BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH -o0o - ĐOÀN THÀNH LUÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA VÀ ỨC CHẾ ENZYM α-GLUCOSIDASE TỪ LÁ TRÀ HOA VÀNG (CAMELLIA DORMOYANA (PIERRE) SEALY., THEACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH -o0o - ĐOÀN THÀNH LUÂN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA VÀ ỨC CHẾ ENZYM α-GLUCOSIDASE TỪ LÁ TRÀ HOA VÀNG (CAMELLIA DORMOYANA (PIERRE) SEALY., THEACEAE) CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN THÀNH TRIẾT TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2022 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Đồn Thành Ln iii TĨM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC - KHÓA 2020 - 2022 Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxy hóa ức chế enzym α-glucosidase từ Trà hoa vàng (Camellia dormoyana (Pierre) Sealy., Theaceae) Học viên thực hiện: Đoàn Thành Luân Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thành Triết Đặt vấn đề Việt Nam quốc gia có đa dạng phong phú lồi trà, có trà hoa vàng (Yellow camellia), nhiều loài trà xác định lồi đặc hữu Tuy nhiên cịn nghiên cứu trà hoa vàng Vì đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxy hóa ức chế enzym α-glucosidase từ Trà hoa vàng (Camellia dormoyana (Pierre) Sealy., Theaceae)” thực nhằm cung cấp thêm thông tin thành phần hóa học tác dụng sinh học Từ làm tiền đề cho nghiên cứu nguồn dược liệu tiềm Đối tượng phương pháp nghiên cứu Lá loài Camellia sp thu hái Vườn Quốc Gia Nam Cát Tiên 03/2021 Nghiên cứu thực vật học nhằm định danh loài, nghiên cứu hóa học, chiết xuất phân lập chất thực phương pháp thường quy Đánh giá hoạt tính mơ hình DPPH ức chế enzym α-glucosidase Cấu trúc chất xác định phổ MS NMR Kết Đã định danh đối tượng nghiên cứu loài Camellia dormoyana Từ kg bột C dormoyana phương pháp ngấm kiệt với cồn 96 % lắc phân bố lỏng-lỏng thu phân đoạn n-hex (107 g), CHCl3 (37 g), EtOAc (45 g), n-BuOH (60 g) H2O (296 g) Từ phân đoạn EtOAc thu hợp chất: C1 (9,7 mg; acid 3’-O-methyl-3,4methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid), C2 (17,2 mg; kaempferol), C3 (20,8 mg; kaempferol-7-O-α-L-rhamnose), C4 (17,9 mg; acid 3,3’,4-trimethoxyl-ellagic 4’-O-β-Dglucopyranosid), C5 (114,6 mg; acid gallic), C6 (8,7 mg; epicatechin), C7 (107,4 mg; kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-L-rhamnopyranosid), C8 (3,5 mg; acid-3’methoxyellagic-4-(6’’-galloyl) glucopyranosid) Bằng cơng cụ tìm kiếm Scifinder kết luận C4 lần phân lập chi Camellia, C8 tạm thời kiến nghị cấu trúc cịn thiếu liệu phổ NMR Kết thử nghiệm chống oxy hóa mơ hình DPPH ức chế enzym α-glucosidase cho thấy C2, C3 C6 thể hoạt tính mơ hình thử nghiệm, C1 thể hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase, C5 thể khả thu dọn gốc tự DPPH mạnh Hợp chất C4 C7 thể hoạt tính yếu mơ hình thử nghiệm Kết luận Đã công bố liệu khoa học thực vật, hóa học tác dụng sinh học loài C dormoyana tạo tiền đề cho nghiên cứu nhằm nâng cao giá trị loài, ứng dụng tạo sản phẩm chăm sóc sức khỏe tương lai iv ABSTRACT Thesis of Master of Pharmacy – Course: 2020 – 2022 BIOACTIVITY-GUIDED ISOLATION OF ANTIOXIDANT AND αGLUCOSIDASE INHIBITOR ACTIVITIES FROM LEAVE OF YELLOW CAMELLIA (CAMELLIA DORMOYANA (PIERRE) SEALY., THEACEAE) Student: Doan Thanh Luan Instructor: Dr Nguyen Thanh Triet Introduction Vietnam has a diversity and abundance of tea species including yellow camellia, many species of these are identified as endemic species of the country However, there is still little studies on yellow camellia Therefore, the study on "Bioactivity-guided isolation of antioxidant and α-glucosidase inhibitor activities from leave of Yellow camellia (Camellia dormoyana (Pierre) Sealy., Theaceae)" was carried out with the aim to provide the scientific evidences about phytochemicals and bioactivities for further studies on potential of this medicinal herb Material and methods The leaves of Camellia sp was collected in Nam Cat Tien National Park, Dong Nai province Botanical studies for species identification, chemical studies, extraction and isolation of components are done by routine methods Evaluation of DPPH activity and α-glucosidase enzyme inhibition Structures were determined by MS and NMR spectroscopy techniques Results The research object was identified as Camellia dormoyana Morphological characteristics, microscopic examination and leaf powder were determined From kg of C dormoyana leaf powder, fractions of n-hex (107 g), CHCl3 (37 g), EtOAc (45 g), n-BuOH (60 g) and H2O (196 g) were obtained by soaking with ethanol 96 % and liquid-liquid method C1 (9,7 mg; acid 3’-O-methyl-3,4-methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid), C2 (17,2 mg; kaempferol), C3 (20,8 mg; kaempferol-7-O-α-L-rhamnose), C4 (17,9 mg; acid 3,3’,4trimethoxyl-ellagic4’-O-β-D-glucopyranosid), C5 (114,6 mg; acid gallic), C6 (8,7 mg; epicatechin), C7 (107,4 mg; kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-Lrhamnopyranosid), C8 (3,5 mg; acid-3’-methoxy-ellagic-4-(6’’-galloyl) glucopyranosid) were isolated from EtOAc fraction C4 was isolated for the first time in the genus Camellia by the Scifinder, C8 temporarily suggested the structure because of the lack of data on the NMR spectrum The results of the DPPH free radical scavenging and the α-glucosidase enzyme inhibition test showed that C2, C3 and C6 showed activity on both tests, C1 only inhibited αglucosidase enzyme C5 showed the strongest DPPH free radical scavenging capacity Compounds C4 and C7 showed very weak activity in both assays Conclusion The study provided information on the botanical, chemistry and bioactivities from the leaves of C dormoyana These results suggest further studies to improve the species value and create health care products in the future v MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT x ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.2 Gốc tự số mơ hình thử tác dụng chống oxy hóa 28 1.3 Tổng quan bệnh Đái tháo đường 30 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 40 3.1 Khảo sát thực vật học loài Camellia sp 40 3.2 Kiểm tra độ tinh khiết 48 3.3 Khảo sát sơ thành phần hóa học lồi C dormoyana 49 3.4 Định lượng polyphenol toàn phần 50 3.5 Nghiên cứu hóa học 51 3.6 Thử nghiệm tác dụng sinh học số hợp chất phân lập 87 3.7 Bàn luận 89 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 97 4.1 Kết luận 97 4.2 Kiến nghị 99 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN 100 TÀI LIỆU THAM KHẢO 101 PHỤ LỤC .PL.1 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Một số loài Trà hoa vàng khu vực Lâm Đồng, Đồng Nai 13 Hình 1.2 Một số cấu tử tinh dầu Trà hoa vàng 20 Hình 1.3 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ Trà hoa vàng 16 Hình 1.4 Một số triterpen dẫn chất glycosid phân lập Trà hoa vàng 17 Hình 1.5 Một số saponin chi Panax phân lập từ Trà hoa vàng 18 Bố trí thí nghiệm thử DPPH cao cồn cao phân đoạn đĩa 96 giếng36 Bố trí thí nghiệm ức chế enzym α-glucosidase đĩa 96 giếng 37 Quy trình chiết xuất phân lập 38 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái thực vật lồi Camellia sp thu hái Đồng Nai 41 Hình 3.2 Hình thái hoa ngồi tự nhiên 42 Hình 3.3 Một số cấu tử bột Camellia dormoyana 48 Hình 3.4 Đặc điểm cấu tạo biểu bì C dormoyana 43 Hình 3.5 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo C dormoyana 44 Hình 3.6 Đặc điểm vi phẫu C dormoyana 45 Hình 3.7 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo cuống C dormoyana 46 Hình 3.8 Đặc điểm vi phẫu cuống C dormoyana 46 Hình 3.9 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo thân C dormoyana 47 Hình 3.10 Đặc điểm vi phẫu thân C dormoyana 48 Hình 3.11 Phương trình đường chuẩn acid gallic 50 Hình 3.12 Kết phân tách phân đoạn từ cao cồn C dormoyana 51 Hình 3.13 Sắc ký phân đoạn từ cao cồn C dormoyana 52 Hình 3.14 So sánh hoạt tính cao chiết mơ hình 55 Hình 3.15 Kết sắc ký phân đoạn EtOAc 56 Hình 3.16 Kết phân tách phân đoạn E.3 sắc ký cột 57 Hình 3.17 Kết phân tách phân đoạn E.4 sắc ký cột 58 Hình 3.18 Kết phân tách phân đoạn E.5 sắc ký cột 59 vii Hình 3.19 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.3 61 Hình 3.20 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.4 62 Hình 3.21 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.5 63 Hình 3.22 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.6 64 Hình 3.23 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc 64 Hình 3.24 Kết phân lập chất từ phân đoạn EtOAc 65 Hình 3.25 Cấu trúc số tương tác phổ MHBC hợp chất C1 68 Hình 3.26 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C2 69 Hình 3.27 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C3 72 Hình 3.28 Cấu trúc số tương tác phổ MHBC hợp chất C4 75 Hình 3.29 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C5 76 Hình 3.30 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C6 78 Hình 3.31 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C7 81 Hình 3.32 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC mảnh 83 Hình 3.33 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC mảnh 85 Hình 3.34 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC hợp chất C8 85 Hình 3.35 Hình thái lồi thu hái sưu tầm từ Lâm Đồng Bình Phước 90 Hình 3.36 Cơ chế cho hydro liên quan khả chống oxy hóa kaempferol 94 Hình 3.37 Liên quan cấu trúc tác dụng ức chế enzym α-glucosidase 96 viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm số loài Trà hoa vàng phân bố Việt Nam Bảng 1.2 Một số Trà hoa vàng phân bố khu vực Lâm Đồng Đồng Nai 12 Bảng 1.3 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ Trà hoa vàng 15 Bảng 1.4 Một số chế phẩm từ C chrysantha 27 Bảng 1.5 Ưu điểm nhược điểm số thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa 30 Bố trí mẫu thử nghiệm DPPH 35 Bố trí mẫu thử nghiệm ức chế enzym α-glucosidase 37 Bảng 3.1 Kết kiểm tinh khiết C dormoyana 49 Bảng 3.2 Kết sơ thành phần hóa học C dormoyana 49 Bảng 3.3 Mối tương quan nồng độ acid gallic độ hấp thu 50 Bảng 3.4 Hàm lượng polyphenol toàn phần C dormoyana 50 Bảng 3.5 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa phương pháp DPPH 53 Bảng 3.6 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase 53 Bảng 3.7 Kết sắc ký cột tải phân đoạn EtOAc 56 Bảng 3.8 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.3 57 Bảng 3.9 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.4 58 Bảng 3.10 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.5 59 Bảng 3.11 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C1 65 Bảng 3.12 Kết so sánh liệu phổ NMR C1 acid 3’-methoxy-3,4methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid 67 Bảng 3.13 Kết so sánh liệu phổ NMR C2 kaempferol 69 Bảng 3.14 Kết so sánh liệu phổ 13C-NMR C3 C2 70 Bảng 3.15 Kết so sánh liệu phổ NMR C3 kaempferol-7-O-α-Lrhamnose 71 Bảng 3.16 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C4 72 Bảng 3.17 Kết so sánh liệu phổ NMR C4 acid 3,3’,4trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid 74 ix Bảng 3.18 Kết so sánh liệu phổ NMR C5 acid gallic 76 Bảng 3.19 Kết so sánh liệu phổ NMR C6 epicatechin 77 Bảng 3.20 Dữ liệu phổ NMR C7 78 Bảng 3.21 Kết so sánh liệu phổ NMR C7 kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-L- rhamnopyranosid 80 Bảng 3.22 Dữ liệu phổ NMR C8 81 Bảng 3.23 Kết so sánh liệu phổ NMR mảnh stachyanthusid A aglycon 84 Bảng 3.24 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C8 86 Bảng 3.25 Kết thử nghiệm hoạt tính thu dọn gốc tự DPPH chất phân lập 87 Bảng 3.26 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập 88 Bảng 3.27 Giá trịnh IC50 chất phân lập mơ hình thử nghiệm 88 Bảng 3.28 Hoạt tính sinh học chất phân lập 98 x DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh ABTS 2,2’- azino-bis(3-ethylbenzthiazolin)-6-sulfonic acid AGEs Advanced glycation end products ALT Alanin Aminotransferase AST Aspartat transaminase COSY Colleration Spectroscopy DĐVN Dược điển Việt Nam DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Tiếng Việt Sản phẩm glycat hóa bền vững Phổ tương quan 1H – 1H Transfer DMSO Dimethyl sulfoxid DNA Deoxyribonucleic acid DPP IV Enzym dipeptidyl peptidase IV Downfield DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl FRAP Ferric reducing ability of plasma HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HPLC High Performance Liquid Chromatography HSQC Heteronuclear Single Bond Correlation IC50 Half - maximal inhibitory concentration MDA Malondialdehyd MIC Minimum inhibitory concentrations MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- Giảm chắn Nồng độ ức chế tối đa nửa Nồng độ ức chế tối thiểu diphenyltetrazolium bromid TMS Tetramethylsilan UV Ultra - violet Phổ tử ngoại xi LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực hiện, đề tài nhận nhiều giúp đỡ từ TS Nguyễn Thành Triết, người đồng hành dẫn cho em Thầy theo dõi suốt trình em thực đề tài, cho em nhiều gợi ý giúp em giải vấn đề phát sinh, quan tâm, hỏi han động viên khích lệ, tạo cho em nhiều động lực để em hồn thành tốt đề tài nhận, em cảm ơn Thầy tất yêu mến quý trọng Em gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy PGS TS Trần Hùng, cô PGS TS Huỳnh Ngọc Thụy, thầy TS Võ Văn Lẹo, cô PGS TS Trần Thị Vân Anh, cô TS Lê Thị Hồng Vân, thầy TS Mã Chí Thành mơn Dược liệu – Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh đồng hành giúp đỡ cho em, truyền đạt cho em nhiều kiến thức, kinh nghiệm thực tiễn, hỗ trợ trang thiết bị để em thực đề tài Thầy Cô động viên ủng hộ tinh thần, giúp em thêm vững bước đường chọn Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy ThS Trần Duy Hiền, anh Trần Văn Chện, anh Trần Ngọc Tín, anh Nguyễn Văn Thủy hỗ trợ em lúc khó khăn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tập thể quý thầy cô Bộ môn dược liệu trường Đại học Nguyễn Tất Thành hỗ trợ em thực đề tài Cảm ơn bạn Em bên cạnh cổ vũ động viên, tạo động lực để hồn thành tốt đề tài Con cảm ơn ba mẹ gia đình ln chỗ dựa vững chắc, ln ủng hộ dõi theo bước trưởng thành Xin chân thành cảm ơn! ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Camellia chi lớn họ Trà (Theaceae) với khoảng 119 – 300 loài Nhiều loài thuộc chi Camellia có hoa đẹp, nhiều màu sắc trắng, đỏ, hồng, vàng, … nên đa số loài chi dùng làm cảnh, số loài dùng để lấy trà lấy dầu (C sinensis, C oleifera)1 Các loài chi Camellia sử dụng từ khoảng 5000 năm trước (ở Trung Quốc), lồi Trà có hoa màu vàng sử dụng cách khoảng 400 năm loại dược phẩm có tác dụng phịng chữa bệnh1 Các nghiên cứu lá, hoa hạt lồi Trà hoa vàng có tác dụng hạ huyết áp, tim mạch, giảm đường huyết, hạ cholesterol, hạ mỡ máu, chống u bướu, tăng cường hệ miễn dịch2,3,4,5 Nhờ nhiều tác dụng quý mà Trà hoa vàng bán với giá cao Trung Quốc có nghiên cứu, sử dụng Trà hoa vàng chế biến thành nhiều loại thực phẩm chức sản phẩm mang lại giá trị kinh tế cao2,3 Ở Việt Nam có 52 lồi Trà hoa vàng (2019)6 tìm thấy khắp từ Bắc vào Nam7 Nhiều loài tìm thấy xác định đặc hữu năm gần C ngheanensis8 C bidoupensis (năm 2020)9, C proensis (năm 2021)10, C quynhii11 C thuanana6 (năm 2022) Các lồi Trà hoa vàng có màu vàng sặc sỡ, kích thước trung bình đến to, hoa đẹp, nhiều loài nở hoa vào dịp Tết âm lịch nên người chơi cảnh sưu tầm Trà hoa vàng dã sinh trồng làm cảnh sân vườn12 Hiện chúng quan tâm đến giá trị cảnh quan mà giá trị sinh học, dược học chưa quan tâm khai thác, dù đa dạng loài số lượng đặc điểm phân bố, đặc tính sinh trưởng, nhiều loài Trà hoa vàng nằm sách đỏ bị đe dọa số lượng tình trạng khai thác bừa bãi sử dụng vào mục đích khác nhau, đặc biệt q trình phát nương làm rẫy tàn phá, thay đổi trạng thái rừng, dẫn đến lồi cịn phân bố rải rác với số lượng ít3,12 Hiện hoạt động bảo tồn phát triển Trà hoa vàng phương pháp lai ghép, nhân giống Việt Nam quan tâm, số lượng Trà hoa vàng dần tăng lên, điều kiện thuận lợi để nghiên cứu bổ sung thêm thơng tin thành phần hóa học tác dụng loài dược liệu quý này12 Vì vậy, đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hướng tác dụng chống oxy hóa ức chế enzym α-glucosidase từ Trà hoa vàng (Camellia dormoyana (Pierre) Sealy., Theaceae)” đề nhằm thực nội dung sau: - Mơ tả hình thái so sánh với tài liệu có, nhằm xác định xác tên khoa học lồi Trà hoa vàng thu hái Vườn Quốc Gia Nam Cát Tiên - Chiết xuất phân lập chất theo định hướng tác dụng chống oxy hóa kháng α-glucosidase - Xác định cấu trúc chất phân lập - Thử nghiệm để đánh giá tác dụng chất phân lập với tác dụng mơ hình thử nghiệm cao chiết Từ cung cấp thêm thơng tin lồi tiền đề cho nghiên cứu, kiểm nghiệm dược lý sau để ứng dụng vào điều trị, nâng cao giá trị dược liệu Trà hoa vàng CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Thực vật học 1.1.1.1 Họ Trà (Theaceae) Cây thân gỗ bụi, thường xanh, rụng lá, thường lưỡng tính, đơn tính (chi Eurya) dị tính (chi Ternstroemia) Lá đơn, mọc so le, thường có cuống, khơng có kèm, gân phụ hình lơng chim, phiến dày, cứng, mép thường có cưa Hoa mọc nách đầu cành, mọc đơn, mọc thành cụm chùm - 10 hoa nhiều hơn, có khơng có cuống Cánh hoa màu trắng, đỏ vàng, mẫu 5, nhiều hơn, thường hoa Lá bắc thường - lá, nhiều hơn, không rụng rụng sớm, không phân biệt với đài Lá đài thường - 6, nhiều hơn, không rụng Bộ nhị gồm từ - nhị rời dính đáy với nhị bên ngồi thường dính vào cánh hoa, bao phấn đính gốc đính lưng, nứt dọc theo chiều ngang Bộ nhụy gồm noãn giống khác hợp thành bầu Quả nang mọng, chín tách dọc khơng, mang đến nhiều hạt Hạt hình cầu, hình bán nguyệt, hình nêm, hình trứng hình thận, vỏ hạt cứng, sần sùi đơi có phần thịt bên ngồi mọng đỏ (chi Anneslea Ternstroemia), có khơng có nội nhũ, phơi lớn nhỏ, mầm dày mỏng13,14 Họ Theaceae có khoảng 19 chi 600 loài phân bố nhiệt đới cận nhiệt đới Châu Phi, vùng nhiệt đới Châu Mỹ, Đông Nam Mỹ, Đơng Nam Á đảo Thái Bình Dương Trong có 12 chi (2 chi đặc hữu) 274 loài (204 loài đặc hữu) phân bố Trung Quốc14 Sự đa dạng loài họ Theaceae lớn Trung Quốc vùng lân cận khu vực Đơng Nam Á14 Ở Việt Nam có khoảng 11 chi với 100 loài13 1.1.1.2 Chi Camellia Là chi lớn họ Theaceae Cây bụi gỗ nhỏ, thân gỗ lớn, chủ yếu thường xanh Lá nhiều, có cuống, không cuống, phiến mỏng, mép cưa, nguyên Hoa mọc nách nhánh phụ, đơn độc thành chùm hoa, có cuống cuống ngắn Hoa đều, khoảng - 12 cánh màu trắng, đỏ vàng Lá bắc từ - 10 xếp xoắn ốc, tồn rụng sớm, phân biệt không phân biệt với đài Nhị nhiều, gồm - nhị thường dính đáy dính vào cánh hoa, nhị phía rời, bao phấn đính lưng, có túi bào tử đực, nứt dọc nứt theo chiều ngang Bầu trên, - ơ, đính nỗn trung trụ Quả nang hình cầu hình trứng, - ơ, đơi tiêu giảm cịn ô, vỏ chia thành - mảnh, mở từ đỉnh, trụ có khơng Hạt hình cầu, hình bán nguyệt đa giác, vỏ hạt sần sùi, rốn hạt lõm, thịt nhiều với hàm lượng dầu cao, khơng có nội nhũ15 Chi Camellia có khoảng từ 120 đến 300 loài16, phân bố Vương quốc Bhutan, Campuchia, Đông Bắc Ấn Độ, Indonesia, Nhật Bản, Hàn Quốc, Lào, Malaysia, Myanmar, Nepal, Philippines, Thái Lan, Việt Nam Trung Quốc, riêng Trung Quốc có khoảng 97 lồi với 76 lồi đặc hữu14 Ở Việt Nam có 52 lồi Trà hoa vàng (2019)6 tìm thấy khắp từ Bắc vào Nam7 Nhiều lồi tìm thấy xác định đặc hữu năm gần C ngheanensis8 C bidoupensis (năm 2020)9, C proensis (năm 2021)10, C quynhii11 C thuanana6 (năm 2022) Bảng 1.1 Đặc điểm số loài Trà hoa vàng phân bố Việt Nam STT Tên loài Đặc điểm thực vật sơ Cây thường xanh nhỏ đến trung bình, cao – m, vỏ màu nâu xám, cành non có lơng tơ Lá – 12 x 3,5 – 5,5 cm, dày, hình elip đến rộng, đỉnh tù đến nhọn, mép có cưa đều, mặt màu xanh Camellia đậm, mặt màu xanh nhạt, nhẵn bóng, cuống cong, bidoupensis mảnh, màu xanh tím nhạt, dài 0,8 – 1,2 cm Hoa đơn gồm – cánh Truong, Luong and màu vàng nhạt, sọc tím chân, vịng ngồi gồm – cánh dính Tran gốc, vịng cánh xếp xoắn, hoa mọc thành cụm nách lá, đường kính 2-2,5 cm, cuống dài 0,4 – 0,5 cm, nhẵn, màu xanh lục nhạt vàng Lá bắc - 4, hình vảy, nhẵn, rụng sớm Lá đài 5, màu xanh lục nhạt, nhẵn Chỉ nhị dài 0,15 – 0,3 cm, dính gốc9 Camellia Cây bụi hay gỗ nhỏ cao tới m, cành non màu xanh nhạt, sau chuyển bugiamapensis qua xám đến nâu, nhẵn, cuống hình lưỡi liềm, ngắn dày, dài – Orel, Curry, Luu cm Lá 18 – 29,5 x 12 – 16 cm hình elip đến hình bầu dục, and Q.D.Nguyen khơng đều, đỉnh nhọn, mặt màu xanh đậm, nhẵn, mặt màu (Trà Bù Gia Mập) xanh lục, vàng Hoa đơn gồm – 11 cánh xếp ngẫu nhiên, đôi 5 mọc thành cụm từ – bông, đầu cành, cuống hoa ngắn, nhỏ dài 0,3 – 0,5 cm Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 50 – 100, nhị dài – cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu - ô, nhẵn17 Cây gỗ nhỏ cao tới m, cành non màu xanh nhạt, sau nâu dần, nhẵn Lá 24 – 32,5 x 10 – 13 cm, hình elip tới trái xoan, xoan ngược, đỉnh nhọn, mặt nhẵn, mặt lơng thưa thớt, cuống hình liềm Camellia capitata dài – 1,8 cm, lông trắng mịn Hoa mọc thành cụm khoảng – 14 Orel, Curry and hoa, hoa cánh xếp thành vòng, vịng cánh, mọc đầu Luu cành, khơng có cuống hoa Lá bắc – 10, có lơng mịn, đài 2, vàng nhạt đến xanh, mép có lông Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 100, nhị dài – 2,5 cm màu vàng nhạt đến màu kem, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy – 2,6 cm, vàng nhạt, nhẵn16,17 Cây bụi gỗ nhỏ cao – m, cành mảnh, nhẵn Lá 11 – 14 x Camellia – cm, hình bầu dục, mặt xanh đậm, mặt xanh lục nhạt, chrysantha (Hu) nhẵn, cuống dài 0,6 – 0,7 cm Hoa đơn gồm – 10 cánh hoa Tuyama mọc đầu cành hay nách lá, cuống hoa 0,7 – cm Lá bắc – 6, rời Sym Camellia Bộ nhị: Nhiều nhị, xếp – vịng, nhẵn Bộ nhụy: Bầu – ơ, nitidissima Chi18 nhẵn19,20,21 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành nhẵn Lá 17,3 – 25,1 x 9,1 – 13 cm, Camellia hình bầu dục, đỉnh tù, cuống dài 1,7 - 2,5 cm, nhẵn Hoa mọc đầu crassiphylla Ninh cành nách lá, cuống hoa dài 0,3 – 0,5 cm Lá bắc – 3, đài 5, and Hakoda có lơng Bộ nhị: Nhiều nhị, dài 1,6 – 1,7 cm, nhẵn Bộ nhụy: (Trà hoa vàng dày) bầu ơ, nhẵn, vịi nhụy 3, rời, dài cm20,22 Cây nhỏ, cao 2,5 m, cành thưa, màu nâu đỏ non, già màu xanh đậm, nhẵn Lá 10 – 12 x – cm, hình nón, elip đến bầu dục, đơi thn nhọn khơng đối xứng, đỉnh nhọn tù, mặt xanh đậm, nhẵn, mặt màu xanh lục vàng, cuống cong, đôi Camellia curryana xoắn nhẹ, dài cm Hoa chủ yếu mọc đơn đầu cành nách Orel and Luu lá, gồm – cánh hoa xếp thành vịng xoắn, vịng ngồi cánh, vòng - cánh, cuống hoa dài 0,6 – 0,7 cm, có lơng sau rụng dần Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 250 – 300, xếp thành vòng, nhị vịng ngồi dài 0,4 – 0,5 cm, vịng tới 1,4 cm Bộ nhụy: Bầu – ô, có lơng mịn17 Cây gỗ nhỏ, cao khoảng – m Lá 40 – 45 x – 11 cm, hình thn Camellia dalatensis dài, mặt nhẵn, mặt có lơng, cuống dài 0,7 – 1,2 cm Hoa Luong, Tran and – 3, hoa gồm – 10 cánh, mọc nách lá, cuống hoa dài 2,0 – 2,5 Hakoda cm Lá đài 5, màu vàng Bộ nhị: Nhiều nhị, vịng nhị ngồi hợp với (Trà hoa vàng Đà gốc, nhị dài 1,4 – 1,7cm Bộ nhụy: Bầu – ơ, có lơng, Lạt) vịi nhụy – 5, có lơng23 Camellia Cây gỗ nhỏ, cao – m, cành nhẵn Lá 16 – 24,5 x 5,5 – 9,5 cm, dilinhensis Ninh hình elip elip thn dài, nhẵn, đỉnh nhọn, cuống – 1,9 cm, and V.D.Luong nhẵn Hoa đơn mọc thành cụm – hoa gồm – cánh, nhẵn, (Trà hoa vàng Di Linh) cuống hoa 0,5 – 0,7 cm, nhẵn Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 350 nhị xếp thành vòng, nhị dài 0,5 – 0,9 cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 0,5 cm, lông mịn24,25 Cây bụi nhỏ hay vừa cao 2,5 m, cành thưa, xanh non nâu trưởng thành Lá 44 x 14 cm, hình trứng ngược hẹp với gân giữ nhô cao mặt lá, đỉnh nhọn, mặt màu xanh đậm, nhẵn, mặt xanh nhạt, cuống cong, lõm dẹt, dài cm Hoa đơn, gồm cánh xếp thành vòng, vịng ngồi cánh, cánh, hoa mọc nách lá, cuống hoa dài 2,5 – cm, xanh đậm, nhẵn Lá đài 3, có lơng Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 300 – 500, nhị dài 1,5 – cm, màu vàng Bộ nhụy: Bầu – ô, vòi nhụy dài 1,5 cm26 Cây cao – 10 m, cành non nhẵn Lá 11 – 18 x 5,5 – cm, hình bầu dục, thn hình trứng, đầu nhọn, ngắn Hoa khoảng 12 cánh, đường kính 5,5 cm Lá đài – Nhị nhẵn, vòi nhụy – hợp nhất, nhụy bầu – Quả rảnh lõm sâu, kích thước 2,5 x 3,5 cm Hạt kích thước 1,0 x 0,7 – 0,8 cm, gồm – hạt ô (Sealy 1958)11 Cây gỗ cao – 10 m, cành non có lơng màu gỉ sắt, sau bóng ánh bạc Lá – 13 x – 5,5 cm, thuôn dài, hay hình trứng ngược, đầu nhọn, cuống dài 0,3 – 0,7 cm Hoa mọc – đầu cành gồm 15 – 19 cánh, lông mềm thưa mặt, cuống 0,2 – 0,3 cm Tất bắc, đài, cánh tràng có hình muỗng, bắc 2, đài Bộ nhị: Nhiều nhị, đính gốc cánh hoa, nhị dài 1,5 – cm Bộ nhụy: Bầu – ô, nhẵn, vòi nhụy dài cm27,19 Cây bụi cao m, cành nhẵn Lá 11 – 14 x 4,5–6,4 cm, hình elip, đỉnh nhọn, cứng, ngắn, phiến cuống nhẵn Hoa đơn mọc đầu cành gồm – cánh với mặt ngồi có nếp gấp, cuống hoa 0,5 cm, bắc 8, nhẵn, đài 5, mặt ngồi có nếp gấp Nhị khơng lơng Bộ nhụy: Bầu ô, nhẵn31 Cây bụi gỗ nhỏ cao – m, cành nhẵn Lá 10,5 – 15 x 3,8 – 5,8 cm, hình bầu dục, elip thn dài bầu dục thuôn dài, đỉnh nhọn, mặt nhẵn, mặt có lơng phát triển dọc theo gân giữa, cuống có lơng Hoa đơn mọc đầu cành gồm 10 – 13 cánh với mặt bên ngồi có nếp gấp, cuống hoa 0,6 – 0,9 cm, nhẵn Nhị có lơng Bộ nhụy: Bầu ơ, có lơng29 Camellia dongnaiensis Orel (Trà hoa vàng Đồng Nai) 10 Camellia dormoyana (Pierre) Sealy (Trà hoa vàng Đormoy) 11 Camellia euphlebia M.Sealy (Trà hoa vàng Sơn Động) 12 Camellia flava (Pit.) Sealy Sym Camellia cucphuongensis Ninh and Rosmann (Trà hoa vàng Cúc Phương)28 13 Cây bụi gỗ, cành nhỏ, nhẵn, màu nâu nhạt sau chuyển màu xám nhạt Lá – 11 x 3,5 – 3,7 cm, hình bầu dục nhọn hình giáo, đỉnh nhọn cong dạng lưỡi liềm, mặt xanh đậm, Camellia fleuryi (A mặt xanh nhạt, cuống dài 0,7 – cm, nhẵn Hoa gần Chev.) Sealy không cuống, mọc đầu cành nách lá, hoa mẫu 5, có lông tơ (Trà sốp) mượt mặt Lá bắc – 9, mặt ngồi nhẵn, mặt có lơng màu vàng Chỉ nhị dài 1,2 cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 3, dài 0,65 cm, nhẵn30 14 Camellia gilbertii (A Chev ex Gagnep.) Sealy (Trà hoa Gilbert) 15 Camellia hakodae M.Sealy (Trà hoa vàng Hakoda) 16 Camellia hirsuta Hakoda et Ninh (Trà hoa vàng nhiều lông) 17 Camellia impressinervis Hung T Chang and S Ye Liang (Trà hoa vàng gân lõm) 18 Camellia indochinensis Merrill Sym Camellia limonia C.F.Liang and S.L.Mo (Trà chanh)1,32 19 Camellia inusitata Orel, Curry and Luu (Trà my cánh dẹt) Cây bụi cao khoảng m, chồi non có lơng mịn Lá có cuống, cuống dài 0,3 – 0,8 cm, hình elip rộng thn dài, đỉnh nhọn Hoa gồm cánh hình trứng ngược, mọc đầu cành nách lá, cuống hoa dài 0,8 – cm Lá bắc – 3, đài 5, mặt có lơng rậm, mặt ngồi nhẵn Chỉ nhị 0,4 cm, gần nhau, không lông Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 3, dài 0,12 – 0,25 cm20,22,30 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành nhẵn Lá 23,5 – 29 x – 11,5 cm, hình bầu dục, đỉnh nhọn, cuống dài 0,8 – 1,5 cm, nhẵn Hoa mọc đầu cành nách có 16 – 17 cánh với mặt có lơng, cuống dài – 1,2 cm, có lơng Lá bắc – 6, đài 5, có lơng Bộ nhị: Nhiều nhị, dài – 4,5 cm, có lơng Bộ nhụy: Bầu – ơ, khơng lơng, vịi nhụy – 5, rời, không lông20,22 Cây gỗ nhỏ, cao – m Lá 16 – 17,5 x 4,7 – 5,5 cm, phiến thn, dài, chóp dài 1,7 – cm, cuống gần tròn, dài 0,4 – 0,8 cm Hoa gồm – 12 cánh mọc đơn độc đầu cành, cánh hoa có lơng mép, hợp gốc, cuống hoa dài 0,5 cm Lá bắc – 10, hình móng Lá đài – 6, gần trịn Nhị dài 2,6 cm, nhị bên ngồi hợp với nhau, bên rời, có lơng Bộ nhụy: Bầu ơ, cao 0,3 cm, lơng dày đặc, vịi nhụy 3, rời, lông thưa phần gốc20,22 Cây bụi gỗ nhỏ cao từ 1,5 – m, cành non màu nâu xám, nhẵn, sau lớn màu nâu tía với lơng màu vàng Lá 12 – 22 x – 8,5 cm, hình elip elip thn dài, đỉnh nhọn, mặt màu xanh nhạt với nhiều lỗ tuyến màu nâu đỏ, mặt màu xanh đậm, nhẵn, cuống dài cm, nhẵn Hoa đơn gồm 11 – 12 cánh, hoa mọc nách cuống hoa nhỏ, dài 0,5 cm, nhẵn Bộ nhị: Nhiều nhị, nhị dài cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ô, vòi nhụy 3, dài – 2,3 cm31 Cây bụi, cao – m, cành non màu nâu vàng, nhẵn Lá – 10,5 x 2,5 – 4,5 cm, hình elip, trứng ngược hình trứng thn dài, đỉnh nhọn, mặt màu xanh đậm, mặt màu xanh nhạt với nhiều lỗ tuyến, mặt nhẵn, cuống dài 0,5 – 0,8 cm Hoa đơn có – cánh màu vàng hay vàng trắng, xếp thành vịng, vịng ngồi – cánh Lá bắc – 6, đài 5, nhẵn mặt ngồi có lông mịn Bộ nhị: Nhiều nhị, nhị dài 0,8 – cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu – ô, vòi nhụy 3, dài cm, nhẵn33 Cây gỗ nhỏ cao tới 3m, cành non mảnh, màu xanh nhạt, sau đậm dần, nhẵn Lá 18 x – cm, hình mũi mác mũi mác hẹp, mép cưa, phân bố không đều, đỉnh nhọn, cong, mặt xanh đậm, nhẵn, mặt xanh nhạt, xỉn màu, cuống dài 0,6 – cm, màu xanh đậm, nhẵn Hoa chủ yếu mọc đơn, mọc thân già đầu cành, hoa – cánh xếp thành vòng, cuống hoa mảnh, nhẵn, dài 1,1 – 1,8 cm Lá bắc – 3, đài xếp thành vòng Bộ nhị: Nhiều nhị (50 – 70), dài 0,7 – cm Bộ nhụy: Bầu ơ, có lơng mịn, vịi nhụy 3, dài 0,7 – 0,9 cm34 20 Camellia luteocerata Orel (Trà hoa vàng trắng) 21 Camellia luteopallida Luong, T.Q.T Nguyen and Luu (Trà my vàng tái) 22 Camellia megasepala Hung T.Chang and Tran Ninh (Trà hoa vàng Ba Bể), (Trà hoa vàng đài to) 23 Camellia murauchii Ninh and Hakoda (Trà hoa vàng Murô) 24 Camellia ngheanensis (Trà hoa vàng Nghệ An) 25 Camellia oconoriana Orel, Curry and Luu (Trà hoa O’Conor) Cây bụi nhỏ đến trung bình cao – 6m, cành non màu nâu xám, chuyển sang nâu trưởng thành Lá 22 – 27,5 x – 11 cm, có sẹo lồi rõ, vàng đến nâu, hình elip đến elip rộng, cưa khơng đều, đỉnh nhọn, hẹp, mặt xanh đậm, nhẵn, mặt gân khơng rõ, cuống hình liềm dài 1,5 – cm Hoa gồm 11 – 13 cánh với cánh xếp kiểu xoắn, dễ nhận biết, mọc đầu cành nách lá, cánh hoa nhẵn Bộ nhị: Nhiều nhị, nhị 1,5 – cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy dài 1,2 – 1,5 cm17,35 Cây bụi hay gỗ nhỏ cao tới m, cành non màu xanh lá, nhẵn Lá 16 – 20 x – cm, hình elip đến hình trứng, non màu nâu, đỉnh nhọn, mặt màu xanh lá, nhẵn, mặt màu xanh nhạt, khô giấy, cuống màu xanh, non thẳng, cong dần già, nhẵn, dài 0,5 – cm Hoa mọc đơn cụm hoa, hoa có 12 – 14 cánh hoa xếp thành nhiều vòng, mặt phủ lông màu nâu Bộ nhị: Nhiều nhị, xếp thành – vòng, dài 1,2 – cm Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy dài 1,3 – 1,6 cm, màu vàng nâu, có lơng36 Cây gỗ nhỏ cao – m Lá 24,5 x 11 cm, hình elip, đỉnh nhọn, mặt màu xanh lục, mặt màu xanh lục nâu, nhiều lông, cuống 0,6 – 0,8 cm, có lơng Hoa có cuống trắng, cuống dài 0,8 cm, có lơng Lá bắc – 8, có lơng Lá đài – 8, hình trứng, mặt nhẵn, mặt ngồi có lơng Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 3, dài 3,5 cm, nhẵn có lông gốc Không thấy nhị cánh hoa37 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành non màu nâu đậm, nhẵn Lá 27,3 – 33,5 x 14,9 – 17,1, hình elip elip thn, đỉnh nhọn, mặt màu xanh lá, nhẵn, mặt màu xanh nhạt, có lơng, cuống dài 0,5 – 0,7 cm, có lơng Hoa đơn, mọc đầu cành, cuống hoa dài cm Lá bắc 7, đài nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 3, dài 2,3 – 2,5 cm Không thấy nhị cánh hoa37 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành non màu tím đến tím xanh dần đỉnh, cành thân già màu xám Lá 11 – 14 x – cm, hình elip rộng đến hình trứng rộng, non màu tía sau ngả xanh tím, già mặt màu xanh đậm, nhẵn, mặt xanh nhạt, lông nhỏ phát triển gân giữa, đỉnh nhọn, dài, cuống cong dần già, màu xanh đậm, dài 0,5 – 0,6 cm Hoa thường mọc đơn, cụm hoa, 12 – 13 cánh hoa xếp thành vòng, vịng ngồi có lơng, vịng nhẵn, mọc nách lá, cuống hoa to, ngắn, 0,3 – 0,5 cm Lá bắc – 3, đài xếp thành vịng, có lơng mặt Bộ nhị: Nhiều nhị, xếp thành – vòng, nhị dài 2,2 – 2,7 cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu – 4, vòi nhụy – 4, dài 2,3 – 2,5 cm8 Cây bụi, cao tới 7,5 m, nhiều nhánh, cành non nhẵn Lá 30 – 36,5 x – 8,5 cm, hình elip hẹp, thưa không đều, non màu hồng đến màu hoa cà, đỉnh nhọn, mặt màu xanh sáng, nhẵn, mặt gân không đều, lông thưa, cuống dài – cm Hoa mọc 26 Camellia petelotii (Merr.) Sealy (Trà hoa vàng Petelot) 27 Camellia phanii Hakoda et Ninh (Trà hoa vàng Phan) Camellia proensis V.D.Luong, 28 Doudkin and V.H Quach 29 Camellia pukhangensis D.N Do, D.V Luong, S T Hoang and H.T Le 30 Camellia quynhii Luong, Quach and Hoang đơn cụm hoa với cánh hoa xếp thành vòng, cuống hoa dài – cm, rộng tới 0,6 cm, Lá bắc nhỏ – 3, đài 2, cứng màu xanh lục vàng Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 300 – 350 xếp thành vịng, khơng có lơng, nhị dài 1,6 – 1,8 cm Bộ nhụy: Bầu – ơ, vịi nhụy dài 1,4 – 1,5 cm, có lơng mịn38 Cây bụi gỗ nhỏ, cành nhẵn Lá 14,5 – 18 x 4,5 – 7,5 cm, hình thn dài hay rộng, đỉnh nhọn, ngắn, phiến cuống nhẵn Hoa đơn mọc đầu cành gồm 14 cánh hoa với mặt ngồi phủ lơng mịn, cuống hoa – 1,2 cm, nhẵn Mặt bắc đài (5) phủ lông ngắn mịn Nhị không lông Bộ nhụy: Bầu ô, nhẵn22,29 Cây gỗ nhỏ, cao – m Lá 14,5 – 16 x 6,8 – 7,7 cm, hình bầu dục, đỉnh nhọn, cuống dài – 1,2 cm, không lông Hoa đơn gồm 14 – 19 cánh, mọc đầu cành nách lá, cánh hoa phủ lông mặt, cuống hoa dài – 1,5 cm Lá bắc – hình móng, xếp xoắn, có lơng mép Lá đài 5, hình vẩy đến gần trịn, mặt có lơng mịn Bộ nhị: Nhiều nhị, dài 2,5 cm, hợp vịng ngồi tạo thành ống nhị, nhị rời Bộ nhụy: Bầu ơ, khơng lơng Vịi nhụy 3, rời, khơng lông20,22 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành nhẵn Lá 33 – 35 x 7,5 – 8,5 cm, hình elip thn, đỉnh nhọn, mặt mặt nhẵn, cuống dài – cm Hoa đơn mọc thành cụm – hoa, hoa gồm – cánh, cuống hoa phân nhánh không, dài – 5,5 cm, nhẵn Lá bắc – màu xanh nhạt, nhẵn Lá đài màu xanh nhạt với mặt ngồi có lơng Bộ nhị: Nhiều nhị, xếp thành – vòng, nhị dài 0,5 – 0,7 cm, nhị xếp bên có lơng đáy Bộ nhụy: Bầu – ô, vòi nhụy xẻ – thùy, dài 1,5 – 1,8 cm, phủ lông dày 1/2 đáy10 Cây bụi gỗ nhỏ cao – m, cành nhiều lông Lá 16 – 24 x 5,5 – cm, hình thn dài, đỉnh nhọn, mặt có lông dọc theo gân lá, mặt cuống nhiều lông Hoa đơn mọc đầu cành gồm 10 – 13 cánh với mặt ngồi phủ lơng tơ, gần khơng có cuống Nhị có lơng mịn Bộ nhụy: Bầu – ô phủ lông mịn29 Cây bụi thường xanh nhỏ cao – m, cành non màu nâu, lông mịn thưa, sau nhẵn Lá 14 – 20 (-22,5) x – 12 cm, hình elip rộng, phiến giống da (coriaceous), không lông, đỉnh tù đỉnh ngắn nhọn, mép có cưa, – 10 gân phụ, mặt màu xanh đậm, mặt xanh nhạt, cuống lớn, cong, dài 0,8 – 1,0 cm, không lông Hoa màu vàng nhạt, gần cuống, mọc đơn mọc đầu cành, hướng lên (hiếm mọc cụm hoa), gồm 12 – 15 cánh màu vàng nhạt, hình elip đến elip rộng, xếp thành vịng, tiền khai vặn, vịng ngồi gồm – cánh, cánh hoa hình elip, nhăn, kích thước 1,0 – 3,7 x 1,7 – 2,7 cm, có lơng mặt, vịng thứ gồm – cánh kích thước 4,0 – 4,4 x 2,3 – 2,7 cm, có lơng mặt, vịng gồm – cánh hình elip rộng, kích thước 4,1 – 4,5 x 1,7 – 2,0 cm Lá bắc – 4, mọc đối, hình tam giác kích thước 0,3 – 1,1 x 10 31 Camellia rosmannii Ninh (Trà hoa vàng Yên Tử) 32 Camellia tamdaoensis Ninh et Hakoda (Trà hoa vàng Tam đảo) 33 Camellia thuanana T.T Hoang 34 Camellia thuongiana Luong, Anna Le and Lau (Trà my Thưởng) 0,3 – 0,4 cm, có lơng mặt Lá đài – 7, hình vảy gần trịn, kích thước 0,5 – 1,2 x 0,5 – 1,5 cm, có lơng mặt Bộ nhị: Nhiều nhị, dài 2,5 – 3,2 cm, xếp thành nhiều vòng, nhị bên dài 0,9 – 1,2 cm Bộ nhụy: (-4), hình trứng, có gân, kích thước 0,4 – 0,5 x 0,4 – 0,45 cm, nhẵn, vòi nhụy dài 2,7 – 3,1 cm Quả nang hình trứng kích thước – 5,6 x 4,0 – 4,5 cm, 3( – 4) bầu, bầu có – hạt, nhiều lông, hạt 1,4 – 1,6 x 0,9 – 1,2 cm, màu nâu sẫm đến đỏ tía11 Cây bụi cao khoảng m, cành nhẵn Lá 10,5 – 13,5 x – 5,6 cm, hình elip, mép có khía, cuống dài 0,6 – 0,7 cm Hoa có 15 cánh hoa, mọc đầu cành nách lá, cuống ngắn Lá đài 6, bắc 6, xếp gần tròn Nhị dài – 3,2 cm Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy – 2,2 cm, nhẵn37 Cây bụi gỗ nhỏ, cao – m Lá 14,0 – 15,5 x 5,0 – 7,0 cm, hình bầu dục thn rộng, đỉnh nhọn, mặt xanh đậm, mặt xanh tía đỏ, mặt nhẵn, cuống dài 0,7 – 0,9 cm, nhẵn Hoa gồm 10 – 12 cánh, mặt phủ lông, mọc đầu cành nách lá, cuống hoa dài 0,5 – 0,7 cm Lá bắc Lá đài 5, hình móng hay gần trịn, có lơng mặt mép Bộ nhị: Nhiều nhị, dài 1,5 – 1,7 cm, hợp vịng ngồi mm, bên rời, có lơng gốc Bộ nhụy: – ơ, khơng lơng Vịi nhụy 3(4), rời, dài khoảng 2,2 cm, không lông20,22 Cây gỗ nhỏ cao – m, cành non nhỏ, có lơng mịn dụng hết vào năm thứ Lá 11 – 17,5 x – 4,5 cm, hình elip elip thn dài, đỉnh tù, mép có cưa nhỏ, nơng, mặt màu xanh đậm, mặt màu xanh nhạt với điểm tuyến rải rác, gân phụ gồm 12 – 15 đôi, rõ mặt dưới, cuống nhỏ dài 0,3 – 0,5 cm, nhẵn Hoa hình trứng, mọc đơn cụm – nách lá, hoa gồm – cánh hoa màu vàng tươi, vịng ngồi cánh kích thước 0,6 – 0,7 x 0,45 – 0,7 cm, khơng có lơng, vịng gồm – cánh hoa hình elip hay hình trứng rộng, kích thước 1,1 – 1,3 x 0,6 – 0,9 cm, gợn sóng, cuống hoa ngắn, dài 0,2 – 0,3 cm, cong Lá bắc – 3, hình tam giác kích thước 0,1 – 0,15 x 0,1 – 0,2 cm, nhẵn Lá đài – xếp thành cặp đối nhau, lõm, chia thành sừng nhỏ bên, bên không lông Tràng hoa màu vàng lục nhạt Bộ nhị: Gồm 190 – 200 nhị xếp thành – vịng, màu vàng nhạt, khơng lơng, vịng ngồi dính với đế hoa khoảng 0,2 – 0,3 cm, nhị dài 0,4 – 0,8 mm Bộ nhụy: Bầu 3, hình trứng kích thước 0,2 – 0,3 x 0,15 – 0,2 cm, có lơng mịn, vịi nhụy 0,5 – 0,65 cm, nhẵn Không thấy quả6 Cây nhỏ cao – m, cành non đỏ sẫm, nhiều lông, cành lớn nhẵn Lá – 17 x – 6,5 cm, hình elip rộng thn, đỉnh nhọn, dài, không lông, cuống 0,8 – 1,1 cm, dài, nhẵn Hoa đơn mọc thành cụm – hoa, hoa gồm 11 – 13 cánh màu vàng tươi, mọc đầu cạnh nách lá, cuống hoa dài 0,8 – cm, nhẵn Lá bắc – 11 35 Camellia tienii Ninh (Hải đường hoa vàng) 36 Camellia tonkinensis (Pit.) Cohen Stuart (Trà my Ba Vì) 37 Camellia tuyenquangensis D V Luong, N N H Le and N Tran (Trà vàng Tuyên Quang) 38 Camellia velutina V.T Pham, V.D Luong and Aver (Trà hoa vàng lông mềm) 39 Camellia vuquangensis Luong, Tran and L T Nguyen (Trà my Vũ Quang) 4, đài 5, nhẵn Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 290 – 340 xếp thành – vòng, nhị dài 1,3 – 1,4 cm Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy 0,8 – 0,9 cm, nhẵn39 Cây gỗ nhỏ, cao 2,5 m Cành non màu tím, khơng lơng Lá 19,8 – 26 x 7,2 – 11,3 cm, hình thn dài, đỉnh nhọn ngắn, mặt láng, mặt nhiều tuyến màu đen, mặt nhẵn, có cuống gần trịn dài 0,9 – 1,8 cm, không lông Hoa mọc nách lá, gồm 14 cánh, cánh bên ngồi phủ nhiều lơng, cánh lông thưa dần, cuống hoa dài 0,9 cm Lá bắc mọc rải rác Lá đài Bộ nhị: Nhiều nhị, nhị dài 3,3 cm, hợp vịng ngồi khoảng 1,8 cm, bên rời, không lông Bộ nhụy: Bầu – ơ, khơng lơng, vịi nhụy 4(5), rời, không lông20,22 Cây bụi cao – m, cành nhẵn Lá – 13,5 x 2,5 – 5,2, hình elip, đỉnh nhọn, mặt nhẵn, mặt có lơng dọc theo gân gần đáy lá, cuống có lông ngắn nhẵn Hoa đơn mọc đầu cành gồm – 12 cánh, nhẵn, cuống hoa 0,7 cm, nhẵn, bắc đài 5, mặt ngồi có nếp gấp Nhị có lơng mịn Bộ nhụy: Bầu ơ, có lơng29 Cây bụi cao – m, cành màu nâu nhạt, nhẵn Lá đơn 14 – 18 x – cm, mọc cách, hình nón, thn dài elip hẹp, đỉnh nhọn, mặt nhẵn, mặt màu xanh vàng, nhẵn, cuống dài – 1,5 cm Hoa – mọc đầu cành nách lá, 12 cánh hoa xếp thành vòng, cuống nhỏ cm Lá bắc – 5, đài nhẵn mặt Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 250 xếp thành – vòng, nhị dài 2,5 – cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi nhụy dài cm, nhẵn16 Cây bụi gỗ nhỏ cao – m, cành nhẵn Lá 15 – 22 x – 11 cm, hình trứng, lõm, đỉnh tù, cuống dài 1,2 – 1,6 cm mảnh, nhẵn Hoa gồm 10 – 11 cánh không xếp xoắn ốc, hoa mọc đơn đầu cành nách lá, cuống to hình trụ – 1,3 cm, nhẵn Lá bắc – mặt ngồi có nếp gấp, đài Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 300 nhị xếp thành – vòng, nhị dài 1,5 – 2,5 cm, nhẵn Bộ nhụy: Bầu ô, vòi nhụy dài – 2,5 cm, nhẵn40 Cây bụi cao – m Lá 12 – 23 x – cm, hình thn dài, đỉnh nhọn, dài, cuống 0,8 – cm, nhiều lông Hoa đơn đôi khoảng – cánh hoa với mặt ngồi có lơng mịn, đường kính hoa – 9,5 cm, mọc đầu cành nách lá, cuống hoa Bộ nhị: Nhiều nhị, khoảng 290 nhị xếp thành 5(6) vòng, nhị dài 3,5 – 4,5 cm, có lơng 1/2 đáy Bộ nhụy: Bầu ơ, vịi – 1,3 cm, có lơng 1/2 đáy25 Một số loài Trà hoa vàng phân bố khu vực tỉnh Lâm Đồng Đồng Nai hình bày bảng 1.2 12 Bảng 1.2 Một số Trà hoa vàng phân bố khu vực Lâm Đồng Đồng Nai STT 10 Loài Tên Việt Nam Camellia bidoupensis Truong, Luong and Tran Camellia curryana Orel and Luu Camellia dalatensis Trà hoa Luong, Tran and vàng Đà Lạt Hakoda Trà hoa Camellia dilinhensis vàng Di Ninh and V.D.Luong Linh Trà hoa Camellia dongnaiensis vàng Đồng Orel Nai Trà hoa Camellia dormoyana vàng (Pierre) Sealy dormoy Camellia inusitata Orel, Trà my cánh Curry and Luu dẹt Camellia luteocerata Trà hoa vàng trắng Orel Camellia luteopallida Trà hoa Luong, T.Q.T Nguyen vàng tái and Luu Camellia oconoriana Trà hoa Orel, Curry and Luu O’Conor 11 Camellia proensis V.D Luong, Doudkin and V.H Quach 12 Camellia thuanana T.T Hoang Phân bố Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà9 Cao nguyên không tên, Đà Lạt, Dãy núi Annamit42 Mức nguy cấp41 NT LC Đà Lạt CR Núi Di Linh, độ cao 850 – 900m24 EN Đầu nguồn sông Đồng Nai26 CR Đồng Nai, Lâm Đồng27 DD Vườn quốc gia Bidoup Núi Bà34 CR Rừng mưa Lâm Đồng35 VU Bờ sông Đồng Nai ranh giới Lâm Đồng, Đăk Nông36 Núi không tên cách Đà Lạt 120 km phía tây nam38 Xã Pro, Huyện Sơn Dương, Xã Tà Năng, Huyện Đức Trọng, Lâm Đồng, 800 – 1100 m10 Xã Đa Tốn, Huyện Bảo Lâm, Lâm Đồng, rừng nguyên sinh, 700 – 850m6 CR 13 Camellia bidoupensis Camellia dilinhensis Camellia dormoyana Camellia luteocerata Camellia inusitata Camellia proensis Hình 1.1 Một số lồi Trà hoa vàng khu vực Lâm Đồng, Đồng Nai 1.1.1.3 Vị trí phân loại bảng hệ thống thực vật Vị trí Camellia sp xếp bảng hệ thống phân loại thực vật Takhtajan sau43: Ngành Ngọc Lan (Magnoliophita) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Sổ (Dilleniidae) Bộ Trà (Theales) Họ Trà (Theaceae) Chi Trà (Camellia) Loài Camellia 1.1.1.4 Trà hoa vàng Camellia spp Tên thường gọi: Trà hoa vàng, kim hoa trà Tên nước ngoài: Golden tea, the golden camellia, yellow camellia18,44 1.1.1.5 Sinh thái phân bố Trà hoa vàng lồi ưa bóng râm, thường phân bố thành cụm tự nhiên, khu rừng rộng thường xanh có tán che từ 30 – 80 % Mức độ che phủ ảnh hưởng đến số lượng màu sắc hoa, phát triển khu vực có độ che phủ rừng cao có số lượng hoa khu vực rừng che phủ thấp, khu vực nhận nhiều ánh sáng mặt trời hoa có màu vàng đậm hơn3 Phân bố độ cao 100 - 1000 m mực nước biển, chủ yếu tập trung độ cao 300 – 700 m Trà hoa vàng mọc vùng đất ẩm có độ ẩm khơng khí cao Do đó, 14 chúng thường tìm thấy thung lũng, gần suối vùng nước Đôi tìm thấy vùng đất khơ, chúng phát triển xấu, kích thước nhỏ3 Trà hoa vàng có hệ thống rễ nơng số lượng rễ ít, dẫn đến khả cạnh tranh thấp độ ẩm, chất dinh dưỡng phát triển với thảm thực vật xung quanh, điều dẫn đến đe dọa số lượng số loài Trà hoa vàng3 1.1.1.6 Bộ phận dùng Bộ phận dùng chủ yếu hoa, để làm trà, dầu ép từ hạt2,44, 45 1.1.2 Tổng quan thành phần hóa học Trà hoa vàng đánh giá có tiềm nghiên cứu, ứng dụng chăm sóc sức khỏe đời sống người, nhiên đa số Trà hoa vàng phân bố phạm vi hẹp, dẫn đến số lượng chúng ít, nhiều loài nằm sách đỏ cần phải bảo vệ, việc nghiên cứu đối tượng Trà hoa vàng cịn gặp nhiều khó khăn Chỉ số Trà hoa vàng nghiên cứu C chrysantha (Hu) Tuyama2, C euphlebia M.Sealy46,47, hay số loài đặc hữu C bugiamapensis Orel, Curry, Luu and Q.D.Nguyen, C dalatensis Luong, Tran and Hakoda, C dilinhensis Luong and Tran nghiên cứu48 Thành phần hóa học lồi Trà hoa vàng gồm nhóm: Các chất bay hơi, chất béo, carotenoid, polyphenol, tanin, triterpen dẫn chất glycosid, anthranoid, polysaccharid, acid amin, nguyên tố vi lượng2,48 1.1.2.1 Flavonoid Flavonoid phân lập xác định từ loài Trà hoa vàng hợp chất genin glycosid chủ yếu thuộc khung cấu trúc flavonol, ngồi cịn có hợp chất khác thuộc khung 2,45,46,49,50,51,52,53,54,56,57,58 flavon, flavan, flavanol proanthocyanidin Cyanidin-3-O-glycosid Li Xin lei cộng xác định năm 2018 kỹ thuật UPLC-QTof/MS, hợp chất tìm thấy non, hợp chất quan trọng làm cho non có màu đỏ tía57 Một số flavonoid trình bày bảng 1.2 15 Bảng 1.3 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ Trà hoa vàng Cấu trúc Flavon Hợp chất Apigenin-6-C-pentosid-8-C-hexosid Apigenin-8-C-glucopyranosid Apigenin-6,8-di-C-glucopyranosid Luteolin-7-O-β-D-glucopyranosid Luteolin-7-O-β-D-rutinosid Vitexin Vitexin-7-O-β-D-glucopyranosid Quercetin Quercetin-3-O-methyl ether Quercetin-3-O-pentosid Quercetin-3-O-β-D-glucopyranosid Quercetin-7-O-β-D-glucopyranosid Quercetin-7-O-(6′-O-E-caffeoyl)-β-D-glucopyranosid Rutin Isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranosid Kaempferol Kaempferol-3-O-β-D-rutinosid Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosid Kaempferol-3-O-[2’-O-(trans-p-coumaroyl)-3-O-α-Dglucopyranosyl]-α-D-glucopyranosid Kaempferol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)-2,4-di-O-acetylα-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosid Kaempferol 3-O-[4-O-acetyl-α-L - rhamnopyranosyl-(1→3)-2,4di-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosid Kaempferol-3-O-[2,3,4-tri-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl(1→3)-4-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-Dglucopyranosid Kaempferol 3-O-[2,3,4-Tri-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl(1→3)-2,4-di-O-acetyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-Dglucopyranosid Kaempferol-O-3-sophoroside-O-7- rhamnosid Isorhamnetin-3-O-β-D-glucosid Multiflorin Pollenitin Catechin Epicatechin Proanthocyanydin Proanthocyanidin dimer Aromadendrin Taxifolin Taxifolin-3-O-deoxyhexose Genistin Genistein 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Flavonol 20 21 22 23 Flavanol Flavanonol Isoflavon 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 Bộ phận Lá Lá Lá Lá Lá, hoa Hoa Lá Lá, hoa Hoa Lá Hoa Hoa Hoa Hoa Hoa Lá, hoa Hoa Hoa Lá Hoa Hoa Hoa Hoa Lá Lá Hoa Hoa Lá Lá Lá Lá Lá Lá Lá Lá, hoa Lá, hoa Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 16 R1 H H OH OH H H R2 OH OH OH OH OH OH R3 C-Glc C-Glc H H C-Glc C-Glc R4 OH OH O-Glc O-Rut OH O-Glc R5 H C-Glc H H H H 11 12 15 16 17 18 R1 OH OH OH OH OMe H H H R2 OH OH OH OH OH OH OH OH R3 H H H Glc H H H H 20 H OH H 21 H OH H 22 H OH H 23 H OH H R4 H Me Glc H Glc H Rut Glc Glc (6→1) [2,4 di-O-ac-L-rha (3→1)-L-rha] Glc (6→1) [2,4 di-O-ac-L-rha (3→1)-4-O-ac-L-rha] Glc (6→1) [4-O-ac-L-rha (3→1)-2,3,4-tri-O-Ac-L-rha] Glc (6→1) [2,4 di-O-ac-L-rha (3→1) - 2,3,4-tri-O-ac-L-rha] Rha Rha: Rhamnose Sop: Sophorose R1 35 Glc 36 H Flavon Flavonol OH Sop 24 H Glc: Glucose Rut: Rutinose R1 R2 R3 OH OH 32 H 33 OH OH OH Flavanonol Isoflavon Hình 1.2 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ Trà hoa vàng 1.1.2.2 Triterpen triperpen glycosid Các hợp chất triterpen triterpen glycosid phân lập chủ yếu từ C chrysantha như: Triterpen: stigmasterol, β-sitosterol, lupeol, acid oleanolic, 3βacetoxy-20-lupanol, 3β,6α,13β-trihydroxyolean-7-on spinasteryl-β-D-glucopyranosid, Triterpen glycosid: stigmasta-7,22-dien-3-O-[α-L-arabinopyranosyl- (1→2)]-β-D-galactopyranosid2,54 Cấu trúc hợp chất trình bày hình 1.3 α- Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 17 Lupeol 3β-Acetoxy-20-lupanol 3β,6α,13β-trihydroxyolean-7-on α-spinasteryl-β-D-glucopyranosid Acid oleanolic Stigmasta-7,22-dien-3-O-[α-L-arabinopyranosyl(1→2)]-β-D-galactopyranosid Hình 1.3 Một số triterpen dẫn chất glycosid phân lập Trà hoa vàng Ngoài ra, triterpen glycosid Ilexosid II (3-β-O-[β-D-glucopyranosyl-(1 → 3)-α-L-arabinopyranosyl]-pomolic acid - (28 → 1)-β-D-glucopyranosyl ester), Ginsenosid Rg1 (6,20-di-O-β-glucosyl-20(S) - protopanaxatriol), Ginsenosid F1 (20O-β-D-glucopyranosyl-20(S) - protopanaxatriol), Ginsenosid F5 (20(S)-O- protopanaxa-triol-20-O-α-L-arabinofuranosyl(1 → 6)-β-D-glucopyranosid) (hình 1.5) phân lập từ C chrysantha, hợp chất có chi Panax với nhiều công dụng quý bảo vệ thần kinh, bảo vệ tim mạch, chống tăng đường huyết, chống oxy hóa2 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 18 Ilexosid II Ginsenosid Rg1 Ginsenosid F1 Ginsenosid F5 Hình 1.4 Một số saponin chi Panax phân lập từ Trà hoa vàng 1.1.2.3 Polysaccharid Các hợp chất polysacharid phân lập hình thành từ monosaccharid arabinose, galactose, rhamnose, glucose, acid galacturonic, xylose, mannose Hợp chất TPS3-1-1 glycoprotein cấu tạo từ đường arabinose, galactose glucose2 1.1.2.4 Các hợp chất bay Các hợp chất bay báo cáo chủ yếu từ lồi C chrysantha có cấu tạo alkan, aldehyd keton Đến có 100 hợp chất báo cáo, số hợp chất phân lập từ C chrysantha acid benzoic-2-hydroxy methyl ester (methyl salicylat) (26,91 %), phenylmethanol (5,92 %), cis-octahydropentalen (5,56 %), linalool oxid (4,17 %), phenylethanol (4,01 %), 2,6-dimetyl-3,7octanedien-2,6-diol (3,52 %), decyl isobutyl phthalat (3,32 %)59 Pentadecan (6,57 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 19 %), 2-(octadecyloxy) ethanol (4,48 %), octatriacontyl pentafluoropropionat (3,93 %), 1-iodO-hexadecan (3,33 %) thành phần phân lập từ cao ether60 Cao n-hexan có thành phần linalool (35,8 %), phytol (7,9 %), cisgeranyl aceton (7,3 %), methyl salicylat (6,8 %), n-hexanal (4,4 %), trans-linalool oxid (3,2 %) α-eudesmol (34,3 %), -eudesmol (31,5 %), linalool (11,1 %) phân lập từ hoa loài C chrysantha47,Error! Reference source not found Cấu tử phân lập từ Camellia tunghinensis Camellia euphlebia Li Ge cộng báo cáo n-hexanal (17,2 %), 2-pentylfuran (10,6 %), phyton (7,5 %), geranylaceton (5,0 %) (Camellia tunghinensis) phytol (58 %), geranylaceton (5,6 %) n-hexanal (3,3 %) (Camellia euphlebia) Tinh dầu cho tác dụng chống oxy hóa yếu mơ hình DPPH ABTS47 1-iodohexadecan Pentadecan 2-Octadecyloxy ethanol α-Eudesmol β-Eudesmol Geranyl aceton n-hexanal Linalool oxid 2,6-dimetyl-3,7-octanedien-2,6-diol Metyl salicylat Phenylethanol Phenylmethanol Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 20 Linalool Decyl isobutyl ester phthalat Cis-octahydropentalen Phytol Hình 1.5 Một số cấu tử tinh dầu Trà hoa vàng 1.1.2.5 Acid amin nguyên tố vi lượng Các nguyên tố vi lượng C chrysantha báo cáo gồm: N, P, K, Ca, Mg, Fe, Zn, Mo Trong nguyên tố nitơ thành phần nhiều 11,9 ± 0,15 mg/g, tiếp sau K, Ca, Mg, P, Fe, Zn45 Cùng với 18 acid amin bao gồm acid amin thiết yếu leucin, lysin, phenylalanin, valin, threonin, isoleucin, methionin Ngoài nghiên cứu Zhongchen xiong cộng (2012) cho thấy hàm lượng acid amin nguyên tố vi lượng loài trồng cao so với loài phát triển tự nhiên, nhiên tỷ lệ tương đồng45 1.1.2.6 Thành phần khác Ellagitannin, platyphyllosid, acid p-coumaroylquinic, (1R, 3R, 4R, 5R)-acid-1, 3, 4, 5-tetrahydroxy-cyclohexan-carboxylic, acid daucic, dihydroxy-6-methoxytetrahydro-2H-pyran-3-oxyl-tetrahydro-2H-pyran-3, 4, 5-triol, , 1, 3, 4-tri-O-acetylα D–frutofuranosy, l, 3, 6-tri-O-acetyl-α-D–glucopyranosid, (2S, 3aR, 4′S, 5′S, 6R, 6′R, 7R, 7aS)-6, 6′-bis [(acetyloxy) methyl] tetrahydro-4H,4′H-spiro [1,3-dioxolo [4, 5-c] pyran-2, 3′-pyran] -3a, 4, 5, (6H) -tetrayl tetraacetat, (2S, 3R, 4R, 5R, 6S)-2(2S,3R, 4S, 5S, 6R)-4,5-dihydroxy-2- (5-hydroxyl-7-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)4-carbonyl-4H-chromen-6) -6-(hydroxymethyl) tetrahydro-2H-pyran-3-oxy)-4,5dihydroxyl-6-methyl-tetrahydro-2H-pyran-3-tetraylacetat2,46 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 21 1.1.3 Tổng quan tác dụng dược lý Trà hoa vàng Nghiên cứu tác dụng dược lý Trà hoa vàng chủ yếu thực loài C chrysantha Các nghiên cứu cho thấy Trà hoa vàng có tác dụng chống oxy hóa, chống ung thư, ức chế phát triển khối u, kháng viêm, kháng khuẩn, hạ lipid huyết, hạ đường huyết, bảo vệ tế bào gan tế bào thần kinh2 1.1.3.1 Chống oxy hóa Năm 2011, Lixia Song cộng nghiên cứu tiềm chống oxy hóa lồi Trà hoa vàng mơ hình ORAC, kết cho thấy C impressinervis có tác dụng mạnh (2271,9 ± 56,2 μmol/g) cao giá trị vitamin C (2000 μmol/g) vitamin E (1162 μmol/g), hàm lượng polyphenol toàn phần, proanthocyanin, tanin flavon cao với giá trị 475,6 ± 15,8 μmol/g, 66,1 ± 3,5 μmol/g, 25,92 μmol/g 26,3 μmol/g46 Năm 2015, Jin Bin Wei công định danh 16 hợp chất UHPLCMS/MS, hợp chất xác định catechin (1), epicatechin (5), vitexin (8), isovitexin (10), quercetin-7-O-β-D-glucopyranosid (12) kaempferol (16) Các hợp chất nghiên cứu khả chống oxy hóa mơ hình DPPH, hợp chất 12 có hiệu qt gốc tự mạnh (78,5 %), thấp 10 (35,6 %), hợp chất có tác dụng giảm dần theo thứ tự 12 > > > 16 > > 1062 Khả chống oxy hóa Trà Rui Yang cộng (2018) nghiên cứu cao chiết ethanol, DCM, EtOAc, n-BuOH nước mơ hình DPPH, ABTS FRAP Cao EtOAc thể khả chống oxy hóa mạnh tổng hàm lượng phenol (TPC) cao so với cao chiết khác với IC50 mơ hình ABTS, DPPH 64,24 ± 1,80 78,80 ± 0,34 μg/ml khả khử sắt mô hình FRAP với giá trị 801,49 ± 2,30 μM FeSO4 nồng độ 1000 μg/ml, cao cịn lại có hiệu tương đối mơ hình ethanol > n-BuOH > DCM > nước4 1.1.3.2 Chống khối u ức chế tế bào ung thư Năm 2009, Han Lichun cộng nghiên cứu tác dụng ức chế hạt Trà hoa vàng dòng tế bào ung thư cổ tử cung HelaS3 dòng tế bào ung thư tuyến Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 22 tiền liệt PC3 Bằng thử nghiệm MTT cho thấy cao chiết ethanol, n-BuOH nước có tác dụng ức chế dòng tế bào, phân đoạn nước ức chế HelaS3 (160 µg/ml) với IC50 85,88 µg/ml ức chế PC3 (80 µg/ml) với IC50 63,06 µg/ml, ngồi phân đoạn n-BuOH nước nồng độ 80 µg/ml cho tác dụng ức chế HelaS3 PC3 với IC50 67,62 µg/ml; 56,20 µg/ml 55,71 µg/ml; 68,53 µg/ml63 Các phân đoạn Shi Liying cộng chứng minh tác dụng ức chế dòng tế bào bạch cầu đơn nhân người U937 với IC50 89,74 µg/ml, 65,19 µg/ml 63,74 µg/ml64 Dịch chiết nước từ hoa loài C chrysantha Lu Dai cộng (2016) nghiên cứu khả ức chế dòng tế bào ung thư thực quản Kỹ thuật nhuộm xanh tryphan dùng để đánh giá tỷ lệ sống chết tế bào xử lý dịch chiết nồng độ 100, 200, 300, 400 500 µg/ml 24 h, 48 h 72 h, kết cho thấy tỷ lệ tế bào chết tăng lên phụ thuộc vào nồng độ thời gian, nồng độ 300, 400 500 µg/ml tỷ lệ chết tế bào 24 h tăng lên đáng kể 34,43 %, 37,30 % 39,43 % so với nhóm chứng 6,43 % Ngồi ra, nồng độ 200 µg/ml làm gián đoạn chu kỳ tế bào, sau 24 h tế bào phân bố pha G0/G1 cao so với nhóm chứng (61,67 % so với 51,66 %), tế bào pha S (34,30 %) pha G2/M (4,04 %) bị giảm đáng kể so với nhóm chứng (36,44 % pha S 11,91 % pha G2/M)65 Năm 2018, Zhi hui Zhang cộng nghiên cứu khả chống khối u cao chiết ethanol 95 % từ C chrysantha dòng tế bào ung thư phổi A549 Cao chiết cho tác dụng ức chế cao nồng độ 320 µg/ml Ở nồng độ 40 μg/ml ức chế pha G0/G1 24 h (58,35 ± 3,24 %) 48 h (63,75 ± 4,34 %), tăng biểu (%) enzym tham gia vào trình chết tế bào Caspase-3 (16,24 ± 3,27 lên 52,34 ± 4,42), Caspase-8 (18,16 ± 2,24 lên 48,62 ± 4,43), Caspase-9 (27,43 ± 3,24 lên 58,43 ± 5,42) Kết cho thấy C chrysantha có tiềm phát triển để điều trị ung thư phổi66 Xiaoying Houl cộng (2018) nghiên cứu khả ức chế khối u 16 hợp chất phân lập từ loài C chrysantha số dòng tế vào ung thư Kết cho thấy 3β,6α,13β-trihydroxyolean-7-on (50 μM) có khả ức chế khối u Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 23 dòng tế bào ung thư dày HGC-27 dòng tế bào ung thư phổi đột biến điểm NCIH1975, catechin cho tác dụng ức chế dòng tế bào NCI-H1975 nồng độ tương tự Nổi bật 16 hợp A1-barrigenol 22α-angelat, triterpen khung olean có tác dụng ức chế mạnh dịng tế bào ung thư phổi A549, NCI-H1975 (giá trị IC50 13.37±2.05 µM) nồng độ 50 μM tế bào ung thư dày HGC-27 nồng độ 10 μM67 1.1.3.3 Hạ đường huyết Các dịch chiết từ C chrysantha Lai Wang cộng (2017) nghiên cứu khả làm giảm đường huyết chuột Chuột gây tăng đường huyết streptozotocin, sau nhóm cho sử dụng cao chiết EtOAc/DCM, nBuOH cao chiết tồn phần sau kiểm tra tác dụng hạ đường huyết Trên mơ hình gây tăng đường huyết lúc đói, cao chiết EtOAc/DCM cho tác dụng tốt nhất, nồng độ glucose máu 5,1 ± 2,1 mmol/l sau tuần Tuy nhiên với mơ hình dung nạp qua đường uống, dịch chiết EtOAc/DCM cho tác dụng không mạnh nồng độ khảo sát 50 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg68 1.1.3.4 Ức chế hình thành sản phẩm glycat hóa bền vững (AGEs) AGEs sản phẩm cuối phản ứng không enzym đường khử nhóm amin protein, lipid acid nucleic AGEs loại carbonyl đóng vai trị quan trọng nhiều bệnh người biến chứng đái tháo đường, bệnh Alzheimer, lão hóa xơ vữa động mạch4,69 Năm 2016, Weixin Wang cộng nghiên cứu ức chế hình thành sản phẩm chu trình glycat hóa mơ hình BSA-glucose, BSA-methylglyoxal thu dọn methylglyoxal cao chiết ethanol, DCM, EtOAc, n-BuOH, nước từ C chrysantha Kết cho thấy cao EtOAc có khả ức chế hình thành AGEs mạnh so với phân đoạn khác mơ hình BSA-glucose BSA-methylglyoxal với tỷ lệ ức chế 64,9 % (0,2 mg/ml) 70,4 % (5 mg/ml) Trên mơ hình thu dọn methylglyoxal, tất cao chiết cho tác dụng thu dọn methylglyoxal tốt, sau ủ với cao ethanol, DCM, EtOAc, n-BuOH nước h, lượng Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 24 methylglyoxal lại 8,7 % , 26,6 %, 1,5 %, 37,6 %, 40,8 % sau h lại 1,1 %, 6,6 %, 1,0 %, 7,7 % 20,3 %69 Năm 2017, Rui Yang cộng có mơ hình nghiên cứu tương tự phân đoạn hợp chất phân lập từ hoa kaempferol 3-O-[2,3,4-tri-O-acetylα-L-rhamnopyranosyl - (1→3) - 2,4 - di - O - acetyl - α - L - rhamnopyranosyl (1→6)]-β-D-glucopyranosid (1), kaempferol 3-O- [2,3,4-tri-O-acetyl- α-L- rhamnopyranosyl- (1→3) - - O - acetyl - α-L-rhamnopyranosyl - (1→6)] - β - D glucopyranosid (2) catechin (3) Kết cho thấy mơ hình BSA-glucose, phân đoạn EtOAc có khả ức chế mạnh phân đoạn khác với tỷ lệ 32,05 % 0,2 mg/ml 90,49 % 5,0 mg/ml, hợp chất có khả ức chế mạnh so với nồng độ thử nghiệm Trên mơ hình BSA-methyglyoxal, phân đoạn EtOAc thể khả ức chế vượt trội phân đoạn khác với tỷ lệ ức chế 34,3 % (1 mg/ml) 80,4 % (5 mg/ml), với hợp chất thử nghiệm có tác dụng ức chế tương đồng Trên mơ hình thu dọn methylglyoxal, tất phân đoạn cho tác dụng thu dọn methylglyoxal tốt, phân đoạn DCM cho kết tốt phân đoạn với tỷ lệ methylglyoxal lại 15,7 % (2 h) 9,8 % (6 h), EtOAc 31,2 % (2 h) 12,0 % (12 h) cuối phân đoạn n-BuOH nước, ngồi hợp chất có khả thu dọn methylglyoxal mạnh, hợp chất có tác dụng tương đương chứng dương kaempferol, hợp chất có tác dụng mạnh khoảng 0,5 h lại 37,4 % methylglyoxal, nhiên giá trị tăng không đáng kể theo thời gian4 1.1.3.5 Chống béo phì Năm 2009, Huang Yonglin cộng nghiên cứu khả làm giảm lipid huyết chim cút cao chiết khác từ Trà (400 mg/kg) Những chim cút cho ăn với chế độ giàu chất béo, sau cho uống cao chiết kiểm tra số cholesterol toàn phần (TC) triglycerid toàn phần (TG) Cao ethanol, nước cao chiết tinh chế sơ cho thấy khả hạ lipid huyết tương đương chứng dương fenofibrat (20 mg/kg) Cụ thể, dịch chiết làm giảm nồng độ TC với giá trị 1818,32 ± 861,16, 1806,78 ± 499,48 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 25 1796,24 ± 387,26 mmol/100ml Dịch chiết nước dịch chiết tinh chế sơ làm giảm mạnh nồng độ tryglycerid toàn phần 352,98 ± 50,61 363,65 ± 68,69 mmol/100ml, mạnh ethanol (431,61 ± 63,28 mmol/100ml) chứng dương (436,04 ± 42,19 mmol/100ml)70 Zhang cộng (2020) nghiên cứu khả ức chế enzym lipase tụy (PL) cholesterol esterase (CEase) tụy dịch chiết từ hoa Camellia chrysantha mơ hình in vitro in vivo Trên mơ hình in vitro, dịch chiết ức chế mạnh hoạt động enzym với giá trị IC50 320 µg/ml 200 µg/ml, ngồi nồng độ 600 µg/ml cịn làm giảm độ hịa tan hạt micell cholesterol khoảng 19 ± % Trên mơ hình in vivo, chuột sử dụng dịch chiết cho thấy lượng thức ăn tiêu thụ giảm, nồng độ 300 mg/kg chuột tăng tiết cholesterol nhiều triglycerid qua phân Qua cho thấy dịch chiết có khả ức chế enzym PL Cease làm giảm hấp thu chất béo, cholesterol, tăng tiết cholesterol triglycerid71 1.1.3.6 Bảo vệ gan Một nghiên cứu khác Xiaoman Zhang cộng (2020) hiệu dịch chiết C chysantha bảo vệ tế bào gan chuột Sprague Dawley đực SPF (200 ± 20 g) Chuột sử dụng cao chiết nồng độ khác nhóm ngày, sau tiêm phúc mạc CCl4/dầu oliu (2 ml/kg) để tạo viêm gan cấp tính Theo dõi số AST, ALT MDA cho thấy, nhóm chuột điều trị trước với nồng độ 160 mg/kg có giảm tỷ lệ nồng độ enzym huyết mô gan ALT (62 60 %), AST (49 53 %); MDA (35 42 %) tương đương điều trị thiopronin, giảm nồng độ gen phản ứng (55 %), yếu tố hoại tử khối u factor-α (26 %), interleukin-1β (19 %) IL-6 (19 %) ngăn chặn chuyển vị hạt nhân p65 Việc cho uống dịch chiết trước làm tăng nồng độ antihem oxygenase-1 (40 %), superoxid dismutase (108 %) glutathion (97 %) thông qua việc điều chỉnh yếu tố liên quan đến yếu tố hạt nhân erythroid (Nrf2)72 1.1.3.7 Bảo vệ thần kinh Năm 2020, Lei An công nghiên cứu khả bảo vệ tế bào thần kinh SH-SY5Y khỏi tổn thương H2O2 Nghiên cứu cho thấy phân đoạn EtOAc (50 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 26 - 200 μg/ml) làm tăng đáng kể khả tồn tế bào SH-SY5Y xử lý H2O2 Ở nồng độ 100 150 μg/ml làm giảm stress oxy hóa H2O2 gây cách giảm gốc tự nội bào tăng hoạt động superoxid dismutase (SOD) catalase (CAT) Phân tích Western blot chứng minh nồng độ 150 μg/ml, dịch chiết làm tăng biểu protein liên kết phần tử phản ứng cAMP Ser133 (pCREB-Ser133) yếu tố thần kinh có nguồn gốc từ não (BDNF)73 1.1.3.8 Kháng khuẩn Li Ge cộng (2018) nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa kháng khuẩn dầu phân lập từ loài Trà hoa vàng C tunghinensis, C chrysantha C euphlebia loài vi khuẩn gram âm (E coli P aeruginosa) loài gram dương (S aureus B subtilis) Tính kháng khuẩn đánh giá phương pháp khuyếch tán đĩa cho thấy trừ P aeruginosa, lồi cịn lại nhạy cảm với dầu lồi Trà có vùng ức chế từ 12,1 đến 24,3 mm với nồng độ ức chế tối thiểu MIC 0,625 - 2,5 mg/ml Dầu phân lập từ Trà có tác dụng kháng khuẩn kém47 1.1.4 Một số kinh nghiệm sử dụng Trà hoa vàng dân gian C chrysantha từ lâu người Tráng – Trung Quốc sử dụng loại thảo dược truyền thống để điều trị bệnh như: Khối u ác tính, viêm thận, viêm gan - vàng da, xơ gan, nhiễm trùng tiết niệu, kiết lỵ, tiêu chảy, viêm ruột, lở loét, kinh nguyệt không tăng huyết áp, loại dược liệu quý xuất tác phẩm “Bản Thảo Cương Mục” y học Trung Quốc từ 400 năm trước2,4,5 1.1.5 Chế phẩm từ Trà hoa vàng Nhờ loạt tác dụng có lợi mà ngày sản phẩm sản xuất Trung Quốc trà dạng túi, trà uống liền, dung dịch uống, cao cô đặc, tinh chất trà, trà búp đồ uống bán khắp khu vực Đông Nam Á, Châu Âu Châu Mỹ, ngồi sản phẩm chăm sóc da, dầu gội đầu, phụ gia thuốc phân bón hữu sinh học sản xuất bày bán2 Mốt số sản phẩm trình bày bảng 1.4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 27 Bảng 1.4 Một số chế phẩm từ C chrysantha Tên chế phẩm Thành phần C chrysantha; cocinic acid; Dầu gội camellia potassium hydroxid; Aloe (Camellia shampoo) vera; ethylen glycol monostearat; nước Dung dịch đậm đặc camellia C chrysantha; (Camellia condensed β-cyclodextrin; sorbitol; nước liquid) tinh khiết Dung dịch uống camellia (Camellia oral liquid) C chrysantha; β-cyclodextrin; sorbitol; nước tinh khiết Công dụng Dạng bào chế Bổ sung dinh dưỡng, kháng khuẩn, dưỡng da, chống lão hóa, giảm gàu, ngứa Kem Hạ lypid máu, hạ đường huyết, ức chế phát triển khối u, tăng cường hệ miễn dịch Thuốc sắc Hạ lipid máu Thuốc sắc C chrysantha; vitamin E; Kem dưỡng da propylen glycol; glycerol; camellia methyl-4-hydroxybenzoat; Thanh nhiệt thải độc, bổ sung (Camellia nutritional ethoxylated hydrogenated; dinh dưỡng, kháng khuẩn, skin care cream) glyceryl monostearat; copper dưỡng da chống lão hóa chlorid; sodium pyrrolidon carboxylat; bột ngọc trai; nước Phân bón hữu Kiểm sốt sâu bệnh hại đất, (Ecological organic C chrysantha; phân động vật; thúc đẩy tăng trưởng fertilizer) bột hạt trà; Actinomyces; Men; trồng Phụ gia thuốc C chrysantha (Cigarette additives) Thực phẩm chức C chrysantha; táo tàu; Canton love-pea vin; Panax ginseng; (Functional foods) Lycium chinense; mật ong Cải thiện chất lượng thuốc Hạ lipid máu, hạ đường huyết, tăng cường miễn dịch, giảm cholesterol, gây lợi tiểu phù nề Thực phẩm chức Chống khối u, phòng ngừa xơ C chrysantha; Ganoderma vữa động mạch, viêm tuyến lucidum; sụn vi cá mập; mật (Functional foods) tiền liệt, hạ lipid máu, kháng ong; menthol; đường khuẩn, chống lão hóa Thực phẩm chức C chrysantha; Hibiscus Giảm lipid máu, giảm đường mutabilis; Nelumbo huyết, chống viêm, giảm đau, (Functional foods) nucifera; nhiệt thải độc, chống Abelmoschus manihot khối u, chống lão hóa Ức chế phát triển khối C chrysantha; Siraitia Thức uống bổ dưỡng u, tăng cường khả miễn grosvenorii; Mentha camellia (Camellia dịch, giảm huyết áp, giảm haplocalyx; acid ascorbic; health beverage) cholesterol, tăng cường độ Sophora japonica; trehalose đàn hồi mạch co dehydrat; sorbitol; nước cất bóp tim Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Kem Hạt Thuốc sắc Kem Viên nén, Viên nang, Kem mật ong Hạt Thuốc sắc Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 28 Trà hoa tan camellia C nitidissima; maltitol; (Camellia instant tea) β-cyclodextrin; trehalose Viên ngậm buccal camellia (Camellia buccal tablets) Hạ lipid máu, hạ đường huyết, ức chế phát triển khối u, tăng cường hệ miễn dịch Hạt C chrysantha Xylitol; proteoglycans; acid Hạ lipid máu, hạ đường citric; polyethylen glycol; huyết, giảm viêm, tăng cường Viên nén microcrystallin cellulose; bột hệ miễn dịch biến tính 1.2 Gốc tự số mơ hình thử tác dụng chống oxy hóa 1.2.1 Gốc tự Gốc tự nguyên tử, phân tử ion có điện tử độc lập lớp vỏ ngồi Đơi khi, gốc tự mang điện tích dương, âm khơng mang điện Trong thể, gốc tự tạo trình trao đổi chất lipid hóa, peroxy hóa, glucuronid hóa gluconeogenesis tác động yếu tố bên tia X, UV, gamma, xạ vi sóng hay chất nhiễm,… Ở nồng độ thấp, gốc tự có vai trị cân chức sinh lý thể, nhiên có nhiều gốc tự thể dẫn đến phát triển bệnh thối hóa số bệnh lý viêm, lão hóa, xơ vữa động mạch, ung thư, Parkinson Alzheimer73 Sử dụng tác nhân chống oxy hóa xem phương pháp tiếp cận đầy hứa hẹn việc phòng ngừa nguy chống lại bệnh tật 1.2.2 Một số mơ hình thử tác dụng chống oxy hóa 1.2.2.1 Thử nghiệm DPPH Dựa phản ứng chất chống oxy hóa với DPPH (2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl) làm DPPH (màu tím, 519 nm) bị khử thành sản phẩm khơng màu Mức độ làm giảm độ hấp thu 519 nm nói lên mức độ chống oxy hóa chất thử74 1.2.2.2 Thử nghiệm ABTS Thử nghiệm đánh giá khả chất thử nghiệm việc ngăn chặn tạo thành sản phẩm có màu (xanh lam xanh lục, 734 nm) muối ABTS (acid 2,2'-azino-bis 3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonid) Mức độ giảm cường độ hấp thu bước sóng 734 nm nói lên khả chống oxy hóa chất thử nghiệm74 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 29 1.2.2.3 Thử nghiệm FRAP Thử nghiệm dựa vào khử Fe3+ thành Fe2+ chất chống oxy hóa, Fe2+ tạo phức với TPTZ (tripyridyltriazin) thành sản phẩm có màu xanh (593 nm) Mức độ tăng cường độ hấp thu 593 nm nói lên khả chống oxy hóa chất thử nghiệm74 1.2.2.4 Thử nghiệm ORAC Thử nghiệm đánh giá khả hợp chất chống oxy hóa quét gốc peroxyl tạo 2,2'-azobis (2-amidinopropan) dihydroclorua (AAPH) Thử nghiệm ban đầu sử dụng β-phycoerythrin làm protein thị, nhiên nhược điểm không đặc hiệu với hợp chất polyphenol nên thay thể thị fluorescein AAPH liên tục tạo gốc peroxyl, gốc oxy hóa thị làm giảm cường độ huỳnh quang, chất chống oxy hóa có vai trị qt gốc peroxyl tạo Mức độ tăng cường độ huỳnh quang thể khả chống oxy hóa chất thử nghiệm74 1.2.2.5 Thử nghiệm ức chế xanthin oxidase Xanthin oxidase đóng vai trị khơng nhỏ việc sản sinh gốc tự do, tác dụng enzym, xanthin bị chuyển thành acid uric có bước sóng hấp thu cực đại 292 nm Mức độ làm giảm hấp thu bước sóng 292 nm nói lên khả ức chế xanthin oxidase chất thử nghiệm74,75 1.2.2.6 Ưu nhược điểm số thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa Một số ưu điểm nhược điểm số thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa trình bày bảng 1.5 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 30 Bảng 1.5 Ưu điểm nhược điểm số thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa Thử nghiệm DPPH76 ABTS76 FRAP76 ORAC76 Ức chế Xanthin oxydase55 Ưu điểm Nhược điểm Đơn giản, hiệu quả, dễ thực hiện, thường Cần nhiều thời gian chuẩn bị dùng để nghiên cứu dịch chiết thiết bị, mẫu thử Nhạy cảm với dược liệu pH acid Dùng cho mơi trường có pH khác nhau, ABTS hịa tan nước dung môi hữu nên thuận lợi việc đánh giá hoạt tính mẫu môi trường khác nhau, Giá thuốc thử ABTS cao thường sử dụng đệm PBS (Đệm phosphat /150 mM NaCl, pH 7,4), mẫu phản ứng nhanh với ABTS PBS đạt ổn định sau 30 phút Không dùng phương pháp Đơn giản, nhanh, rẻ, không cần thiết bị FRAP để thử nghiệm chuyên dụng, thực lồi chống oxy hóa chế phương pháp tự động, bán tự động hay chuyển H có hợp chất thủ cơng chống oxy hóa nhóm thiol glutathion protein Khơng dùng cho hợp Thử nghiệm ORAC áp dụng chất chống oxy hóa thân dầu, rộng rãi trường học ngành cần máy đo huỳnh quang Ít có cơng nghiệp thực phẩm sẵn phịng thí nghiệm phân tích, khó khăn việc bảo trì Khơng nhạy, xác dễ bị ảnh hưởng số chất Đơn giản, nhanh chóng, dễ thực có khả hấp thu UV hợp chất polyphenol 1.3 Tổng quan bệnh Đái tháo đường 1.3.1 Khái niệm Đái tháo đường (ĐTĐ) rối loạn liên quan đến q trình chuyển hóa mỡ, carbohydrat protein Các rối loạn dẫn đến tổn thương mô, mạch máu dẫn đến biến chứng nghiêm trọng bệnh thần kinh, võng mạc, gan, thận Nguyên nhân tối loạn bệnh ĐTĐ giảm sản xuất insulin, giảm nhạy cảm insulin 277,78 Trên giới năm 2019 ước tính có 463 triệu người bị ĐTĐ, dự đoán đến năm 2045 tăng lên khoảng 700 triệu người79,80 Ở Hoa Kỳ tính đến năm 2018 có tới 34,2 triệu người mắc bệnh ĐTĐ (10,5 % dân số Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 31 Hoa Kỳ) tiền ĐTĐ 88 triệu người từ 18 tuổi trở lên (34,5 % dân số Hoa Kỳ độ tuổi trưởng thành)81 Việt Nam năm 2017 ước tính có 300.000 trẻ em ảnh hưởng bệnh đái tháo đường thai kỳ người mẹ, khoảng 3,53 triệu người mắc bệnh ĐTĐ dự đoán tăng lên 6,3 triệu người vào năm 204579 1.3.2 Một số mơ hình thử nghiệm xác định tác dụng hạ đường huyết 1.3.2.1 Mơ hình ức chế enzym α-glucosidase Dưới tác dụng enzym α-glucosidase, p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid (pNPG) bị thủy phân thành α-D-glucose p-nitrophenol Lượng p-nitrophenol sinh đo bước sóng 405 nm Mức độ giảm hấp thu thể khả ức chế enzym α-glucosidase chất thử nghiệm82 1.3.2.2 Mơ hình ức chế enzym α-amylase Dưới tác dụng enzym α-amylase, tinh bột hay polysaccharid có liên kết α bị thủy phân thành đường khử Các đường khử phản ứng tạo màu với acid 3,5dinitrosalicylic, lượng đường khử sinh tỉ lệ với cường độ màu dung dịch đo bước sóng 540 nm Mức độ giảm hấp thu thể khả ức chế enzym αamylase chất thử nghiệm82 1.3.2.3 Mơ hình ức chế enzym dipeptidyl peptidase IV (DPP IV) Ở môi trường pH 7,5, enzym DPP IV thủy phân chất gly-pro-p-nitroanilic (GPPN) tạo thành sản phẩm p-nitroanilin (pNA) có màu vàng, đo bước sóng 405 nm Mức độ giảm hấp thu thể khả ức chế enzym DPP IV chất thử nghiệm83 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 32 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Lá loài Camellia sp thu hái khu vực Vườn Quốc Gia Nam Cát Tiên 03/2021 Vị trí địa lý: 11°20′50" - 11°50′20" vĩ Bắc 107°09′05" - 107°35′20" kinh Đông Dược liệu sau thu hái loại bỏ đất cát, rửa sạch, phơi khô râm xay thành bột theo yêu cầu thí nghiệm 2.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị - Bình ngấm kiệt - Kính hiển vi quang học Carl Zeiss, Đức - Cân xác định độ ẩm MA – 45 (Satorius) - Lò nung Nabertherm (Đức) - Bể siêu âm Power sonic 410, Hàn quốc - Đèn UV 254/365 nm Spectrolight CM – 10A - Tủ sấy Memmert hiệu số UN110 - Nồi cách thủy Memmert WB – 14 - Máy cô quay chân không Hei-VAP Core G3, kèm sinh hàn tự động Hei-VAP Core, Đức - Cân phân tích Sartorius độ nhạy 0,1 mg BP – 221S, Đức - Máy sấy chân không (Jeiotech, model OV – 12) - Máy hút chân không Panasonic GP – 125JP - Bình sắc ký, cột sắc ký thủy tinh dụng cụ phịng thí nghiệm - Máy đọc đĩa Elisa đa (Biotek, USA), máy đọc đĩa Elisa iMarkTM (Biorad, USA) 2.1.3 Dung mơi hóa chất - Silica gel (Ấn Độ), cỡ hạt trung bình (37 – 63 μm); Silica gel (Merck, Đức), cỡ hạt mịn (15 – 40 μm) - Sắc ký lớp mỏng pha thuận dùng Silica gel G F254 (Merck) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 33 - Dung mơi dùng phân tích hóa học, sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột đạt chuẩn tinh khiết phân tích - Các dung mơi dùng cho chiết xuất sắc ký cột thay đổi theo thực nghiệm cụ thể cất lại, làm khan trước dùng - DPPH (Sigma), vitamin C (Sigma), acid gallic (Merck), Folin - Ciocalteu (Merck) - Hóa chất dùng thử nghiệm ức chế α-glucosidase: α-glucosidase (từ Saccharomyces cerevisiae, Sigma), p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid (pNPG, Sigma), acarbose (Sigma, ≥95 % HPLC), DMSO (Merck) 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xác định nguyên liệu Hình thái thực vật: Thu hái mẫu, mơ tả phân tính mắt thường, kính lúp, kính hiển vi, đối chiếu mẫu với khóa phân loại với hình ảnh mô tả tài liệu tham khảo để xác định tên loài Khảo sát vi học: Vi phẫu lá, đặc điểm bột dược liệu phương pháp thường quy 2.2.2 Kiểm tra độ tinh khiết Xác định tiêu: độ ẩm, tro hàm lượng chất chiết dược liệu dựa vào Dược Điển Việt Nam V xác định sau84: - Xác định độ ẩm dược liệu cân xác định độ ẩm hồng ngoại theo phụ lục 12.13 theo DĐVN V (trang PL-279) - Xác định tro toàn phần (phụ lục 9.8) tro không tan acid hydrocloric (phụ lục 9.7) theo DĐVN V (trang PL-203 PL-204) - Xác định chất chiết dược liệu tiến hành theo phương pháp chiết nóng cồn theo phụ lục 12.10 – DĐVN V (trang PL-278 PL-279) với dung môi chiết cồn 96 % Kết tiêu lấy giá trị trung bình lần thử độc lập 2.2.3 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật loài Camellia sp Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 34 Bằng dụng cụ chiết xuất thường quy phản ứng định tính đặc trưng để sơ xác định có mặt nhóm hợp chất có dược liệu phân đoạn có độ phân cực tăng dần phương pháp Ciulei cải tiến môn Dược liệu - Đại học Y Dược Tp HCM85 2.2.4 Định lượng polyphenol từ dịch chiết nước Xác định hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước dược liệu theo DĐVN V, hiệu chỉnh môn Dược liệu – Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh84 2.2.4.1 Chuẩn bị mẫu thử Cân xác g bột dược liệu (xay mịn rây qua rây 125) vào bình định mức 250 ml, thêm 150 ml nước vừa đun sôi, siêu âm nhiệt độ thường 20 phút , để nguội, thêm nước vừa đủ, lắc đều, để lắng Lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu, hút xác 20 ml dịch lọc vào bình định mức 100 ml, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc 2.2.4.2 Xây dựng đường chuẩn Cân xác khoảng mg acid gallic chuẩn vào bình định mức 10 ml màu nâu (hoặc bọc giấy bạc), thêm nước để hịa tan vừa đủ đến vạch Hút xác ml dung dịch vào bình định mức 50 ml màu nâu, thêm nước vừa đủ, lắc (dung dịch có nồng độ acid gallic khoảng 0,05 mg/ml) Hút xác 0,5 ml; ml; 1,5 ml; ml; 2,5 ml, ml dung dịch chuẩn vào bình định mức 25 ml riêng biệt bọc giấy nhơm, thêm vào bình ml thuốc thử F-C, sau thêm 11,5 ml; 11 ml; 10,5 ml; 10 ml; 9,5 ml; ml nước vào bình tương ứng, thêm dung dịch natri carbonat 29 % đến vạch, lắc Đo độ hấp thu dung dịch thu 760 nm, chuẩn bị song song mẫu trắng Xây dựng đường chuẩn với độ hấp thu trục tung nồng độ dung dịch trục hồnh (Mẫu trắng: bình định mức 25 mL cho 1ml thuốc thử F-C +12 mL nước + thêm Na2CO3 29 % cho đủ vạch 25 mL) 2.2.4.3 Định lượng polyphenol từ dịch chiết nước Hút xác ml dung dịch thử vào bình định mức 25 ml Thêm ml thuốc thử F-C, trộn đều, thêm 10 ml nước; thêm dung dịch natri carbonat 29% đến vạch, lắc đều, đo độ hấp thụ dung dịch thu phương pháp tính tốn Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 35 hàm lượng polyphenol theo acid gallic dung dịch thử dựa đường chuẩn xây dựng 𝑃= Cx × n × V m × 10−3 - P: Hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước (mg GAE/g dược liệu) - Cx: nồng độ acid gallic xác định từ đường chuẩn (µg/ml) - n: Độ pha lỗng từ dịch chiết gốc - V: Thể tích dịch chiết gốc (ml) - m: khối lượng dược liệu ban đầu Kết lặp lại lần, lấy giá trị trung bình Hàm lượng polyphenol mẫu thử trà xanh quy acid gallic (mg GAE/g dược liệu) 2.2.5 Sàng lọc tác dụng sinh học 2.2.5.1 Mơ hình DPPH Thử nghiệm thực theo mô tả Trieu L H cộng (2019)86 hiệu chỉnh cho phù hợp với thử nghiệm Nguyên tắc: Các chất thử nghiệm xác định hoạt tính chống oxy hóa cách cho tác dụng với gốc tự ổn định DPPH Sự giảm nồng độ DPPH xác định đo quang dựa giảm hấp thu bước sóng 517 nm, thực đĩa 96 giếng - Chuẩn bị hóa chất, mẫu thử dùng thử nghiệm Thuốc thử DPPH pha MeOH nồng độ 0,6 mM (0,2 mM với chất tinh khiết) Mẫu thử pha MeOH để thu dãy nồng độ khảo sát Chứng dương vitamin C pha tương tự mẫu thử MeOH - Thiết kế thí nghiệm Các mẫu bố trí theo bảng 2.1 hình 2.1 Bố trí mẫu thử nghiệm DPPH Dung dịch thử Mẫu chứng trắng (CT) - Mẫu chứng (C) - Mẫu thử trắng (TT) 25 μl Mẫu thử (T) 25 μl DPPH 0,6 mM - 25 μl - 25 μl MeOH 200 μl 175 μl 175 μl 150 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 36 Bố trí thí nghiệm thử DPPH cao cồn cao phân đoạn đĩa 96 giếng - Tiến hành Bước 1: Cho vào giếng MeOH, dung dịch thử, dung dịch chuẩn, DPPH Bước 2: Ủ nhiệt độ phòng 30 phút tối Bước 3: Xác định độ hấp thu bước sóng 517 nm Bước 4: Đánh giá kết Hoạt tính chống oxy hóa xác định theo công thức: % Ức chế DPPH = (1 – 𝐴𝑏𝑠 (𝑇) − 𝐴𝑏𝑠 (𝑇𝑇) ) x 100% 𝐴𝑏𝑠 (𝐶)−𝐴𝑏𝑠 (𝐶𝑇) Abs: Độ hấp thu đo bước sóng 517 nm Khả thu dọn gốc tự DPPH đánh giá dựa giá trị IC50 2.2.5.2 Mơ hình ức chế enzym α-glucosidase Thử nghiệm thực theo mô tả Trieu L H cộng (2018)87, điều chỉnh cho phù hợp với thử nghiệm - Quy trình gồm bước Bước 1: Thêm vào giếng thử 60 μl mẫu thử 50 μl enzym (0,2 U/ml) Bước 2: Ủ hỗn hợp 37 oC 10 phút Bước 3: Thêm 50 μl pNPG (10 mM đệm K3PO4 (0,1 M, pH 6,8) 40 μl đệm K3PO4 0,1 M Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 37 Bước 4: Ủ hỗn hợp 37 oC 20 phút Bước 5: Đo độ hấp thu sản phẩm bước sóng 405 nm Các mẫu dĩa 96 giếng bố trí theo bảng 2.2 hình 2.2 Bố trí mẫu thử nghiệm ức chế enzym α-glucosidase Mẫu chứng trắng (CT) Mẫu chứng (C) Mẫu thử trắng (TT) Mẫu thử (T) Mẫu thử - - 60 60 α-glucosidase (0,2 U/ml) - 50 - 50 p-NPG 10 mM/ K3PO4 0,1 M 50 50 50 50 Đệm K3PO4 0,1 M (pH 6,8) 110 60 50 Đơn vị (μl) Bố trí thí nghiệm ức chế enzym α-glucosidase đĩa 96 giếng Tiến hành thử nghiệm với mẫu thử có nồng độ khác với chứng dương acarbose Khả ức chế enzym α-glucosidase mẫu thử tính theo công thức: % Ức chế = (1 - 𝐴𝑏𝑠 (𝑇)−𝐴𝑏𝑠 (𝑇𝑇) 𝐴𝑏𝑠 (𝐶) − 𝐴𝑏𝑠 (𝑀𝐶𝑇) ) x 100% Abs: Độ hấp thu đo bước sóng 405 nm Khả ức chế enzym α-glucosidase đánh giá dựa giá trị IC50 - Phương pháp xử lý số liệu đánh giá kết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 38 Kết thí nghiệm biểu diễn giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn lần tiến hành thí nghiệm Kết tính tốn vẽ đồ thị phần mềm Microsoft Excel Số liệu xử lý phần mềm, tìm phương trình phù hợp (R2 ≥ 0,99), từ xác định IC50 mẫu nghiên cứu 2.2.6 Chiết xuất phân lập 2.2.6.1 Chiết xuất Chiết xuất phương pháp ngấm kiệt với cồn 96% Cao cồn thu được cô đặc sau phân tán vào nước tiến hành chiết lỏng lỏng với n-hexan (n-Hex), CHCl3, EtOAc, n-BuOH cô thu hồi áp suất giảm để thu phân đoạn Bằng phương pháp chiết tách hỗn hợp nhiều chất cao chiết thành phân đoạn có độ phân cực khác Việc chiết xuất phân lập hợp chất tinh khiết tiến hành định hướng tác dụng sinh học Quy trình chiết xuất phân lập trình bày hình 2.3 Quy trình chiết xuất phân lập Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 39 2.2.6.2 Phân lập tinh chế - Phân lập Sắc ký cột dùng để tách cao chiết thành phân đoạn đơn giản phân lập chất tinh khiết từ phân đoạn - Tinh chế Kết hợp phương pháp sắc ký khác kết tinh phân đoạn dung môi hỗn hợp dung môi thích hợp với lượng tối thiểu Khi có kết tinh, tiến hành lọc lấy tinh thể phễu thủy tinh xốp rửa dung mơi thích hợp, sấy chân không, cân xác định khối lượng (mg) - Kiểm tra độ tinh khiết Độ tinh khiết chất kiểm tra phương pháp sắc ký lớp mỏng: Chất phân lập sắc ký mỏng với hệ dung môi khác Chất cần xác định độ tinh khiết phát UV 254 nm, UV 365 nm màu với thuốc thử thích hợp Chất xem tinh khiết cho vết gọn với Rf khoảng 0,25 - 0,75 2.2.7 Xác định cấu trúc chất phân lập Các chất phân lập xác định cấu trúc dựa liệu phổ UV, MS NMR, kết hợp với liệu tài liệu tham khảo Phổ NMR đo với kỹ thuật 1-D, 2-D (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC, COSY) Mẫu hịa tan dung mơi thích hợp với chất chuẩn nội TMS, thực máy ADVANCE 600 (Bruker) phòng cấu trúc, Viện Hóa học, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, số 18 Hồng Quốc Việt, Hà Nội Độ dời hóa học tính theo thang δ (ppm) với δTMS = 0,00 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 40 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khảo sát thực vật học lồi Camellia sp 3.1.1 Đặc điểm hình thái Cây bụi gỗ nhỏ, cao – 15 m Cành non nhẵn, thưa, màu xanh lục nhạt dần chuyển sang màu nâu (hoặc xám) già Cuống dài 0,4 – 1cm, nhẵn Phiến hình elip hẹp đến rộng, kích thước 3,9 – 7,2 cm (rộng) x 10,4 – 18 cm (dài), đỉnh nhọn dài, gốc tròn, mặt màu xanh lục đậm nhẵn, mặt màu xanh nhạt, gân rõ mặt dưới, màu xanh lục nhạt, nhiều điểm tuyến màu nâu, – đôi gân phụ rõ mặt dưới, mép cưa Lá bắc màu xanh, hoa mang bắc, mép mặt phủ lông mịn, bên nhẵn Cuống hoa ngắn (0,1 – 0,3 cm) bao phủ gần hoàn toàn đài phụ, đài phụ – 7, màu xanh lục nhạt, hình móng, mép đài phụ mặt ngồi có lơng mịn, kích thước 1,5 – 3,0 x – mm, mọc phía đối nhau, phía gồm – xếp chồng lên Các đài hoa (5) (– 8), 0,8 – 1,6 cm (rộng) x 0,9 – 1,8 cm (dài), hình thìa, bên ngồi màu vàng sẫm đến cam, bên màu vàng nhạt bóng, xếp lộn xộn thành vịng khơng rõ rệt, vịng ngồi (4) đài vòng (2) (4) đài Hoa chủ yếu mọc đơn cành nách lá, nụ hoa hình cầu Cánh hoa rời, số cánh 12 – 22 xếp thành nhiều lớp lộn xộn kích thước 1,7 – 2,8 cm (dài) x 1,4 – 2,4 cm (rộng), cánh ngồi phủ nhiều lơng, cánh cịn lại có lơng thưa, mặt tất cánh khơng lơng, hình dạng cánh hoa thay đổi từ ngồi vào, cánh từ gần trịn, bầu dục hay bầu dục thuôn, cánh hoa màu vàng sẫm (đôi màu vàng nhạt), sáp, giòn, dày chuyển nhạt mỏng rìa, bên ngồi màu vàng đến vàng đậm, bên màu vàng sáng Nhị nhiều, dài 1,5 – 2,0 cm, dạng sợi mảnh, xếp thành bó kích thước 2,5 – cm, nhị bên ngồi dính với với cánh hoa bên trong, nhị – mm (rộng) x 15 – 20 mm (dài) Nhụy bầu ô, nỗn, màu vàng, khơng lơng Vịi nhụy hợp khoảng 2/3 chiều dài, phần lại rời (hình 3.1 3.2) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 41 Chú thích: Cành già (A), Cành non (B), Chồi nách (C), Lá mặt trước sau (D), Hoa đầu cành (E) + (F), Nụ hoa (G), Nụ hoa cắt ngang (H) cắt dọc (I), Lá bắc (J), Lá đài phụ (K), Lá đài (L), Cánh hoa (M), Nhị (N), Hạt phấn (O), Vòi nhụy (P), Bầu nhụy (Q) Hình 3.1 Đặc điểm hình thái thực vật loài Camellia sp thu hái Đồng Nai Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 42 Hình 3.2 Hình thái hoa ngồi tự nhiên Qua phân tích mẫu thu thập được, nhận thấy mẫu nghiên cứu có đặc điểm tiêu biểu tương đồng với loài C dormoyana như: (1) Hoa chủ yếu mọc đơn đầu cành, cuống nhỏ khơng có cuống, bao phủ đài phụ chồng lên nhau, (2) Hòa màu vàng đến vàng đậm, cỡ vừa, kích thước – cm, (3) cánh hoa nhiều (>12 cánh), hình thìa, màu vàng nhạt đến vàng đậm, phần rìa nhạt màu hơn, giống sáp, giịn, dễ gãy, (4) Bầu trên, – ô, nhẵn, (5) Vòi nhụy nhẵn, – vòi hợp nhất, (6) Quả nang hình cầu, thường có khía dọc sâu11 Kết so sánh Tiến sĩ Lương Văn Dũng (Giám đốc Trung tâm Đa dạng sinh học Biến đổi khí hậu, Khoa Sinh học, Đại học Đà Lạt, Việt Nam) kiểm tra xác nhận, xác định đối tượng nghiên cứu đề tài Trà hoa vàng Dormoy – Camellia dormoyana (Pierre) Sealy 3.1.2 Đặc điểm vi học 3.1.2.1 Lá Biểu bì: Bóc tách quan sát biểu bì nhận thấy tế bào biểu bì biểu bì kích thước khơng vách uốn lượn (A, B, C), chứa hạt tinh bột (a), lục lạp (b) tinh thể calci oxalat hình cầu gai (c) Tế bào lỗ khí (d) hình bầu dục gần trịn, dạng dị bào tập trung biểu bì dưới, bao quanh vởi – tế bào bạn (e) hình dạng dẹp, kích thước nhỏ tế bào biểu bì (g), nằm rời rạc, đơi nằm thành cụm lỗ khí (h) Điểm tuyến (cork- Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 43 wart - f) màu nâu tập trung biểu bì dưới, có chức trao đổi khơng khí88 Cả mặt khơng có lơng Đặc điểm biểu bì trình bày hình 3.3 Chú thích: Phóng đại 40X; A: Biểu bì trên; B+C: Biểu bì dưới; a: hạt tinh bột; b: lục lạp; c: calci oxalat cầu gai; d: Tế bào lỗ khí; e: Tế bào bạn; f: Điểm tuyến; g: Tế bào biểu bì; h: Cụm khí khổng; i: Lỗ khí Hình 3.3 Đặc điểm cấu tạo biểu bì C dormoyana - Gân Vi phẫu (A) mặt lõm, mặt lồi tròn, gân dày gấp – lần phiến Biểu bì lớp hình chữ nhật đến gần trịn, vách cellulose, kích thước đều, tế bào biểu bì lớn gấp đơi tế bào biểu bì dưới, lớp cutin vách dày Mô dày góc nằm biểu bì biểu bì dưới, gồm – lớp tế bào hình đa giác vách cellulose, kích thước khơng đều, xếp lộn xộn Tiếp đến mô mềm đạo gồm nhiều lớp tế bào hình đa giác vách cellulose, kích thước khơng đều, nhiều tế bào có kích thước lớn gấp – biểu bì trên, tế bào mơ cứng thể cứng nhiều, tập trung chủ yếu vùng mơ mềm đạo Trụ bì hóa mơ cứng phía ngồi libe gồm – lớp tế bào hình đa giác, vách tẩm chất gỗ, kích thước đều, xếp lộn xộn thành vịng bao quanh bó mạch Trong vùng tủy có nhiều bó dẫn xếp hình cung, gỗ trên, Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 44 libe Mạch gỗ phát triển, mô mềm gỗ tế bào hình đa giác đến gần trịn, vách tẩm chất gỗ, kích thước khơng đều, xếp xuyên tâm Libe tế bào hình đa giác kích thước nhỏ, khơng đều, xếp lộn xộn thành đám Thể cứng vách hóa gỗ dày, phân nhánh nhỏ, ngắn nhọn, phân bố chủ yếu vùng mơ mềm đạo Tinh thể calci oxalat hình cầu gai nằm rải rác vùng mô mềm gỗ mô mềm đạo - Phiến Phiến (B) gồm biểu bì biểu bì lớp tế bào hình chữ nhật, tế bào biểu bì lớn biểu bì dưới, biểu bì có vách dày cutin dày, lỗ khí nhiều biểu bì Phiến có cấu tạo dị thể bất đối xứng Mô mềm giậu lớp tế bào thuôn dài, dài tế bào biểu bì 1,5 – lần, xếp xít vng góc với biểu bì Mơ mềm khuyết gồm 10 – 13 lớp tế bào đa giác gần tròn, xếp lộn xộn, khuyết lớn gấp – lần tế bào mô mềm Gân phụ với vịng bao mơ cứng bao quanh bó mạch dẫn nằm rải rác Tinh thể calci oxalat hình cầu gai nằm rải rác mô mềm Xuất nhiều thể cứng kích thước lớn, nhọn, phân nhánh, kéo dài từ biểu bì đến biểu bì Đặc điểm vi phẫu chi tiết trình bày hình 3.4 3.5 Hình 3.4 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo C dormoyana Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 Hình 3.5 Đặc điểm vi phẫu C dormoyana 3.1.2.2 Cuống Vi phẫu tiết diện dần tròn, mặt lõm (A) Tế bào biểu bì giống nhau, lớp tế bào hình chữ nhật đến gần trịn, kích thước biểu bì lớn biểu bì dưới, cutin dày, lông che chở đơn bào thưa thớt Dưới biểu bì mơ dày góc, gồm 15-20 lớp tế bào xếp xuyên tâm tế bào biểu bì xếp lộn xộn tế bào biểu bì Dưới lớp mơ dày xếp xun tâm mô mềm khuyết gồm tế bào đa giác hay gần trịn vách cellulose kích thước khơng xếp lộn xộn Bó dẫn xếp hình cung, gỗ trên, libe Mạch gỗ hình đa giác hay gần trịn, kích thước khơng đều, xếp thành dãy xun tâm xen kẽ với – dãy mô mềm gỗ vách cellulose Libe tế bào đa giác, vách cellulose kích thước khơng xếp lộn xộn Dưới libe nhiều lớp mơ dày trịn, tế bào vách cellulose dày, kích thước khơng đều, xếp lộn xộn tạo thành vòng cung bao lấy libe Thể cứng calci oxalat hình cầu gai nhiều, phân bố chủ yếu vùng mô dày mô mềm, thể cứng kích thước lớn, phân nhánh nhiều (a) hay (b), thành dày, đầu nhọn Mô cứng nằm rải rác vùng mơ mềm bó dẫn Đặc điểm vi phẫu cuống trình bày hình 3.6 3.7 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 46 Hình 3.6 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo cuống C dormoyana Hình 3.7 Đặc điểm vi phẫu cuống C dormoyana 3.1.2.3 Thân Vi phẫu tiết diện gần tròn, vùng vỏ chiếm 1/5, vùng trung trụ chiếm 4/5 Biểu bì gồm lớp tế bào hình đa giác, kích thước khơng đều, vách cellulose Dưới biểu bì – lớp tế bào mơ dày góc, kích thước khơng Mơ mềm vỏ đạo gồm nhiều lớp tế bào đa giác gần tròn, vách cellulose uốn lượn, tế bào lớp phía bị ép dẹp Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 47 Trụ bì hố sợi gồm – lớp tế bào hình đa giác, kích thước đều, vách tẩm chất gỗ, xếp thành vịng liên tục, mơ cứng nằm rải rác trụ bì Tầng sinh bần bên trụ bì tạo bần gồm nhiều lớp tế bào hình chữ nhật, vách cellulose uốn lượn Libe tế bào hình đa giác, vách cellulose, kích thước nhỏ, khơng đều, xếp thành cụm Libe gồm – lớp tế bào hình đa giác, vách cellulose, xếp xuyên tâm Gỗ liên tục, mạch gỗ hình đa giác gần trịn, kích thước khơng phân bố vùng mô mềm gỗ, mô mềm gỗ tế bào hình đa giác hình chữ nhật, vách tẩm chất gỗ, kích thước khơng đều, xếp thành dãy Tia tủy hẹp gồm – dãy tế bào hình bầu dục đa giác gần trịn vách tẩm chất gỗ Gỗ cách tế bào hình đa giác gần tròn, vách tẩm chất gỗ, xếp thành dãy xuyên tâm, dãy gồm – mạch hình đa giác Mơ mềm gỗ tế bào hình đa giác gần trịn vách cellulose, kích thước không đều, xếp lộn xộn thành cụm vùng mô mềm tủy Mô mềm tủy đạo tế bào hình đa giác trịn trịn, kích thước khơng đều, nhiều tế bào bề mặt vách hóa mơ cứng có ống trao đổi phân nhánh, mơ mềm bên gồm tế bào hóa mơ cứng thường có kích thước nhỏ xen với tế bào to vách cellulose Thể cứng kích thước nhỏ, vách dày, phân nhánh, nằm rải rác vùng mô mềm vỏ, mô cứng phân bố khắp thành vòng bao bên trụ bì Calci oxalat hình cầu gai phân bố tập trung nhiều vùng libe mô mềm tủy Đặc điểm chi tiết vi phẫu thân trình bày hình 3.8 3.9 Hình 3.8 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo thân C dormoyana Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 48 Hình 3.9 Đặc điểm vi phẫu thân C dormoyana 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu Bột có màu xanh rêu, mùi thơm, vị đắng chát Quan sát kính hiển vi gồm có thành phần: Mảnh biểu bì trên, mảnh biểu bì có mang lỗ khí, thể cứng lớn, phân nhánh, bị đứt gãy phần, tinh thể calci oxalat hình cầu gai nằm rải rác, bó sợi, mạch xoắn, khối nhựa, hạt tinh bột hình cầu, mặt ngồi nhẵn, nằm rời rạc Các cấu tử có mặt bột dược liệu trình bày hình 3.10 Chú thích: A: Bột dược liệu; B: biểu bì trên; C: Biểu bì lỗ khí; D: Bó sợi; E+F: Thể cứng; G: Tinh thể calci oxalat; H: Mạch xoắn; I: Khối nhựa; J: Tinh bột Hình 3.10 Một số cấu tử bột Camellia dormoyana Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 49 3.2 Kiểm tra độ tinh khiết Các tiêu gồm độ ẩm, độ tro, hàm lượng chất chiết được thực theo DĐVN V, phụ lục 9.6, 9.7, 9.8 12.10, tiến hành mẫu lấy kết trung bình Kết trình bày Bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết kiểm tinh khiết C dormoyana Chỉ tiêu Độ ẩm (%) Tro tồn phần (%) Tro khơng tan acid (%) Hàm lượng chất chiết (chiết nóng/ cồn 96%) Lần 11,02 10,04 0,28 Lần 10,88 10,21 0,36 Lần 11,22 9,63 0,29 Trung bình 11,04 9,96 0,31 7,07 6,61 7,24 6,97 Các thơng số lý hóa xây dựng nghiên cứu này, kết cho thấy mẫu đạt độ tinh khiết với tiêu nằm giới hạn thông thường Dược Điển Việt Nam V nghiên liệu làm thuốc 3.3 Khảo sát sơ thành phần hóa học loài C dormoyana Kết cho thấy loài C dormoyana có diện hợp chất saponin; hợp chất phenolic tanin, polyphenol, flavonoid, acid hữu cơ; ngồi cịn có chất khử, carotenoid, triterpen, carotenoid tinh dầu Kết trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết sơ thành phần hóa học C dormoyana Nhóm hợp chất Tinh dầu Chất béo Carotenoid Triterpen Anthranoid Flavonoid Proanthocyanidin Tanin Polyphenol Saponin Acid hữu Chất khử Dịch chiết ether + + ++ + +/+/- Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Dịch chiết cồn 96% + + ++++ +++ +++ + +++ Dịch chiết nước Kết luận ++ +++ +++ +++ + ++ + + + + +/+ +/+ + + + + Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 50 3.4 Định lượng polyphenol từ dịch chiết nước Hàm lượng polyphenol xác định phương pháp Folin-Ciocalteu mơ tả mục 2.2.7 3.4.1 Phương trình đường chuẩn acid gallic Mối tương quan nồng độ acid gallic độ hấp thu quang học bước sóng 760 nm trình bày Bảng 3.3, hình 3.11 phụ lục Bảng 3.3 Mối tương quan nồng độ acid gallic độ hấp thu Lượng cân (mg) Nồng độ acid gallic (μg/ml) ODtb (760 nm) 5,00 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 0,1330 0,2703 0,3847 0,5033 0,6153 0,7347 y = 0,1189x + 0,024; R² = 0,9991 Hình 3.11 Phương trình đường chuẩn acid gallic 3.4.2 Hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước từ C dormoyana Dựa vào đường chuẩn acid gallic để xác định hàm lượng polyphenol có C dormoyana, có so sánh với loài C sinensis cung cấp TS Nguyễn Thành Triết – Khoa YHCT – ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Bảng 3.4 Hàm lượng polyphenol dịch chiết nước từ C dormoyana C dormoyana Lần Lần Lần Trung bình Khối lượng (g) 1,0043 1,0051 1,0044 Hàm ẩm tb (%) OD (760 nm) 11,84 0,238 0,245 0,232 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g) 31,7615 32,7743 30,8679 31,80 ± 0,9538 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 51 C sinensis Lần Lần Lần Trung bình Khối lượng (g) 1,0034 1,0001 1,0032 Hàm ẩm tb (%) OD (760 nm) 11,62 0,549 0,521 0,533 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g) 77,8011 73,8947 75,4450 75,71 ± 1,9670 Như vậy, hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước có g C dormoyana C sinensis xác định 31,80 ± 0,9538 75,71 ± 1,9670 (mg GAE/g) Kết cho thấy hàm lượng polyphenol trà vàng thấp nhiều so với trà xanh điều kiện phương pháp thử 3.5 Nghiên cứu hóa học 3.5.1 Chiết phân đoạn từ cao cồn C dormoyana Bột C dormoyana (4 kg) ngấm kiệt với cồn 96 % thu dịch chiết cồn, tiến hành cô quay chân không để bay bếp cách thủy thu 570 g cao cồn Trải qua trình lắc phân bố lỏng-lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần thu phân đoạn trình bày hình 3.12 Hình 3.12 Kết phân tách phân đoạn từ cao cồn C dormoyana Như vậy, kết thúc trình lắc phân bố thu phân đoạn n-Hex (107 g), CHCl3 (37 g), EtOAc (45 g), n-BuOH (60 g) Các phân đoạn khai triển sắc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 52 ký lớp mỏng với dung môi khai triển CHCl3 – MeOH – HCOOH (8:2:0,1) để sơ đánh giá so sánh thành phần hóa học Kết trình bày hình 3.13 CHCl3 – MeOH – HCOOH (8:2:0,1) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.13 Sắc ký phân đoạn từ cao cồn C dormoyana Kết sắc ký cho thấy phân đoạn EtOAc n-BuOH có nhiều vết tắt quang UV254 số vết phát huỳnh quang UV365 Bản mỏng nhúng thuốc thử VS cho thấy có xuất số vết màu vàng vàng cam tương ứng các vết tắt quang, nhiên đa số vết tắt quang UV 254 không màu với thuốc thử VS Trên mỏng nhúng thuốc thử FeCl3 1% cho thấy phân đoạn EtOAc cho nhiều vết màu xanh đen xanh đậm, chứa nhiều hợp chất pyrogallic Các phân đoạn tiếp tục sàng lọc sinh học để lựa chọn phân đoạn có hoạt tính, từ phân lập hợp chất tinh khiết 3.5.2 Khảo sát hoạt tính sinh học cao phân đoạn 3.5.2.1 Khảo sát hoạt tính thu dọn gốc tự DPPH Các mẫu cao đánh giá khả chống oxy hóa phương pháp DPPH mơ tả Kết trình bày bảng 3.5, phụ lục 2, Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 53 Bảng 3.5 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa phương pháp DPPH Nồng độ (µg/ml)/ % ức chế Mẫu Cồn n-Hex CHCl3 EtOAc nBuOH Vitamin C 18,75 12,5 9,375 6,25 3,125 88,4965 63,3535 46,4379 33,0217 17,1269 100 - - - - 25,1412 - - - - 100 50 25 12,5 6,25 89,6864 47,8878 23,0177 13,7840 4,4637 7,8125 6,25 4,6875 3,125 1,5625 81,3708 67,1315 49,9394 31,0275 7,6562 25,00 18,75 12,5 9,375 6,25 90,1546 76,5717 54,6405 46,076 37,0101 12,5 10,0 7,5 5,0 2,5 86,7121 74,1013 58,6629 49,6129 37,3655 R2 IC50 (µg/ml) 0,9973 10,07 ± 0,1585 - - 0,9974 54,63 ± 2,1262 0,9915 4,91 ± 0,0519 0,9937 10,63 ± 1,1751 0,9943 5,21 ± 0,2143 Kết thử nghiệm cho thấy khả chống oxy hóa cao cồn tồn phần phân đoạn có khác biệt Một số cao cho tác dụng mạnh, cụ thể phân đoạn EtOAc cho tác dụng mạnh với giá trị IC50 4,91 ± 0,0519 µg/ml cao chứng dương vitamin C (IC50 5,21 ± 0,2143 µg/ml), phân đoạn n-BuOH cao cồn toàn phần với giá trị IC50 10,63 ± 1,1751 10,07 ± 0,1585 µg/ml, phân đoạn CHCl3 cho tác dụng thu dọn gốc tự yếu với giá trị IC50 54,63 ± 2,1262 µg/ml Cuối phân đoạn n-Hex thể khả chống oxy hóa yếu phân đoạn với giá trị 25,14 % nồng độ 100 µg/ml 3.5.2.2 Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Các mẫu cao cồn cao phân đoạn đánh giá hoạt tính ức chế enzym αglucosidase mơ tả Kết trình bày bảng 3.6 phụ lục 5, Bảng 3.6 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Nồng độ (µg/ml)/ % ức chế Mẫu Cồn n-Hex CHCl3 1,875 1,5 0,75 0,375 0,1875 87,3698 63,2918 27,9939 16,9333 4,0610 75 56,25 37,5 28,125 18,75 76,6033 63,0291 48,8124 36,7354 28,8173 7,5 3,75 1,875 0,9375 0,46875 89,0398 49,3405 17,0712 8,4641 2,6372 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn R2 IC50 (µg/ml) 0,9910 1,15 ± 0,0522 0,9907 42,19 ± 1,7010 0,9917 4,23 ± 0,0636 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 54 EtOAc n-BuOH Acarbose 1,5 0,75 0,375 0,1875 0,09375 88,5073 44,7653 20,8908 10,7198 6,8601 3,75 1,875 1,5 0,75 0,375 98,3074 46,4348 35,4257 17,7025 5,5572 1500 750 375 187,5 93,75 69,8923 55,8371 37,9316 26,7762 15,6983 0,9992 0,85 ± 0,0072 0,9992 1,99 ± 0,0503 0,9909 584,70 ± 56,5100 Kết cho thấy khả ức chế enzym α-glucosidase cao toàn phần cao phân đoạn mạnh, cao phân đoạn EtOAc với giá trị IC50 0,85 ± 0,0072 µg/ml), cao cồn tồn phần (IC50 1,15 ± 0,0522 µg/ml), n-BuOH (IC50 1,99 ± 0,0503 µg/ml), CHCl3 (IC50 4,23 ± 0,0636 µg/ml), khả ức chế enzym cao cồn toàn phần, phân đoạn CHCl3, EtOAc nBuOH chênh lệch không đáng kể, nHex cho thấy hiệu ức chế yếu (IC50 42,19 ± 1,7010 µg/ml) , nhiên cao nhiều so với chứng dương acarbose (IC50 584,70 ± 56,51 µg/ml) Nhận xét: Thông qua sàng lọc ban đầu, cao cồn toàn phần, phân đoạn CHCl3, EtOAc n-BuOH từ C dormoyana thể hoạt tính mạnh Trong đó, phân đoạn EtOAc cho tác dụng vượt trội mơ hình DPPH ức chế α-glucosidase, phân đoạn n-BuOH, cao cồn phân đoạn CHCl3 Phân đoạn n-Hex cho thấy khả ức chế enzym α-glucosidase tốt, nhiên khả dọn gốc tự DPPH (100 µg/ml) yếu nhiều so với phân đoạn cịn lại Cao cồn tồn phần có hoạt tính cao mơ hình thử nghiệm, chí cịn cao phân đoạn n-BuOH, CHCl3 n-Hex, hiệp đồng tác động hợp chất có mặt cao cồn Kết so sánh tác dụng chống oxy hóa ức chế enzym α-glucosidase phân đoạn trình bày hình 3.14 Qua kết khảo sát, phân đoạn EtOAc lựa chọn để tiếp tục phân lập thử hoạt tính chất phân lập mơ hình thử nghiệm Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh IC50 (µg/ml) 55 Hình 3.14 So sánh hoạt tính cao chiết mơ hình 3.5.3 Phân tách phân đoạn EtOAc kỹ thuật sắc ký 3.5.3.1 Phân đoạn EtOAc Phân đoạn EtOAc (E) phân tách thành phân đoạn nhỏ kỹ thuật sắc ký cột tải với thông số sau: - Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước x 60 cm, rửa sạch, sấy khô - Pha tĩnh: 500 g silica gel, cỡ hạt trung bình 40 – 63 μm, nhồi cột ướt - Mẫu: 45 g phân đoạn EtOAc, nạp mẫu khô - Pha động: chạy gradient với dung môi CHCl3, tăng dần tỷ lệ MeOH đến 50%, cuối MeOH 100% - Thể tích hứng phân đoạn: 100 ml - Kiểm tra phân đoạn sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi EtOAc-MeOH-H2OHCOOH (100:17:13:0,2), phát cách soi UV 254 nm, UV 365 nm, nhúng thuốc thử VS, FeCl3 Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn hứng có sắc ký đồ giống nhau, cô quay để thu phân đoạn Kết quả: Từ 40g phân đoạn EtOAc, qua sắc ký cột tải thu phân đoạn từ E.1 - Khối lượng phân đoạn trình bày bảng 3.7 hình 3.15 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 56 Bảng 3.7 Kết sắc ký cột tải phân đoạn EtOAc Phân đoạn E.1 E.2 E.3 E.4 E.5 Phân đoạn hứng 0-14 15-37 38-87 88-113 114-196 Hệ chạy cột (CHCl3 - MeOH) 95:5 95:5 90:10 90:10 90:10 E.6 197-284 85:15 – 80:20 E.7 285-465 80:20 – 50:50 – MeOH 100 % Khối lượng (g) 0,254 0,243 1,80 2,32 3,19 5,90 (Tủa 468,8 mg) 24,48 EtOAc-MeOH-H2O- HCOOH (100:17:13:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.15 Kết sắc ký phân đoạn EtOAc 3.5.3.2 Phân đoạn E.3 Phân tách phân đoạn E.3 sắc ký cột cổ điển với thông số sau: - Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước 2,5 x 60 cm, rửa sạch, sấy khô - Pha tĩnh: 100 g silica gel, cỡ hạt trung bình 40 – 63 μm, nhồi cột ướt - Mẫu: 1,80 g phân đoạn E.3, nạp mẫu khô - Pha động: chạy với dung môi EtOAc, sau tăng lên EtOAc-MeOH (90:10) cuối MeOH 100% - Thể tích hứng phân đoạn: 10 ml - Kiểm tra phân đoạn sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi CHCl3-MeOHHCOOH (9:1:0,2), phát cách soi UV 254 nm, UV 365 nm, nhúng thuốc thử VS, FeCl3 Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn hứng có sắc ký đồ giống nhau, cô quay để thu phân đoạn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 57 Kết quả: Từ 1,80 g phân đoạn E.3 tiến hành sắc ký thu phân đoạn từ E.3.1-6 Kết trình bày bảng 3.8 hình 3.16 Bảng 3.8 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.3 Phân đoạn E.3.1 E.3.2 E.3.3 E.3.4 E.3.5 E.3.6 Phân đoạn hứng 0-5 6-15 16-34 35-62 63-91 92-251 Hệ chạy cột EtOAc 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 90:10 – MeOH 100 % Khối lượng (mg) 142,3 191,5 280,6 (tủa) 106,2 260,9 477,4 CHCl3 – MeOH – HCOOH (9:1:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.16 Kết phân tách phân đoạn E.3 sắc ký cột 3.5.3.3 Phân đoạn E.4 Phân tách phân đoạn E.4 sắc ký cột cổ điển với thông số sau: - Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước 2,5 x 60 cm, rửa sạch, sấy khô - Pha tĩnh: 100 g silica gel, cỡ hạt trung bình 40 – 63 μm, nhồi cột ướt - Mẫu: 2,32 g phân đoạn E.4, nạp mẫu khô - Pha động: chạy với dung mơi EtOAc, sau tăng lên EtOAc-MeOH (90:10) cuối MeOH 100% - Thể tích hứng phân đoạn: 15 ml - Kiểm tra phân đoạn sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi CHCl3-MeOHHCOOH (9:1:0,2), phát cách soi UV 254 nm, UV 365 nm, nhúng thuốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 58 thử VS, FeCl3 Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn hứng có sắc ký đồ giống nhau, cô quay để thu phân đoạn Kết quả: Từ 2,32 g phân đoạn E.3 tiến hành sắc ký thu phân đoạn từ E.4.1-7 Kết trình bày bảng 3.9 hình 3.17 Bảng 3.9 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.4 Phân đoạn E.4.1 E.4.2 E.4.3 E.4.4 E.4.5 E.4.6 E.4.7 Phân đoạn hứng 0-16 17-25 26-70 71-100 101-145 146-189 190-287 Hệ chạy cột EtOAc 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 90:10 90:10 – MeOH 100 % Khối lượng (mg) 379,1 (tủa) 186,4 394,3 177,0 68,4 253,3 493,8 CHCl3 – MeOH – HCOOH (9:1:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.17 Kết phân tách phân đoạn E.4 sắc ký cột 3.5.3.4 Phân đoạn E.5 Phân tách phân đoạn E.5 sắc ký cột cổ điển với thông số sau: - Cột thủy tinh trung tính, thành dày, kích thước 2,5 x 60 cm, rửa sạch, sấy khô - Pha tĩnh: 100 g silica gel, cỡ hạt trung bình 40 – 63 μm, nhồi cột ướt - Mẫu: 3,19 g phân đoạn E.5, nạp mẫu khô - Pha động: chạy với dung mơi EtOAc, sau tăng lên EtOAc-MeOH (90:10) cuối MeOH 100% - Thể tích hứng phân đoạn: 15 ml Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 59 - Kiểm tra phân đoạn sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi CHCl3-MeOHHCOOH (8:2:0,2), phát cách soi UV 254 nm, UV 365 nm, nhúng thuốc thử VS, FeCl3 Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn hứng có sắc ký đồ giống nhau, cô quay để thu phân đoạn Kết quả: Từ 2,32 g phân đoạn E.3 tiến hành sắc ký thu phân đoạn từ E.5.1-6 Kết trình bày bảng 3.10 hình 3.18 Bảng 3.10 Kết sắc ký cột tải phân đoạn E.5 Phân đoạn E.5.1 E.5.2 E.5.3 E.5.4 E.5.5 E.5.6 Phân đoạn hứng 0-23 24-47 48-97 98-151 152-190 191-242 Hệ chạy cột EtOAc 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 90:10 – MeOH 100 % Khối lượng (mg) 595,7 (tủa) 103,6 236,5 574,3 (tủa) 320,3 (tủa) 664,7 CHCl3 – MeOH – HCOOH (8:2:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.18 Kết phân tách phân đoạn E.5 sắc ký cột 3.5.4 Phân lập chất tinh khiết từ phân đoạn 3.5.4.1 Phân đoạn E.3 Phân đoạn E.3.3 (280,6 mg) xuất tủa màu vàng, tiến hành lọc rửa tủa nhiều lần với EtOAc kết tinh nhiều lần MeOH lạnh thu 20,8 mg tủa vơ định hình màu vàng sáng (C3) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 60 3.5.4.2 Phân đoạn E.4 Phân đoạn E.4.1 (279,1 mg) xuất tủa màu vàng, tiến hành lọc rửa tủa kết tinh lại MeOH lạnh thu 17,2 mg tủa hình kim hình màu vàng nâu (C2) Phân đoạn E.4.6 (253,3 mg) tinh chế sắc ký sephadex LH-20, để bay tự nhiên xuất tủa màu trắng Tủa lọc rửa MeOH lạnh thu 17,9 mg tủa vơ định hình màu trắng (C4) 3.5.4.3 Phân đoạn E.5 Phân đoạn E.5.1 (595,7 mg) tinh chế sắc ký sephadex LH-20, để bay tự nhiên thu phân đoạn xuất kết tủa E.5.1.1 E.5.1.2 - Phân đoạn E.5.1.1 cho tủa dạng tinh thể hình kim, tiến hành rửa kết tinh lại nhiều lần với hệ dung môi CHCl3-EtOAc (1:1) lạnh thu 114,6 mg tủa vơ định hình màu nâu (C5) - Phân đoạn E.5.1.2 cho tủa vô định hình màu nâu, lọc rửa tủa với hệ dung môi CHCl3-EtOAc (1:1) lạnh thu 8,7 mg tủa vơ định hình màu cam (C6) Phân đoạn E.5.4 (574,3 mg) xuất tủa màu trắng, tủa lọc, rửa kết tinh lại nhiều lần MeOH lạnh, thu 9,7 mg tủa vơ định hình màu trắng (C1) Phân đoạn E.5.5 (320,3 mg) xuất tủa màu trắng, tủa lọc, rửa kết tinh lại nhiều lần MeOH lạnh, thu 3,5 mg tủa vơ định hình màu trắng (C8) 3.5.4.4 Phân đoạn E.6 Phân đoạn E.6 thu 468,8 mg tủa vô định hình màu vàng nâu Tiến hành lọc rửa kết tinh lại nhiều lần MeOH lạnh thu 107,4 mg tủa vơ định hình màu vàng tươi (C7) Nhận xét: Từ cao EtOAc (45g) kỹ thuật sắc ký cột tải thu phân đoạn Từ phân đoạn E.3, 3.4, E.5 E.6 thu hợp chất C1-8 Hợp chất C5 (114,6 mg) có khối lượng nhiều C8 (3,5 mg) Các hợp chất tiếp tục kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng 3.5.5 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 61 Độ tinh khiết chất phân lập xác định sắc ký lớp mỏng hệ dung môi khác với độ phân cực khác 3.5.5.1 Phân đoạn E.3 Độ tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.3 kiểm tra sắc ký lớp mỏng hệ dung môi: - CHCl3-MeOH-HCOOH (9:1:0,2) - EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH (100:17:13:0,2) - CHCl3-MeOH-H2O-HCOOH (55:35:10:0,2) Kết kiểm tinh khiết sắc ký lớp mỏng trình bày hình 3.19 CHCl3-MeOH-HCOOH 9:1:0,2 EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH CHCl3-MeOH-H2O-HCOOH 100:17:13:0,2 55:35:10:0,2 Hình 3.19 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.3 3.5.5.2 Phân đoạn E.4 Độ tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.4 kiểm tra sắc ký lớp mỏng hệ dung môi: - CHCl3-MeOH-HCOOH (9:1:0,2) - EtOAc-HCOOH (10:0,2) - EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH (100:17:13:0,2) Kết kiểm tinh khiết sắc ký lớp mỏng trình bày hình 3.20 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 62 CHCl3-MeOH-HCOOH 9:1:0,2 EtOAc-HCOOH 10:0,2 EtOAc-MeOH-H2OHCOOH 100:17:13:0,2 Hình 3.20 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.4 3.5.5.3 Phân đoạn E.5 Độ tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.5 kiểm tra sắc ký lớp mỏng hệ dung môi: - CHCl3-MeOH-HCOOH (8:2:0,2) - CHCl3-EtOAc-HCOOH (55:35:10:0,2) - EtOAc-MeOH-HCOOH (8:2:0,2) Kết kiểm tinh khiết sắc ký lớp mỏng trình bày hình 3.21 UV254 CHCl3-MeOH-HCOOH (8:2:0,2) UV365 VS Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn FeCl3 1% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 63 CHCl3-MeOH-H2O-HCOOH (55:35:10:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% EtOAc-MeOH-HCOOH (8:2:0,2) UV254 UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.21 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.5 3.5.5.4 Phân đoạn E.6 Độ tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.6 kiểm tra sắc ký lớp mỏng hệ dung môi: - CHCl3-MeOH-HCOOH (9:1:0,2) - EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH (100:17:13:0,2) - CHCl3-MeOH-HCOOH (55:35:0,2) Kết kiểm tinh khiết sắc ký lớp mỏng trình bày hình 3.22 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 64 EtOAc-MeOH-HCOOH 9:1:0,2 EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH 100:17:13:0,2 CHCl3-MeOH-H2O-HCOOH 55:35:10:0,2 Hình 3.22 Kiểm tinh khiết chất phân lập từ phân đoạn E.6 Kết luận: Kết cho thấy chất phân lập cho vết sắc ký, chất xác định tinh khiết sắc ký lớp mỏng hệ dung môi với độ phân cực khác Thông qua kỹ thuật sắc ký kết tinh phân đoạn, từ 45 g phân đoạn EtOAc phân lập chất, hợp chất đạt độ tinh khiết mỏng Kết phân lập thể hình 3.23 hình 3.24 Hình 3.23 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn EtOAc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 65 UV254 EtOAc-MeOH-H2O-HCOOH (100:17:13:0,2) UV365 VS FeCl3 1% Hình 3.24 Kết phân lập chất từ phân đoạn EtOAc Kết kiểm tra cho thấy hợp chất tinh khiết mỏng, cấu trúc chất xác định thông qua phổ MS MNR 3.5.6 Xác định cấu trúc chất phân lập 3.5.6.1 Xác định cấu trúc chất C1 Bảng 3.11 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C1 13 C (δppm) 158,3 157,6 152,0 150,7 141,9 141,4 138,4 131,5 CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV H δppm; nH; J (Hz) - 115,6 CIV - - 10 113,8 CIV - - 11 112,6 CIV - - 12 112,4 CH 7,86 s (1H) 157,6; 152,0; 141,9; 113,8 13 14 111,9 104,4 CIV CH2 6,40 s (2H) 15 104,1 CH 7,58 s (1H) 16 17 18 101,3 77,3 76,5 CH-O CH-O CH-O 5,16 d (1H, 7,2) 3,41 m 3,29 150,7; 138,4 158,3; 150,7; 138,4; 131,5; 115,6; 111,9 152,0 C1 DEPT Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn HMBC - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 66 19 20 21 73,3 69,5 61,7 CH-O CH-O OCH3 22 60,6 CH-O 3,31 3,24 m 4,10 s (3H) 3,52 m 3,70 d (1H, 10,2) 141,9 77,3 C1 phân lập từ phân đoạn E.5.4, kết tủa vơ định hình màu trắng, tắt quang UV 254 nm phát huỳnh quang UV 365 nm Không màu với thuốc thử VS FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 8) xuất 22 tín hiệu carbon, khơng có tín hiệu cao bất thường Trong có 16 tín hiệu cộng thường vùng trường thấp (δC 101,3 – 158,3), dựa vào phổ DEPT (phụ lục 10) xác định có tín hiệu carbon CH, tín hiệu carbon CH2 12 tín hiệu carbon bậc IV, tín hiệu cịn lại nằm vùng (δC 60,0 – 80,0) xác định có tín hiệu carbon CH, tín hiệu carbon CH2 tín hiệu carbon CH3 Các tín hiệu gợi ý cho cấu trúc với vòng thơm riêng biệt phần đường liên kết dây nối oxy thông qua tín hiệu carbon anomer (δC 101,3) proton anomer δH 5,16 d (1H, 7,2 Hz) phổ HSQC HMBC (phụ lục 11 12) Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 9) xuất đỉnh đơn, tín hiệu proton δH 7,86 s (1H) δH 7,58 s (1H) gán cho carbon olefin C-5’ δC 112,4 C-5 δC 104,1 thông qua tương tác phổ HSQC; vị trí carbon xác định thơng tương tác nhìn thấy proton δH 7,86 s (1H) với carbon C-7’ (δC 157,6), C-4’ (δC 152,0), C-3’ (δC 141,9), C-6’ (δC 113,8) proton δH 7,58 s (1H) với carbon C-7 (δC 158,3), C-4 (δC 150,7), C-3 (δC 138,4), C-2 (δC 131,5), C-1 (δC 115,6), C-6 (δC 111,9) phổ HMBC Như vậy, liệu phổ NMR cho thấy tín hiệu đặc trưng cho cấu trúc acid ellagic Hai đỉnh đơn lại δH 6,40 s (2H) 4,10 s (3H) gán cho carbon –CH2- δC 104,4 -OCH3 δC 61,4 Tín hiệu carbon methylen downfield, có khả nhóm liên kết với dị tố có độ âm điện cao, thường oxy Trên phổ HMBC nhận thấy proton δH 6,40 s (2H) tương tác với carbon C-3 (δC 138,4) C-4 (δC 150,7), xác định nhóm CH2 liên kết với oxy vị trí Vị trí gắn nhóm methoxy (C3’) phần đường (C-4) xác định thông qua tương tác phổ HMBC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 67 Như vậy, hợp chất C1 xác định acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid với CTCT C22H18O13 (Ω=14) Tiến hành so sánh phổ NMR C1 với acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic 4’-O-β-Dglucopyranosid công bố88, kết thể bảng 3.12 Bảng 3.12 Kết so sánh liệu phổ NMR C1 acid 3’-methoxy-3,4methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid C1 C1 (600 MHz, DMSO-d6) DEPT 13 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7’ 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ CIV CIV CIV CIV CH CIV CIV CIV CIV CIV CIV CH CIV CIV -CH2-OCH3 CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O CH2-O C (δppm) 115,6 131,5 138,4 150,7 104,1 111,9 158,3 112,6 141,1 141,9 152,0 112,4 113,8 157,6 104,4 61,7 101,3 73,3 76,5 69,5 77,3 60,6 H δppm; nH; J (Hz) 7,58 s (1H) 7,86 s (1H) 6,40 s (2H) 4,10 s (3H) 5,16 d (1H, 7,2) 3,70 d (1H, 10,2) Acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid (300 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 114,8 130,8 138,0 150,3 103,7 7,29 brd (1H, 2,4 Hz) 111,2 157,6 112,9 140,8 141,7 151,9 112,3 7,75 s 111,8 157,0 104,5 6,34 s 61,6 4,11 s 101,4 5,14 d (1H, 6,7) 73,2 3,40 76,4 3,40 69,4 3,25 77,2 3,50 60,5 3,75 brd (1H, 11,0) Dữ liệu NMR C1 acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic-4’-O-β-Dglucopyranosid gần trùng khớp Như hợp chất C1 xác định acid 3’Methoxy-3,4-methylendioxyellagic-4’-O-β-D-glucopyranosid (hình 3.25) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 68 CTCT: C22H18O13 (Ω=14) Hình 3.25 Cấu trúc số tương tác phổ MHBC hợp chất C1 3.5.6.2 Xác định cấu trúc chất C2 - Phổ MS Phổ MS-(+)APCI cho phân mảnh [M+H]+ = 287,22 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 286,22 đvC (phụ lục 13) - Phổ NMR C2 phân lập từ phân đoạn E.4.1, chất kết tinh hình kim màu vàng nâu, cho vết tắt quang UV 254 nm UV 365 nm, cho màu vàng cam với thuốc thử VS, cho màu xanh rêu với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 14) xuất 13 tín hiệu carbon cộng hưởng vùng trường thấp (δC 93,6 – 176,0), kết hợp với liệu phổ MS xác định CTCT C2 C15H10O6 (Ω=11) Nhận thấy phổ 13C-NMR có tín hiệu δC 176,0 đặc trưng cho nhóm carbon carbonyl (C=O) tín hiệu (δC 129,6 δC 115,5) cao bất thường, Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 15) cho tín hiệu đỉnh đơn vùng trường thấp (δH 12,45) đặc trưng cho tín hiệu 5-OH ngồi cịn có cặp tín hiệu proton δH 6,15 d (1H, 2,4 Hz), δH 6,40 d (1H, 1,8 Hz) đặc trưng cho tương tác meta cặp proton đối xứng δH 6,92 d (2H, 9,0 Hz), δH 8,03 d (2H, 9,0 Hz) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 69 Dựa vào thơng tin phổ MS NMR nhận thấy C2 flavonoid (15C) với cấu trúc đối xứng nhóm vòng B (Δδ = 14,4 ppm) Các đặc điểm phù hợp với cấu trúc hợp chất kaempferol Tiến hành so sánh phổ NMR C2 với kaempferol công bố trước đây90, kết thể bảng 3.13 Bảng 3.13 Kết so sánh liệu phổ NMR C2 kaempferol C2 DEPT 10 1’ 2’, 6’ 3’, 5’ 4’ CIV CIV CIV CIV CH CIV CH CIV CIV CIV CH CH CIV C2 (600 MHz, DMSO-d6) C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 146,9 135,7 176,0 160,8 98,3 6,15 d (1H, 2,4) 164,0 93,6 6,40 d (1H, 1,8) 156,3 103,1 121,8 129,6 8,03 d (2H; 9,0) 115,5 6,92 d (2H; 9,0) 159,3 OH 12,45 s 13 Kaempferol (500 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 147,0 135,8 176,1 160,9 98,3 6,17 d (1H, 2,1) 164,1 93,6 6,42 d (1H; 2,1) 156,4 103,1 121,8 129,6 8,02 d (2H; 8,7) 115,6 6,91 d (2H; 8,7) 159,4 OH 12,46 s Dữ liệu NMR C2 kaempferol gần trùng khớp Như hợp chất C2 xác định Kaempferol (hình 3.26) CTCT: C15H10O6 (Ω=11) PTK: 286,22 đvC Hình 3.26 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 70 3.5.6.3 Xác định cấu trúc chất C3 - Phổ MS Phổ MS-(+)APCI cho phân mảnh [M+H]+ = 433,01 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 432,01 đvC (phụ lục 16) - Phổ NMR C3 phân lập từ phân đoạn E.3.3, chất kết tủa vô định hình màu vàng, cho vết tắt quang UV 254 nm UV 365 nm, cho màu vàng cam với thuốc thử VS, cho màu xanh rêu với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 17) xuất 19 tín hiệu carbon, kết hợp với liệu phổ NMR xác định CTCT C3 C21H20O10 (Ω=12) Nhận thấy phổ 13 C- NMR tín hiệu δC 176,0 đặc trưng cho nhóm carbon carbonyl (C=O), tín hiệu (δC 129,6 δC 115,4) cao bất thường, tín hiệu cịn lại có tín hiệu thành cụm vùng δC 60-80 tín hiệu δC 17,9 đặc trưng cho đường rhamnose Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 18) cho tín hiệu đỉnh đơn vùng trường thấp δH 12,47; 10,12 9,51 đặc trưng cho nhóm -OH, ngồi cịn có cặp tín hiệu proton δH 6,42 d (1H, 2,4 Hz), δH 6,80 d (1H, 2,4 Hz) đặc trưng cho tương tác meta cặp proton đối xứng δH 6,93 d (2H, 9,0 Hz), δH 8,09 d (2H, 9,0 Hz) Như C3 flavonoid với cấu trúc đối xứng nhóm vòng B (Δδ = 14,2 ppm) đường rhamnose Đặc điểm mô tả phần aglycon C3 tương đồng với C2 nên tiến hành so sánh liệu phổ 13 C-NMR C3 với kaempferol (C2), kết trình bày bảng 3.14 Bảng 3.14 Kết so sánh liệu phổ 13C-NMR C3 C2 C C3 147,5 136,0 176,0 160,4 98,8 161,4 94,3 C2 146,9 135,7 176,0 160,8 98,3 164,0 93,6 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn C 10 1’ 2’, 6’ 3’, 5’ 4’ C3 155,7 104,7 121,5 129,6 115,4 159,3 C2 156,3 103,1 121,8 129,6 115,5 159,3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 71 Dữ liệu phổ 13C-NMR C3 C2 tương đồng, carbon vị trí C-7 thuộc vịng A có có chênh lệch lớn (ΔC = 2,6 ppm), phần đường gắn vị trí C-7 công thức Tiến hành so sánh phổ NMR C3 với kaempferol7-O-α-L-rhamnose công bố trước đây90, kết thể bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết so sánh phổ NMR C3 kaempferol-7-O-α-L-rhamnose C DEPT 10 1’ 2’, 6’ 3’, 5’ 4’ CIV CIV CIV CIV CH CIV CH CIV CIV CIV CH CH CIV 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O CH3 C3 (600 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 147,5 136,0 176,0 160,4 98,8 6,42 d (1H, 2,4) 161,4 94,3 6,80 d (1H, 2,4) 155,7 104,7 121,5 129,6 8,09 d (2H; 9,0) 115,4 6,93 d (2H; 9,0) 159,3 5-OH 12,47 s 98,4 5,54 d (1H, 1,8) 70,0 70,2 71,6 69,8 17,9 1,13 d (3H, 6,0) Kaempferol 7-O-α-L rhamnose (300 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 147,6 136,2 176,3 160,6 98,9 6,44 d (1H, 2,0) 161,6 94,4 6,85 d (1H, 2,0) 155,7 104,8 121,7 129,8 8,10 d (2H; 8,7) 115,6 6,94 d (2H; 8,7) 159,6 5-OH 12,05 s 98,4 5,56 s (1H) 70,1 70,3 71,6 69,9 17,9 1,14 d (3H, 6,3) Dữ liệu NMR C3 Kaempferol-7-O-α-L-rhamnose gần trùng khớp Như hợp chất C3 xác định Kaempferol-7-O-α-L-rhamnose (hình 3.27) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 72 CTCT: C21H20O10 (Ω=12) PTK: 432,01 đvC Hình 3.27 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C3 3.5.6.4 Xác định cấu trúc chất C4 - Phổ MS Phổ MS-(-)APCI cho phân mảnh [M-C6H10O5-H]- = 342,71 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 505,71 (~ 506) đvC (phụ lục 19) - Phổ NMR Bảng 3.16 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C4 13 C4 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 C (δppm) 158,4 158,4 154,3 151,9 141,7 141,2 141,1 140,9 113,7 112,9 112,6 112,3 112,0 107,6 101,3 77,2 76,4 73,3 69,5 61,6 61,3 60,5 DEPT CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CH CH CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O OCH3 OCH3 CH-O H δppm; nH; J (Hz) 7,85 s 7,68 s 5,17 d (1H, 6,6) 3,44 m 3,35 m 3,37 m 3,23 m 4,10 s (3H) 4,06 s (3H) 3,70 dd (1H, 1,8; 8,4) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn HMBC 158,0; 151,9; 141,7; 113,7 158,4; 154,3; 140,9; 112,9; 112,3 151,9 141,7 140,9 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 73 23 56,8 OCH3 OH OH OH OH 3,51 m 4,02 s (3H) 5,44 d (1H, 4,8) 5,13 d (1H, 4,2) 5,04 d (1H, 5,4) 4,55 t (1H, 5,4) 77,2 154,3 101,3; 76,4; 73,3 76,4; 73,3; 69,5 77,2; 69,5 77,2; 60,5 C4 phân lập từ phân đoạn E.4.6, kết tủa vơ định hình màu trắng, tắt quang UV 254 nm phát huỳnh quang UV 365 nm Không màu với thuốc thử VS FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 20) xuất 26 tín hiệu carbon, khơng có tín hiệu cao bất thường, có tín hiệu carbon δC 79,2, δC 78,9, δC 78,6 xác định tạp khơng có tương tác phổ NMR, hợp chất C4 có 23 carbon Trong 15 tín hiệu cộng thường vùng trường thấp (δC 101,3 – 158,4) có tín hiệu xác định carbon CH, 12 tín hiệu carbon bậc IV; tín hiệu cịn lại nằm vùng (δC 56,8 – 77,2) xác định có tín hiệu carbon CH, tín hiệu carbon CH2 tín hiệu cịn lại (δC 56,8; 61,3; 61,6) đặc trưng cho nhóm -OCH3, xác định phổ DEPT (phụ lục 22) Các tín hiệu phổ NMR hợp chất C4 tương đồng với hợp chất C1 cho thấy C4 dẫn chất acid ellagic với nhóm methoxy đường hexose, phần đường liên kết dây nối oxy thơng qua tín hiệu carbon anomer (δC 101,3) proton anomer δH 5,17 d (1H, 6,6 Hz) Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 21) xuất đỉnh đơn, tín hiệu proton δH 7,85 s (1H) δH 7,68 s (1H) gán cho carbon olefin C-5’ δC 112,0 C-5 δC 107,6; vị trí carbon xác định thơng qua tương tác nhìn thấy phổ HMBC proton δH 7,85 s (1H) tương tác với carbon C-7’ (δC 158,0), C-4’ (δC 151,9), C-3’ (δC 141,7), C-6’ (δC 113,7) proton δH 7,58 s (1H) tương tác với carbon C-7 (δC 158,4), C-4 (δC 154,3), C-3 (δC 140,9), C-1 (δC 112,9), C-6 (δC 112,3) Ba đỉnh đơn lại δH 4,10 s (3H), δH 4,06 s (3H), δH 4,02 s (3H) gán cho carbon -OCH3 δC 61,6, δC 61,3, δC 56,8 Vị trí gắn nhóm methoxy (C3, C3’, C4) phần đường (C4’) xác định thông qua tương tác phổ HMBC (phụ lục 24) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 74 Thêm vào phổ MS-(+)APCI xác định khối lượng phân tử C4 506 đvC, kết hợp với liệu phổ NMR xác định CTCT C4 C23H22O13 (Ω=13) Như vậy, hợp chất C4 xác định acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’-O-β-Dglucopyranosid Tiến hành so sánh phổ NMR C4 với acid 3,3’,4trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid công bố trước đây88, kết thể bảng 3.17 Bảng 3.17 Kết so sánh liệu phổ NMR C4 acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid C4 C4 (600 MHz, DMSO-d6) DEPT 13 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ CIV CIV CIV CIV CH CIV CIV CIV CIV CIV CIV CH CIV CIV 4-OCH3 3-OCH3 3’-OCH3 CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O C (δppm) 112,9 141,2 140,9 154,3 107,6 112,3 158,4 113,7 141,1 141,7 151,9 112,0 113,6 158,0 56,8 61,3 61,6 101,3 73,3 76,4 69,5 77,2 6’’ CH2-O 60,5 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7’ 2’’-OH 3’’-OH 4’’-OH 6’’-OH H δppm; nH; J (Hz) 7,68 s - 7,85 s 4,02 s 4,06 s 4,10 s 5,17 d (1H, 6,6) 3,37 m 3,35 m 3,23 m 3,44 m 3,70 dd (1H, 1,8; 8,4) 3,51 m 5,44 d (1H, 4,8) 5,13 d (1H, 4,2) 5,04 d (1H, 5,4) 4,55 t (1H, 5,4) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’ -O- β -D-glucopyranosid (300 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 112,4 140,8 140,7 154,1 107,3 7,5 s 112,2 158,1 113,8 140,9 141,6 151,8 112,0 7,80 s 112,0 157,9 56,6 3,97 s 61,2 4,04 s 61,6 4,11 s 101,2 5,17 d (1H, 6,3) 73,2 3,45 76,4 3,44 69,4 3,26 77,2 3,47 60,5 3,73 brd (1H, 10,0) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 75 Dữ liệu NMR C4 acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid gần trùng khớp Như hợp chất C3 xác định acid 3, 3’,4trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid (hình 3.28) Đây cấu trúc lần đầu phân lập loài thuộc chi Camellia CTCT: C23H22O13 (Ω=13) PTK: 505,71 (~ 506) đvC Hình 3.28 Cấu trúc số tương tác phổ MHBC hợp chất C4 3.5.6.5 Xác định cấu trúc chất C5 - Phổ MS Phổ MS-(-)APCI cho phân mảnh [M-H]- = 168,9 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 169,9 (~ 170) đvC (phụ lục 25) - Phổ NMR C5 phân lập từ phân đoạn E.5.1.1, tủa vơ định hình màu nâu, cho vết tắt quang UV 254 nm, không phát quang UV 365 nm, không màu với thuốc thử VS, cho màu xanh đen với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 26) xuất tín hiệu carbon cộng hưởng vùng trường thấp (δC 108,7 – 167,4), kết hợp với liệu phổ NMR xác định CTCT C3 C7H6O5 (Ω=5) Nhận thấy phổ 13C-NMR xuất tín hiệu δC 167,4 đặc trưng cho nhóm carbon carbonyl (C=O), tín hiệu (δC 145,4 δC 108,7) cao bất thường Như C5 acid phenolic đối xứng nhóm (Δδ = 36,4 ppm) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 76 Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 27) có tín hiệu đỉnh đơn trường thấp δH 12,20 (1H); 9,15 (1H) 8,79 (1H) đặc trưng cho nhóm -OH proton δH 6,91 s (2H) Các đặc điểm phổ NMR MS phù hợp với cấu trúc hợp chất acid gallic Tiến hành so sánh phổ NMR C5 với acid gallic công bố trước đây91, kết thể bảng 3.18 Bảng 3.18 Kết so sánh liệu phổ NMR C5 acid gallic C 2, 3, C5 (600 MHz, DMSO-d6) 13 DEPT C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 120,4 CH 108,7 6,91 s CIV 145,4 CIV 137,9 CIV 167,4 OH 12,20 s 3,5-OH 9,15 s (2H) 4-OH 8,79 s acid gallic (500 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 121,0 109,0 6,91 s 145,9 138,3 168,0 - Dữ liệu phổ so sánh tương đồng, C5 xác định acid gallic (hình 3.29) CTCT: C7H6O5 (Ω=5) PTK: 169,9 (~ 170) đvC Hình 3.29 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C5 3.5.6.6 Xác định cấu trúc chất C6 - Phổ MS Phổ MS-(+)APCI cho phân mảnh [M+H]+ = 291,15 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 290,15 đvC (phụ lục 28) - Phổ NMR Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 77 C6 phân lập từ phân đoạn E.5.1.2, chất kết tủa vơ định hình màu cam, cho vết tắt quang UV 254 nm, không phát quang UV 365 nm, cho màu hồng với thuốc thử VS, màu xanh rêu với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 29) xuất 15 tín hiệu carbon, khơng có tín hiệu cao bất thường, kết hợp với liệu phổ NMR xác định CTCT C6 C15H14O6 (Ω=9) Nhận thấy phổ 13C-NMR có 12 tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp (δC 94,0 – 156,5), tín hiệu vùng δC 60-80, tín hiệu cịn lại dịch chuyển 28,1 ppm Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 30) cho tín hiệu đỉnh đơn vùng trường thấp δH 9,08; 8,87, 8,77 8,69 đặc trưng cho nhóm -OH, ngồi cịn có cặp tín hiệu proton δH 5,88 d (1H, 1,8 Hz), δH 5,71 d (1H, 1,8 Hz) đặc trưng cho tương tác meta Đặc điểm mô tả phần aglycon C6 tương đồng với epicatechin nên tiến hành so sánh liệu phổ NMR C6 với epicatechin92, kết trình bày bảng 3.19 Bảng 3.19 Kết so sánh liệu phổ NMR C6 epicatechin C DEPT CH-O CH-O CH2 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ CIV CH CIV CH CIV CIV CIV CH CH CIV CH CH OH C6 (600 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 78,0 4,73 s (1H) 64,9 4,00 m 2,67 dd (1H, 4,2; 16,2) 28,1 2,46 d (1H, 3,6) 156,5 95,0 5,88 d (1H, 1,8) 156,2 94,0 5,71 d (1H, 1,8) 155,7 98,4 130,6 114,8 6,88 d (1H; 1,8) 144,3 144,4 114,7 6,65 m (2H) 117,9 6,65 m (2H) 4,64 d (1H, 4,8) Epicatechin (500 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 78,1 4,73 brs (1H) 64,9 4,00 brd (1H, 3,0) 2,68 dd (1H, 4,5; 16,5) 28,2 2,48 dd (1H, 3,5; 16,5) 156,5 95,2 5,88 d (1H, 2,0) 156,2 94,1 5,72 d (1H; 2,0) 155,8 98,4 130,6 114,9 6,88 brs (1H) 144,4 144,5 114,8 6,66 d (1H; 8,0 Hz) 118,0 6,66 m (1H) OH 4,64 d (1H, 4,5) Dữ liệu phổ C6 epicatechin gần trùng khớp, C6 xác định epicatechin (hình 3.30) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 78 PTK: 290,15 đvC CTCT: C15H14O16 (Ω=9) Hình 3.30 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C6 3.5.6.7 Xác định cấu trúc chất C7 - Phổ MS Phổ MS-(-)ESI cho phân mảnh [M-H]- = 592,75 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 593,75 ~ 594 đvC (phụ lục 31) - Phổ NMR Bảng 3.20 Dữ liệu phổ NMR C7 13 C7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 C (δppm) 177,6 161,6 160,8 160,0 156,7 155,9 133,5 130,9 120,7 115,1 105,6 100,7 99,3 98,4 94,4 77,5 76,4 74,2 71,6 70,2 DEPT CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CH CIV CH CIV CH CH CH CH CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O H δppm; nH; J (Hz) 8,08 d (2H, 9,0) 6,89 d (2H, 8,4) 5,48 d (1H, 7,2) 6,44 d (1H, 2,4) 5,55 s 6,82 d (1H, 1,8) 3,09 (2H, s) 3,21 m 3,19 m 3,64 d (1H, 6,6) 3,30 m Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn HMBC 160,0; 155,9; 130,9 160,0; 120,7; 115,1 133,5; 77,5 160,8; 105,6; 94,4 161,6 161,6; 156,7; 105,6; 99,3 4,04 s 4,11 s 5,17 d (1H, 6,3) 17,9 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 79 21 22 23 24 25 70,0 69,9 69,8 60,8 17,9 CH-O CH-O CH-O CH2-O CH3 OH OH 3,43 m 3,09 (2H, s) 3,84 s 3,57 d (1H, 5,4) 1,12 d (3H, 6,0) 12,60 s 10,20 s 71,6 C7 phân lập từ phân đoạn E.6, chất kết tủa vơ định hình màu vàng nhạt, cho vết tắt quang UV 254 nm, không phát quang UV 365 nm, cho màu vàng cam với thuốc thử VS, cho màu xanh rêu với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 32) xuất 25 tín hiệu carbon kết hợp với liệu phổ NMR xác định CTCT C7 C27H30O15 (Ω=13) Nhận thấy phổ tín hiệu δC 177,6 đặc trưng cho nhóm carbon carbonyl (C=O), tín hiệu (δC 130,9 δC 115,1) cao bất thường, 10 tín hiệu vùng trường cao cịn lại có tín hiệu vùng δC 6080 tín hiệu δC 17,9 Trong đó, tín hiệu thành cụm δC ~ 70,0 tín hiệu methyl (δC 17,9) đặc trưng cho đường rhamnose, tín hiệu cịn lại tín hiệu đường hexose Như C7 flavonoid với cấu trúc đối xứng nhóm vịng B (ΔC = 15,8 ppm) với đường liên kết qua cầu nối oxy xác định carbon anomer δC 100,7 [δH 5,48 d (1H, 7,2 Hz)] δC 98,4 (δH 5,55 s), vị trí gắn khẳng định thông qua tương tác phổ HSQC HMBC (phụ lục 35 36) Trên phổ 1H-NMR (phụ lục 33) cho tín hiệu đỉnh đơn vùng trường thấp δH 12,47;10,12 đặc trưng cho nhóm -OH, ngồi cịn có cặp tín hiệu proton δH 6,44 d (1H, 2,4 Hz), δH 6,82 d (1H, 2,4 Hz) đặc trưng cho tương tác meta gán cho carbon δC 99,3; δC 94,4 cặp proton đối xứng δH 8,09 d (2H, 9,0 Hz); δH 6,93 d (2H, 9,0 Hz) gán cho carbon δC 130,9 δC 115,1, khẳng định thơng qua tương tác phổ HSQC Tín hiệu proton anomer rhamnose δH 5,54 s gợi ý đường α-L-rhamnose, phần đường cịn lại xác định glucose thông qua so sánh với tài liệu tham khảo Vị trí gắn đường glucopyranosid rhamnopyranosid vào phần aglycon xác định C-3 (δC 133,5) C-7 (δC 161,6) khẳng định thơng qua tương tác nhìn thấy phổ HMBC Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 80 Như cấu trúc C7 xác định kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-Oα-L-rhamnopyranosid So sánh phổ 13 C-NMR C7 kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-L- rhamnopyranosid báo cáo trước đây93, kết trình bày bảng 3.21 Bảng 3.21 Kết so sánh liệu phổ NMR C7 kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-L- rhamnopyranosid C7 (600 MHz, DMSO-d6) 13 10 1’ 2’,6’ 3’,5’ 4’ 155,9 133,5 177,6 160,8 99,3 161,6 94,4 156,7 105,6 120,7 130,9 115,1 160,0 C (δppm) 3-glu 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 7-rha 2’’’ 3’’’ 4’’’ 5’’’ 6’’’ 100,7 74,2 76,4 69,9 77,5 60,8 98,4 69,8 70,2 71,6 70,0 17,9 Kaempferol 3-O-β-D glucose 7-O-α-Lrhamnose (300 MHz, DMSO-d6) 13 C (δppm) 155,8 3-glu 100,8 133,4 2’’ 74,1 177,5 3’’ 76,4 160,7 4’’ 69,9 99,2 5’’ 77,3 161,5 6’’ 60,8 94,4 7-rha 98,4 156,6 2’’’ 69,7 10 105,6 3’’’ 70,2 1’ 120,6 4’’’ 71,5 2’,6’ 130,8 5’’’ 69,9 3’,5’ 115,5 6’’’ 17,7 4’ 160,0 Dữ liệu phổ 13C-NMR C7 kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-α-Lrhamnopyranosid gần trùng khớp Như C7 xác định kaempferol 3O-β-D glucopyranosid 7-O-α-L- rhamnopyranosid (hình 3.31) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 81 PTK: 593,75 ~ 594 đvC CTCT: C27H30O15 (Ω=13) Hình 3.31 Cấu trúc độ dịch chuyển hóa học hợp chất C7 3.5.6.8 Xác định cấu trúc chất C8 - Phổ MS Phổ MS-(-)ESI cho phân mảnh [M-H]- = 629,19 đvC tương ứng với khối lượng phân tử 630,19 đvC (phụ lục 37) - Phổ NMR Bảng 3.22 Dữ liệu phổ NMR C8 13 CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV CIV C (δppm) 165,7 158,7 158,6 152,7 147,1 145,4 141,9 140,1 138,4 136,0 119,2 114,6 113,0 H δppm; nH; J (Hz) - 14 CH 111,4 7,76 s 15 CH 111,3 7,54 s 16 CH 108,7 6,93 s (2H) C DEPT 10 11 12 13 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn HMBC COSY 158,6; 147,1; 136,0; 114,6; 111,4 158,7; 152,7; 140,1; 113,0; 111,3 165,7; 145,4; 138,4; 119,2 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 82 17 18 19 20 21 CH-O CH-O CH-O CH-O CH-O 101,7 75,4 74,0 73,2 69,4 22 CH2 63,0 23 -OCH3 OH OH OH OH OH OH OH 60,9 - 5,17 d (7,2) 3,44 s 3,83 s 3,46 s 3,43 s 4,46 d (1H, 10,8) 4,30 dd (1H, 4,8; 12,0) 4,05 s (3H) 10,77 s 10,63 s 9,12 s (2H) 8,86 s (1H) 5,50 d (1H, 4,2 Hz) 5,36 s (1H) 5,28 s (1H) - 3,46 s 4,30 dd - 165,7 - 140,5 - 3,44 s 3,43 s C8 phân lập từ phân đoạn 5.5, chất kết tủa vơ định hình màu trắng, tắt quang UV 254 nm, không phát quang UV 365 nm Không màu với thuốc thử VS, cho màu xanh đen với FeCl3 Trên phổ 13C-NMR (phụ lục 38) xuất 23 tín hiệu carbon, có tín hiệu cao bất thường, có 17 tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp (δC 101,7 – 165,7), có tín hiệu CH, 13 tín hiệu C bậc IV Trong tín hiệu cộng hưởng vùng (δC 75,4 – 60,9), có tín hiệu -OCH3, tín hiệu CH2 tín hiệu CH Trên phổ 13 C-NMR có xuất tín hiệu δC 165,7 đặc trưng cho nhóm carbon carbonyl (C=O), tín hiệu (δC 145,4 δC 108,7) cao bất thường, tín hiệu vịng thơm đối xứng nhóm (Δδ = 36,7 ppm) Cấu trúc galloyl xác định thông qua tương tác proton δH 6,93 s (δC 108,7) với tín hiệu carbon δC 165,7; 145,4; 138,4; 119,2 108,7 quan sát thấy phổ HMBC (phụ lục 44) Năm tín hiệu carbon δC 63,0; 69,4; 73,2; 74,0; 75,4 (60-80 ppm) tín hiệu carbon anomer δC 101,7 (δH 5,17 d 7,2 Hz) gợi ý cho cấu trúc đường glucose, tín hiệu –OH δH 5,50 d (1H, 4,2 Hz), δH 5,36 s (1H), δH 5,28 s (1H) gán cho carbon C-2’’ (δC 73,2; δH 3,46 s), C-3’’ (δC 75,4; δH 3,44 s), C4’’ (δC 69,4; δH 3,43 s), khẳng định thông qua tương tác phổ COSY (phụ lục 45) Phần galloyl liên kết với đường qua cầu nối oxy carbon C-6’’ (δC 63,0), xác định thông qua tương tác nhìn thấy proton H-6’’ (4,46 d [1H, Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 83 10,8 Hz] 4,30 dd [1H, 4,8; 12,0 Hz]) với C-7’’’ (δC 165,7) phổ HMBC Như mảnh xác định 6-galloyl glucose với CTPT C13H15O9 tương ứng với phân tử khối 315 đvC (hình 3.32) CTCT mảnh I: C13H15O9 PTK: 315 đvC Hình 3.32 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC mảnh Thêm vào phổ MS-(-)ESI xác định khối lượng phân tử C6 630,19 đvC, mảnh có PTK 315 đvC Mười hai tín hiệu carbon cịn lại có tín hiệu carbon carbonyl δC 158,7 δC 158,6; tín hiệu carbon CH gán cho proton tương ứng δH 7,76 s (δC 111,4) δH 7,54 s (δC 111,3) Thông qua tương tác phổ HMBC proton δH 7,76 s (δC 158,6; 147,1; 136,0; 114,6; 111,4) δH 7,54 s (δC 158,7; 152,7; 140,1; 113,0; 111,3) xác định cấu trúc mảnh số có vịng thơm riêng biệt Các đặc điểm tương đồng với cấu trúc acid ellagic với nhóm methoxy Tiến hành so sánh mảnh với phần aglycon hợp chất acid 3’-methoxy ellagic 4-O-β glucopyranosid (Stachyanthusid A) Kết trình bày bảng 3.23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 84 Bảng 3.23 Kết so sánh liệu phổ NMR mảnh stachyanthusid A aglycon II (600 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) - Stachyanthusid A aglycon (400 MHz, DMSO-d6) 13 C H (δppm) δppm; nH; J (Hz) 107,3 C DEPT CIV CIV - 140,7 CIV 136,0 135,7 - CIV 147,1 - 147,1 - CH 111,4 7,76 s 111,5 7,78 s CIV 114,6 114,5 CIV 158,7 158,6 1’ CIV 113,0 113,0 2’ CIV 141,9 141,8 3’ CIV 140,1 140,5 4’ CIV 152,7 152,6 5’ CH 111,3 6’ CIV 113,0 113,0 7’ CIV 158,6 158,5 3’ OCH3 60,9 4,05 s (3H) 60,9 4,02 s 1’’ -CHO 101,7 5,17 d (7,2) 102,1 4,99 d (1H, 7,1) 2’’ -CHO 73,2 3,46 s 73,1 3,4 m 3’’ -CHO 75,4 3,44 s 75,4 3,35 m 4’’ -CHO 69,4 3,43 s 69,5 3,25 m 7,54 s 113,3 7,51 s Kết cho thấy liệu NMR mảnh II gần trùng khớp với phần aglycon Stachyanthusid A Hai tín hiệu cịn thiếu lượng mẫu đo không đủ nên không xác định Như mảnh II xác định acid 3’-methoxy ellagyl với CTCT C15H7O8 với khối lượng 315 đvC, phù hợp với phần cịn thiếu (hình 3.33) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 85 CTCT mảnh II: C15H7O8 PTK: 315 đvC Hình 3.33 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC mảnh Như hợp chất C8 xác định acid 3’-methoxy-ellagic-4-(6’’-galloyl) glucopyranosid, cơng cụ tìm kiếm Google scholar, Chemspider, Scifinder, … xác định cấu trúc lần tìm thấy thực vật Dữ liệu phổ NMR cấu trúc C8 thể hình 3.34 bảng 3.24 CTCT: C28H22O17 PTK: 630,19 đvC Hình 3.34 Cấu trúc số tương tác phổ HMBC hợp chất C8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 86 Bảng 3.24 Dữ liệu phổ NMR hợp chất C8 13 C DEPT CIV CIV CIV CIV 136,0 147,1 CH 111,4 1’ 2’ 3’ 4’ CIV CIV CIV CIV CIV CIV 114,6 158,7 113,0 141,9 140,1 152,7 5’ CH 111,3 6’ 7’ 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ CIV CIV 3’-OCH3 >CHO>CHO>CHO>CHO>CHO- 113,0 158,6 60,9 101,7 73,2 75,4 69,4 74,0 6’’ >CH2O- 63,0 1’’’ CIV 119,2 2/6’’’ CH 108,7 3/5’’’ 4’’’ 7’’’ CIV CIV CIV 2’’-OH 3’’-OH 4’’-OH 3/5’’’-OH 145,4 138,4 165,7 C (δppm) C8 (600 MHz, DMSO-d6) H HMBC δppm; nH; J (Hz) Mất tín hiệu Mất tín hiệu 158,6; 147,1; 136,0; 7,76 s 114,6; 111,4 158,7; 152,7; 140,1; 7,54 s 113,0; 111,3 4,05 s (3H) 140,5 5,17 d (7,2) 3,46 s 3,44 s 3,43 s 3,83 s 4,46 d (1H, 10,8) 165,7 4,30 dd (1H, 4,8; 12,0) 165,7; 145,4; 138,4; 6,93 s (2H) 119,2 5,50 d (1H, 4,2) 5,36 s 5,28 s 9,12 s (2H) COSY 3,46 s 4,30 dd 3,44 s 3,43 s - Kết luận: Từ 45 g phân đoạn EtOAc phân lập hợp chất, chất kiểm tra độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng với hệ dung mơi khác có độ phân cực khác Cấu trúc xác định phổ NMR, MS so sánh với tài liệu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 87 cơng bố trước Các hợp chất tiếp tục thử nghiệm tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH ức chế enzym α-glucosidase 3.6 Thử nghiệm tác dụng sinh học số hợp chất phân lập 3.6.1 Khảo sát khả chống oxy hóa mơ hình loại gốc tự DPPH Thử nghiệm tiến hành theo mục 3.3.2.2 với chứng dương vitamin C Kết trình bày bảng 3.25, phụ lục 46 47 Bảng 3.25 Kết thử nghiệm hoạt tính thu dọn gốc tự DPPH chất phân lập Nồng độ (µg/ml)/ % ức chế Mẫu C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 Vitamin C R2 - - - 14,5882 - - - - 12,5 10 7,5 2,5 82,5575 58,9530 38,5799 21,7145 6,8226 15 12,5 10 7,5 73,2799 500 62,2104 - 48,3624 - 30,6099 - 12,8092 - 21,35 - - - - 2,5 1,5 83,2198 68,2369 57,0635 39,9103 29,0095 10 70,4877 500 51,7052 - 41,2701 - 23,3660 - 10,7313 - 3,5294 - - - - 90,1944 72,1982 63,3721 48,0799 36,9806 500 IC50 (µg/µM) 0,9912 0,9904 - 0,9958 0,9935 0,9906 8,60 ± 0,0373 30,03 ± 0,1302 10,74 ± 0,1792 24,87 ± 0,4149 1,80 ± 0,0276 10,61 ± 0,1628 7,42 ± 0,2630 25,57 ± 0,9063 5,07 ± 0,1620 28,78 ± 0,9200 Kết thử nghiệm cho thấy hợp chất C2, C3, C5, C6 có tác dụng thu dọn gốc tự mơ hình thử nghiệm Trong C5 thể khả chống oxy hóa mạnh với giá trị IC50 10,61 ± 0,1628 µM, cao chứng dương vitamin C (IC50 28,78 ± 0,9200 µM) Tiếp đến C3, C6 C2 theo thứ tự giảm dần, nhiên khác biệt không đáng kể so với chứng dương Các chất C1, C4, C7 cho thấy tác dụng chống oxy hóa yếu mơ hình DPPH (bảng 3.27) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 88 3.6.2 Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Thử nghiệm tiến hành theo mục 3.3.2.2 với chứng dương acarbose Kết trình bày bảng 3.26, phụ lục 48 49 Bảng 3.26 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập Nồng độ (µg/ml)/ % ức chế 40 30 20 63,2918 27,9939 16,9333 20 10 62,1613 36,0750 23,4247 125 100 75 56,5602 38,6358 24,8357 - Mẫu C1 C2 C3 50 87,3698 30 97,5148 150 68,6834 100 C4 - - - - - 17,99 - - - - 100 75 55,5015 - 50 28,0359 - 25 6,7678 - 12,5 -0.1680 - 8,66 - - - - 1500 69,8923 750 55,8371 375 37,9316 187,5 26,7762 100 71,8834 C7 Acarbose - 10 0,9921 4,0610 2,5 0,9943 11,3195 50 0,9943 5,1439 - 100 C5 C6 - 21,35 R2 IC50 (µg/µM) 33,91 ± 2,2860 69,21 ± 4,6652 14,80 ± 0,2574 51,70 ± 0,8993 117,69 ± 1,5350 272,40 ± 3,5531 - - - 0,9927 72,93 ± 3,1387 251,36 ± 10,8174 - - 93,75 0,9909 15,6983 544,14 ± 35,0612 862,85 ± 54,3075 Kết thử nghiệm cho thấy hợp chất C1, C2, C3, C6 có tác dụng ức chế enzym α-glucosidase cao chứng dương acarbose (IC50 862,85 ± 54,3075 µM) Trong C2 thể khả chống oxy hóa mạnh với giá trị IC50 51,70 ± 0,8993 µM, tiếp đến C1 (IC50 69,21 ± 4,6652 µM), C6 (IC50 251,36 ± 10,8174 µM) C3 (IC50 272,40 ± 3,5531 µM) Các chất C4, C5, C7 cho thấy tác dụng ức chế enzym α-glucosidase yếu nhiều so với hợp chất lại (bảng 3.27) Bảng 3.27 Giá trịnh IC50 chất phân lập mơ hình thử nghiệm Mơ hình thử nghiệm C1 DPPH - αglucosidase 69,21 ± 4,6652 IC50 (µM) C2 30,03 ± 0,1302 51,70 ± 0,8993 C3 24,87 ± 0,4149 272,40 ± 3,5531 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn C4 - C5 10,61 ± 0,1628 - C6 25,57 ± 0,9063 251,36 ± 10,8174 C7 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 89 Nhận xét: Kết thử nghiệm cho thấy C2, C3 C6 thể hoạt tính mơ hình thử nghiệm Trong nghiên cứu này, C1 thể bật khả ức chế enzym α-glucosidase, C5 thể khả thu dọn gốc tự mạnh Hợp chất C4 C7 thể hoạt tính yếu mơ hình thử nghiệm 3.7 Bàn luận Qua thời gian thực hiện, đề tài nghiên cứu thực vật học hóa học loài Trà hoa vàng Camellia sp thu hái vườn Quốc Gia Nam Cát Tiên theo hướng tác dụng chống oxy hóa phương pháp DPPH tác dụng ức chế enzym αglucosidase 3.7.1 Về đối tượng nghiên cứu Đề tài định danh đối tượng nghiên cứu thơng qua phân tích mẫu thu thập Nhận thấy mẫu có đặc điểm tương đồng với lồi C dormoyana như: (1) Hoa mọc đơn đầu cành, cuống nhỏ khơng có cuống, bao phủ đài phụ chồng lên nhau, (2) Hòa màu vàng đến vàng đậm, cỡ vừa, kích thước – cm, (3) cánh hoa nhiều (>12 cánh), hình thìa, màu vàng nhạt đến vàng đậm, phần rìa nhạt màu hơn, giống sáp, giịn, dễ gãy, (4) Bầu trên, 5-6 ơ, nhẵn, (5) Vòi nhụy nhẵn, 5-6 vòi hợp nhất, (6) Quả nang hình cầu, thường có khía dọc sâu11 Các đặc điểm Camellia sp so sánh với mẫu C dormoyana khu vực Lâm Đồng Bình Phước giúp xác định lồi (hình 3.31) Mẫu xác định loài C dormoyana (Pierre) Sealy xác nhận TS Lương Văn Dũng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 90 Mẫu A-G: thu hái Lâm Đồng; Mẫu H-M: từ tỉnh Bình Phước Chú thích: A: Hoa; B: Cành non; C: Đài phụ; D: Lá đài; E: Cánh hoa; F: Đài hoa nhụy; G: Nhụy; H: Cụm hoa; I: Nụ hoa; J+K: Hoa; M: Đài nhụy hoa; L: Quả Hình 3.35 Hình thái lồi thu hái sưu tầm từ Lâm Đồng Bình Phước 3.7.2 Về kết sàng học sinh học nghiên cứu hóa học Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 91 3.7.2.1 Sơ thành phần hóa học Phân tích sơ thành phần hóa học cho thấy lồi C dormoyana có diện hợp chất saponin, tanin, polyphenol, flavonoid, acid hữu cơ, chất khử, carotenoid, triterpen, carotenoid tinh dầu Kết thu tương đồng với kết công bố trước đây48 Ngồi thành phần hóa học tương đồng với số loài trà hoa vàng hoa đỏ khác C dalatensis, C longii, C thuongiana, C dilinhensis, …48 Kết sơ số loài trà hoa vàng cho thấy khơng có có mặt nhóm alkaloid, nhóm xem đặc trưng có trà xanh48 Thêm vào Phạm Cao Bách cộng (2020) chứng minh khơng có diện caffein hoa loài C chrysantha94 Qua nghiên cứu nhận thấy có số lồi trà hoa vàng khơng có caffein, lồi có tiềm sử dụng thay cho nguyên liệu có caffein để tránh số tác dụng khơng mong muốn mà mang lại 3.7.2.2 Hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước Polyphenol nhóm hợp chất quan trọng tự nhiên, nghiên cứu cho thấy polyphenol có tác dụng chống oxy hóa làm giảm tỷ lệ mắc bệnh tim mạch, ung thư ruột kết, rối loạn chức gan, béo phì, đái tháo đường95 Các loài trà dùng chủ yếu cách hãm với nước nóng, đề tài thực xác định hàm lượng polyphenol chiết nước nóng nhằm đánh giá tiềm phương pháp Kết thử nghiệm xác định hàm lượng polyphenol từ dịch chiết nước C dormoyana 31,80 ± 0,9538 (mg GAE/g), so sánh với mẫu trà xanh (C sinensis) cho thấy hàm lượng polyphenol C dormoyana thấp điều kiện phương pháp thử Mặc dù phương pháp chiết nước cho hàm lượng polyphenol thấp, nhiên hàm lượng lớn 20 mg GAE/g xem có hoạt tính chống oxy hóa mạnh96, kết thu cho thấy tiềm phương pháp chiết phòng ngừa điều trị số bệnh liên quan đến gốc tự C dormoyana 3.7.2.3 Quá trình chiết xuất sàng lọc ban đầu Từ kg bột lá, tiến hành ngấm kiệt với cồn 96 %, sau chiết lỏng-lỏng để tách thành phân đoạn có độ phân cực khác n-hex, CHCl3, EtOAc n-BuOH Kết Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 92 sàng lọc sinh học ban đầu cho thấy phân đoạn CHCl3, EtOAc n-BuOH cho tác dụng tốt mơ hình thử nghiệm Phân đoạn EtOAc cho thấy tác dụng tốt nhất, sau n-BuOH CHCl3, phân đoạn n-hex cho thấy tiềm mơ hình ức chế enzyme α-glucosidase Như phân đoạn EtOAc đề xuất tiếp tục nghiên cứu 3.7.2.4 Kết phân lập Từ phân đoạn EtOAc toàn phần, tiến hành phân tách thành phân đoạn đơn giản để phân lập hoạt chất Đây phân đoạn có nhiều vết tắt quang UV 254 cho màu xanh đậm với thuốc thử FeCl3, hứa hẹn phân lập hợp chất phenolic, ra, vết tắt quang giúp dễ dàng theo dõi UV 254 sắc ký lớp mỏng, thuận tiện việc phân tách tinh khiết hóa hợp chất Quá trình tách sắc ký cột thu phân đoạn, phân đoạn (E.1-5) có khối lượng nhỏ, phân đoạn E.6 thu tủa với khối lượng đáng kể (468,8 mg), tủa tiếp tục kết tinh lại nhiều lần thu C7 tinh khiết, phần lại tinh chế sắc ký cột sephadex LH-20 không thu kết dù nhiều vết phát chủ yếu vết có Rf sát khối lượng nhỏ, khơng thể tiếp tục phân lập Phân đoạn E.7 với khối lượng lớn (24,48 g), cho màu xanh đậm với thuốc thử FeCl3 %, phân đoạn chứa nhiều hợp chất phenol phân cực, nhiên lại khó phân lập, kết tinh làm kỹ thuật sắc ký thường quy Kết thu từ phân đoạn EtOAc phân lập xác định cấu trúc chất Các chất phân lập thuộc nhóm flavonoid acid phenolic Các hợp chất flavonoid phân lập thuộc khung flavonol C2 (kaempferol), C3 (kaempferol7-O-α-L-rhamnose) C7 (kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosid 7-O-α-L- rhamnopyranosid) Kaempferol flavonoid điển hình có nhiều tự nhiên phân lập từ nhiều loài trà đen, trà xanh, cải, dâu tây,…, đặc tính sinh học thể chủ yếu khả chống oxy hóa, ức chế 5αreductase, chống viêm bảo vệ da97 Hợp chất C6 (epicatechin) thuộc khung flavan3-ol, hợp chất khung flavan-3-ol báo cáo thể số tác dụng có lợi Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 93 cho sức khỏe chống oxy hóa, chống ung thư, phịng ngừa tim mạch, kháng khuẩn, chống vi-rút bảo vệ thần kinh98 Các hợp chất thuộc nhóm acid phenolic bao gồm C1 (acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid), C4 (acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’-O-β-D-glucopyranosid), C5 (acid gallic), C8 (acid 3’methoxyellagic-4-O-β-D -(6’’-galloyl) glucopyranosid) Acid gallic chứng minh có khả chống oxy hóa, chống viêm, kháng khuẩn, chống đột biến chống ung thư Bên cạnh đó, hợp chất acid ellagic cho thấy khả chống ung thư, bảo vệ gan, ức chế DNA topoisomerase, chống oxy hóa, chống viêm, bảo vệ dày99 Các hợp chất nghiên cứu phân lập báo cáo lần từ loài C dormoyana Bằng cơng cụ tìm kiếm google scholar, chemspider, scifinder xác định hợp chất C4 lần phân lập từ loài thuộc chi Camellia C8 cấu trúc lần tìm thấy tự nhiên, nhiên liệu hình thành C8 chưa đầy đủ, tín hiệu phổ NMR cịn thấp, số tín hiệu bị mất, cấu trúc C8 cấu trúc dự kiến, cần phân lập thêm để xác định cấu trúc xác 3.7.2.5 Thử nghiệm sinh học chất phân lập Hợp chất C8 có khối lượng thấp (3,5 mg) đủ để xác định cấu trúc, hợp chất (C1-7) khảo sát hoạt tính chống oxy hóa mơ hình DPPH hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase - Mơ hình DPPH Kết thử nghiệm cho thấy chất có tác dụng thu dọn gốc tự DPPH (C2, C3, C5, C6) Trong C2 C3 chất thuộc nhóm kaempferol Kaempferol thể khả chống oxy hóa tốt mơ hình DPPH nhờ khả cho hai H● Sau cho H●, liên kết hydro khác hình thành gốc phenoxy H● OH, liên kết ngăn cản phân chia điện tử chưa ghép đơi, nhờ có khả cho H● thứ tạo thành kaempferol quinon bền (hình 3.36) Các nhóm 3-OH, 3’-OH, 4’OH, liên kết đơi vị trí C-2 = C-3 có vai trị quan trọng đến khả chống oxy hóa hợp chất flavonoid, giảm hay thay làm giảm khả chống oxy Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 94 hóa100 Đều giải thích C7 dù thuộc khung kaempferol thể khả chống oxy hóa yếu nhóm 3-OH bị thay nhóm -Oglucosyl Epicatechin (C6) hợp chất thuộc cấu trúc flavan-3-ol, cấu trúc thiếu nhóm carbonyl vị trí số nối đơi vị trí C-2 = C-3 Các sản phẩm trình oxy hóa catechin phức tạp hình thành quinon kèm với q trình dimer hóa Nghiên cứu trước cịn cho thấy hợp chất flavanol có bước phản ứng chậm kéo dài so với hợp chất flavonoid thuộc khung khác, đặc điểm riêng biệt hợp chất flavanol khơng tn theo quy tắc trước đó100 Hình 3.36 Cơ chế cho H● liên quan khả chống oxy hóa kaempferol Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 95 Cuối C5 (acid gallic) chất chống oxy hóa mạnh số hợp chất phenolic101, hợp chất sử dụng làm chứng dương thử nghiệm khả chống oxy hóa số nghiên cứu102,103 Cấu trúc acid gallic gồm nhóm -OH vịng thơm nhóm -COOH Ngồi khả cho proton từ nhóm -OH, phân ly proton -COOH dung dịch làm tăng khả cho proton, điều tạo nên hợp chất có tác dụng trung hịa gốc tự DPPH mạnh mẽ101 Giá trị IC50 nghiên cứu tương đồng với báo cáo trước khả chống oxy hóa acid gallic Hợp chất C1, C4 hợp chất tạo thành từ đơn vị acid gallic, nhiên nhóm -OH bị thay thành -OCH3 -Oglucosyl, chúng thể khả chống oxy hóa yếu mơ hình DPPH - Ức chế enzym α-glucosidase Kết thử nghiệm cho thấy chất có khả ức chế enzym αglucosidase (C1, C2, C3, C6) Nghiên cứu đánh giá Şöhretoğlu cộng (2020) cho thấy mối liên hệ cấu trúc khả ức chế enzym α-glucosidase hợp chất flavonoid Trên vịng A, thay nhóm 5-OH 7-OH làm giảm khả ức chế enzym α-glucosidase, ngồi nhóm geranyl prenyl vị trí C8 làm tăng khả ức chế chất Thêm vào đó, số lượng nhóm OH vòng B thể tiềm ức chế enzym, số lượng nhóm OH tăng lên khả ức chế enzym tăng, thay nhóm glycosid vị trí C3’ làm giảm tác dụng Đối với vịng C, nối đơi vị trí C-2 = C-3 quan trọng để ức chế enzym, tự thay nhóm 3-OH làm giảm ức chế104 Tóm lại, liên quan cấu trúc khả ức chế enzym α-glucosidase flavonoid - Số lượng nhóm OH tăng khả ức chế tăng - Liên kết đơi vị trí C-2 = C-3 quan trọng cấu trúc - Bất kỳ thay nhóm OH làm giảm tác dụng - Sự nhóm phenolic lên vị trí đường làm tăng tác dụng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 96 Hình 3.37 Liên quan cấu trúc tác dụng ức chế enzym α-glucosidase Vì vậy, khung kaempferol C3 có đường rhamnose C-7 làm giảm tác dụng ức chế nhiều so với C2 không gắn đường Hợp chất C7 có đường glucose rhamnose gắn lượt vào vị trí C-3 C-7 nên thể khả ức chế enzym α-glucosidase yếu Hợp chất C6 thuộc khung flavan-3-ol, dù có nhóm -OH vịng B nhiên thiếu nối đơi quan trọng vị trí C-2 = C-3 nên khả ức chế enzym yếu so với hợp chất C2 C3 Hợp chất C5 thể khả ức chế yếu, kết tương đồng với nghiên cứu Cho cộng (2013)105, nhiên số nghiên cứu khác cho thấy acid gallic có tác dụng ức chế enzym với giá trị IC50 5,2 ± 0,2 µM (2007)106 313,03 ± 3,71 µM (2020)107 Sự khác biệt bị ảnh hưởng trình bảo quản xử lý mẫu thử Đối với dẫn chất acid ellagic, nhóm –OH –OCH3 hay –O-glycosid làm giảm tác dụng108, C1 thể khả ức chế enzym với giá trị IC50 69,21 ± 4,6652 µM C4 ức chế enzym yếu có mặt nhóm -OCH3 gốc đường Hiện nay, nghiên cứu trà hoa vàng nói chung lồi C dormoyana nói riêng cịn hạn chế Đề tài xem nghiên cứu lồi C dormoyana, góp phần cung cấp thơng tin khoa học nâng cao giá trị trà hoa vàng, đặc biệt lá, vốn có sinh khối lớn dễ tái sinh, nguồn thu hái ổn định Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 97 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau thời gian thực hiện, đề tài đạt mục tiêu đề với kết sau 4.1.1 Về khảo sát thực vật học Mô tả so sánh đặc điểm hình thái lồi định danh đối tượng nghiên cứu lồi C dormoyana, đồng thời mơ tả vi phẫu bột dược liệu thân loài thu hái khu vực vườn Quốc Gia Nam Cát Tiên, Đồng Nai 4.1.2 Sơ thành phần hóa học Phân tích sơ thành phần hóa học cho thấy lồi C dormoyana có diện hợp chất saponin, tanin, polyphenol, flavonoid, acid hữu cơ, chất khử, carotenoid, triterpen, carotenoid tinh dầu Kết thu tương đồng với kết công bố trước 4.1.3 Về chiết xuất sàng lọc sinh học ban đầu Cao cồn toàn phần phân đoạn n-hex, CHCl3, EtOAc n-BuOH sàng lọc sinh học với mơ hình DPPH ức chế enzym α-glucosidase Kết cho thấy phân đoạn CHCl3, EtOAc n-BuOH cho tác dụng tốt mơ hình thử nghiệm Phân đoạn EtOAc cho thấy tác dụng tốt nhất, sau n-BuOH CHCl3, phân đoạn n-hex cho thấy tiềm mơ hình ức chế enzyme αglucosidase Nghiên cứu lựa chọn phân đoạn EtOAc để tiếp tục phân lập chất, phân đoạn n-BuOH cho thấy tiềm có giá trị IC50 cao mơ hình thử nghiệm 4.1.4 Về nghiên cứu hóa học Từ 45 g phân đoạn EtOAc kỹ thuật sắc ký kết tinh lại nhiều lần phân lập chất, dựa vào liệu phổ xác định cấu trúc chất C1 (9,7 mg; Acid 3’-methoxy-3,4-methylendioxyellagic 4-O-β-D-glucopyranosid), C2 (17,2 mg; Kaempferol), C3 (20,8 mg; Kaempferol-7-O-α-L-rhamnose), C4 (17,9 mg; Acid 3,3’,4-trimethoxylellagic4’-O-β-D-glucopyranosid), C5 (114,6 mg; Acid gallic), C6 (8,7 mg; Epicatechin), C7 (107,4 mg; Kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-αL-rhamnopyranosid), C8 (3,5 mg; Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Acid-3’-methoxy-ellagic-4-(6’’-galloyl) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 98 glucopyranosid) Bằng cơng cụ tra cứu có xác định C4 lần phân lập từ loài thuộc chi Camellia C8 đề nghị cấu trúc kiến, cần làm rõ thơng tin phổ để xác định xác cấu trúc hợp chất 4.1.5 Nghiên cứu tác dụng sinh học Kết thử nghiệm khả chống oxy hóa phương pháp DPPH khả ức chế enzym α-glucosidase cho thấy C2, C3 C6 thể hoạt tính mơ hình thử nghiệm Trong nghiên cứu này, C1 thể bật khả ức chế enzym α-glucosidase, C5 thể khả thu dọn gốc tự mạnh Hợp chất C4 C7 thể hoạt tính yếu mơ hình thử nghiệm Trên mơ hình DPPH, chất phân lập có tác dụng thu dọn gốc tự DPPH tốt, C5 cho thấy tác dụng tốt chứng dương vitamin C, chất lại có giá trị IC50 chênh lệch khơng đáng kể với chứng dương Giá trị IC50 (µM) chất giảm dần theo thứ tự C5 > C3 > C6 > C2 Trên mơ hình ức chế enzym α-glucosidase, chất ức chế tốt chứng dương acarbose Giá trị IC50 (µM) giảm dần theo thứ tự C2 > C1 > C6 > C3 Bảng 3.28 Hoạt tính sinh học chất phân lập DPPH IC50 (µM) α-glucosidase IC50 (µM) - 69,21 ± 4,6652 30,03 ± 0,1302 24,87 ± 0,4149 51,70 ± 0,8993 272,40 ± 3,5531 - - 10,61 ± 0,1628 25,57 ± 0,9063 251,36 ± 10,8174 - - X X Vit C 28,78 ± 0,9200 - Acarbose - 862,85 ± 54,3075 Ký hiệu C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 Tên chất Acid 3’-Methoxy-3,4-methylendioxyellagic -O-β-D-glucopyranosid Kaempferol Kaempferol-7-O-α-L-rhamnose Acid 3,3’,4-trimethoxylellagic 4’-O-β-Dglucopyranosid Acid gallic Epicatechin Kaempferol 3-O-β-D glucopyranosid 7-O-αL- rhamnopyranosid Acid-3’-methoxyellagic-4-(6’’-galloyl) glucopyranosid Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 99 4.2 Kiến nghị Sau thời gian thực hiện, đề tài đạt mục tiêu đề ra, bổ sung thêm thông tin nghiên cứu cho loài C dormoyana Nếu tiếp tục, đề tài thực thêm số nghiên cứu như: - Xác định khối lượng C1 kỹ thuật phổ MS - Phân lập thêm hợp chất C8, từ xác định cung cấp đầy đủ thơng tin phổ học tính chất lý hóa - Thử nghiệm thêm số tác dụng khác độc tế bào, kháng viêm, kháng khuẩn, … nhằm khai thác tiềm cao chiết hợp chất phân lập - Xây dựng quy trình định lượng chất phân lập - Phân đoạn n-BuOH thể tác dụng tốt mơ hình thử nghiệm, thực phân lập thử nghiệm hoạt tính chất từ phân đoạn - Xác định trình tự DNA đặc trưng cho lồi C dormoyana, nhằm cung cấp thêm thơng tin gen lồi, giúp việc xác định loài dễ cho nghiên cứu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 100 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN Thanh luan DOAN, Chen TV, Duc ND, et al Morphological, physicochemical, and phytochemical characterization of Camellia dormoyana (Pierre) Sealy from Vietnam Biodiverbitas Journal of Biological Diversity 2022; 23(11): 5869-5883 DOI:10.13057/biodiv/d231141 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Wang Y., Zhuang H., Shen Y., et al The Dataset of Camellia Cultivars Names in the World Biodiversity Data Journal 2021; 9: 1-14 DOI: 10.3897/BDJ.9.e61646 He D., Li X., Sai X., et al Camellia nitidissima CW Chi: a review of botany, chemistry, and pharmacology Phytochemistry Reviews 2018; 17(2): 327-349 DOI 10.1007/s11101-017-9537-x Manh T D., Thang N T., Son,H T., et al Golden camellias: a review Archives of Current Research International 2019; 1-8 DOI: 10.9734/ACRI/2019/v16i230085 Yang R., Wang W X., Chen H J., et al The inhibition of advanced glycation endproducts by five fractions and three main flavonoids from Camellia nitidissima Chi flowers Journal of food and drug analysis 2018; 26(1): 252-259 https://doi.org/10.1016/j.jfda.2017.03.007 Yue-yuan C., Yong-lin H., and Yong-xin W Advance in study on Chemical Constituents and Pharmacological Action of Camellia chrysantha [J] Guangxi Tropical Agriculture 2009; 1 Jan, 2009 http://www.cqvip.com/qk/91564a/ 200901/29250562.html Truong, Hoang Thanh, and Nguyen Thi Lieu Le Hong En Camellia thuanana (Camellia sect Chrysantha)–a new species from the central highlands, Vietnam (2022) Dalat university journal of science (2022); 12(3): 18-26 DOI: http://dx.doi.org/10.37569/DalatUniversity.12.3.931(2022) Le N H N and Luong V D General information about the Yellow Camellia species in Vietnam In Proceedings of Dali International Camellia Congress Dali, Yunnan 2016; 80-84 Do N D., Luong V D., Le T H., et al Camellia ngheanensis (Sect Chrysantha: Theaceae), a new species from Central Vietnam Phytotaxa 2020; 452(3): 209216 https://doi.org/10.11646/ phytotaxa.452.3.3 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Cuong T Q., Dung L V., Son L V et al Camellia bidoupensis-A new species of Camellia Section Theopsis (Theaceae) from Bidoup Nui Ba National Park in Vietnam International Camellia Journal 2020; 52: 125-127 10 Van Hoi Quach, Van Dung Luong, Doudkin R V., et al Camellia proensis (Theaceae, sect Piquetia), a new species from Southern Vietnam Phytotaxa 2021; 479(1): 137-141 https://doi.org/10.11646/phytotaxa.479.1.12 11 Quach, Van Hoi, Luong, L., Hoang, T T., Bui., et al Camellia quynhii (Theaceae, sect Stereocarpus), a new yellow species from the Central Highlands, Vietnam Dalat University Journal of Science (2022); 12(3): 3-9 DOI: http://dx.doi.org/10.37569/DalatUniversity.12.3.848(2022) 12 Ngô Thị Minh Duyên, Ngô Quang Hưng, Lê Sỹ Doanh, Ngô Quý Công, Nguyễn Văn Khương Đánh giá tình hình sinh trưởng khả tái sinh Trà hoa vàng số tỉnh phía Bắc Tạp chí khoa học Lâm nghiệp 2011; (2); 1-10 13 Trương Thị Đẹp Thực vật dược Bộ Y Tế 2007; 209 14 Shan C K., Min T., Bruce B Theaceae Flora of China 2007; 12: 366 15 Shan Cha Shu Camellia Linnaeus Flora of China 2007; 12: 367–412 16 Le N N H., Uematsu C., Katayama H., et al Camellia tuyenquangensis (Theaceae), a new species from Vietnam Korean Journal of Plant Taxonomy 2017; 47(2): 95-99 https://doi.org/10.11110/kjpt.2017.47.2.95 17 Orel G., Wilson P G., Curry A S et al Four new species and two new sections of Camellia (Theaceae) from Vietnam Novon: A Journal for Botanical Nomenclature 2014; 23(3): 307-318 https://doi.org/10.3417/2012076 18 Chuangxing Y A note on revision of latin name of golden camellia Guangxi Zhiwu 1997; 17(4): 309-313 https://europepmc.org/article/cba/306549 19 Phạm Hoàng Hộ Cây cỏ Việt Nam Quyển 1, NXB Trẻ 1999; 424-431 20 Trần Ninh, Naotoshi Các loài Trà VQG Tam Đảo 2010 21 Maoxian L K Y The Study on the Morphology of Camellia Chrysantha [J] Journal of Yunnan University - Natural Science 1989; p Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 22 Ninh T and Ninh L N H The yellow Camellias of the Tam Dao National Park International Camellia Journal 2013; 45: 122-128 https://www.semanticscholar.org/paper/The-Yellow-Camellias-of-the-TamDao-National-Park-Ninh-Ninh/b1e152615e2c7edd95d89d060bf81f657a42ad2b 23 Luu H T., Nguyen Q D and Nguyen T Q T Camellia sonthaiensis (Theaceae), a new species from Vietnam”, In Annales Botanici Fennici 2015; 52 (5–6): 289295 https://doi.org/10.5735/085.052.0502 24 D H’Sninski J J., White T J., and Van Dung T N L Camellia Dilinhensis: A New Yellow Species from Viet Nam Journal of Botany 2013; 69: 347-355 25 Nguyen L T., Tran N., Chiyomi U., et al Two new species of Camellia (Theaceae) from Vietnam Korean Journal of Plant Taxonomy 2018; 48(2): 115122 https://doi.org/10.11110/kjpt.2018.48.2.115 26 Orel G A new species of Camellia section Piquetia (Theaceae) from Vietnam Novon: A Journal for Botanical Nomenclature 2006; 16(2): 244-247 https://doi.org/10.3417/1055-3177(2006)16[244:ANSOCS]2.0.CO;2 27 Hoàng Thanh Sơn, Trịnh Ngọc Bon, Võ Quang Trung, Nguyễn Văn Linh, Trần Lâm Đồng Sổ tay nhận biết loài thực vật phổ biến khu dự trữ sinh Đồng Nai, NXB Nông nghiệp Hà Nội 2018; 156 28 Zhao D New synonyms in Camellia (Theaceae): Camellia cucphuongensis, C cylindracea and C Vidalii Phytotaxa 2019; 419(1): 100-104 https://doi.org/ 10.11646/phytotaxa.419.1.7 29 Do D N., Luong D V., Nguyen C D., et al A new yellow Camellia (Theaceae) from central Vietnam Korean Journal of Plant Taxonomy 2019; 49(1): 90-95 https://doi.org/10.11110/kjpt.2019.49.1.90 30 Nguyễn Tiến Bân tác giả Sách đỏ Việt Nam Phần II-Thực vật NXB Khoa học tự nhiên Công nghệ Hà Nội 2007; 343-345 31 Hung T C and Ye L Camellia impressinervis Hung T Chang and S Ye Liang”, Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni 1979; 18(3): 72 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 32 C F Liang and S L Mo Synonymic Checklists of the Vascular Plants of the World In: Guihaia 1982; 2(2): 63 DOI: 10.15468/7ppkhn 33 Merrill E D Records of Indo-Chinese plants”, Journal of the Arnold Arboretum 1939; 20(3): 346-355 https://www.jstor.org/stable/43780957 34 Orel G., Wilson P G., Curry A S et al Camellia inusitata (Theaceae), a new species forming a new section (Bidoupia) from Vietnam Edinburgh Journal of Botany 2012; 69(2): 347 DOI:10.1017/S0960428612000170 35 Orel G and Wilson P G Camellia luteocerata sp nov and a new section of Camellia (Dalatia) from Vietnam Nordic Journal of Botany 2010; 28(3): 280284 https://doi.org/10.1111/j.1756-1051.2010.00652.x 36 Luu H T., Nguyen T Q T and Nguyen Q D Camellia luteopallida (Theaceae), a new species from Vietnam In Annales Botanici Fennici 2016; 53 (1–2): 135138 https://doi.org/10.5735/085.053.0224 37 Chang H T New species of Camellia International Camellia Journal 1998; 30: 77-83 38 Orel G., Wilson P G., Curry A S et al Camellia oconoriana, a new species from Vietnam Edinburgh Journal of Botany 2013; 70(3): 439 DOI:10.1017/ S0960428613000103 39 Van Dung L., Le Anna, N T H et al Camellia thuongiana-a new yellow Camellia species from Vietnam Dalat University Journal of Science 2016; 6: 338-344 DOI:10.37569/DalatUniversity.6.3.78(2016) 40 Nguyen, T L and Nguyen T L T Camellia velutina (Theaceae, Sect Chrysantha), a new species from northern Vietnam Pakistan journal of botany 2019; 51(4): 1441-1446 DOI: http://dx.doi.org/10.30848/PJB2019-4(33) 41 Emily B., Megan B and Malin R The Red List of Theaceae Botanic Gardens Conservation International 2017; 48 http://globaltrees.org/wp-content/upl 42 Orel G., Wilson P G and Truong L H Camellia curryana and C longii spp nov.(Theaceae) from Vietnam Nordic Journal of Botany 2014; 32(1): 42-50 https://doi.org/10.1111/j.1756-1051.2013.00399.x Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 43 Takhtajan A (2009), “Flowering plants”, Springer Science and Business Media 44 An L., Zhang W., Ma G., et al Neuroprotective effects of Camellia nitidissima Chi leaf extract in hydrogen peroxide‐treated human neuroblastoma cells and its molecule mechanisms Food science and nutrition 2020; 8(9): 4782-4793 DOI: 10.1002/fsn3.1742 45 Xiong Z., Qi X., Wei X., et al Nutrient composition in leaves of cultivated and wild Camellia nitidissima Pakistan Journal of Botany 2012; 44(2): 635-638 ID ：201202244087843037 46 Song L., Wang X., Zheng X., et al Polyphenolic antioxidant profiles of yellow camellia Food chemistry 2011; 129(2): 351-357 DOI: 10.1016/j.foodchem 2011.04.083 47 Ge L., Lin B., Mo J., et al Composition and antioxidant and antibacterial activities of essential oils from three yellow Camellia species Trees 2019; 33(1): 205-212 DOI:10.1007/s00468-018-1769-x 48 Trần Thị Phương Linh, Lữ Hoàng Trúc Linh, Trần Thị Thanh Phúc, Lương Văn Dũng, Trịnh Thị Điệp Khảo sát thành phần hóa học đánh giá hàm lượng polyphenol loài Trà mi học tự nhiên Lâm Đồng Tạp chí dược liệu 2017; 22; 206-209 49 Nguyễn Thị Hồng Vân, Cầm Thị Ính, Phạm Cao Bách, Trần Thị Tuyến, Nguyễn Thị Thanh, Nguyễn Hương Quỳnh, Phạm Quốc Long Các hợp chất flavonoid glycoside phân lập từ hoa Trà hoa vàng Camellia chrysantha Tạp chí Hóa học 2018; 56(3); 335-340 50 Lin J N., Lin H Y., Yang N S., et al Chemical constituents and anticancer activity of yellow camellias against MDA-MB-231 human breast cancer cells Journal of agricultural and food chemistry 2013; 61(40): 9638-9644 https://doi.org/10 1021/jf4029877 51 Nguyen H V T., Pham B C., Cam I T., et al Flavonoids isolated from the flowers of Camellia chrysantha Vietnam Journal of Science and Technology 2019; 57(3): 287 https://doi.org/10.15625/2525-2518/57/3/13119 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 52 Peng X., Yu D Y., Feng B M., et al A new acylated flavonoid glycoside from the flowers of Camellia nitidissima and its effect on the induction of apoptosis in human lymphoma U937 cells Journal of Asian natural products research 2012; 14(8): 799-804 https://doi.org/10.1080/10286020.2012.691475 53 Peng X., Yu D., Feng B., et al Chemical constituents from the flowers of Camellia chrysantha Guangxi Zhiwu/Guihaia, 2011; 31(4): 550-568 https://www cabdirect.org / cabdirect/abstract/20113346570 54 Qi J., Shi R F., Yu J M., et al Chemical constituents from leaves of Camellia nitidissima and their potential cytotoxicity on SGC7901 cells Chinese Herbal Medicines 2016; 8(1): 80-84 https://doi.org/10.1016/S1674-6384(16)60012-6 55 Xu C., Liu S., Song F and Liu, Z Xanthine oxidase inhibitors and the analytical methods to screen them: A review Current Traditional Medicine 2015; 1(1): 4150 15 May, 2015 https://www.ingentaconnect.com/content/ben/ctm/2015/ 00000001/00000001/art00008 56 Zhang X., Feng J., Su S and Huang L Hepatoprotective effects of Camellia nitidissima aqueous ethanol extract against CCl4-induced acute liver injury in SD rats related to Nrf2 and NF-κB signalling Pharmaceutical biology 2020; 58(1): 239-246 DOI: 10.1080/13880209.2020.1739719 57 Li X., Wang J., Sun Z., et al UPLC-QTOF-MS analysis of flowers and leaves of Camellia nitidissima Forest Research, Beijing 2018; 31(6): 83-88 DOI: 10.13275/j.cnki.lykxyj.2018.06.012 58 Yan D M and Li R J Determination of five kinds of polyphenol substances in camellia chrysantha by high performance liquid chromatography [J] Journal of Henan University of Technology (Natural Science Edition) 2010; p DOI :10.16433/j cnki issn1673 -2383.2010.01.015 59 Huang Y L., Chen Y Y., Wen Y X., et al Analysis of volatile components in Camellia nitidissima by GC-MS Food Science Technology 2021; 34: 257-260 https://doi.org/10.3390/ agronomy11040657 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 60 Zou D F., Qiu Y T., Xie A Z., et al GC-MS analysis of ether extraction of Camellia chrysantha Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae 2012; 18(20): 129-132 DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.20.046 61 Wang B., Ge L., Mo J., Su L., Li Y., et al Essential oils and ethanol extract from Camellia nitidissima and evaluation of their biological activity Journal of food science and technology 2018; 55(12): 5075-5081 DOI: https://doi.org/ 10.1007/s13197-018-3446-x 62 Wei J B., Li X., Song H., et al Characterization and determination of antioxidant components in the leaves of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama based on composition–activity relationship approach Journal of food and drug analysis 2015; 23(1): 40-48 DOI: https://doi.org/10.1016/j.jfda.2014.02.003 63 Han L C., Shi L Y., Yu D Y., et al Inhibitive effect of seeds of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama on gonadal hormones dependent tumour in vitro Lishizhen Medicine and Materia Medica Research 2009; 20: 3146 ID: 10080805( 2009) 12-3146-02 64 Shi L Y., Yu D Y and Tang Q Effect of Seeds of Camellia Chrysantha (Hu) Tuyama on Human Monocytic Leukemia U937 Cell Line The Practical Journal of Cancer 2009; 24(4): 331-332 ID: 1001-5930( 2009) 04-0331-02 65 Dai L., Li J L., Liang X Q., et al Flowers of Camellia nitidissima cause growth inhibition, cell-cycle dysregulation and apoptosis in a human esophageal squamous cell carcinoma cell line Molecular medicine reports 2016; 14(2): 1117-1122 https://doi.org/10.3892/mmr.2016.5385 66 Zhang Z H and Li P Anti-proliferation and apoptosis effects of Camellia nitidissima CW Chi extract on A549 lung cancer cells Tropical Journal of Pharmaceutical Research 2018; 17(3): 395-400 http://dx.doi.org/ 10.4314/tjpr.v17i3.2 67 Hou X., Du H., Yang R The antitumor activity screening of chemical constituents from Camellia nitidissima Chi International journal of molecular medicine 2018; 41(5): 2793-2801 DOI: 10.3892/ijmm.2018.3502 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 68 Wang L., Roy D., Lin S S., et al Hypoglycemic effect of Camellia chrysantha extract on type diabetic mice model Bangladesh Journal of Pharmacology 2017; 12(4): 359-363 DOI: 10.3329/bjp.v12i4.32995 69 Wang W., Liu H., Wang Z., et al Phytochemicals from Camellia nitidissima Chi inhibited the formation of advanced glycation end-products by scavenging methylglyoxal Food chemistry 2016; 205: 204-211 https://doi.org/10.1016/j foodchem.2016.03.019 70 Huang Y L., Chen Y Y., Wen Y X., et al Effects of the extracts from Camellia nitidssimas leaves on blood lipids Lishizhen Medicine and Materia Medica Research 2009; 4(20): 776-777 ID: 87493317 71 Zhang H L., Wu Q X., Wei X Et al Pancreatic lipase and cholesterol esterase inhibitory effect of Camellia nitidissima Chi flower extracts in vitro and in vivo Food Bioscience 2020; 37: 1-8 https://doi.org/10.1016/j.fbio.2020.100682 72 Zhang X., Feng J., Su S and Huang L Hepatoprotective effects of Camellia nitidissima aqueous ethanol extract against CCl4-induced acute liver injury in SD rats related to Nrf2 and NF-κB signalling Pharmaceutical biology 2020; 58(1): 239-246 DOI: 10.1080/13880209.2020.1739719 73 Bano T., Kumar N., and Dudhe R Free radical scavenging properties of pyrimidine derivatives Organic and medicinal chemistry letters 2012; 2(1): 16 https://doi.org/10.1186/2191-2858-2-34 74 Liang N and Kitts D D Antioxidant property of coffee components: assessment of methods that define mechanisms of action Molecules 2014; 19(11): 1918019208 DOI:10.3390/molecules191119180 75 Mishra B B., Gautam S and Sharma A Microbial decontamination of tea (Camellia sinensis) by gamma radiation Journal of food science 2006; 71(6): 151-156 DOI: 10.1111/j.1750-3841.2006.00057.x 76 Shalaby E A and Shanab S M Antioxidant compounds, assays of determination and mode of action African journal of pharmacy and pharmacology 2013; 7(10): 528-539 DOI 10.5897/AJPP2013 3474 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 77 Trần Thị Thu Hằng Dược lực học NXB Hồng Đức 2019; 414 78 Makkar F and Chakraborty K Antidiabetic and anti-inflammatory potential of sulphated polygalactans from red seaweeds Kappaphycus alvarezii and Gracilaria opuntia International Journal of Food Properties 2017; 20(6): 13261337 https://doi.org/10.1080/10942912.2016.1209216 79 Federation I D IDF diabetes atlas ninth”, Dunia:International Diabetes Federation 2019 80 Saeedi P., Petersohn I., Salpea P., et al Global and regional diabetes prevalence estimates for 2019 and projections for 2030 and 2045: Results from the International Diabetes Federation Diabetes Atlas Diabetes research and clinical practice 2019; 157 DOI:10.1016/j.diabres.2019.107843 81 Centers for Disease Control and Prevention National diabetes statistics report Atlanta, GA: Centers for Disease Control and Prevention, US Department of Health and Human Services 2020; 12-15 June 30, 2011 https:// www.researchgate.net/publication/215534034 82 Su K., Mao X., Ai L and Zhang X In vitro assessment of anti-diabetic potential of four kinds of dark tea (Camellia sinensis L.) protein hydrolysates Journal of Applied Botany and Food Quality 2019; 92: 57-63 DOI:10.5073/JABFQ.2019.092.008 83 Chakrabarti R., Bhavtaran S., Narendra P., et al Dipeptidyl peptidase-IV inhibitory activity of Berberis aristata Journal of Natural Products 2011; 4: 158-163 84 Bộ Y Tế Dược điển Việt Nam V NXB Y học Hà Nội; 2017 85 Trần Hùng Phương pháp nghiên cứu dược liệu Bộ môn Dược liệu – ĐH Y Dược thành phố Hồ Chí Minh 2016; 25-35 86 Ly H T., Nguyen T T H., Tran T T L., et al Hypoglycemic and antioxidant activities of Clerodendrum inerme leaf extract on streptozotocin-induced diabetic models in mice Chinese Herbal Medicines https://doi.org/10.1016/j.chmed.2019.08.001 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 2019; 11(4): 387-393 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 87 Ly Hai Trieu, Le Van Minh, Nguyen Thi Thu Huong In vitro α-amylase and αglucosidase inhibitory activities of crude and fractionated extracts of Clerodendrum inerme leaves collected from phu quoc island Journal of Medicinal Materials 2018; 23(5): 283-289 88 Qi Z., Pi E., Zhang X., Möller M., et al Ontogenesis of D-type stomata and corkwarts on the leaf epidermis of Camellia japonica (Theaceae) and functional assessment Flora 2017 228, 24-30 DOI: http://www.elsevier.com/openaccess/userlicense/1.0/ 89 Li X C., Elsohly H N., Hufford C D., et al NMR assignments of ellagic acid derivatives Magnetic Resonance in Chemistry 1999; 37(11): 856-859 DOI: CCC 0749–1581/99/110856–04 $17.50 90 Choe K I., Kwon J H., Park K H., et al The antioxidant and anti-inflammatory effects of phenolic compounds isolated from the root of Rhodiola sachalinensis A BOR Molecules 2012; 17(10): 11484-11494 DOI: https://doi.org/10.3390/molecules171011484 91 Eldahshan, O A Isolation and structure elucidation of phenolic compounds of carob leaves grown in Egypt Curr Res J Biol Sci 2011; 3(1): 52-55 92 Cuong D T D., Dat H T., Duan N T Et al Isolation and characterization of six flavonoids from the leaves of Sterculia foetida Linn Vietnam Journal of Chemistry 2019; 57(4): 438-442 DOI: 10.1002/vjch.201900084 93 Lee T M., and Der Marderosian A H Studies on the constituents of dwarf ginseng Phytotherapy Research 1988; 2(4): 165-169 DOI: CCC-095 1-41 8X/88/0165-0 169 $02.50 94 Bach P C., Hung N P., Inh C T., et al Quantitative analysis of Caffeine in the leaves and flowers of Camellia chrysantha by high-performance liquid chromatography with DAD detection Vietnam Journal of Science and Technology 2020; 58(3); 267-273 2518/58/3/14366 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn DOI: https://doi.org/10.15625/2525- Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 95 Rasouli, H., Farzaei, M H., and Khodarahmi R Polyphenols and their benefits: A review International Journal of Food Properties 2017; 20(2), 1700-1741 DOI: https://doi.org/10.1080/10942912.2017.1354017 96 Kähkönen M P, Hopia A I, Vuorela H J et al Antioxidant activity of plant extracts containing phenolic compounds, J Agric Food Chem 1999; 47 (10): 3954-3962 97 Lee S B., and Chung, D W Synthesis and purification of kaempferol by enzymatic hydrolysis of tea seed extract Biotechnology and bioprocess engineering 2014; 19(2): 298-303 DOI: 10.1007/s12257-013-0605-9 98 Patricia M Aron and James A Kennedy Flavan-3-ols: Nature, occurrence and biological activity 2008; 52(1): 79– 1104 DOI:10.1002/mnfr.200700137 99 Alves M M D M., Brito L M., Souza A C., et al Gallic and ellagic acids: two natural immunomodulator compounds solve infection of macrophages by Leishmania major Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology 2017; 390(9): 893-903 DOI: 10.1007/s00210-017-1387-y 100 Dimitrios I Tsimogiannis and Vassiliki Oreopoulou The contribution of flavonoid C-ring on the DPPH free radical scavenging efficiency A kinetic approach for the 3′,4′-hydroxy substituted members 2006; 7(1-2): 0–146 DOI:10.1016/j.ifset.2005-.09.001 101 Alavi Rafiee S., Farhoosh, R., and Sharif A Antioxidant activity of gallic acid as affected by an extra carboxyl group than pyrogallol in various oxidative environments European Journal of Lipid Science and Technology 2018; 120(11): 1800319 DOI: https://doi.org/10.1002/ejlt.201800319 102 Shirazi O U., Khattak M M A K., and Shukri N A M Determination of total phenolic, flavonoid content and free radical scavenging activities of common herbs and spices Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry 2014; 3(3): 104-108 103 Olszowy-Tomczyk, M How to express the antioxidant properties of substances properly Chemical Papers 2021; 75(12): https://doi.org/10.1007-/s11696-021-01799-1 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 6157-6167 DOI: Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 104 Şưhretoğlu, D., and Sari, S Flavonoids as alpha-glucosidase inhibitors: Mechanistic approaches merged with enzyme kinetics and molecular modelling Phytochemistry Reviews 2020; 19(5): 1081-1092 105 Cho J Y., Lee K D., Park S Y., et al Isolation and identification of αglucosidase inhibitors from the stem bark of the nutgall tree (Rhus javanica Linné) Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry 2013; 56(5): 547-552 DOI 10.1007/s13765-013-3140-7 106 Wansi J D., Lallemand M C., Chiozem D D., et al α-Glucosidase inhibitory constituents from stem bark (Combretaceae) Phytochemistry 2007; of Terminalia 68(15): superba 2096-2100 DOI:10.1016/j.phytochem.2007.02.020 107 Yang, D., Chen, X., Liu, X., Han, N., Liu, Z., et al Antioxidant and αglucosidase inhibitory activities guided isolation and identification of components from mango seed kernel Oxidative medicine and cellular longevity 2020 DOI:10.1016/j.-phytochem.2007.02.020 108 Kashtoh, H., and Baek, K H Recent Updates on Phytoconstituent AlphaGlucosidase Inhibitors: An Approach towards the Treatment of Type Two Diabetes Plants 2022; 11(20): 2722 https://doi.org/10.3390/ plants11202722 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.1 PHỤ LỤC Phụ lục Độ hấp thu bước sóng 760 nm chuẩn acid gallic PL.3 Phụ lục Số liệu khảo sát thử nghiệm DPPH cao cồn phân đoạn PL.3 Phụ lục Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng khả thu dọn gốc tự DPPH cao cồn phân đoạn PL.3 Phụ lục Phương trình, đồ thị thử nghiệm DPPH PL.4 Phụ lục Số liệu khảo sát thử nghiệm ức chế enzym α-glucosidase cao cồn phân đoạn PL.4 Phụ lục Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase cao cồn phân đoạn PL.5 Phụ lục Phương trình đồ thị thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidasePL.6 Phụ lục Dữ liệu phổ C1: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.7 Phụ lục Dữ liệu phổ C1: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.8 Phụ lục 10 Dữ liệu phổ C1: DEPT PL.9 Phụ lục 11 Dữ liệu phổ C1: HSQC PL.10 Phụ lục 12 Dữ liệu phổ C1: HMBC PL.11 Phụ lục 13 Dữ liệu phổ C2: MS (+) APCI PL.12 Phụ lục 14 Dữ liệu phổ C2: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.12 Phụ lục 15 Dữ liệu phổ C2: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.13 Phụ lục 16 Dữ liệu phổ C3: MS (+) APCI PL.14 Phụ lục 17 Dữ liệu phổ C3: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.14 Phụ lục 18 Dữ liệu phổ C3: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.15 Phụ lục 19 Dữ liệu phổ C4: MS (-) APCI PL.16 Phụ lục 20 Dữ liệu phổ C4: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.16 Phụ lục 21 Dữ liệu phổ C4: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.17 Phụ lục 22 Dữ liệu phổ C4: DEPT PL.18 Phụ lục 23 Dữ liệu phổ C4: HSQC PL.19 Phụ lục 24 Dữ liệu phổ C4: HMBC PL.20 Phụ lục 25 Dữ liệu phổ C5: MS (-) APCI PL.21 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.2 Phụ lục 26 Dữ liệu phổ C5: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.21 Phụ lục 27 Dữ liệu phổ C5: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.22 Phụ lục 28 Dữ liệu phổ C6: MS (+) APCI PL.22 Phụ lục 29 Dữ liệu phổ C6: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.23 Phụ lục 30 Dữ liệu phổ C6: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.24 Phụ lục 31 Dữ liệu phổ C7: MS (+) APCI PL.24 Phụ lục 32 Dữ liệu phổ C7: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.25 Phụ lục 33 Dữ liệu phổ C7: 1H-NMR (DMSO-d6) PL.26 Phụ lục 34 Dữ liệu phổ C7: DEPT PL.27 Phụ lục 35 Dữ liệu phổ C7: HSQC PL.28 Phụ lục 36 Dữ liệu phổ C7: HMBC PL.29 Phụ lục 37 Dữ liệu phổ C8: MS (+) APCI PL.30 Phụ lục 38 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.30 Phụ lục 39 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) trích vùng 148 – 168 ppm PL.31 Phụ lục 40 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) PL.32 Phụ lục 41 Dữ liệu phổ C8: DEPT PL.33 Phụ lục 42 Dữ liệu phổ C8: DEPT trích vùng 55-135 ppm PL.33 Phụ lục 43 Dữ liệu phổ C8: HSQC PL.34 Phụ lục 44 Dữ liệu phổ C8: HMBC PL.35 Phụ lục 45 Dữ liệu phổ C8: COSY trích vùng 3,0-5,5 ppm PL.36 Phụ lục 46 Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng khả thu dọn gốc tự DPPH chất phân lập PL.36 Phụ lục 47 Phương trình, đồ thị thử nghiệm DPPH chất phân lập PL.37 Phụ lục 48 Số liệu thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập PL.37 Phụ lục 49 Phương trình đồ thị thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập PL.38 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.3 Phụ lục Độ hấp thu bước sóng 760 nm chuẩn acid gallic Nồng độ 0,129 0,137 0,133 0,273 0,267 0,271 0,390 0,386 0,378 0,509 0,505 0,496 0,624 0,617 0,605 0,742 0,735 0,727 Phụ lục Số liệu khảo sát thử nghiệm DPPH cao cồn phân đoạn Mẫu (100 µg/ml) Mẫu trắng % ức chế tb n-hexan CHCl3 EtOAc n-BuOH Cồn 0,71 0,673 0,706 0,078 25,14 0,157 0,158 0,166 0,093 91,84 0,103 0,097 0,092 0,066 96,20 0,125 0,113 0,112 0,051 92,05 0,145 0,146 0,147 0,081 92,13 Vitamin C (5 µg/ml) 0,457 0,463 0,468 0,041 48,95 DPPH 0,867 0,87 0,861 0,04 Phụ lục Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng khả thu dọn gốc tự DPPH cao cồn phân đoạn Mẫu A Cồn EtOAc n-BuOH 10 11 12 0,750 0,730 0,792 0,047 0,837 0,846 0,841 0,050 0,649 0,606 0,652 0,576 0,656 0,054 0,661 0,658 0,649 0,065 0,582 0,543 0,616 0,084 0,504 0,518 0,508 0,051 0,488 0,476 0,491 0,056 0,477 0,374 0,396 0,408 0,302 0,055 0,344 0,358 0,347 0,068 0,274 0,233 0,459 0,048 F 0,158 0,188 0,184 0,078 0,218 0,238 0,227 0,068 0,150 0,150 0,918 0,070 - 0,145 0,064 - G 0,926 - - - - - - - - - - - H 0,937 - - - - - - - - - - - B C D E Mẫu CHCl3 Vitamin C 0,806 0,841 0,074 0,543 0,511 0,524 0,043 B 0,758 0,744 0,725 0,069 0,417 0,423 0,448 0,041 - - - - C 0,687 0,665 0,679 0,076 0,363 0,358 0,364 0,043 - - - - D 0,498 0,514 0,494 0,095 0,241 0,231 0,259 0,044 - - - - E 0,234 - - - - F 0,838 - - - - G 0,846 0,223 0,208 0,141 0,139 0,156 0,144 0,044 0,052 0,837 0,051 0,810 - - - - H 0,815 - - - - 0,819 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn - - 0,812 - 0,05 A - 0,245 - - 0,555 0,098 - - 10 - 11 - 12 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.4 Phụ lục Phương trình, đồ thị thử nghiệm DPPH Phụ lục Số liệu khảo sát thử nghiệm ức chế enzym α-glucosidase cao cồn phân đoạn Mẫu n-hexan (100 mcg/ml) 0,334 CHCl3 EtOAc n-BuOH Cồn 0,28 0,107 0,122 0,242 Acarbose (100 mcg/ml) 0,851 DPPH 1,097 0,336 0,29 0,108 0,121 0,225 0,812 1,029 0,323 0,276 0,115 0,126 0,243 0,833 1,056 Chứng mẫu 0,317 0,216 0,112 0,108 0,183 0,064 0,063 % ức chế 98,59 93,38 100,20 98,49 94,62 23,02 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.5 Phụ lục Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng hoạt tính ức chế enzym αglucosidase cao cồn phân đoạn Mẫu n-Hex Cồn CHCl3 10 11 12 A 1,515 1,525 1,501 0,054 0,827 0,828 0,837 0,126 1,028 1,063 1,036 0,046 B 1,276 1,303 1,390 C 1,031 1,177 1,235 0,053 0,782 0,795 0,789 0,282 0,912 0,896 0,882 0,048 D 0,641 0,609 0,588 0,054 0,655 0,635 0,654 0,282 0,571 0,561 0,582 0,053 E 0,212 0,261 0,265 0,054 0,543 0,546 0,551 0,315 0,163 0,176 0,187 0,066 1,019 0,056 1,019 0,056 1,074 0,046 1,032 1,032 1,075 1,089 1,089 1,059 F G H Mẫu 0,06 0,802 0,816 0,819 0,186 0,986 0,981 0,984 0,047 EtOAc n-BuOH 1,43 Acarbose 10 11 12 A 1,473 1,456 1,446 0,061 1,518 B 1,352 1,353 1,379 0,052 1,326 1,316 1,282 0,061 1,154 1,155 1,137 C 1,177 1,309 0,054 1,037 1,033 1,027 0,054 1,017 0,975 0,957 0,052 D 0,898 0,883 0,861 0,052 0,862 0,839 0,868 0,045 0,738 0,704 0,716 0,057 E F 0,221 0,245 0,217 0,055 0,918 0,07 - G 0,926 - - - 0,072 0,072 0,068 0,045 0,512 0,506 0,511 0,058 1,515 0,045 1,515 0,045 1,589 1,589 H 0,937 - - - 1,534 1,24 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn - 1,505 0,054 1,319 1,302 1,317 0,048 - - 1,534 - - 0,05 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.6 Phụ lục Phương trình đồ thị thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.7 Phụ lục Dữ liệu phổ C1: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.8 Phụ lục Dữ liệu phổ C1: 1H-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.9 Phụ lục 10 Dữ liệu phổ C1: DEPT Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.10 Phụ lục 11 Dữ liệu phổ C1: HSQC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.11 Phụ lục 12 Dữ liệu phổ C1: HMBC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.12 Phụ lục 13 Dữ liệu phổ C2: MS (+) APCI Phụ lục 14 Dữ liệu phổ C2: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.13 Phụ lục 15 Dữ liệu phổ C2: 1H-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.14 Phụ lục 16 Dữ liệu phổ C3: MS (+) APCI Phụ lục 17 Dữ liệu phổ C3: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.15 Phụ lục 18 Dữ liệu phổ C3: 1H-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.16 Phụ lục 19 Dữ liệu phổ C4: MS (-) APCI Phụ lục 20 Dữ liệu phổ C4: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.17 Phụ lục 21 Dữ liệu phổ C4: 1H-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.18 Phụ lục 22 Dữ liệu phổ C4: DEPT Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.19 Phụ lục 23 Dữ liệu phổ C4: HSQC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.20 Phụ lục 24 Dữ liệu phổ C4: HMBC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.21 Phụ lục 25 Dữ liệu phổ C5: MS (-) APCI Phụ lục 26 Dữ liệu phổ C5: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.22 Phụ lục 27 Dữ liệu phổ C5: 1H-NMR (DMSO-d6) Phụ lục 28 Dữ liệu phổ C6: MS (+) APCI Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.23 Phụ lục 29 Dữ liệu phổ C6: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.24 Phụ lục 30 Dữ liệu phổ C6: 1H-NMR (DMSO-d6) Phụ lục 31 Dữ liệu phổ C7: MS (+) APCI Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.25 Phụ lục 32 Dữ liệu phổ C7: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.26 Phụ lục 33 Dữ liệu phổ C7: 1H-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.27 Phụ lục 34 Dữ liệu phổ C7: DEPT Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.28 Phụ lục 35 Dữ liệu phổ C7: HSQC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.29 Phụ lục 36 Dữ liệu phổ C7: HMBC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.30 Phụ lục 37 Dữ liệu phổ C8: MS (+) APCI Phụ lục 38 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.31 Phụ lục 39 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) trích vùng 148 – 168 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.32 Phụ lục 40 Dữ liệu phổ C8: 13C-NMR (DMSO-d6) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.33 Phụ lục 41 Dữ liệu phổ C8: DEPT Phụ lục 42 Dữ liệu phổ C8: DEPT trích vùng 55-135 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.34 Phụ lục 43 Dữ liệu phổ C8: HSQC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.35 Phụ lục 44 Dữ liệu phổ C8: HMBC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.36 Phụ lục 45 Dữ liệu phổ C8: COSY trích vùng 3,0-5,5 ppm Phụ lục 46 Số liệu thử nghiệm đĩa 96 giếng khả thu dọn gốc tự DPPH chất phân lập Mẫu A B C D E F G H Mẫu A B C D E F G H C2 C3 C5 0,358 0,299 0,243 0,180 0,097 0,383 0,386 0,391 0,363 0,312 0,256 0,171 0,098 0,035 - 0,364 0,314 0,251 0,178 0,097 - 0,034 0,033 0,034 0,032 0,036 - 0,323 0,264 0,199 0,156 0,122 0,352 0,371 0,375 0,330 0,260 0,205 0,161 0,120 0,029 - 0,330 0,270 0,211 0,164 0,127 - 0,034 0,031 0,031 0,033 0,033 - 0,277 0,237 0,184 0,147 0,099 0,383 0,386 0,391 10 0,294 0,251 0,185 0,146 0,087 0,035 - 0,326 0,291 0,235 0,196 0,137 0,352 0,371 0,375 C6 0,332 0,334 0,283 0,293 0,231 0,229 0,199 0,201 0,134 0,135 0,029 - 0,030 0,031 0,034 0,036 0,036 - 0,241 0,203 0,162 0,136 0,106 0,360 0,391 0,364 Vitamin C 0,243 0,236 0,209 0,212 0,159 0,156 0,137 0,131 0,105 0,103 0,038 - 0,030 0,035 0,037 0,042 0,072 - 0,267 0,296 0,311 0,325 0,327 0,330 C1-C4-C7 10 11 12 0,280 0,284 0,035 0,301 0,285 0,052 0,306 0,305 0,034 0,044 - Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 11 0,289 0,248 0,189 0,141 0,096 - 12 0,037 0,034 0,035 0,033 0,035 - Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.37 Phụ lục 47 Phương trình, đồ thị thử nghiệm DPPH chất phân lập Phụ lục 48 Số liệu thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập Mẫu C1 C2 C3 10 11 12 A 2,077 2,095 2,077 0,121 1,965 1,904 1,821 0,053 1,536 1,528 1,473 0,117 B 1,607 1,688 1,786 0,131 1,658 1,641 1,636 0,053 1,321 1,309 1,347 C 1,349 1,384 1,366 D 1,041 1,069 1,086 0,144 1,062 1,086 1,022 E 0,624 0,659 0,714 0,251 0,641 0,681 0,726 0,631 0,825 0,823 0,808 0,358 F 2,346 0,267 - - 2,346 0,267 - - 1,533 0,062 - - G 2,269 - - - 2,269 - - - 1,646 - - - H 2,668 - - - 2,668 - - - 1,745 - - - 0,12 1,423 1,443 1,385 0,088 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 0,27 1,17 0,22 1,116 1,139 0,239 0,995 0,938 0,992 0,336 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL.38 Mẫu C6 Acarbose C4-C5-C7 10 11 12 A 2.352 2.213 2.472 0.187 2,025 2,157 2,219 0,044 1,675 1,764 1,898 0,061 B 2.188 2.146 2.269 0.195 1,801 1,856 1,791 0,052 1,867 1,904 1,798 0,065 C 1.734 1.689 1.843 0.205 1,521 1,588 1,577 0,059 2,151 2,102 D 1.145 1.188 1.243 0.234 1,234 1,205 1,121 0,059 - E 0.829 0.852 0.898 0.254 0,793 0,752 0,749 0,052 - F 2.346 0.267 - - 2,677 0,094 - - G 2.269 - - - 2,596 - - H 2.668 - - - 2,546 - - 2,19 0,157 - - - - - - 2,109 0,052 - - - 2,209 - - - - 2,391 - - - Phụ lục 49 Phương trình đồ thị thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất phân lập Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn