ích chế phẩm vi khuẩn nốt sần sản xuất họ đậu Nông dân mời đến ruộng trình diễn lần, nhiều điểm trình diễn nơng dân thăm ruộng, lấy mẫu nốt sần, mẫu sinh khối thu hoạch hạt Có 3400 lượt người tham gia Nơng dân cung cấp tài liệu khuyến nông Hơn nữa, cán dự án, khuyến nơng viên giải thích cho nông dân hiểu biết cố định đạm sinh học, vi khuẩn nốt sần hoạt động điều kiện để trình nhiễm đạt hiệu cao Nơng dân hứng thú việc tìm hiểu q trình cố định đạm khí trời rhizobia 5 Báo cáo chi tiết Báo cáo bao gồm chi tiết thí nghiệm chủng rhizobia, qui trình sản xuất chế phẩm, QA, phân phối ứng dụng chế phẩm, kết đánh giá trình diễn đồng ruộng , theo tiêu đề địi hỏi báo cáo, sau: • Giới thiệu hai chủng Úc vào Việt nam, ảnh hưởng đến sản xuất họ đậu hiệu quả, phân tích so sánh chủng địa phương nhập nội • Qui trình sản xuất chế phẩm chất lượng cao, đóng gói, dự trữ, phân phối áp dụng đồng ruộng quản lý chất lượng trình sản xuất • Kết trình diễn đồng ruộng, bao gồm đánh giá sinh học kinh tế, lợi nhuận sau hệ thống canh tác xen canh hiệu trình diễn đồng ruộng việc cải thiện hiểu biết nông dân lợi nhuận mang lại từ chế phẩm 5.1 Giới thiệu hai chủng Úc vào Việt nam, ảnh hưởng đến sản xuất họ đậu hiệu quả, phân tích so sánh chủng địa phương nhập nội Giới thiệu Nghiên cứu chế phẩm cố định đạm cho họ đậu thực từ năm 1980 Trường Đại học Hà nội, Viện Nơng hố Thổ nhưỡng SFI (VASI), Miền Nam Trường Đại học Cần Thơ (CTU), IAS OPI (nay đổi tên IOOP) Một cách tổng quát, mục tiêu nghiên cứu lựa chọn chủng, sản xuất nhỏ thực thí nghiệm đồng ruộng đánh giá hiệu chế phẩm Mỗi viện tập trung nghiên cứu vùng định nhóm trồng khác nhau, ví dụ CTU Đồng Sông Mekong với đậu tương, IAS vùng Đông Nambộ với lạc, OPI lạc đậu tương vùng Duyên hải Nam Trung vùng Cao Nguyên Các chủng đề xuất cho sản xuất chưa nghiên cứu lựa chọn cho qui mô quốc gia kết nghiên cứu công nghệ sản xuất chưa chia viện nghiên cứu Do đó, có lịch sử nghiên cứu sản xuất Việt nam chế phẩm vi khuẩn nốt sần chưa có mặt thị trường nông dân múc độ rộng lớn khơng hiểu biết tiềm lợi ích chúng Thay vào d8ó, nơng dân sử dụng phân bón N hố học đắt tiền cho họ đậu họ Trong phần báo cáo đánh giá chủng quí quốc tế vùng trồng họ đậu nước so sánh chúng với chủng quốc gia (Việt nam) Các chủng địa phương nhập có nguồn gốc từ viện nghiên cứu Việt nam, từ NifTAL (USA), ALIRU (Australia), DOA (Thailand), Hàn quốc Achentina Một số chủng sử dụng sản xuất thương mại chế phẩm chủng CB1809 (đậu tương) NC92 (đậu phộng) Úc Chúng tơi thực hai thí nghiệm: thí nghiệm chậu thí nghiệm ngồi đồng ruộng Phương pháp Lựa chọn chủng rhizobia Thiết kế thí nghiệm RBDR với block The experimental design was a randomized complete block design with three blocks Trong thí nghiệm chậu, có 13 nghiệm thức cho đậu phộng (11 chủng, đối chứng có bón phân N khơng nhiễm, đối chứng khơng bón phân N khơng nhiễm) có 18 nghiệm thức cho đậu tương (17 chủng, đối chứng có bón phân N khơng nhiễm, đối chứng khơng bón phân N khơng nhiễm) Thơng tin chủng bảng Mỗi chủng nuôi cấy môi trường yeast manitol lỏng (YMB) từ – ngày để đạt độ đục tối đa (khoảng x 109 tế bào/ml) Dịch sinh khối lỏng sau trộn vào than bùn khử trùng ổn định tuần Hạt nhiễm với chế phẩm 105–106 tế bào/hạt trước gieo Thí nghiệm sử dụng đất cát bạc màu Trảng Bàng, Tây Ninh Đất lấy độ sâu 10– 15 cm vận chuyển Trạm Thực nghiệm Bình Thạnh OPI Đất trộn đều, sau qua rây 5-mm Đất sau trộn với bụi xơ dừa (1:1) vôi để yên tuần Mỗi chậu 1.7 kg hỗn hợp Khả giữ nước đất xác định để xác định lượng nước thêm vào Phân bón áp dụng sau: KH2PO4 - 195 mg/pot; KCl - 168.4 mg/pot; MgSO4.7H2O 22.21 mg/pot; ZnSO4.7H2O - 20.63 mg/pot; (NH4)6Mo7O24.7H2O - 0.81 mg/pot Trồng cây/chậu bỏ sau ngày Cây thu hoạch sau 30 ngày đậu tương 45 ngày lạc Số lượng nốt sần, trọng lượng khô nốt sần, sinh khối khô xác định thu hoạch Bảng Thông tin chủng rhizobium STT Tên chủng Cây Nguồn NC92 Lạc Australia Tal 179 Lạc NifTAL P088183 Lạc Thailand P03818 Lạc Thailand GL1 Lạc OPI – local strain GL2 Lạc SFI – local strain GL14 Lạc OPI – local strain LAC1 Lạc SFI – local strain P3 Lạc OPI – local strain 10 P1 Lạc OPI – local strain 11 CTP Lạc CTU – local strain 12 CB1809 Đậu tương Australia 13 U110 Đậu tương NifTAL 14 SEMIA 5019 Đậu tương NifTAL 15 S01015 Đậu tương Thailand 16 S1059 Đậu tương Thailand 17 Ach Đậu tương Argentina 18 YCK Đậu tương Korea 19 SL1 Đậu tương SFI – local strain 20 DT2 Đậu tương SFI – local strain 21 SL2 Đậu tương SFI – local strain 22 DL1 Đậu tương OPI – local strain 23 DL2 Đậu tương OPI – local strain 24 CJ1 Đậu tương OPI – local strain 25 CJ2 Đậu tương OPI – local strain 26 S6 Đậu tương OPI – local strain 27 S37 Đậu tương OPI – local strain Thí nghiệm đồng ruộng Thí nghiệm đồng ruộng tiến hành 10 vùng trồng đậu Việt nam, từ vùng núi cao phía bắc, vùng Duyên hải miền Trung đến vùng đất cao Miền nam Đồng Sông Cửu Long Các tỉnh tham gia thí nghiệm Sơn La, Nghệ An, Bình Định, Bình Thuận, Daklak, DakNong, Tây Ninh, Đồng Tháp, An Giang Trà Vinh Có nghiệm thức thí nghiệm: Nơng dân, khơng bón phân N Nơng dân, bón phân N Nhiễm với chủng Úc CB1809 (đậu tương) NC92 (đậu phộng), khơng bón phân N Nhiễm với chủng địa phương: SL1 (đậu tương) GL1 (đậu phộng), không bón phân N Nhiễm với chủng địa phương: SL2 (đậu tương) GL2 (đậu phộng), khơng bón phân N Nguồn chủng giống: SL1: chủng Việt nam (đậu tương) từ trường ĐH Cần Thơ SL2: chủng Việt nam (đậu tương) từ SFI (VASI – chương trình chủng vi sinh vật quốc gia) GL1: chủng Việt nam (lạc) - OPI GL2: chủng Việt nam (lạc) - SFI (VASI - chương trình chủng vi sinh vật quốc gia) CB1809: Chủng thương mại Úc (đậu tương) từ ALIRU NC92: Chủng thương mại Úc (đậu tương) từ ALIRU Các tiêu là: trọng lượng khô nốt sần, suất sinh khối hạt Ơ thí nghiệm 20 m2 với lần lập lại Bố trí thí nghiệm kiểu RCBD Phụ thuộc vào vùng canh tác, ngày gieo, chuẩn bị đất, bón phân, ngày lấy mẫu khác Chi tiết cung cấp cần Chế phẩm nề than bùn cung cấp viện nghiên cứu Việt nam (OPI, IAS SFI) mốt số thí nghiệm chế phẩm thương mại úc sử dụng đối chứng dương Liều lượng nhiễm 1–2 kg/ha chế phẩm Việt nam 0.25 kg/ha chế phẩm thương mại Úc Các chế phẩm xác định chất lượng OPI trước tiến hành thí nghiệm Phương páho nhiễm vào hạt áp dụng Các phương pháp lấy mẫu, tiến hành xác định nốt sần, sinh khối suất hạt ssẽ cung cấp cần Kết thảo luận Lựa chọn chủng Tất chủng thí nghiệm làm tăng nốt sần suất bso với đối chứng (bảng 2) Dựa vào số liệu nốt sần phân làm nhóm: - Nốt sần cao nhất: NC92, GL1, GL2 - Nốt sần trung bình: P12, GL14, P03818 - Nốt sần thấp: P08183, CTP, P31, LAC1, Tal179 Có tương quan chặt số lượng nốt sần, trọng lượng nốt sần sinh khối (r2=0.82) tương quan nốt sần chiều cao không đáng kể (r2=0.27) kết cho thấy at NC92, GL1 GL2 chủng tốt Chúng sản xuất nhiều nốt sần nhiều sinh khối chủng khác Bảng Nốt sần tăng trưởng lạc nhiễm với chủng rhizobia khác Chủng rhizobium Số lượng nốt sần/cây Trọng lượng nốt sần/cây (mg) Chiều cao (cm) Sinh khối khô (g/cây) 2.7 b NC92 79 b 93 b 33 abcd P08183 29 gh 35 fg 29 cd 1.7 ghi CTP 44 e 52 d 36 ab 2.2 def GL1 113 a 136 a 35 abc 3.8 a P31 35 fg 42 ef 31 bcd 1.7 hij GL2 77 b 91 b 35 ab 2.5 bc P12 54 cd 66 c 35 ab 1.9 fgh GL14 60 c 72 c 32 abcd 1.9 efg LAC1 39 ef 47 de 38 a 1.6 ij 10 Tal 179 27 h 33 g 35 ab 1.5 jk 11 P03818 53 d 63 c 32 abcd 2.4 cd 11 i 12 h 27 d 1.2 k Đối chứng 5i 6h 32 abcd 2.2 de CV% 10.6 11.4 12.7 8.6 Đối chứng Đối chứng 1: khơng nhiễm, khơng bón phân N Đối chứng 2: khơng nhiễm, bón phân N (100ppm) Nguồn: OPI Bảng Nốt sần tăng trưởng đậu tương nhiễm với chủng rhizobia khác Chủng rhizobium Số lượng nốt sần/cây Trọng lượng nốt sần/cây (mg) Chiều cao (cm) Sinh khối khô (g/cây) 12 U110 47 cd 129 d 38 defg 2.8 d 13 DT2 45 de 121 e 35 defg 2.7 e 14 CB1809 52 bc 149 b 43 abcd 3.3 bc 15 CJ1 35 fg 121 e 41 bcde 2.7 e 16 DL2 30 g 72 h 34 efg 1.6 hi 17 S37 16 h 103 f 50 a 2.3 f 18 SL2 66 a 170 a 42 abcd 3.7 ab 19 CJ2 49 cd 136 cd 42 abcde 2.9 c 20 DL2 35 fg 114 e 37 defg 2.5 e 21 SL1 57 b 141 c 37 defg 3.1 cd 22 YCK 33 fg 77 gh 48 ab 1.7 gh 23 S01015 35 fg 121 e 46 abc 2.6 e 24 SEM 5019 34 fg 118 e 39 cdef 2.6 e 25 DL1 39 ef 83 g 39 cdef 1.8 g 26 S6 21 h 80 g 39 cde 1.7 gh Kết (Bảng 21 22) cho thấy pha lỗng sinh khối 1:10 1:100 sử dụng tạo chế phẩm Tuy nhiên cần thiết kiểm tra với loại than bùn xác định nồng độ pha loãng phù hợp Bảng 22 Ảnh hưởng dịch sinh khối pha loãng đến số lượng rhizobia chế phẩm từ chủng rhizobium khác Chủng rhizobia Số lượng rhizobia/g chế phẩm ẩm 1: NC92 1:10 3,2 x 10 1:100 2,5 x 10 1:1000 3,2 x 106 1,6 x 10 GL2 1,6 x 10 1,2 x 10 1,2 x 10 1,8 x 10 CB1809 6,5 x 109 7,4 x 109 5,8 x 109 1,5 x 106 SL2 6,6 x 109 3,4 x 108 1,4 x 107 1,6 x 105 Nguồn: ISF Sau hai tuần bảo quản Kiểm tra chất lượng sản phẩm Sau 1- tuần ủ, chế phẩm cần phải kiểm tra chất lượng, sau: • Kiểm tra ẩm độ (đối với chế phẩm chất mang rắn) • Đếm số lượng rhizobia/g phương pháp đếm trực tiếp gián tiếp (MPN) • Kiểm tra vi sinh vật tạp nhiễm • Nhuộm gram từ khuẩn lạc từ đếm trực tiếp • Kiểm tra phản ứng kháng nguyên – kháng thể Chỉ kiểm tra thực chất lượng đạt chất blượng chế phẩm đưa vào nghiên cứu thực thí nghiệm đồng ruộng Qui trình QA: Hiện chưa có tiêu chuẩn dành riêng cho chế phẩm vi khuẩn nốt sần Việt nam, mà có tiêu chuẩn cho phân bón vi sinh vật cố định đạm Tuy nhiên, cần thiết để có quản lý chất lượng (QA) hiệu cho chế phẩm Đã cải tiến số nội dung tiêu chuẩn quôc gia Việt nam (TCVN 6166-1996), làm cho phù hợp với chế phẩm rhizobium, dựa công nghệ sản xuất yêu cầu có hiệu Tiêu chuẩn sử dụng cấu trúc tốt tiêu chuẩn Tên tiêu chuẩn đề nghị là: Tiêu chuẩn Quốc gia Việt nam Chế phẩm vi khuẩn nốt sần cho họ đậu Định nghĩa - Chế phẩm vi khuẩn nốt sần sản phẩm sinh học: • Bao gồm chủng vi khuẩn rhizobium sống, mà chúng chọn lọc để có khả cố định N tăng trưởng mơi trường ni cấy • Sản xuất chất mang khử trùng (cứng dịch thể) 29 Chỉ tiêu kỹ thuật Số lượng rhizobia Số lượng vi sinh vật tạp nhiễm MPN Ẩm độ Đặc trưng tế bào (ở khuẩn lạc phát triển môi trường ni cấy độ pha lỗng 10-6) CFU/g ml Tại lúc sản xuất ≥ x 108 Khơng có độ pha loãng 10-6 ≥ x 107 35 – 50% Gram âm Phản ứng với huyết tương ứng Kiểm tra PCR ngẫu nhiên Tại cuối hạn sử dụng ≥ x 107 Khơng có độ pha loãng 10-6 ≥ x 106 35 – 50% Gram âm Phản ứng với huyết tương ứng Kiểm tra PCR ngẫu nhiên - Ảnh hưởng đất cây: sản phẩm có ảnh hưởng dương tính đất Điều công bố nhãn hàng hoá xác định phịng thí nghiệm cơng nhận định - Hạn sử dụng: khơng tháng Phương pháp xác định: Mỗi mẻ sản xuất lấy mẫu đại diện (túi hay lọ) kiểm tra chất lượng theo thứ tự sau: 1) Ẩm độ (nếu cần thiết) 2) Số lượng rhizobia/g hoăc ml xác định phương pháp đếm trực tiếp môi trường nuôi cấy đặc gián tiếp MPN (số lượng có xác suất cao nhất) 3) Mẫu giống từ nuôi cấy môi trường đặc quan sát kính hiển vi, nhuộm gram xác định gram 4) Mầu giống từ nuôi cấy môi trường đặc kiểm tra phản ứng huyết (nếu có thể) 5) mẫu chế phẩm sau bảo quản nhiệt độ phịng có kết đếm số lượng rhizobium mơi trường đặc, chúng sau bỏ thùng rác cơng nghiệp Tính tốn kết báo cáo Kết số lượng rhizobium phương pháp trực tiếp gián tiếp (MPN), ẩm độ, gram huyết từ mẫu chế phẩm ghi vào sổ nhật ký liệu máy vi tímh Một báo cáo nhanh kết (thành công hay thất bại sản phẩm) gởi đến nhà sản xuất số lượng rhizobium (trực tiếp), gram kết phản ứng huyết Báo cáo hoàn thất chuyển đến nhà sản xuất sau hoàn nghiệm đếm gián tiếp MPN, khoảng – tuần sau thử nghiệm Tiêu chuẩn nhãn hàng, bảo quản hướng dẫn sử dụng - Nhãn hàng cần có phần sau: • Tên nhà sản xuất • Tên sản phẩm tên khoa học chủng rhizobium sử dụng • Số lượng rhizobia • Ẩm độ • Loại họ đậu • Ngày sản xuất hạn sử dụng 30 • Trọng lượng • Số đăng ký sản phẩm - Hướng dẫn sử dụng: • Liều lượng áp dụng • Cách sử dụng 5.3 Kết trình diễn đồng ruộng, bao gồm đánh giá sinh học kinh tế, lợi nhuận sau hệ thống canh tác xen canh hiệu trình diễn đồng ruộng việc cải thiện hiểu biết nông dân lợi nhuận mang lại từ chế phẩm Các trình diễn đồng ruộng, bao gồm đánh giá sinh học kinh tế Tổng số 168 trình diễn thực A total of 168 10 tỉnh Trình diễn đồng ruộng bao gồm hai nghiệm thức: +nhiễm khơng hay có sử dụng phân bón N liều lượng thấp Kết Phụ lục Một cách tổng quát, sử dụng chế phẩm vi khuẩn nốt sần làm tăng thu nhập nông dân, trung bình 4.500.000VNĐ/ha Múc độ tăng thay đổi tuỳ theo địa diểm Ở Bầu Đồn, Tây Ninh nông dân trồng lạc lợi khoảng 500.000VNĐ/ha Châu Thành, Trà Vinh nông dân thu lợi cao nhiều 14.200.000VNĐ/ha Tương tự đậu tương, lợi nhuận tăng thêm 11.640.000VNĐ Dương Minh Châu, Tây Ninh Tại tỉnh Đồng Tháp nông dân thu lợi từ chế phẩm trung bình 4.900.000VNĐ/ha Tại Đồng Tháp, làng Phú Hữu, huyện Châu Thành, thực trình diễn diện tích đất lớn (61.5 ha) với tham gia 120 nơng dân, suất tăng trung bình 12.5%, tương đương với 300 kg hạt/ha Nông dân thu lợi khoảng 4.900.000 VNĐ/ha so với lối canh tác cũ dùng phân bón N hố học (Biểu đồ 11) Profits (VND) Graph 11 Profits from inoculation of soybean in Dong Thap Province 14000000 12000000 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 -2000000 -4000000 -6000000 20 40 60 80 100 120 140 Field sites Lợi nhuận hệ thống trồng luân canh Lợi nhuận kinh tế hệ thống trồng phân bón hố học N thay chế phẩm vi khuẩn nốt sần trình bày phần trước (Biểu đồ 11 Phụ 31 lục 3) Tiềm lợi nhuận khác khơng (và khơng thể) đánh giá trọng tâm dự án sản xuất, chất lượng, phân phối, thị trường đào tạo nông dân Hơn nữa, dự án ngắn hạn (2 năm) nên lợi nhuận chế phẩm đánh giá Kết từ nghiên cứu khác cho kết luận ảnh hưởng đến môi trường dài hạn đặc biệt chất lượng nước, mức độ hẹp hơn, chất lượng đất, lợi nhuận kinh tế Hiệu trình diễn đồng ruộng việc tăng cường hiểu biết nơng dân lợi ích chế phẩm vi khuẩn nốt sần Nông dân mời đến ruộng trình diễn lần, nhiều điểm trình diễn nơng dân thăm ruộng, lấy mẫu nốt sần, mẫu sinh khối thu hoạch hạt Có 3400 lượt người tham gia Tại làng Phú Hữu có 360 lượt nơng dân đến điểm trình diễn lần, lúc trồng, rộ hoa thu hoạch (Xem Phụ lục 5) Nông dân cung cấp tài liệu khuyến nông Hơn nữa, cán dự án, khuyến nơng viên giải thích cho nơng dân hiểu biết cố định đạm sinh học, vi khuẩn nốt sần hoạt động điều kiện để q trình nhiễm đạt hiệu cao Nơng dân hứng thú việc tìm hiểu trình cố định đạm khí trời rhizobium Đánh giá hiệu hiệu trình diễn đồng ruộng tăng hiểu biết nơng dân lợi ích chế phẩm vi khuẩn nốt sần thực điều tra từ tháng đến tháng năm 2009 Chi tiết trình bày báo cáo Đánh giá Dựán 32 Phụ lục Tóm tắt thí nghiệm đồng ruộng 2007–09 Ảnh hưởng CB1809 NC92 đến nốt sần, sinh khối suất hạt Vùng Tỉnh Làng Cây Thời gieo gian Ảnh hưởng nhiễm với NC92 CB1809) lên Nốt sần Northern Highland Son La Muong Chum Co Noi Năng khối suất sinh Năng suất hạt Phu Cat Soybean Soybean Soybean Soybean Soybean Sobean Groundnut Groundnut Groundnut Groundnut April ‘07 April ‘07 April 08 April ‘07 April 08 April 08 Jan 08 Jan 08 Mar 08 Jan 08 Small (+18%) Large (+44%) Small (+13) Moderate (+36%) Small (+17) Small (+13) Moderate (+37%) Small (13%) Large (+58%) Large (+94%) Large (+44%) Moderate (+22%) Small (+9) Moderate (+17%) Small (+10%) Small (+16) Moderate (+32%) Moderate (20%) Moderate (24%) Moderate (+20%) Large (+68%) Moderate (+37%) Small (+8) Moderate (+31%) Large (70%) Small (+4) Small (9%) Small (18%) Large (50%) Moderate (+33%) An Nhon Soybean Jan 08 Small (+18%) Moderate (+37%) Moderate (+24%) Quang Hiep Soybean August ‘07 Small (-2%) Small (+19%) Small (5%) Groundnut August ‘07 Large (+79%) Large (+48%) Moderate (+25%) Soybean August ‘07 Large (+57%) Moderate (+44%) Moderate (+20%) Groundnut August ‘07 Large (+55%) Large (+47%) Moderate (+34%) Soybean August ‘07 Large (+46%) Large (+47%) Moderate (+24%) Chieng Ban Coastal North Nghe An Central Coastal South Binh Dinh Central Highlands DakLak Son La town Dien Phong Dien Ky Nghi Phong CuMgar DakNong CuJut Groundnut South East Upland Small (+7%) Small (+13%) Moderate (+25%) Moderate (+29) Large (+43%) Bac Binh Groundnut May 08 Large (+69) Moderate (+30) Moderate (32) Groundnut May 08 Large (+46) Moderate (+22) Large (+32) Tuy Phong Groundnut May 08 Large (+66) Moderate (+40) Moderate (+40) Tuy Phong Tay Ninh Small (+3%) May ‘08 Tuy Phong Binh Thuan August ‘07 Soybean Groundnut May 08 Large (+58) Large (+49) Moderate (31) Bau Don Groundnut Dec 07 Large (104%) Small (15%) Moderate (+28%) Phuoc Dong Groundnut Dec 07 Large (+65%) Small (+5%) Moderate (+30%) Bau Don Groundnut Nov 08 Large (+65%) Moderate (+24%) Moderate (+24%) Phuoc Dong Groundnut Nov 08 Large (+104%) Moderate (+20%) Moderate (+27%) Phuoc Dong Groundnut Dec 08 Large (+119%) Moderate (+20%) Small (+18%) Phuoc Dong Dong Thap Groundnut Dec 08 Large (+84) Moderate (+20%) Moderate (+20%) Cao Lanh City Soybean March 08 Large (+61%) Large (+51%) Large (+40%) Cao Lanh Mekong Delta Soybean March 08 Large (+166%) Large (+58%) Small (+9%) Soybean March 08 Large (+78%) Moderate (+28%) Moderate (+20%) Soybean March 08 Large (+125%) Large (+46%) Large (+46%) Cho Moi Soybean March 08 Large (139%) Large (+60%) Large (+41%) Duyen Hai Groundnut Jan 08 Small (+15%) Large (+46%) Small (+12%) Cau Ngang Groundnut Jan 08 Large (+43%) Small (+9%) Small (+6%) Chau Thanh Tra Vinh Chau Phu Tan Chau An Giang Groundnut April 08 Large (+53%) Large (+86%) Large (+59%) Large effect: > 40% Moderate effect: 20 – 40% Small effect: