Bacillus cere us 1. Giới tiệu về Bacillus cereus: Bacillus cereus là trực khuẩn Gram dương, theo phân loại quốc tế thuộc giới bacteria, ngành (phylum) firmicutes, lớp (Class) Bacilli, bộ (Order) Bacillales, họ (Family) Bacillaceaem, chi (Genius) Bacillus, loài (Species) Cereus. Trong chi bacillus này ngoài loài cereus còn có một số loài như: Bacillus subtilis Bacillus coagulans Bacillus thuringiensis Bacillus natto Paenibacillus larvae Bacillus cereus là loài vi khuẩn hiếu khí, bào tử dạng hình ovan, có khả năng sinh nha bào, được phát hiện đầu tiên trong một ca nhiễm độc thực phẩm vào năm 1955. từ những năm 1972 đến 1986 có tới 52 trường hợp trúng độc thực phẩm do Bacillus cereus được phát hiện và báo cáo chiếm khoảng 2% số ca bệnh thực phẩm, trên thực tế con số này lớn hơn rất nhiều. 1.1. Đặc điểm Bacillus cereus: Trực khuẩn, gram dương, tạo nội bào tử. Kích thước 0,5–1,5 x 2-4 µ. Vi khuẩn không tạo giáp mô, không có khả năng di động. Hình 1: Bacillus cereus trên kính hiển vi Hình 2: khuẩn lạc Bacillus cereus trên môi trường BA 1 1.2. Đặc điểm nuôi cấy: Là loại vi khuẩn dễ mộc Hiếu khí và kị khí tùy nghi. Nhiệt độ 5-50 o C, tối ưu 35-40 o C. ph 4,5-9,3, thích hợp 7-7,2 Trên môi trường NA hay TSA sau 24 giờ tạo khóm lớn, nhăn nheo, xù xì. Trên môi trường BA tạo dung huyết rộng. Trên môi trường MYP (Mannitol Egg Yolk Polymixin): khóm hồng chung quanh có vòng sáng. Trên môi trường Mossel (thạch cereus selective agar): khóm to hồng chung quanh có vòng sáng. Trên môi trường canh NB, TSB: đục tạo váng, sau cặn lợn cợn 1.3. Tính chất sinh hóa: Trên môi trường đường: lên men glucose trong điều kiện hiếu khí và kị khí, không lên men mannitol. Khử nitrat thành nitrit. Phản ứng VP (+) Phân giải Tyroxin Catalase (+), Citrate (+) Mọc trên NB + 0,001% lyzozym 1.4. Tính chất gây bệnh- Độc tố-Triệu chứng: Vi khuẩn Bacillus cereus phân bố nhiều trong tự nhiên, nhiễm vào các loại thức ăn qua đêm hay trữ lạnh lâu, thường gây ngộ độc thực phẩm. Đ ộc tố: vi khuẩn sản sinh 2 loại độc t ố Độc tố gây tiêu chảy (Type 1): Diarrhoed toxin. Vi khuẩn sản sinh độc tố trên thịt , rau quả, gia vị. Bản chất là một loại protein gây hủy hoại biểu bì và niêm mạc ruột gây tiêu chảy có thể nguy hiểm đến tính mạng. Độc tố gây nôn mửa (Type 2): emetic toxin. Vi khuẩn nhiễm trong gạo, cơm nguội, đậu các loại. Bản chất độc tố là phospholipit có tính ổn định cao không bị phân hủy ở nhiệt độ cao và dịch dạ dày. Ngoài ra vi khuẩn còn có enzyme hemolyzin là một protein gây độc mạnh có thể gây chết người. Độc tố này có thể trung hòa bởi cholesterol trong huyết thanh nhưng nó đã góp phần cho sự phát triển của vi khuẩn. Triệ u c hứng tr ú ng độc: Thức ăn chứa mật độ vi khuẩn: 10 5 vi khuẩn/g thực phẩm đủ gây độc. Biểu hiện đau bụng, buồn nôn và nôn sau 1-5 giờ ăn phải thực phẩm nhiễm vi khuẩn. Bệnh có thể kéo dài 24 giờ. Trường hợp nhiễm type 1 có triệu chứng đau bụng tiêu chảy nhưng không sốt. Bắt đầu sau 4-16 giờ sau khi ăn thực phẩm nhiễm khuẩn và kéo dài 12-24 giờ. Phòng: không ăn thức ăn để nguội qua đêm, thức ăn luôn hâm nóng trên 80 o C trước khi ăn So sánh độc tố type 1 và type 2: 2. Đặc tính 3. Type 1 4. Type 2 5. Bền với nhiệt 6. 45 o C/30 phút 7. 120 o C/90 phút 8. pH 9. ổn định pH 4-11 10. ổn định pH 2-11 11. Tính nhạy 12. Nhạy với enzyme protease và trypsin 13. Kháng pepsin và trypsin Ở nước ta hiện nay theo báo cáo từ bộ y tế, chỉ có khoảng 38 trung tâm y tế có khả năng kiểm nghiệm được loài vi khuẩn này, khoảng 60% các tình thành có năng lực kiểm nghiệm. Tuy nhiên hiện nay phương pháp xét nghiệm vẫn dựa trên phương pháp đếm tổng số khuẩn lạc trên môi trường thạch dinh dưỡng kết hợp với các xét nghiệm hóa sinh khác. Phương pháp này có nhược điểm là thời gian lâu, có thể mất nhiều ngày hoặc vài tuần và độ chính xác không cao. Trong những năm gần đây, các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật dựa trên nguyên tắc di truyền phân tử và miễn dịch học đã được thiết lập như: lai phân tử, PCR (Polymerase Chain Reaction), Elisa cho kết quả rất khả quan với độ chính xác cao, thời gian rút ngắn có thể xuồng vài giờ, không đòi hỏi nhiều máy móc thiết bị do đó khả năng cơ động là rất cao. Những phương pháp trên đã mở ra cho ngành vi hóa sinh học nói riêng và cả ngành công nghệ thực phẩm hiện đại. 2. Cơ chế sản sinh độc tố Bacillus cereus 2.1. Giới thiệu chung về độc tố của B. cereus Vì ngộ độc thực phẩm do B.cereus không phải là loại bệnh được nói đến nhiều, sự thật là phạm vi ảnh hưởng của loại bệnh này ít được biết đến, được báo cáo là nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm và chiếm khoảng 33% trong tổng số các nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm (đa số các nguyên nhân là do vi rút) ở Norway (1988-1993), 47% ở Iceland (1985-1992). Tỷ lệ thấp hơn nhiều được báo cáo ở các quốc gia khác bao gồm U.S (1.3%) và Canada (2.2%). Ở Anh và xứ Wales, có đến 468 trường hợp từ 1990 đến 1995. B. cereus là một thực vật hoại sinh trong đất rất phổ biến. Nó được phân lập từ nhiều nguồn thực phẩm đa dạng, đặc biệt là thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật, từ thịt, các và các sản phẩm từ thịt cá cũng vậy. Phát hiện đầu tiên các về các mầm bệnh gây ngộ độc thực phẩm là từ năm 1949 khi Hauge đã phân lập mẫu từ xốt vani sau khi có một ca ngộ độc thực phẩm gây tiêu chảy tại bệnh viện ở Oslo, Norway. Xốt vani được nấu trước khi tiêu thụ và bảo quản ở nhiệt độ phòng cho đến khi sử dụng. Để khẳng định B. cerus là nguyên nhân gây ngộ độc, Hauge đã phát triển mẫu phân lập đến nồng độ khoảng 4x10 6 ml -1 và uống 200ml cocktail. Sau 13h, ông cảm thấy đau bụng và đi tiêu ra nhiều nước, triệu chứng này dai dẳng khoảng 8h. Hơn 20 năm sau, một triệu chứng gây ngộ độc thực phẩm khác do chủng B. cereus gây ra lại xuất hiện ở các công nhân người Anh. Triệu chứng này nặng hơn triệu chứng nôn mửa và kéo dài một thời gian ngắn (chưa đến 5h), điều này cho thấy rằng đây là một sự nhiễm độc. Ngày nay, bệnh này liên quan đến triệu chứng gây nôn mửa do B. cereus. Bacillus cereus có thể gây ra sự nhiễm trùng và nhiễm độc khác nhau, thêm vào đó, những ngộ độc khác do B.cereus gây ra là sự nhiễm trùng máu, viêm màng não, và nhiễm trùng mắt. Hai loại ngộ độc thực phẩm là nguyên nhân bởi rất nhiều nhấn tố gây độc hại khác nhau. Bệnh nôn mửa được mô tả với thời kỳ ủ bệnh ngắn (1-5h), nguyên nhân gây ra ngộ độc này là do chuỗi polypeptide nhỏ (cereulide) đã hình thành trước ở trong thực phẩm (ví dụ như Gạo). Triệu chứng bao gồm sự buồn nôn, sự nôn mửa ra và đau dạ dày (bảng 1-1). Bệnh tiêu chảy được mô tả với thời kỳ ủ bệnh từ 8 – 16h, triệu chứng bao gồm đau bụng, đi tiêu ra nhiều nước và đau thắt trực tràng (bảng 1-2). Nguyên nhân của triệu chứng này là do sự sản sinh ra độc tố đường ruột trong thời kỳ sinh trưởng của B.cereus trong ruột non từ việc ăn vào bụng các tế bào hay bào tử của vi khuẩn. Thông thường cả hai triệu chứng này là tương đối nhẹ, kéo dài ít nhất là 24h và không phải luôn luôn đòi hỏi phải dùng thuốc. Tuy nhiên, nhiều trường hợp ngộ độc gây tiêu chảy có thể xảy ra, nguyên nhân có lẻ là do các tế bào biểu mô chiếm đa số trong ruột non khi các bào tử của B.cereus sinh sôi nảy nở và sản sinh ra độc tố đường ruột. Bảng 1-1 Đặc điểm của bệnh nôn mửa và tính chất của triệu chứng gây nôn mửa do B. Cereus Tính chất/ Hoạt động Mô tả Liều nhiễm độc Số lượng B.cereus: 10 5 - 10 8 tb/g thực phẩm Khối lượng độc tố: 12 - 32 μ g/ kg Độc tố được sản sinh ra Trong thực phẩm (25 - 30 o C) Thời kỳ ủ bệnh ½ đến 5h Khoảng thời gian mang bệnh 6 - 24h Triệu chứng Buồn nôn, nôn mửa Loại thực phẩm thường gặp nhất Cơm nấu chin / chiên, mì ống, phở Tên của độc tố Cereulide Cấu trúc của độc tố Chuỗi polypeptide [D-O-Leu-D-Ala-L-O-Val-L-Val] Khối lượng phân tử 1.2 kDa Sinh kháng thể Không (none) Hoạt động sinh học trên người Gây nôn Cơ quan nhận cảm 5-HT 3 Cytotoxic No Hoạt động trên tế bào HEp-2 Hoạt động không bào Khả năng chịu nhiệt 90 phút ở 121 o C Ảnh hưởng của sự phân giải protein Không Việc sản sinh ra độc tố như thế nào Chưa biết, nhưng có thể liên quan đến enzyme (not known, but probably enzymatically) 2.2. Cơ chế gây bệnh 2.2.1 Triệu chứng nôn mửa Đặc điểm của bệnh nôn mửa và tính chất của độc tố gây nôn mửa đã được thể hiện ở bảng 1-1. Sự giải thích về cấu trúc của độc tố emetic đã đưa đến những hiểu biết sâu sắc hơn về triệu chứng này. Độc tố emetic có tên là cereulide và là một chuỗi polypeptide ba lần lặp lại của bốn amino và/hoặc oxy-acid (bảng 1-1) Cereulide (polypeptide) là tên của một độc tố quan trọng gây ra triệu chứng nôn mửa do Bacillus cereus sản sinh ra. Bài báo này giải quyết được nghiên cứu về quá trình sinh tổng hợp độc tố này dựa trên sự bất thường của độc tố depsipeptide từ Cacbon số 13 ( 13 C) liệt kê ra trên 3 loại tiền L- amino acid (Valin, Alanin, Leuzin) trên môi trường tổng hợp trung gian. Sự phân tích này được thực hiện dựa vào mức cấu tạo phân tử của amino hay oxy acid qua NMR và ESI – MS của phương pháp kính quang phổ trên cereulide và sản phẩm thủy phân là các dipeptide của nó. Sự hợp nhất của nguyên tử cacbon số 13 ( 13 C) là chiếm đến 95% trong O-Val, O-Leu và L-Val, trong khi đó chỉ có 40% 13 C là kết hợp trong D-Ala của Cereulide. Bacillus cereus được biết là nguyên nhân gây ra hai loại ngộ độc thực phẩm, đó là triệu chứng nôn mửa và triệu chứng tiêu chảy. Phần lớn những ngộ độc do Bacillus cereus gây ra chỉ mới phát hiện sau này. Cereulide được biết đến với cấu trúc bậc 1, với 1 dodecadepsipeptide tuần hoàn, với 12 góc lập thể trung tâm. Hóa học lập thể được chỉ ra từ sản phẩm thủy phân là các dipeptide kiềm tính, D-O-Leu, D-Ala, L-O-Val và L-Val. Đó là 1 ion Kali mạnh, nó liên kết yếu với các ion Li + , ion Na + , ion Cs + , nhưng với ion Rb + nó lại liên kết mạnh nhất, hơn bất kỳ ion kim loại kiềm nào. Cereulide tạo cấu trúc bậc 2 từ NMR và sự tính toán cơ học các phân tử được biểu thị ở hình 1. Độc tố này là nguyên nhân dẫn đến sự hình thành các ty lạp thể có chứa ATP và các enzyme lien quan đến hoạt động chuyển hóa tế bào trong các mô khác nhau. Chúng ta bắt đầu quan tâm đến con đường sinh tổng hợp của độc tố này cho các chương trình phòng chống ngộ độc thực phẩm trong tương lai. Nghiên cứu quá trình sinh tổng hợp tương tự như dodecadepsipeptide, valinomycin. Agata – một trong nhiều tác giả đã nghiên cứu quá trình phát triển và sinh độc tố của bacillus cereus trong quá trình tổng hợp trung gian một cách đầy đủ từ CADM (hỗn hợp các amino acid) và đường sucrose (đường mía). Người ta nhận thấy rằng, bacillus cereus cho phép (chấp nhận) việc sản sinh ra cereulide cấu trúc bậc 1 và 3 amino acid Val, Leu và Thr là cần thiết. Những nghiên cứu khác về quá trình sinh tổng hợp cereulide có lẻ là cần thiết để thúc đẩy việc nghiên cứu tìm ra phương pháp ngăn chặn những ngộ độc từ thực phẩm. Xét đoán từ cấu trúc của 1, tiền thân của D-Ala, L-O-Val và D-O-Leu sẽ lien quan đến các amino acid như L-Ala, L-Val, và L-Leu. Figure 2.ESI-mass spectrum of cereulide-K+complex upper trace. Natural isotope abundance lower trace, 13 C enriched cereulide. Trong thí nghiệm này, chúng tôi chú trọng đến sinh tổng hợp trung gian của 3 amino acid là L-Val, L-Leu, và L-Ala (0.1g/L có đến 99% nguyên tử cacbon ở dạng 13 C trong cacboxylic, tất cả 15 amino acid còn lại (0.1g/L), K 2 HPO 4 (5g/L) và MgSO 4 .7H 2 O (0.05g/L), được tiến hành ở nhiệt độ 30 0 C và thời gian là 24h, giữ ở tốc độ lắc là 200 rpm, chúng tôi thu được 2mg cereulide có cùng độc tính ở điều kiện này đã được đánh dấu để phục vụ cho phân tích các nghiên cứu tiếp theo. 1 H NMR của mẫu này là đồng nhất với quang phổ đáng tin cậy ngoại trừ chất đồng vị của cacbon 13 C. ESI mass (interpreting Electrospray Mass Spectra) của nó xuất hiện ở 7 đỉnh trung tâm với m/z là 1201.48 khá hơn mức bình thường M + K với m/z là 1191.55 (thể hiện ở hình 2), vì vậy cứ trung bình 10 đơn vị mass thì cao hơn bởi vì sự kết hợp cao của 13 Cs. Chính vì sự liên hợp cao của 13 Cs vào phân tử cereulide đã thúc đẩy chúng ta trong việc đo lường mức quang phổ NMR 13 C của ion K + trong phức hợp CDCl 3 để đạt được mức quang phổ như ở hình 3, với số liệu đáng kể 171.4 (L-O-Val), 172.2 (D-O-Leu), 175.7 (L-Val) và 176.2 (D-Ala) đã được chuyển sang mối tương quan giữa C-H của nó. Tương ứng với cường độ của 3 cacbon (C 6 , C 9 , C 12 ) của L-O-Val, D-O-Leu và L-Val là nhiều hơn hai lần C 6 D-Ala. Figure 3. 13 C NMR spectrum of cereulide-K + complex enriched at the 4 carboxyl or carboamide atoms (Ã). Brucker AMX-600, 150 MHz for 13 C at 300 K. Figure 4.Decoupled NHs by irradiating a-protons Tương tự với việc làm riêng các thí nghiệm đã đạt được với bức xạ β proton của 4 hợp phần amino hay oxy – acid. Loại bỏ các kết quả đạt được với α proton của O-Val ở 4.61 ppm với bức xạ β-H của nó ở 2.30 ppm để thay đổi từ bộ ba sang bộ kép (J=3.8 Hz cặp với 13 C của O- Val) như đã thể hiện ở hình 5 . Bức xạ β-H của L-Val ở 2.24 ppm đã làm thay đổi α proton của Val ở 3.82 ppm từ bộ năm thành bộ ba (J=5 Hz). Cả hai kết quả trên đều chỉ ra được sự kết hợp cao cacbonyl cacbon của 13 C tiền thân của các amino acid đối với L-O-Val và cả L-Val. Chưa có kết quả chính xác nào về sự kết hợp của 13 C, tuy nhiên trường hợp này lại đúng đối với Ala và O- Leu (hình 5). Sự chiếu xạ gốc metyl của Ala ở 1.47 ppm gây ra α-H của nó (4.27 ppm) giống như sự pha trộn của bộ ba và bộ kép biểu kiến với J=4 và 5 Hz, theo thứ tự định sẵn (tách biệt ra) có nghĩa là tỷ lệ sát nhập lại để tạo thành cacbonyl cacbon là không quá cao (không đạt đến 100%). Sự chiếu xạ của β-Hs của O-Leu trong khoảng 1.84 ppm là không đạt kết quả bởi vì dải sóng tự nhiên của nó quá rộng. Tuy nhiên, quang phổ NMR của 13 C (hình 3) và những thí nghiệm riêng lẻ (hình 4, 5) là những minh chứng gần như 100% của sự kết hợp 13 C tiền amino acid với 3 hợp phần (O-Leu, Val và O-Val) của cereulide. Figure 5.Decoupling experiments of a protons of the four components by irradiating b protons. Một phần trăm sự kết hợp của 13 C là được xác định bởi phép đo phổ từ các sản phẩm thủy phân cereulide, vì vậy hai dipeptide thu được từ sự thủy phân bằng kiềm cereulide (1) với 0.1N KOH (hoặc 1N NH 4 OH) ở rt trong 30 phút. Các sản phẩm thủy phân dipeptide là D-O-Leu-D- Ala và L-O-Val-L-Val, được phân tích bằng phương tiện ESI (electrospray ionization)- thước MS/MS ở trên Q-TOF của phép đo phổ (Mcro Mass Co.,Ltd, Manchester, UK). Để làm được điều này các chất đồng vị thừa và 13 C kết hợp lại với nhau thành mẫu, pha loãng mẫu đó đến độ hòa tan 10-100 pmol/μL trong 99,8% methanol: 0.2% acid formic trước khi bị electrospray ở 5μL/phút. Ngày nay, L-Leu và L-Ala đã được chứng minh để xác định rõ là có được từ quá trình sinh tổng hợp cereulide, vì hai acid amin này là cần thiêt cho B. cereus. Một trong những khả năng có thể được nghiên cứu là cả ba L-amino acid sẽ ít nhất một lần được biến đổi thành các α- keto acid và sau đó biến đổi thành D-O-Leu và L-O-Val hoặc là sự chuyển hóa amin để tạo thành D-Ala. Trong trường hợp này chỉ có acid pyruvic sẽ bị pha loãng bởi vì số gốc cao vì L- Ala là không cần thiết cho B. cereus. Nghiên cứu này có thể giải thích đến 95% sự kết hợp để tạo thành D-O-Leu, L-O-Val, và L-Val khoảng (40%) sự kết hợp để tạo thành D-Ala. 2.1.1 Triệu chứng tiêu chảy [...]... 16 h Khong thi gian mang bnh Triu chng 12 24h au bng dai dng, i tiờu nhiu nc, thnh thong bun nụn Na-Uy, hai ln bc phỏt ó xy ra vi rt nhiu ngi b nh hng sau khi n tht hm vi khoai tõy v rau Liu lng gõy bnh xp x 10 4 10 5 Ln u tiờn bựng phỏt (19 92), 17 24 ngi b ng c, 3 trong s cỏc bnh nhõn phi nhp vin t 1 3 tun, triu chng bt u nng 3 bnh nhõn ny khỏ mun (>24h) Ln th hai, bnh bựng phỏt vo thỏng 2 nm 19 95... ca c t ng rut thp n 1% s vi mc ban u Thi gian tng i di gia vic n vo nhng sinh vt ny vi vic xut hin nhng triu chng ca bnh c im ca triu chng tiờu chy c th hin trong bng 1- 3 Mc bin i ca liu lõy nhim cú l do kh nng sn sinh ra cỏc c t ng rut khỏc nhau v do tớnh nhy cm ca mi cỏ nhõn l khỏc nhau Bng 1- 2 c im bnh tiờu chy gõy ra bi chng vi khun B cereus c tớnh Liu gõy nhim Thụng thng l 10 5/g hoc /ml c t c... bng t l khng nh (phn trm khun lc c xỏc nhn l B .cereus) Vớ d: s khun lc m c pha lừang 10 -4 l 65, cú 4 trong 5 khun lc c chn xỏc nhn l B .cereus (c kim tra bng cỏc phn ng sinh húa) S t bo B .cereus/ 1g thc phm = 65 x 4/5 x 10 000 x 10 = 5200000 (nhõn 10 vỡ cú 0 .1 ml mu c tri da) 3.2 Cỏc phng phỏp phõn tớch nhanh: Theo nguyờn lớ ca cỏc phng phỏp phõn tớch vi sinh vt cú th chia phng phỏp ny thnh hai nhúm... ra bnh tiờu chy Cú hai s khỏc bit trong ba hp phn ca c t ng rut c sn sinh bi cỏc thc phm nhim B cereus, mt s nhúm cng c mụ t c t ng rut mt hp phn vi cỏc phõn t trng lng khong t 40 10 0 kDa Mt s hiu bit hin ti v c t ng rut ca B cereus c th hin bng 1- 3 Bng 1- 3 Properties of Enterotoxin Isolated from Bacillus cereus Enterotoxin/Reference Molecular Weight Once main Pro 50 kDa and two other pro Positive... nhiờn vi nhúm phng phỏp ny cũn mt s hn ch nh nhy khụng cao, tn nhiu nhõn cụng v thi gian phõn tớch thng kộo di do ú hn ch trong cụng tỏc phũng nga Bacillus cereus phõn bit vi cỏc loi khỏc trong Bacillus nhúm 1 nh B.anthracis gõy bnh than cho ngi, B.thuringiensis to c t kt tinh gõy bnh cho cụn trựng, B.mycoides, B.megaterium da vo cỏc c tớnh sinh húa Cỏc khun lc c khng nh da trờn cỏc th nghim sinh húa vi. .. mụi trng pepton m (BPW) -> ng nht bng Stomacher/ 1phỳt cú pha loóng 10 -1 -> pha loóng thnh dóy thp phõn cú cỏc pha loóng thớch hp nh lng B .cereus bng phng phỏp m khun lc: Phỏt hin bng mụi trng chn lc: Tri 0.1ml mi pha loóng lờn cỏc mụi trng thch ri 24h 30oC: MYP: do B .cereus khụng lờn men mannitol, to lecithinase v khỏng polymicin nờn khun lc B .cereus cú mu hng eosin, c bao quanh bi vựng cú ta,... chun b cho cỏc phn ng khng nh B .cereus Cỏc phn ng khng nh: Nhum Gram: Cy ria cỏc khun lc c chn t mụi trng MYP/MOSSEL sang ng thch dinh dng -> 30oC/ 24h -> nhum Gram -> quan sỏt di kớnh hin vi t bo nhum bng vt kớnh 10 0X nhỳng trong du Cỏc bc nhum Gram: Chn phin kớnh sch -> v lờn kớnh 1 vũng trũn, ng kớnh 2cm -> v trớ tng n vi vũng trũn, mt cũn li nh vi git nc ct thnh 1 git ln -> chuyn mt ớt sinh khi... khi m 15 2 trong s 252 ngi Na-uy b nh hng trong sut thi gian tham gia gii vụ ch v trt tuyt Cỏc i th tr tui (16 19 tui) b nhim triu chng ny sau hn 24 gi bnh v h b au t 1 n vi ngy Bo t ca B cereus t mụ t u tiờn trờn (phn gii thiu chung) l c phõn bit cho thy rng chỳng cú kh nng bỏm vo cỏc t bo Caco-2 (trờn cỏc t bo biu mụ ca ngi) Sau khi bỏm vo, cỏc bo t ny ny mm mt cỏch nhanh chúng (trong vũng 1h),... phỏt mu tng ng vi enzyme s c cho vo v mu s xut hin trong cỏc ging th Vic nh lng hm lng khỏng th hoc khỏng nguyờn c thc hin bng cỏch o mt quang gia mu v cht chun nh mỏy mỏy c Giỏn tip: ELISA Xỏc nh Bacillus Cereus Bng Phng Phỏp Elisa Hai loi c t gõy ra trỳng c thc phm do Bacillus cereus sinh ra l Emetic oxin (c t gõy nụn) v Diarrhoeal Enterotoxin (c t gõy tiờu chy) Phng phỏp xỏc nh Bacillus Diarrhoeal... ging nha(wells) Bng so mu (colour card) Mỏy so mu (Plate reader) Chun b mu v dng c: Ly 10 g mi mu thc phm nghi cha vi khun B .cereus, thờm vo 20ml dung m Tris 0.25 mol1 -1 Xay nghin mu Ly tõm mu trong 10 phỳt bng mỏy ly tõm tc c cao Lc b bó sau li tõm, thờm vo dch mu mụi trng m v chnh pH cho ti 8 Hỡnh 3.9: dng c o PH Hỡnh 3 .10 : Mỏy ly tõm Ly dng c t b Kit v nhit phũng trong mụi trng vụ trựng 30 phỳt Pha . sánh độc tố type 1 và type 2: 2. Đặc tính 3. Type 1 4. Type 2 5. Bền với nhiệt 6. 45 o C/30 phút 7. 12 0 o C/90 phút 8. pH 9. ổn định pH 4 -11 10 . ổn định pH 2 -11 11 . Tính nhạy 12 . Nhạy với enzyme. Kích thước 0,5 1, 5 x 2-4 µ. Vi khuẩn không tạo giáp mô, không có khả năng di động. Hình 1: Bacillus cereus trên kính hiển vi Hình 2: khuẩn lạc Bacillus cereus trên môi trường BA 1 1.2. Đặc điểm. (Genius) Bacillus, loài (Species) Cereus. Trong chi bacillus này ngoài loài cereus còn có một số loài như: Bacillus subtilis Bacillus coagulans Bacillus thuringiensis Bacillus natto Paenibacillus