Bệnh tuyến trùng hại thông ba Pinus kesiya Royle, nguyên nhân v giảI pháp phòng trừ Phạm Quang Thu Phòng bảo vệ Thực vật rừng Mở dầu Lâm Đồng tỉnh nam Tây Nguyên, tài nguyên rừng đất rừng có vai trò quan trọng việc phát triển kinh tế bảo vệ môi trờng đầu ngn khu vùc Theo sè liƯu cđa Bé L©m nghiệp (nay Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn) năm 1995, tổng diện tích đất có rừng toàn tỉnh 559.039 có 127.440 rừng kim (chủ yếu thông thông lá), chiếm 22,8% cha kể đến diện tích rừng hỗn giao rộng với kim họ dầu với kim 27.009 rừng trồng thông ba Thông ba Pinus kesiya địa, phân bố chủ yếu Lâm Đồng, phần tỉnh Kon Tum vùng núi cao Hoàng Su Phì tỉnh Hà Giang Thông ba có ý nghĩa kinh tế xà hội môi trờng quan trọng thành phố Đà Lạt nói riêng toàn tỉnh Lâm Đồng nói chung, vậy, gần nh tất diện tích rừng thông tự nhiên rừng thông trồng đợc đa vào loại rừng đặc dụng Bệnh héo thông, thông bị héo vàng chết đợc phát lần Lâm Đồng vào khoảng năm 1994 Từ đến mức độ gây hại lây lan dịch bệnh đà tăng lên đáng kể Theo thống kê chi cục Kiểm lâm tỉnh Lâm Đồng năm 1999, diện tích rừng thông ba bị hại với triệu chøng hÐo vµng råi chÕt víi mét diƯn tÝch vµo khoảng 1000 Tuy nhiên tỷ lệ mức độ bị hại khác khu vực khác Tỷ lệ chết số lâm phần bị bệnh cao số địa phơng nh Cam Ly, thành phố Đà Lạt, KLong KLanh Đa Sa huyện Lạc Dơng Đứng trớc tình hình dịch bệnh có chiều hớng lây lan, loại bệnh đà gây đợc ý nhiều nhà khoa học quan quản lý Đầu tiên nhà chuyên môn tỉnh Lâm Đồng cho nguyên nhân gây nên triệu chứng héo thông gây chết sâu non vòi voi đục vỏ phá hoại phần vỏ dẫn đến không khả dẫn truyền chất dinh dỡng Những năm sau nhà khoa học trờng Đại học Nông Lâm Thủ Đức, Thành phố Hồ Chí Minh đà tiến hành nghiên cứu nguyên nhân gây héo Kết nghiên cứu cho thấy đà phát nhiều sâu non vòi voi vỏ thông đà héo chết từ năm trớc Chi Cục kiểm lâm tỉnh Lâm Đồng đà điều tra, thu mẫu gỗ thông bị chết từ khu rừng trồng bị nhiễm bệnh gửi cho giáo s Trần Văn MÃo, trờng Đại học Lâm nghiệp, Xuân Mai, Hà Tây, để xác định nguyên nhân gây chết Sau xem xét mẫu vật tài liệu có ông cho nguyên nhân gây chết héo thông ba Lâm Đồng loại tuyến trùng gây hại Tháng năm 1997, Trung tâm nghiên cứu Lâm sinh Lâm Đồng thuộc Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam đà gửi cho phòng nghiên cứu bảo vệ thực vật rừng mẫu gỗ thông bị chết héo, mẫu gỗ có chứa sâu non xén tóc Những sâu non đà đợc nuôi phòng thí nghiệm, đến cuối tháng 10 năm 1997 đà thu đợc cá thể xén tóc trởng thành Kết giám định sơ loài xén tóc có tên Monochamus alternatus, loại vectơ truyền tuyến trùng gây bệnh phổ biến nớc có đại dịch bệnh tuyến trùng gây chết thông Loài xén tóc đối tợng kiểm dịch nhiều nớc giới Những nghiên cứu nhà khoa học Nhật Bản, Canađavề giải thích nguyên nhân gây bệnh chết héo thông tuyến trùng cho rằng: nguyên nhân gây chết thông tuyến trùng sống gỗ chủ yếu loài Bursaphelenchus xylophilus, số loài khác có khả gây bệnh nhng mức độ yếu Các loài tuyến trùng sống gỗ không tự di chuyển từ sang khác đợc mà phải dựa vào số loài thuộc cánh cứng với vai trò nh vectơ truyền bệnh Xén tóc hay số loài cánh cứng khác thờng đẻ trứng vào thông đà bị bệnh, có dấu hiệu héo, sâu non xén tóc sinh trởng phát triển thân đà bị bệnh chết Gần đến thời kỳ vũ hoá xén tóc, tuyến trùng sống thân di chuyển dần, tập trung bờng nhồng bám vào thể nhộng trần xén tóc Khi vũ hoá, xén tóc trởng thành đà mang lợng lớn tuyến trùng bám vào bên thể; xén tóc trởng thành bay tới thông khoẻ ăn bổ sung vỏ cành non dới tuổi để thành thục; trình gặm vỏ thông, tuyến trùng bám thể xén tóc đà chui vào thông qua vết thơng cành Sau xâm nhiễm vào cành cây, tuyến trùng sinh trởng nhanh, mật độ tăng nhanh đà làm tắc ống dẫn nớc nhựa làm cho bị héo vào mùa thu mùa hè năm sau Từ thông tin nêu việc nghiên cứu hệ thống nguyên nhân gây chết héo, đánh giá mức độ thiệt hại nghiên cứu trình phát sinh, phát triển vật gây bệnh nh vectơ truyền bệnh nhằm đa giải pháp phòng trừ giảm thiểu tác hại bệnh, bảo vệ rừng thông ba tỉnh Lâm Đồng việc cần thiết cấp bách nhà quản lý nhà khoa học giai đoạn tơng lai phơng pháp nghiên cứu 2.1 Địa điểm nghiên cứu 2.1.1 Địa điểm điều tra Việc điều tra, đánh giá tỷ lệ bị bệnh mức độ bị bệnh khu vực sau: - Cam Ly, thành phố Đà Lạt - Hồ Tuyền Lâm, thành phố Đà Lạt - Núi Lang Bian, huyện Lạc Dơng - KLong KLanh, huyện Lạc Dơng 2.1.2 Địa điểm gây bệnh nhân tạo nghiên cứu đặc điểm xén tóc - Trung tâm Nghiên cứu Lâm sinh Lâm Đồng - Phòng Nghiên cứu Bảo vệ rừng 2.2 Phơng pháp nghiên cứu 2.2.1Xác định tỷ lệ bị bệnh: Ô tiêu chuẩn điển hình đợc bố trí tuyến đợc đặt điểm điều tra, diện tích ô tiêu chuẩn 400m2 Mỗi địa điểm 60 ô điều tra Trên ô tiêu chuẩn, tình trạng sức khoẻ, tỷ lệ bị bệnh đợc đánh giá thông qua đo lợng nhựa chảy qua vết đục vào thân Dùng đục chuyên dụng, lỗ đục hình tròn đờng kính 12 mm, đóng nhẹ vào thân vị trí 1.3 m đục chạm vào phần gỗ thân cây, lấy đục tách phần vỏ lỗ đục Sau 10 phút đánh giá lợng nhựa chảy lỗ đục, lợng nhựa chảy đợc chia làm cấp: A, B, C D đà chết nhựa Các tiêu cấp lợng nhựa chảy qua lỗ đục nh sau: A: khoẻ, lợng nhựa tiết nhiều B: yếu, lợng nhựa tiết C: đà nhiễm bệnh, vỏ phía tơi nhng nhựa D: đà chết Nếu nh vào lợng nhựa tiết qua lỗ đục vào thân dựa vào kết nghiên cứu nhà khoa học Nhật Bản mối quan hệ ngừng giảm khả tiết nhựa với việc chết bị bệnh tuyến trùng đợc xem nh tất có mức B,C D Tỷ lệ bị bệnh cho ô tiêu chuẩn đợc tính toán số mức B,C D chia cho tổng số ®iÒu tra: B + C + D 100 P% = A+B+C+D Tỷ lệ bị bệnh bình quân cho khu vực điều tra đợc tính toán sở trung bình 60 ô tiêu chuẩn - Điều tra diễn biến chết hàng năm tuyến trùng đợc tiến hành điều tra ô tiêu chuẩn định vị, diện tích ô 1,0 loại mật độ: 1650 cây/ha 1250 cây/ha qua năm liên tục 1998, 1999 2000 2.2.2 Tách chiết tuyến trùng từ mẫu gỗ nghiên cứu phân loại tuyến trùng vectơ truyền tuyến trùng Tách chiết tuyến trùng từ mẫu gỗ đợc thực phễu lọc Biếc Man; đếm mật độ tuyến trùng đĩa đếm kẻ lới; quan sát hình thái, giải phẫu phục vụ việc định loại kính hiển vi quang học BX 50 Việc đinh loại tuyến trùng dựa chuyên khảo chi Bursaphelenchus Fuchs, 1937 Nuôi xén tóc để phân loại giám định đợc thực phòng thí nghiệm, khúc gỗ chứa sâu non đợc đặt lồng lới, theo dõi thời gian vũ hoá; phân loại giám định xén tóc dựa chuyên khảo chi Monochamus Hope 2.2.3 Phơng pháp gây bệnh nhân tạo Nhân nuôi tuyến trùng gây bệnh nhân tạo đợc áp dụng phơng pháp Yoichi Kishi năm 1995 2.2.4 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ dựa nguyên tắc phòng trừ tổng hợp Kết nghiên cứu 3.1 Điều tra đánh giá tỷ lệ mức độ bị bệnh 3.1.1 Tỷ lệ bị bệnh Đánh giá tình trạng sức khoẻ hay gọi tỷ lệ bị bệnh đợc tiến hành ô tiêu chuẩn điển hình địa điểm điều tra Các nhà côn trùng học Nhật Bản đà phát qua hệ gần giảm ngừng tiết nhựa đục lỗ nhỏ qua lớp vỏ vào đến phần gỗ thân thông đầu mùa hè chết vào mùa thu (Mamiya, 1983) Kết điều tra tỷ lệ bị bệnh thông qua lợng nhựa tiết qua lỗ đục địa điểm điều tra đợc tính trung bình 60 ô tiêu chuẩn đợc trình bày bảng Bảng1: Tỷ lệ bị bệnh điểm điều tra Chỉ số A B C D Tỉng Langbian Sè c©y % 40 63.5 11 17.5 4,7 14.3 63 100.0 TuyÒn L©m Sè c©y % 30 53.6 11 19.6 7.2 11 19.6 56 100.0 Cam Ly Sè c©y % 37 52.1 12 16.9 11.3 14 19.7 71 100.0 K’Long K’Lanh Sè c©y % 39 52.0 12.0 10 13.3 17 22.7 75 100.0 Kết bảng cho thấy tỷ lệ bị bệnh thông ba tuyến trùng khác điểm điều tra Theo nh cách tính tỷ lệ bị bệnh thông qua lợng nhụa tiết cấp B C có trị số khoảng 20%, trung bình điểm điều tra 25,6% Số đà bị chết hoàn toàn trung bình là: 19,1% Nh vậy, tỷ lệ bị bệnh trung bình điểm điều tra gồm có lợng nhựa chảy đà chết bệnh mức 44.7% 3.1.2 Sự chết hàng năm thông tuyến trùng Hai ô tiêu chuẩn định vị đợc đặt Cam Ly rừng trồng 10 tuổi với diện tích ô Mật độ ô tiêu chuẩn số 1.650 cây/ha mật độ ô tiêu chuẩn số hai 1.250 cây/ha Căn vào triệu chứng tình trạng đà chết ô tiêu chuẩn, việc tính toán số lợng bị chết tuyến trùng ô tiêu chuẩn đợc trình bày bảng Năm Bảng 2: Số lợng chết qua năm tuyến trùng ô tiêu chuẩn định vị ¤ tiªu chuÈn ¤ tiªu chuÈn 1994-1997 1998 1999 2000 Tổng cộng Số lợng chết 107 38 59 67 271 % 6.5 2.3 3.6 4.1 16.4 Số lợng chết 97 18 35 43 193 % 7.8 1.4 2.8 3.4 15.4 Kết bảng đà chết thông hàng năm tuyến trùng có tăng lên song mức độ tăng không lớn, điều có nghĩa dịch bệnh có chiều hớng lây lan gia tăng nhiên với tốc độ chậm Tính bình quân từ năm 1994 đến năm 2000, thời gian năm, năm bình quân chết 33 cây, tơng đơng với tỷ lệ 2.25% Đây tỷ lệ không lớn, giải pháp ngăn chặn, hạn chế diện rộng số đáng kể Kết bảng cho thấy tỷ lệ bị bệnh bình quân điểm điều tra 44.7%, nhng tỷ lệ chết bình quân năm có 2.25%, điều tuyến trùng phát triển chậm có thời gian ủ bệnh lâu tính gây bệnh yếu so với loài B xylophilus đợc nghiên Nhật Bản nớc Bắc Mỹ Qua hai ô tiêu chuẩn, chết hàng năm ô tiêu chuẩn có mật độ cao, cao ô tiêu chuẩn có mật độ thấp, sở cho việc hạn chế trình lây lan bệnh thông qua biện pháp kỹ thuật lâm sinh; tỉa tha rừng trồng, không để cá thể cạnh tranh không gian dinh dỡng 3.2 Nghiên cứu xác định nguyên nhân gây bệnh 3.2.1 Triệu chứng trình phát sinh, phát triển bệnh Khi bị nhiễm tuyến trùng giai đoạn đầu, mật độ tuyến trùng thân thấp, sinh trởng phát triển cha có dấu hiệu thay đổi, tán xanh biểu khavc biệt Giai đoạn khó phát Khi tuyến trùng đợc nhiễm vào thông qua vectơ thờng vào mùa vũ hoá xén tóc, có thời điểm tháng tháng 10 hàng năm Sau tuyến trùng xâm nhập vào chủ, chúng phát triển nhanh số lợng chiếm toàn hệ thống mạch dẫn phần gỗ thân dẫn đến cản trở trình cung cấp nớc từ rễ lên phần tán lá, toàn có tợng héo dần rủ xuống Lợng nhựa giảm rõ rệt Sau khoảng 3-4 tháng bắt đầu héo chuyển dần thành màu vàng khô có màu nâu đỏ (xem ảnh 1) ảnh 1: Thông ba bị nhiễm tuyến trùng Do đặc điểm tuyến trùng gây bệnh héo thông chúng không tự di chuyển từ sang khác đợc mà phải nhờ vào vectơ, số loài thuộc họ cách cứng, chủ yếu loài xén tóc Xén tóc trởng thành thờng chọn loài bị bệnh, sinh trởng kém, lợng nhựa thân giảm để đẻ trứng Trứng nở thành sâu non, hết tuổi sâu non chui vào vỏ làm thành đờng hầm sống thân Sắp đến thời kỳ vũ hoá xén tóc, tuyến trùng thân di chuyển đến buồng nhộng bám vào thể, lỗ thở, gốc cánh xén tóc trởng thành Xén tóc trởng thành sau vũ hoá đà mang lợng lớn tuyến trùng thể để nhiễm cho khoẻ khác Sau vũ hoá, xén tóc trởng thành cha phát triển đầy đủ khả sinh sản, chúng đòi hỏi phải có thời gian ăn bổ sung để thể thành thục thờng từ đến tuần Thức ăn chúng vỏ non cành thông sống có độ tuổi dới năm Lúc tuyến trùng từ lỗ thở chui xâm nhập vào thông khoẻ qua vết cắn xén tóc Đây thời kỳ phát tán nhiễm bệnh héo thông tuyến trùng từ chết bị bệnh sang khoẻ khác Chính thế, triệu chứng điển hình thông bị bệnh tuyến trùng cành non thông đà chết phải có vết cắn vết vỏ bị gặm xén tóc (xem ảnh 2, chỗ mũi tên) ảnh 2: Cành non thông bị bệnh có vết vỏ bị gặm xén tóc Trong số trờng hợp thông ba bị chết, có màu nâu đỏ, bên vỏ có nhiều máng đẻ trứng xén tóc, có dấu hiệu sâu non xén tóc sống thân thông qua phân sâu non thải ngoài; nhng tách lọc tuyến trùng không thu đợc Trong trờng hợp này, yếu bị bệnh gỉ sắt, nguyên nhân khác xén tóc số loài cánh cứng khác nh mọt, bọ vòi voi đến đẻ trứng sâu non loài đà làm chết Vì xác định nguyên nhân gây chết thông ba Lâm Đồng vào triệu chứng bên cha đủ Để xác định xác mẫu chết có phải tuyến trùng hay không cần phải khoan lấy mẫu gỗ thân bị bệnh tách chiết tuyến trùng phòng thí nghiệm 3.2.2 Xác định nguyên nhân gây bệnh 3.2.2.1 Tách chiết tuyến trùng từ gỗ Bằng phơng pháp tách lọc tuyến trùng phễu Biếc Man, mật độ tuyến trùng thu đợc điểm điều tra đợc trình bày bảng Bảng 3: Mật độ tuyến trùng mẫu gỗ No MÉu sè 11 13 D BH (cm) 20 13 15 H (m) Tuæi 7.0 3.0 3.0 13 9.0 16 15 15 Tình trạng c©y lÊy mÉu ChÕt 1999 ChÕt 2000 ChÕt 2000 ChÕt 1999 Chết 2000 Địa điểm Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Sè tuyÕn trïng (con) 682 2.828 242 58 2.871 10 11 12 13 14 17 18 22 26 27 28 29 30 31 32 34 35 38 14 15 16 17 18 19a 21 22 26 30 31 32 33 34 35 36 38 39 42 10 18 15 10 10 13 10 7 10 10 10 10 2.5 3.0 5.0 5.0 5.0 6.0 5.0 6.0 4.0 5.0 5.0 3.5 4.0 6.0 6.5 6.5 6.0 7.0 7 7 7 5 5 5 7 ChÕt 2000 ChÕt 2000 ChÕt 1999 ChÕt 1999 HÐo 40% HÐo 90% ChÕt 1999 ChÕt 1998 HÐo 80% ChÕt 1998 ChÕt 1999 ChÕt 1999 ChÕt 1999 ChÕt 1999 HÐo 50% ChÕt 2000 ChÕt 2000 ChÕt 2000 HÐo 98% Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Langbian Langbian Langbian Lâm Hà Lâm Hà Lâm Hà Lâm Hà Lâm Hà Lâm Hà Klong Klanh Klong K’lanh K’long K’lanh 44 754 58 20 40 21.301 290 1.305 841 363 470 1.390 20 10 20 550 300 540 8.580 Kết bảng cho thấy mật ®é tuyÕn trïng biÕn ®éng ë c¸c mÉu thu thËp địa phơng khác Mật độ tuyến trùng cao thu đợc từ mẫu Cam Ly, Thành phố Đà Lạt KLong KLanh, Lạc Dơng Mật ®é tun trïng cao nhÊt cịng t×m thÊy ë mÉu gỗ chết 3.2.2.2 Phân loại tuyến trùng Tuyến trùng thu đợc qua việc tách chiết từ mẫu gỗ địa phơng khác nhau, đợc mô tả đặc điểm hình thái cho việc định loại nh sau: + Con cái: Thân cong phía bụng bị giết nhiệt Thực quản trớc hình trụ lần chiều rộng thể vị trí phận sinh dục Diều kéo dài hình ô van, van thực quản diều Bộ phận sinh dục hình trụ, phía nắp; dài gấp 3-4 lần chiều rộng thể vị trí sinh dục ngoµi ChiỊu dµi tõ bé phËn sinh dơc ngoµi tíi hậu môn thờng dài gấp 7-8 lần chiều rộng thể vị trí sinh dục Đuôi có dạng hình tháp, có bao nhỏ (Bursa) chóp đuôi cong phía bụng + Con đực: Có hình chữ J sau giết nhiệt Phần trớc thể tơng tự nh Đuôi cong phía bụng, cuối đuôi có bao nhỏ Gai sinh dục đực dạng đôi cong, đầu nhọn nắp Dựa vào đặc điểm hình thái nh vừa mô tả trên, tuyến trùng phân lập đợc từ bị bệnh Lâm Đồng thuộc giống Bursaphelenchus Fuchs, 1937 Các số đo số giúp cho việc định loại đến loài đợc trình bày Bảng Chỉ tiêu L Sp V A B C Bảng 4: Một số số đo tỷ lệ Con ®ùc Con c¸i TuyÕn trïng tõ B xylophilus* TuyÕn trïng từ B xylophilus* Lâm Đồng Lâm Đồng 562.1(356.3730(590-820) 572.7(360.8810(710-1010) 811.8) 820.8) 14.2(11.3-15.8) 27(25-30) 71.8(68.3-75.3) 72.7(67.0-78.0) 28.8(23.2-38.1) 42.3(36-47) 29.4(23.6-37.3) 42.3(36.0-47.0) 11.8(8.9-18.5) 9.4(7.6-11.3) 12.1(9.0-15.7) 9.4(7.6-11.3) 20.9(16-27.4) 26.4(21-31) 12.5(8.9-15.4) 26.0(23.0-32.0) c’ 2.2(1.7-2.8) 4.2(3-5.40 St 12.8(9.5-14.4) 14.9(14.0-17.0) 12.3(9.0-15.3) 15.9(14.0-18.0) Pu 66.5(45.0-97.2) * Theo Mamiya vµ Kryohara, 1972 Ghi chó: - L : chiỊu dài thể (m) - Sp: chiều dài gai sinh dục đực (m) - V: chiều dài từ đầu tới bé phËn sinh dơc ngoµi x 100 / chiỊu dµi thể - a: chiều dài thể / chiều rộng thể điểm - b: chiều dài thể/ chiều dài từ đỉnh đầu tới van thực quản - c: chiều dài thể / chiều dài đuôi - c: chiều dài đuôi / chiều rộng thể hậu môn - St: chiều dài kim hót (μm) - Pu: chiỊu dµi cđa tói tư cung sau (m) Dựa vào số đo tỷ lệ đợc trình bày chi tiết bảng 4, tuyến trùng phân lập từ thông chết tỉnh Lâm Đồng không trùng với loài tổng số 37 loài đà đợc mô tả chuyên khảo loài thuộc giống Bursaphelenchus Fuchs, 1937 A.C Tarjan Carlos Baeza Aragon Trên sở nghiên cứu trên, giám định loài tuyến trùng gây bệnh cho thông ba Lâm Đồng Bursaphelenchus sp Kết đợc nhà khoa học Nhật Bản khẳng định cho loài cho khoa học cần có nghiên cứu sâu phân loại học sở phân tích AND (Yamane, 2000) Vị trí phân loại tuyến trùng gây bệnh cho thông ba Lâm Đồng nh sau: - Loài: Bursaphelenchus sp - Gièng: Bursaphelenchus Fuchs - Hä: Aphelenchoididae - Bé: Tylenchida - Lớp: Secernentea 3.2.2.3 Thí nghiệm gây bệnh nhân tạo * Nhân nuôi tuyên trùng Theo Yoichi Kishi năm 1995, hầu hết loài tuyến trùng thuộc họ Aphelenchoididae tuyến trùng ăn sợi nấm (mycetophagous) Tuyến trùng Bursaphelenchus xylophilus đợc nhà khoa học Nhật Bản nuôi nhân tạo hệ sợi số loài nấm khác nh−: Botrytis cinerea, Pestalotia sp., Rhizosphaera sp… Trong ®ã hƯ sợi nấm Botrytis cinerea thức ăn thích hợp cho tuyến trùng B xylophilus đạt đợc số lợng tuyến trùng cao Trong thí nghiệm này, tuyến trùng Bursaphelenchus sp đợc nuôi nhân tạo hệ sợi nấm loài Botrytis cinerea Môi trờng PDA đợc chuẩn bị đổ lớp dầy 5-10 mm đáy bình tam giác 250 ml Cấy nấm Botrytis cinerea điểm bình Sau ngày sợi nấm ăn kín mặt thạch, thả vào bình tam giác 20 tuyÕn trïng ®ã cã 10 ®ùc 10 Sau 20 ngày lọc lấy tuyến trùng phễu Biếc Man ( xem ảnh 3, tuyến trùng gây nuôi nhân tạo) ảnh 3: Tuyến trùng gây nuôi nhân tạo * Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm gây bệnh nhân tạo đợc tiến hành phòng thí nghiệm Nghiên cứu bảo vệ rừng, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam với công thức thí nghiƯm nh− sau: C«ng thøc1: NhiƠm b»ng n−íc cÊt C«ng thức 2: Nhiễm 1000 tuyến trùng/1 Công thức 3: Nhiễm 2000 tuyến trùng/1 Công thức 4: Nhiễm 3000 tuyến trùng/1 Công thức 5: Nhiễm 4000 tuyến trùng/1 Công thức 6: Nhiễm 5000 tuyến trùng/1 Mỗi công thức thí nghiệm 30 thông xuất xứ Lâm Đồng năm tuổi Trên thông thí nghiệm dùng dũa sắt chà sát nhẹ cành nhỏ với chiều dài 5-10 cm (trông nh vết xén tóc ăn vỏ cây) Số lợng tuyến trùng công thức thí nghiệm đợc nhỏ vào giấy hút ẩm đặt vết thơng vừa tạo cành băng kín băng giấy paraphin Tiến hành chăm sóc thoi dõi thí nghiệm, Kết cho thấy: có công thức thứ với mật độ 5000 tuyến trùng/1 xuất hiƯn triƯu chøng hÐo sau thêi gian 12 th¸ng (xem ảnh 4) Các công thức khác sinh trởng bình thờng Tuy nhiên kiểm tra lợng nhựa tiết công thức thí nghiệm có lợng nhựa so với công thức đối chứng ảnh 4: Cây thí nghiệm gây bệnh nhân tạo bị chết Lấy mẫu gỗ thân bị chết từ thí nghiệm chiết lọc tuyến trùng phễu Biéc Man thu đợc tuyến trùng có đặc điểm giống nh loài đà nhiễm gây bệnh 3.2.3 Vectơ truyền tuyến trùng 3.2.3.1 Nuôi xén tóc nghiên cứu phân loại Quan sát thân cành lớn thông bị bệnh có lỗ đẻ trứng xén tóc Lỗ đẻ trứng có hình máng có kích thớc -5 mm, sâu 2-3mm (xem ảnh 5) xén tóc trởng thành tạo đẻ trứng Trứng nở thành sâu non sâu non tuổi bắt đầu chui qua vỏ đục đờng hầm chui vào thân Sâu non sau tuổi vũ hoá hoàn toàn sống thân gỗ Khi sâu non sống trông thân gỗ chúng thải phân qua lỗ đờng hầm, vào màu sắc vị trí chất thải, ta đoán đợc vị trí sâu non Các mẫu gỗ khúc chứa sâu non xén tóc (nhìn bên thân có lỗ đẻ trứng) đợc thu thập từ rừng trồng bị bệnh vào tháng năm 1999 tháng năm 2000, đợc nuôi phòng thí nghiệm Nghiên cứu bảo vệ rừng, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Trung tâm thực nghiệm Lâm sinh Lâm Đồng Máng đẻ trứng ảnh 5: Máng đẻ trứng xén tóc Các mẫu thu vào tháng thờng thu đợc xén tóc trởng thành vào tháng 10 mẫu gỗ thu vào tháng thờng thu đợc xén tóc trởng thành vào đầu tháng Đặc điểm hình thái xén tóc đợc mô tả nh sau: - Xén tóc trởng thành (xem ảnh 6): Kích thớc xén tóc trởng thành có chiều dài từ 17,0 đến 22,0 mm, chiều rộng từ 0,6 đến 0,8 mm Con thờng nhỏ đực - Màu sắc: Toàn đầu, ngực chân màu nâu; phần đầu lng ngực có đốm màu nâu vàng Trên cánh có lông màu trắng tạo thành hàng xen kẽ lẫn hàng lông màu vàng chạy từ đầu cánh đến cuối cánh; hàng lông hàng lông trắng bị đứt đoạn với lông màu nâu đen nên toàn cánh có dạng đốm với màu nâu, trắng nâu vàng - Râu đầu dài thân, gồm 10 đốt gốc Râu đầu đực dài đốt có màu nâu toàn bộ, râu ngắn gốc đốt có màu nâu nhạt (hơi trắng) kéo đến đốt Đây dấu hiệu quan trọng để phân biệt đực - Phần ngực: Có gai nhọn hai bên ( bên gai) - Sâu non : Màu trắng ngà, đầu lớn thân, chân ngực Kích thớc sau tuổi cuối 3,4 cm - Nhộng: Dạng nhộng trần, màu trắng ngà kích thớc 3,2 3,6 cm - Trứng : Màu trắng nhạt sau chuyển vàng, kích thớc dài khoảng 1mm Dựa vào đặc điểm hình thái mô tả nh trên, loài xén tóc thu đợc Lâm Đồng đợc giám định nh sau: - Loài: Monochamus alternatus Hope - Gièng: Monochamus - Hä: Cerambycidae - Bé: Coleoptera ảnh 6: Xén tóc M alternatus trởng thành 3.2.3.2 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học xÐn tãc M alternatus * Mét sè tËp tÝnh sinh hoạt - Sâu trởng thành thờng khoét thành lỗ có đờng kính 1-2 mm lớp vỏ thân yếu chết bị bệnh héo thông để đẻ trứng Mỗi lỗ có trứng nhiên lỗ tìm thấy trứng, số lợng lỗ có trứng chiếm tỷ lệ 50 65% so với tổng số lỗ điều tra; điều nµy chøng tá chóng cã sù chän läc rÊt kü cho nơi đẻ trứng Nhiều lỗ đợc tìm thấy cành thông với đờng kính 2cm - Sâu non tuổi nở từ trứng, sống ăn phần dới lớp vỏ Sau giai đoạn phát triển sâu non đục vào phần tợng tầng nơi dẫn nhựa tiếp tục đục vào phần gỗ cây, ăn sống hóa nhộng Trong giai đoạn sâu non lột xác lần sau chuyển sang giai đoạn nhộng - Sâu non đẫy sức ( cuối tuổi ) chúng làm thành buồng nhộng cuối đờng hầm nằm bất động để hoá nhộng, giai đoạn kéo dài khoảng tuần Đây thời gian tuyến trùng tập trung quanh buồng nhộng xâm nhập vào lỗ thở nhộng sâu trởng thành vũ hóa - Về chế truyền bệnh xén tóc đợc Miyazaki cộng mô tả nh sau: Sâu non đà tiết mét sè axÝt bÐo ch−a no nh− linoleic axÝt ë buồng nhộng giai đoạn hóa nhộng đà kích thích sù tËp trung cđa tun trïng tíi bng nhéng vµ xâm nhập vào thể xén tóc M alternatus Tuy nhiªn, viƯc di chun tËp trung quanh bng nhéng tuyến trùng bị chi phối nhiều yếu tố khác nh vật lý, sinh hóa sinh học chúng mà cha đợc xác minh Khi vũ hoá, sâu trởng thành mang số lợng lớn tuyến trùng lỗ thở thân thể chúng - Sau vũ hoá, sâu trởng thành cha phát triển đầy đủ khả sinh sản, chúng đòi hỏi phải có thời gian ăn bổ sung để thể thành thục (2- tuần) Thức ăn chúng vỏ non cành thông sống có độ tuổi dới năm Lúc tuyến trùng từ lỗ thở chui xâm nhập vào thông khoẻ qua vết cắn xén tóc Đây thời kỳ phát tán nhiễm bệnh héo thông tuyến trùng từ chết bị bệnh sang khoẻ khác 10 * Vòng đời Những thông tin giới vòng đời loài sâu hại cho thấy chúng cã sù kh¸c vỊ sè thÕ hƯ mét năm Ngay Nhật Bản khu vực vực miền Đông Bắc để hoàn thành vòng đời M alternatus đòi hỏi năm; khu vựa miền Tây Nam, việc hoàn thành vòng đời M alternatus có năm Tại Lâm Đồng, theo dõi vòng đời M alternatus cho thấy hệ năm ( 12 tháng) * Thời gian xuất sâu trởng thành năm Thời gian xuất sâu trởng thành M alternatus hệ vào khoảng tháng đến cuối tháng 4, tập trung vào tháng Thời gian xuất sâu trởng thành M alternatus hệ vào khoảng cuối tháng đến đầu tháng 10, tập trung vào tháng Tuy nhiên xuất cảu sâu trởng thành M alternatus rừng thông Lâm Đồng quan sát thấy trớc sau thời kỳ nói nhng với số lợng Sự phát tán bệnh thông qua xét tóc mạnh hệ (tháng 4) Thời gian vũ hoá xén tóc trởng thành đợc trình bày bảng Bảng 5: Thời điểm vũ hoá xén tóc trởng thành nuôi phòng thÝ nghiÖm MÉu sè 1-00 2-00 3-00 4-99 5-99 6-00 7-00 8-00 9-99 10-99 11-00 12-00 13-00 14-99 15-99 16-00 17- 00 18-00 Địa điểm K'Long K'Lanh K'Long K'Lanh K'Long K'Lanh Lang Bian Lang Bian Lang Bian Lang Bian Lang Bian Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Cam Ly Tun L©m Tun L©m Cam Ly Cam Ly Cam Ly Ngµy thu mÉu 24 – - 2000 24 – - 2000 24 – - 2000 –8 - 1999 – - 1999 25 –1 - 2000 25 –1 - 2000 25 –1 - 2000 – - 1999 – - 1999 26 – - 2000 26 – - 2000 26 – - 2000 – - 1999 – - 1999 18 – - 2000 18 – - 2000 18 – - 2000 Ngày vũ hoá 25 - 2000 26 - 2000 – - 2000 20 – - 1999 21 – - 1999 26 – - 2000 – - 2000 – - 2000 22 – - 1999 23 – - 1999 27 –3 - 2000 13 – - 2000 15 – - 2000 25 – - 1999 – 10 - 1999 15 – - 2000 27 – - 2000 – - 2000 Sè l−ỵng 1 4 1 1 1 1 Kết bảng xén tóc trởng thành có giai đoạn vũ hoá năm Giai đoạn thứ cuối tháng đến đầu tháng Giai đoạn từ cuối tháng đến đầu tháng 11 3.3 Biện pháp phòng trừ Việc phòng trừ bệnh héo thông tuyến trùng đợc tiến hành nguyên tắc phòng trừ tổng hợp, bao gồm biện pháp kỹ thuật lâm sinh, biện pháp vật lý giới (chặt đột bệnh, thiêu huỷ xén tóc tuyến trùng), biện pháp dùng bẫy pheromon dùng bẫy tuơi để tiêu diệt vectơ truyền bệnh 3.3.1 Biện pháp kỹ thuật lâm sinh 11 - - Thí nghiệm đợc tiến hành với ô tiêu chuẩn định vị đợc đặt Cam Ly rừng trồng 10 tuổi với diện tích ô Mật độ ô tiêu chuẩn số 1.650 cây/ha mật độ ô tiêu chuẩn số hai 1.250 cây/ha Căn vào triệu chứng tình trạng đà chết ô tiêu chuẩn, việc tính toán số lợng bị chết tuyến trùng ô tiêu chuẩn cho thấy: Khi rừng trồng có mật độ lớn: 1.650 cây/ha, tỷ lệ chết tuyến trung trung bình năm năm từ 1998-2000 3,31%, rừng trồng có mật độ thấp 1.250, tỷ lệ chết trung bình năm năm theo dõi có 2,56% Khi rừng khép tán, tiến hành tỉa tha rừng, đa mật độ rừng lại từ 1000 1250 cây/ha Sau tỉa tha trình cạnh tranh không gian dinh dỡng cá thể giảm, rừng sinh trởng tốt dầy cứng thức ăn hấp dẫn xén tóc 3.3.2 Chặt đốt bệnh tiêu diệt sâu non xén tóc M alternatus tuyến trùng Bursaphelenchus sp ảnh 7: Chặt đa khỏi rừng bị bệnh để thiêu huỷ - - Thí nghiệm đợc tiến hành với ô tiêu chuẩn định vị đợc đặt Cam Ly rừng trồng 10 tuổi với diện tích ô 1ha Mật độ ô tiêu chuẩn 1.650 cây/ha Trên ô tiêu chuẩn số 1, chặt toàn số chết bị bệnh tuyến trùng đa khỏi rừng (xem ảnh 7); đốt hết số chết để thiểu hủy toàn số sâu non tuyến trùng sống bị bệnh Ô tiêu chuẩn số không tác động Thu thập số liệu định kỳ số lợng chết vào tháng 10 hàng năm năm 1998 đến 2000, kết cho thấy: ô tiêu chuẩn số 1, tỷ lệ chết tuyến trung trung bình năm năm từ 1998-2000 1,82%, ô tiêu chuẩn số 2, tỷ lệ chết trung bình năm năm theo dõi có 3,31% Nh vây, việc chặt toàn chết đa khỏi rừng để thiêu huỷ có tác dụng tốt việc giảm tỷ lệ chết hàng năm 3.3.3 BÉy xÐn tãc M alternatus tr−ëng thµnh b»ng chÊt dẫn dụ hoá học Thí nghiệm đợc tiến hành vào ngày tháng đến 30 tháng năm 2001 địa điểm: Cam Ly, hồ Tuyền Lâm, Lang Bian, Klong Klanh thuộc tỉnh Lâm Đồng, địa ®iĨm 10 mÉu, víi lo¹i chÊt dÉn dơ cã nguồn gốc hoá học: Hodolon C1 Tiến sỹ Akiomi Yamane, Chuyên gia ngắn hạn tổ chức JICA cung cÊp vµ h−íng dÉn sư dơng ChÊt dÉn dơ đợc đựng hộp sắt, mở nắp đợc đặt hộp nhựa, đáy hộp đựng nớc có pha chút dầu hoả để giết côn trùng bay vào hộp nhụa rơi xuống nớc (xem ảnh 8) 12 ảnh 8: Thí nghiệm đặt bẫy xén tóc trởng thành Thí nghiệm đợc theo dõi định ngày lần thu thập mẫu ghi chép số loài côn trùng thu đợc loại chất dẫn dụ bẫy địa điểm Số lợng cá thể xén tóc loài Monochamus alternatus loài cánh cứng khác bình quân cho loại chất dẫn dụ/1 bẫy địa điểm đặt mẫu đợc ghi bảng Bảng 6: Số lợng cá thể xén tóc M alternatus loài cánh cứng khác bắt đợc bẫy TT ChÊt dÉn dô Hodolon ChÊt dÉn dô C1 XÐn tóc Loài khác Tổng Xén tóc Loài khác Tổng Cam Ly 3,2 10.2 13.4 5.4 5.4 TuyÒn L©m 5.2 11.2 16.4 3.8 3.8 Lang Bian 4.4 14.6 19.0 2.2 2.2 K’long K’lanh 5.6 15.8 21.4 1.2 6.0 7.2 Kết bảng rằng: Chất dẫn dụ Hodolon hiệu viƯc dÉn dơ xÐn tãc M alternatus vµ mét số loài cánh cứng khác so với chất dẫn dụ C1 (có thành phần nhựa thông) Các loài cánh cứng khác thu đợc nhiều từ bẫy cã chÊt dÉn dô Hodolon 3.3.4 BÉy xÐn tãc tr−ëng thành đến đẻ trứng khúc gỗ thông tơi Theo kinh nghiệm Tiến sỹ Akiomi Yamane, dùng thông tơi chặt hạ đặt rừng thông bị bệnh hấp dẫn đợc xén tóc M alternatus trởng thành đến đẻ trứng Thí nghiệm đà đợc tiến hành ô tiêu chuẩn diện tích ô 1,0ha Cam Ly, Đà Lạt Thí nghiệm đợc tiến hành nh sau: Ô tiêu chuẩn thứ nhất: không chặt bị bệnh, số lợng 20 Ô tiêu chuẩn thứ 2: chặt toàn bị bệnh có lợng nhựa cấp C (không có nhựa chảy qua lỗ đục), đặt ô tiêu chuẩn 20 bẫy gỗ tơi phủ phía cành để tránh làm khô đột ngột khúc gỗ bẫy (xem ảnh 9) Thời gian tiến hành thí nghiệm vào ngày 14 tháng năm 2002 Đánh giá số lợng lỗ đẻ trứng số lợng sâu non trung bình bẫy dài 2,5 m sau tháng thí nghiệm tính toán tỷ lệ bị chết bị bệnh ô tiêu chuẩn sau năm (tháng năm 2003) Mật độ ô tiêu chuẩn 1.650 Kết thí nghiệm đợc ghi bảng 13 ảnh 9: Bẫy xén tóc trởng thành đến đẻ trứng Bảng 7: Số lợng lỗ đẻ trứng, sâu non tỷ lệ bị bệnh ô tiêu chuẩn TT Chỉ tiêu Ô tiêu chuẩn Ô tiêu chuẩn (đối chứng) Số lợng lỗ đẻ trứng (cái /2,5 m) 17,5 Số lợng sâu non (con/2,5 m) 8,0 Số bị bệnh chết (cây/1 ô) 32 Ghi chú: - không điều tra Kết thí nghiệm bảng cho thấy bẫy tơi có tác dụng rõ rệt việc hạn chế lây lan dịch bệnh Xén tóc trởng thành đà bay đến đẻ trứng vào khúc gỗ tơi đặt rừng với tỷ lệ cao, 17,5 lỗ đẻ trứng khúc gỗ dài 2,5 m bình quân có 8,0 sâu non khúc gỗ Trên ô đối chứng, không chặt bị nhiễm bệnh, xén tóc đà đến đẻ trứng làm chết 32 sau năm thí nghiệm Một tác dụng việc dùng bẫy tơi sau xén tóc trởng thành vũ hoá từ khúc gỗ làm bẫy (khúc gỗ đợc chặt từ khoẻ), xén tóc vũ hoá tuyến trùng dính vào lỗ thở gốc cánh Vì vậy, đà làm khả lan truyền tuyến trùng xén tóc, hạn chế việc lây lan bệnh kết luận 4.1.1 Tỷ lệ bị bệnh đợc hiểu bao gồm đà chết cha chết đà có biểu héo, nhựa sống nhng lợng nhựa chảy bình quân ô tiêu chuẩn 44.7% 4.1.2 Tại Cam Ly, bình quân hàng năm chết 33 cây, tơng đơng 2.25% số có ô tiêu chuẩn 4.1.3 Nguyên nhân gây nên chết thông đợc xác định tuyến trùng Bursaphelenchus sp 4.1.4 Đà phát đợc loài xén tóc Monochamus alternatus thông bị bệnh tất địa phơng có thông bị bệnh Lâm Đồng Đây vectơ truyền tuyến trùng nguy hiểm đối tợng phòng trừ Nhật Bản, nớc Bắc Mü, Trung Quèc vµ Hµn Quèc Loµi xÐn tãc nµy năm hệ Giai đoạn từ tháng đến cuối tháng giai đoạn từ cuối tháng đến đầu tháng 10 4.1.5 Phòng trừ bệnh héo thông tuyến trùng đợc tiến hành biện pháp phòng trừ tổng hợp Khi rừng khép tán, tỉa tha rừng đến mật độ 1000 1250 cây/ha, Chặt đa toàn bị bệnh khỏi rừng, đốt để tiêu diệt sâu non tuyến trùng thân bị bệnh Sử dụng thuốc dẫn dụ hoá học Hodolon để bẫy xén tóc trởng thành thời kỳ vũ hoá từ tháng đến tháng từ 14 tháng đến tháng 10 hàng năm Dùng bẫy tơi để dẫn dụ xén tóc trởng thành đến để trứng có hiệu hạn chế lây lan dịch bệnh Tài liệu tham kh¶o chÝnh Kishi Yoichi 1995 The pine wood nematode and the Japanese pine sawyer Thomas Company Limited, Tokyo, Japan 302 p Kobayashi, F., Yamane, A., and Ikeda, T 1984 The Japanese sawyer beetle as the vector of pine wilt disease Annual Rev Entomology 1984 (29): 115-35 Mamiya Y 1983 Pathology of the pine wilt disease caused by Bursaphelenchus xylophilus Annual Rev Phytopathology 1983(21):201-20 Mamiya Y 1988 History of pine wilt disease in Japan Journal of nematology 1988, 20(2): 219-226 Yamane A 1981 The Japanese pine sawyer, Monochamus alternatus Hope (Coleoptera: cerambycidae): bionomics and control Review of Plant Protection Research 1981 (14): 1-25 15 ... pháp gây bệnh nhân tạo Nhân nuôi tuyến trùng gây bệnh nhân tạo đợc áp dụng phơng pháp Yoichi Kishi năm 1995 2.2.4 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ dựa nguyên tắc phòng trừ tổng hợp Kết nghiên cứu. .. 11 3.3 Biện pháp phòng trừ Việc phòng trừ bệnh héo thông tuyến trùng đợc tiến hành nguyên tắc phòng trừ tổng hợp, bao gồm biện pháp kỹ thuật lâm sinh, biện pháp vật lý giới (chặt đột bệnh, thiêu... giải pháp phòng trừ giảm thiểu tác hại bệnh, bảo vệ rừng thông ba tỉnh Lâm Đồng việc cần thiết cấp bách nhà quản lý nhà khoa học giai đoạn tơng lai phơng pháp nghiên cứu 2.1 Địa điểm nghiên cứu