1 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA LÊ THỊ NHUNG Tên đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LỤC BÌNH Ở HƢƠNG THỦY, THỪA THIÊN HUẾ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM Đà Nẵng- 2012 2 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA Tên đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LỤC BÌNH Ở HƢƠNG THỦY, THỪA THIÊN HUẾ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN SƢ PHẠM SVTH : LÊ THỊ NHUNG LỚP : 08SHH GVHD: ThS. GIANG THỊ KIM LIÊN Đà Nẵng- 2012 3 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HOÀ XÃ HỘi CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƢỜNG ĐHSP Độc lập - Tự do - Hạnh phúc KHOA HOÁ NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ và tên sinh viên: LÊ THỊ NHUNG Lớp: 08SHH 1. Tên đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LỤC BÌNH Ở HƢƠNG THỦY, THỪA THIÊN HUẾ 2. Nguyên liệu, dụng cụ và thiết bị: - Nguyên liệu: Cây lục bình đƣợc thu hái tại Hƣơng Thủy, Thừa Thiên Huế. - Dụng cụ, thiết bị: Tủ sấy, cân kỹ thuật, các dụng cụ thủy tinh, máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS hiệu AAnalyst 100, máy đo sắc ký lỏng – khối phổ LC- MS Xevo TQ hang Waters, Mỹ và thiết bị sắc ký khí- khối phổ (GC- MS) Aligent 7890A/5975C. 3. Nội dung nghiên cứu: - Xác định các thông số hóa lý của cây lục bình. - Chiết bằng phƣơng pháp ngâm chiết tĩnh với các dung môi n-hexan, etyl axetat và metanol. - Xác định thành phần dịch chiết trong n-hexan bằng phƣơng pháp sắc ký khí- khối phổ (GC-MS). Xác định thành phần dịch chiết trong etyl axetat và metanol bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng – khối phổ (LC-MS). - Thử nghiệm hoạt tính sinh học. 4. Giáo viên hƣớng dẫn: Th.S. GIANG THỊ KIM LIÊN 5. Ngày giao đề tài: 6. Ngày hoàn thành: Chủ nhiệm Khoa Giáo viên hƣớng dẫn (Ký và ghi rõ họ, tên) (Ký và ghi rõ họ, tên) Sinh viên đã hoàn thành và nộp báo cáo cho Khoa ngày 25 tháng 5 năm 2012 Kết quả điểm đánh giá: Ngày…tháng…năm 2012 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký và ghi rõ họ tên) 4 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô giáo hướng dẫn khoa học ThS.Giang Thị Kim Liên, người đã tận tình hướng dẫn tôi thực hiện luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô thuộc khoa Hóa-trường ĐHSP Đà Nẵng đã nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn, cùng với cán bộ phòng cấu trúc, Viện Hóa học, Viện Hóa học các hợp chất tự nhiên - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam. Xin được gửi lời cảm ơn đến những người thân, gia đình, bạn bè và đồng nghiệp đã giúp đỡ, động viên tôi trong thời gian học tập và thực hiện luận văn. Tác giả LÊ THỊ NHUNG 5 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN 4 DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT 7 DANH MỤC BẢNG, HÌNH 8 MỞ ĐẦU 10 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 13 1.1. Sơ lƣợc về đặc điểm thực vật và phân bố của họ lục bình 13 1.2. Tình hình nghiên cứu về cây lục bình 15 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1. Thu gom và xử lý nguyên liệu 17 2.2. Hóa chất, thiết bị và dụng cụ 17 2.2.1. Hóa chất 17 2.2.2. Thiết bị 17 2.3. Các phƣơng pháp nghiên cứu thực nghiệm 19 2.3.1. Các phƣơng pháp phân hủy mẫu phân tích 19 2.3.2. Phƣơng pháp ngâm chiết 20 2.3.3. Phƣơng pháp chƣng cất để loại dung môi 20 2.3.4. Phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 21 2.3.5. Phƣơng pháp sắc ký khí- khối phổ 22 2.3.6. Phƣơng pháp sắc ký lỏng- khối phổ 23 2.3.7. Phƣơng pháp thăm dò hoạt tính sinh học 24 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1. Xác định các thông số hóa lý 28 3.1.1. Độ ẩm 28 3.1.1.1. Thực nghiệm 28 3.1.1.2. Kết quả 28 3.1.2. Hàm lƣợng tro 29 3.1.2.1. Thực nghiệm 29 6 3.1.2.2. Kết quả 30 3.1.3. Xác định hàm lƣợng kim loại có trong mẫu cây lục bình bằng phƣơng pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 30 3.1.3.1. Thực nghiệm 30 3.1.3.2. Kết quả 31 3.2. Khảo sát thành phần hóa học của các dịch chiết 31 3.2.1. Quy trình khảo sát thành phần hóa học các dịch chiết 32 3.2.2. Hiệu suất chiết 34 3.2.3. Kết quả khảo sát thành phần hóa học DC1 35 3.2.4. Kết quả khảo sát thành phần hóa học DC2 41 3.2.5. Kết quả khảo sát thành phần hóa học DC3 45 3.3. Thăm dò hoạt tính sinh học 49 3.3.1. Hoạt tính vi sinh vật kiểm định 49 3.3.2. Hoạt tính chống oxi hóa 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 1. Kết luận 51 2. Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC 54 7 DANH MỤC NHỮNG VIẾT TẮT GC Sắc ký khí LC Sắc ký lỏng MS Khối phổ GC-MS Sắc ký khí-khối phổ liên hợp LC-MS Sắc ký lỏng – khối phổ liên hợp DC1 Dịch chiết lỏng của cây lục bình trong dung môi n-hexan C1 Cặn sau khi chiết kiệt với n-hexan DC2 Dịch chiết lỏng của cây lục bình trong etyl axetat C2 Cặn sau khi chiết kiệt với etyl axetat DC3 Dịch chiết lỏng của cây lục bình trong metanol C3 Cặn sau khi chiết kiệt với metanol EE Hợp chất hóa học trong dung môi etyl axetat EM Hợp chất hóa học trong dung môi metanol EtOH Etanol L.f Lactobacillus fermentum S.au Staphylococcus aureus S.ent Salmonella enterica E.coli Escherichia coli P.aeru Pseudomonas aeruginosa C.allbicans Candida albican 8 DANH MỤC BẢNG , HÌNH Hình 1.1.Cây lục bình (hoa, lá, thân) 14 Hình 2.1. Mẫu bột khô của cây lục bình 17 Hình 2.2. Thiết bị đo AAS: AAnalyst 100. 18 Hình 2.3. Thiết bị sắc ký khí khối phổ (GC-MS) Agilent 7890A/5975C 19 Hình 2.4. Sơ đồ thiết bị đo quang phổ hấp thụ nguyên tử 21 Bảng 3.1. Kết quả xác định độ ẩm của cây lục bình. 29 Bảng 3.2. Kết quả xác định hàm lƣợng tro. 30 Bảng 3.3. Kết quả xác định hàm lƣợng kim loại. 31 Hình 3.1. Sơ đồ nghiên cứu khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình 32 Hình 3.2. Dịch chiết của mẫu cây lục bình với n – hexanError! Bookmark not defined.33 Hình 3.3. Dịch chiết của mẫu lục bình với etyl axetat 33 Hình 3.4. Dịch chiết của mẫu cây lục bình với dung môi metanol.Error! Bookmark not defined.34 Hình 3.5. Sắc ký đồ của DC1 35 Bảng 3.4. Hiệu suất chiết 35 Bảng 3.5. Kết quả khảo sát thành phần hóa học của DC1. 35 Hình 3.6. Phổ khối của n – hexadecanoic axit 38 Hình 3.7. Phổ khối của phytol 38 Hình 3.8. Phổ khối của cholesterol Error! Bookmark not defined.39 Hình 3.9. Phổ khối của stigmasterol. 39 Hình 3.10. Phổ khối của gamma- sitosterol. 40 Hình 3.11. Phổ khối của 4,22- stigmastadiene-3-one. 40 Hình 3.12. Sắc ký đồ LC của DC2 . 42 Bảng 3.6. Kết quả khảo sát thành phần hoá học của DC2. 43 Hình 3.13. Phổ khối của (EE6). 44 Hình 3.14.Sắc ký đồ LC của DC3. 45 Bảng 3.7. Kết quả khảo sát thành phần của DC3 46 Hình 3.15. Phổ khối của (EM6) 47 Hình 3.16. Phổ khối của (EM7). 48 9 Bảng 3.8. Kết quả thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 49 Bảng 3.9. Kết quả thử hoạt tính chống oxi hóa. 50 10 MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề Từ nhiều thế kỷ nay, nền y học cổ truyền ở Việt Nam vẫn đƣợc duy trì, phát triển và ngày càng khẳng định đƣợc vai trò cũng nhƣ tiềm năng to lớn trong việc bảo vệ sức khỏe cho nhân dân. Những chế phẩm y học cổ truyền đƣợc coi nhƣ một kho tàng dƣợc liệu quý báu. Cùng với sự tiến bộ của khoa học, con ngƣời đã có thêm điều kiện tốt để nghiên cứu, tìm ra thêm những công dụng của cây cỏ và góp phần làm giàu thêm cho nền y học cổ truyền Việt Nam. Nƣớc ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới nên đƣợc thừa hƣởng nguồn thiên nhiên vô cùng phong phú và đa dạng sinh học với nhiều loài dƣợc liệu quý. Việc sử dụng các loại thuốc thảo dƣợc theo cách cổ truyền hay từ các hợp chất nguồn gốc tự nhiên có xu hƣớng ngày càng tăng đã chiếm một vị trí quan trọng trong nền y học Việt Nam. Vậy nên, những bài thuốc từ thảo dƣợc hiện nay là một chủ đề đang đƣợc các nhà khoa học Việt Nam nói riêng và thế giới nói chung tích cực quan tâm. Việc nghiên cứu thành phần hóa học từ những cây cỏ thiên nhiên có ý nghĩa khoa học và thực tiễn cao. Và việc nghiên cứu cây Lục bình cũng vậy. Lục bình (danh pháp khoa học: Eichhornia crassipes Solms) còn đƣợc gọi là bèo tây, bèo sen hay bèo Nhật Bản, là một loài thực vật thủy sinh, thân thảo, sống nổi theo dòng nƣớc, thuộc về chi Eichhornia của họ Họ Bèo tây (Pontederiaceae) [1, 5, 9, 10]. Lục bình có giá trị sử dụng lớn. Nó đƣợc sử dụng làm phân xanh bón ruộng, làm chất độn để ủ phân chuồng, làm thức ăn cho lợn, bò…Đọt non của lục bình đƣợc dùng làm thức ăn cho ngƣời. Lục bình còn là nguyên liệu sản xuất giấy, sản xuất hàng thủ công mỹ nghệ, làm giá thể của sản xuất nấm rơm [24, 25, 26]. Ngoài ra, ngƣời ta còn sử dụng nó vào việc chữa bệnh: lá và thân có vị ngọt cay, tính mát không độc, có tác dụng tiêu viêm giải độc lành da. Lá lục bình tƣơi đem giã với muối rồi đem đắp lên ung nhọt, khô thì thay miếng khác, nhiều lần sẽ làm giảm sƣng [4, 8, 19, 22]. [...]... trình khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình Mẫu bột khô của cây lục bình đƣợc ngâm chiết tĩnh lần lƣợt qua 3 dung môi n-hexan, etyl axetat và metanol Sau đó, đem các dịch chiết thu đƣợc đi đo GC-MS và LC-MS để khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình Các phần dịch chiết còn lại đƣợc đem cô quay khô dung môi, thu đƣợc các cặn chiết tƣơng ứng Quy trình khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình. .. Bắc Bộ thì tiềm năng của cây lục bình vẫn chƣa đƣợc ngƣời dân chú ý nhiều Những công trình nghiên cứu về cây lục bình vẫn còn rất ít, đặc biệt là việc nghiên cứu về thành phần hóa học của cây lục bình và hoạt tính sinh học của nó Vì vậy, tôi chọn đề tài “ Khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình ở Hƣơng Thủy, Thừa Thiên Huế làm đề tài khoá luận tốt nghiệp của mình, nhằm góp phần cung cấp thêm những... tin có ý nghĩa khoa học của cây lục bình để phục vụ cho việc nghiên cứu và ứng dụng nó vào thực tiễn 2 Đối tƣợng nghiên cứu Cây lục bình đƣợc thu gom ở huyện Hƣơng Thủy, tỉnh Thừa Thiên Huế 3 Mục đích nghiên cứu Đề tài này nhằm mục đích khảo sát thành phần hóa học có trong cây lục bình để cung cấp thêm một số thông tin khoa học, góp phần cho việc nghiên cứu và ứng dụng cây lục bình vào thực tiễn 4... cây lục bình Các công trình nghiên cứu về thành phần hoá học của cây lục bình trên thế giới rất ít và tại Việt Nam hầu nhƣ chƣa có Còn các nghiên cứu về ứng dụng của cây lục bình thì đã đƣợc công bố khá nhiều Lục bình có những công dụng nhƣ trồng làm cảnh Rễ bèo phơi khô làm vật liệu để chèn lót rất tốt, có sức đàn hồi cao, chịu đƣợc các hóa chất thông thƣờng và ít bị nát vụn Ở dạng tự nhiên, lục bình. .. độ ẩm của mỗi mẫu  Độ ẩm chung là độ ẩm trung bình của 4 mẫu 3.3.1.2 Kết quả Kết quả xác định độ ẩm trung bình của mẫu đƣợc trình bày ở bảng 3.1 29 Bảng 3.1 Kết quả xác định độ ẩm của cây lục bình STT m0 m1 m2 W(%) 1 33,27 5,00 34,45 76,40 2 30,86 4,98 31,95 78,11 3 32,35 5002 33,61 74,9 4 31,24 4,99 32,52 74,35 Độ ẩm trung bình 75,94 Nhận xét: Từ bảng 3.1 cho thấy độ ẩm trung bình của cây lục bình. .. trong metanol: DC3 Cặn không tan trong ethanol Đo LC-MS Kết quả Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu khảo sát thành phần hóa học của cây lục bình Cân 30 gam mẫu bột lục bình khô cho vào bình tam giác có nút Sau đó, cho thêm dung môi n-hexan vào ngập hết mẫu bột khô và ngâm chiết tĩnh ở nhiệt độ phòng Theo dõi sự thay đổi màu sắc của dịch chiết cho đến khi không đổi màu nữa thì lọc lấy dịch chiết có màu nâu đen và... quyết định của bộ y tế số 505/BYT – QĐ ngày 13 tháng 4 năm 1992 về một số tiêu chuẩn vệ sinh thực phẩm cho hàm lƣợng kim loại nặng tối đa cho phép trong rau quả sấy khô đối với Pb: 2mg/kg; Zn: 20mg/kg; Cu: 20mg/kg thì hàm lƣợng kim loại nặng trong cây lục bình mà ta khảo sát ở bảng trên nhỏ dƣới giới hạn cho phép, không gây ảnh hƣởng đến sức khỏe con ngƣời 3.2 Khảo sát thành phần hoá học của các dịch...11 Từ lâu, dù cây lục bình dễ sinh sôi, phát triển ở khắp Việt Nam, nhƣng vẫn bị coi là thứ cây hoang dại ít đƣợc khai thác, sử dụng có hiệu quả Nhiều nơi, còn coi lục bình nhƣ là một mối họa môi trƣờng vì lục bình gây tắc vƣớng giao thông đƣờng thủy, cản trở dòng chảy kênh rạch [20] Hiện tại, ở vùng sông nƣớc Nam Bộ, lục bình mới đƣợc ngƣời dân khai thác và sử dụng từ... m0: là khối lƣợng của cốc sứ (g) m1: là khối lƣợng của cốc sứ và mẫu cây lục bình trƣớc khi sấy (g) m3: là khối lƣợng của cốc sứ và mẫu cây lục bình sau khi tro hóa (g) 30 Hàm lƣợng tro trung bình là giá trị trung bình của hàm lƣợng tro tính cho 4 lần xác định 3.1.2.2 Kết quả Kết quả xác hàm lƣợng tro trung bình của mẫu đƣợc trình bày ở bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết quả xác định hàm lƣợng tro STT m0 m1 m2 m3... NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thu gom và xử lý nguyên liệu Cây lục bình đƣợc thu gom từ huyện Hƣơng Thủy, tỉnh Thừa Thiên Huế vào ngày 3 tháng 8 năm 2011 Mẫu thực vật sau khi thu gom, rửa sạch, để ráo nƣớc rồi đem cân Sau đó, đem mẫu khô đi xay nhỏ Hình 2.1 Mẫu bột khô của cây lục bình 2.2 Hóa chất, thiết bị và dụng cụ 2.2.1 Hóa chất  Dung môi n-hexan (C6H14)  Dung môi etyl axetat (CH3COOC2H5) . tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LỤC BÌNH Ở HƢƠNG THỦY, THỪA THIÊN HUẾ 2. Nguyên liệu, dụng cụ và thiết bị: - Nguyên liệu: Cây lục bình đƣợc thu hái tại Hƣơng Thủy, Thừa Thiên Huế. . về cây lục bình vẫn còn rất ít, đặc biệt là việc nghiên cứu về thành phần hóa học của cây lục bình và hoạt tính sinh học của nó. Vì vậy, tôi chọn đề tài “ Khảo sát thành phần hóa học của cây. ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA LÊ THỊ NHUNG Tên đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LỤC BÌNH Ở HƢƠNG THỦY, THỪA THIÊN HUẾ KHÓA LUẬN