BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN BÌNH PHƯƠNG ANH NGHIÊN CỨU CƠNG THỨC HỆ VI TỰ NHŨ (SMEDDS) CHỨA PREDNISOLON HƯỚNG TỚI THUỐC NHỎ MẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN BÌNH PHƯƠNG ANH NGHIÊN CỨU CƠNG THỨC HỆ VI TỰ NHŨ (SMEDDS) CHỨA PREDNISOLON HƯỚNG TỚI THUỐC NHỎ MẮT NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 8720202 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN THIỆN HẢI TP HỒ CHÍ MINH - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Bình Phương Anh Luận văn Thạc sĩ dược học – Năm học 2020-2022 NGHIÊN CỨU CÔNG THỨC HỆ VI TỰ NHŨ (SMEDDS) CHỨA PREDNISOLON HƯỚNG TỚI THUỐC NHỎ MẮT Nguyễn Bình Phương Anh Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Thiện Hải TÓM TẮT Mở đầu: Prednisolon thuốc chống viêm corticosteroid, sử dụng cho mắt điều trị viêm màng bồ đào viêm mắt không đáp ứng với corticosteroid chỗ Prednisolon dược chất khó tan nước, việc cải thiện độ tan, tăng tỷ lệ hấp thu thuốc vào mô bên mắt, tăng thời gian lưu thuốc trước giác mạc từ cải thiện sinh khả dụng hiệu điều trị cho mắt vấn đề quan tâm Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Tuần tự khảo sát độ tan prednisolon, chọn tá dược, xây dựng giản đồ pha, sau đánh giá cảm quan, độ bền nhiệt động, ảnh hưởng độ pha loãng pH lên độ bền vững hệ kích thước giọt Hệ sau tải prednisolon từ 1% - 2,5% đánh giá cảm quan, ảnh hưởng độ pha loãng pH, độ bền nhiệt động, kích thước giọt, zeta khả giải phóng hoạt chất Khảo sát tá dược bảo quản, chống oxy hóa, điều chỉnh pH để hồn thiện cơng thức thuốc nhỏ mắt Kết quả: Đề tài xây dựng cơng thức quy trình điều chế hệ vi tự nhũ tải prednisolon 2% Công thức SMEDDS tải 2% prednisolon gồm Capryol® 90 Kolliphor® RH40 - Transcutol® HP (20:40:40) SMEDDS thu suốt, đồng nhất, đạt tiêu lý hóa, có kích thước trung bình 19,99 ± 0,122, phân bố 01 đỉnh, zeta -1,88 khả GPHC 74,92 % sau 06 Các tá dược acid boric, vitamin E lựa chọn để hoàn thiện công thức thuốc nhỏ mắt Kết luận: Đề tài bước đầu điều chế thành công thuốc nhỏ mắt chứa hệ SMEDDS tải 2% prednisolon thỏa tính chất lý hóa, độ hịa tan có triển vọng cho nghiên cứu Từ khoá: Thuốc nhỏ mắt, hệ vi tự nhũ, SMEDDS, prednisolon Final thesis for the Master degree of Pharmacy – Academic year: 2020 – 2022 FORMULATION OF SELF – MICROEMULSIFYING DRUG DELIVERY SYSTEM (SMEDDS) CONTAINING PREDNISOLONE TO OCULAR Nguyen Binh Phuong Anh Supervisor: Assoc Prof PhD Nguyen Thien Hai Introduction: Prednisolone is a corticosteroid anti-inflammatory drug that, used ophthalmologically in the treatment of conjunctivitis and ocular inflammation unresponsive to topical corticosteroids Prednisolone has a very low aqueous solubility, improving the solubility, increasing the rate of drug absorption into the inner tissues of the eye, increasing the retention time of the drug in front of the cornea, thereby improving the bioavailability and therapeutic effect for the eyes is a matter of concern Methods: Solubility of prednisolone in various excipients in order to select appropriate excipients, and the phase diagram was constructed SMEDDS was evaluated for appearance, the effects of dilution and pH on system stability, thermodymamic properties, droplet size, zeta potential The SMEDDS that formed clear microemulsions were loaded – 2.5 % and evaluated appearance, the effects of dilution and pH on system stability, thermodymamic properties, droplet size, zeta potential and drug release Investigation of preservative, anti-oxidant, and pHadjusting excipients to perfect the eye drop formulation Results: SMEDDS - prednisolon 2% contained Capryol® 90 - Kolliphor® RH40 Transcutol® HP (20:40:40) was stable, met all physico-chemical properties, had average nano sized droplets of 19,99 ± 0.122 nm, narrow size distribution and zeta potentials of -1.88, drug release after 06 hours 74,92% Excipients are boric acid, vitamin E selected to complete the formulation of eye drops Conclusion: The formulation of SMEDDS loading 2% prednisolone was successfully formulated and could be subjected to further investigations Keywords: Ocular, self-microemulsifying drug delivery systems, SMEDDS, prednisolone MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ iv ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương dược chất prednisolon 1.2 Hệ vi tự nhũ (Self-microemulsifying drug delivery system) 1.3 Vi tự nhũ nhỏ mắt 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng, nguyên liệu, hóa chất, dung môi dùng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 3.1 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm 38 3.2 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS – prednisolon 50 3.3 Xây dựng công thức đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon 77 CHƯƠNG BÀN LUẬN 80 4.1 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm 80 4.2 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS – prednisolon 82 4.3 Xây dựng công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon 86 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ tiếng anh Chữ tiếng việt BAB Blood–aqueous barrier Hàng rào máu - thủy dịch BRB Blood-retinal barrier Hàng rào máu - võng mạc GPHC HLB HPLC Giải phóng hoạt chất Hydrophilic-Lipophilic Balance High Performance Liquid Chromatography Hệ số cân dầu-nước Sắc kí lỏng hiệu cao Khối lượng/khối lượng kl/kl LCT Long chain triglycerides Triglycerid mạch dài MCT Medium chain triglycerides Triglycerid mạch trung bình Nước mắt nhân tạo NMNT RPE Retinal Pigment Epithelium Biểu mô sắc tố võng mạc RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SEDDS SKD SMEDDS SNEDDS Self-emulsifying Drug Delivery System Bioavailability Self-microemulsifing Drug Delivery System Self-nanoemulsifying Drug Delivery System Sinh khả dụng Hệ vi tự nhũ Hệ tự nhũ tạo nhũ tương nano Tiêu chuẩn sở TCCS UV – Vis Hệ tự nhũ tạo nhũ tương Ultraviolet-Visible Quang phổ tử ngoại - khả kiến ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại so sánh đặc điểm hệ tự nhũ khác Bảng 1.2 Chất chất diện hoạt sử dụng hệ SMEDDS Bảng 1.3 Một số SMEDDS hoạt chất gần 12 Bảng 1.4 Một số SMEDDS cấp sáng chế 12 Bảng 2.1 Dãy dung dịch chuẩn prednisolon 31 Bảng 2.2 Dãy dung dịch chuẩn prednisolon 35 Bảng 3.1 Độ tan prednisolon tá dược 38 Bảng 3.2 Kết sàng lọc chất diện hoạt 40 Bảng 3.3 Kết sàng lọc chất đồng diện hoạt 41 Bảng 3.4 Các công thức chọn để khảo sát với Capryol® 90 : Kolliphor® RH40: Transcutol® HP 45 Bảng 3.5 Các công thức chọn để khảo sát với Capryol® 90 : Kolliphor® RH40: PEG 400 45 Bảng 3.6 Kết đo kích thước giọt vi nhũ tương SMEDDS (Capryol® 90:Kolliphor® RH40:Transcutol® HP) 47 Bảng 3.7 Kết đo kích thước giọt vi nhũ tương SMEDDS (Capryol® 90:Kolliphor® RH40:PEG 400) 49 Bảng 3.8 Kết khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS (Capryol® 90: Kolliphor® RH40:Transcutol® HP) 51 Bảng 3.9 Kết khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS (Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400) 53 Bảng 3.10 Thành phần công thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 54 Bảng 3.11 Độ ổn định môi trường NMNT SMEDDS – prednisolon 55 Bảng 3.12 Độ bền nhiệt động công thức SMEDDS – prednisolon 2,0% 56 Bảng 3.13 Kết đo kích thước tiểu phân zeta dung dịch NaCl công thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 57 Bảng 3.14 Đánh giá độ lặp lại công thức tối ưu A5-2 58 Bảng 3.15 Kết định lượng prednisolon SMEDDS công thứ A5-2 60 iii Bảng 3.16 Bảng kết diện tíc pic từ 06 lần tiêm dung dịch chuẩn 60 Bảng 3.17 Thời gian lưu diện tích pic mẫu chuẩn mẫu thử 62 Bảng 3.18 Sự tương quan nồng độ prednisolon diện tích pic 63 Bảng 3.19 Kết xử lý thống kê 64 Bảng 3.20 Kết thẩm định độ quy trình định lượng prednisolon 65 Bảng 3.21 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống quy trình định lượng prendnisolon chế phẩm 66 Bảng 3.22 Kết thẩm độ lặp lại quy trình định lượng prendnisolon 67 Bảng 3.23 Kết thẩm định độ xác trung gian quy trình định lượng prendnisolon 68 Bảng 3.24 Kết đánh giá GPHC công thức A5-2 Pred Forte 69 Bảng 3.25 Kết thẩm định khoảng tuyến tính prednisolon 72 Bảng 3.26 Kết xử lý thống kê 73 Bảng 3.27 Kết thẩm định độ xác 74 Bảng 3.28 Kết thẩm định độ 74 Bảng 3.29.Thời gian lưu diện tích pic sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử 75 Bảng 3.30 Kết độ ổn định công thức A5-2 76 Bảng 3.31 Kết tiêu đánh giá công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS prednisolon 78 Bảng 3.32 Kết tiêu đánh giá công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon sau 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc 78 Bảng 4.1 Chỉ số HLB chất diện hoạt khảo sát 81 Bảng 4.2 So sánh kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành SMEDDS – prednisolon SMEDDS 84 iv DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Công thức cấu tạo prednisolon Hình 1.2 Cấu tạo giải phẫu mắt 14 Hình 2.1 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành 24 Hình 2.2 Lưu đồ điều chế SMEDDS – prednisolon 27 Hình 3.1 Biểu đồ so sánh độ tan prednisolon tá dược 39 Hình 3.2 Giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP 42 Hình 3.3 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP 42 Hình 3.4 Giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 43 Hình 3.5 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành 44 Hình 3.6 Cảm quan công thức T1 – T8 45 Hình 3.7 Cảm quan công thức P1 – P8 45 Hình 3.8 Biểu đồ so sánh kích thước giọt trung bình thay đổi tỷ lệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP 48 Hình 3.9 Biểu đồ so sánh kích thước giọt trung bình thay đổi tỷ lệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 50 Hình 3.10 (A).Cảm quan cơng thức tối ưu A5-2, (B).Cảm quan ảnh hưởng độ pha loãng thời điểm công thức tối ưu A5-2, (C).Cảm quan ảnh hưởng độ pha loãng thời điểm 06 công thức tối ưu A5-2 59 Hình 3.11 Sắc ký đồ dung dịch tương thích hệ thống 60 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu trắng thẩm định tính đặc hiệu 61 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu placebo thẩm định tính đặc hiệu 61 Hình 3.14 Sắc ký đồ mẫu chuẩn thẩm định tính đặc hiệu 62 Hình 3.15 Sắc ký đồ mẫu thử thẩm định tính đặc hiệu 62 Hình 3.16 Sắc ký đồ đồ thị kiểm tra độ tinh khiết pic prednisolon mẫu thử 62 Hình 3.17 Đồ thị mối tương quan tuyến tính nồng độ diện tích pic prednisolon 63 v Hình 3.18 Đồ thị biểu diễn khả GPHC theo thời gian A5 – Pred Forte 69 Hình 3.19 Phổ hấp thu mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu giả dược mẫu trắng 70 Hình 3.20 Phổ hấp thu mẫu trắng bước sóng 248nm 71 Hình 3.21 Phổ hấp thu mẫu thử bước sóng 248 nm 71 Hình 3.22 Phổ hấp thu mẫu giả dược bước sóng 248 nm 71 Hình 3.23 Phổ hấp thu mẫu chuẩn bước sóng 248 nm 72 Hình 3.24 Đồ thị độ tuyến tính prednisolon mơi trường NMNT 73 Hình 3.25 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn phương pháp HPLC 75 Hình 3.26 Sắc ký đồ dung dịch thử phương pháp HPLC 75 ĐẶT VẤN ĐỀ Mắt quan quan trọng người cấu tạo từ hệ thống quang sinh học nhạy cảm Các hệ thống phân phối thuốc mắt thách thức nhà nghiên cứu mắt tổ chức có cấu tạo sinh lý phức tạp Các thuốc nhãn khoa thường có tỷ lệ hấp thu dược chất thấp thời gian lưu thuốc trước giác mạc ngắn Khi nhỏ dung dịch thuốc vào mắt, tăng tiết nước mắt hoạt động chớp mắt dẫn đến giảm nồng độ thuốc gấp 10 lần vịng - 20 phút1 Những cơng thức nhỏ mắt thơng thường địi hỏi phải nhỏ thuốc thường xuyên với liều lượng lớn để bù đắp sinh khả dụng cho mắt thấp Một số chế phẩm liposome2, vi cầu3, hỗn dịch nano4, nhũ tương nano5, vi nhũ tương6,… nghiên cứu để sử dụng nhãn khoa nhằm việc kéo dài thời gian lưu, tăng khả hấp thu thuốc, phân phối thuốc kéo dài qua tăng tác dụng dạng bào chế Prednisolon glucocorticoid tổng hợp có nguồn gốc từ cortisol Đối với mắt prednisolon định làm giảm viêm màng bồ đào viêm mắt không đáp ứng với corticosteroid chỗ7 Prednisolon dược chất có độ hòa tan nước, chế phẩm thuốc nhỏ mắt prednisolon thị trường sử dụng chủ yếu dạng dung dịch thuốc nhỏ mắt prednisolon natri phosphat cải thiện độ tan nước hỗn dịch nhỏ mắt prednisolon acetat để tăng cường tính thấm qua giác mạc Các nhà bào chế giới nghiên cứu số phương pháp để cải thiện độ tan prednisolon sử dụng phân tử nano8, niososome9, tiền dược10, … Gần đây, hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương (SMEDDS) cách tiếp cận đầy hứa hẹn để sử dụng chế phẩm nhãn khoa11 Hệ tự nhũ cải thiện độ tan, SKD hiệu điều trị mắt12-14, ổn định mặt nhiệt động học14, phương pháp bào chế không phức tạp Đề tài “Nghiên cứu bào chế công thức thuốc nhỏ mắt chứa hệ vi tự nhũ (SMEDDS) prednisolon” thực nhằm mục tiêu điều chế hệ vi tự nhũ (SMEDDS) cải thiện độ tan prednisolon tiếp cận công nghệ nano bào chế thuốc dùng cho nhãn khoa Để giải mục tiêu đề ra, nội dung cần thực hiện: Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm Xây dựng đánh giá SMEDDS – prednisolon Sơ xây dựng công thức đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương dược chất prednisolon 1.1.1 Công thức hóa học Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo prednisolon Tên khoa học: 11β, 17,21-trihydroxypregna-1,4-dien-3,20-dion, phải chứa từ 96,5% đến 102,0 % C21H28O5, tính theo chế phẩm làm khơ15 Công thức phân tử: C21H28O5 Khối lượng phân tử: 360,4 1.1.2 Đặc tính lý hóa Tính chất vật lý - Cảm quan: Bột kết tinh trắng gần trắng, đa hình, dễ hút ẩm7 - Độ tan: ➢ Rất khó tan nước (độ tan nước prednisolon 25 ᵒC 0,223 mg/ml)16, tan ethanol 96 % (1 g / 30 g) methanol, tan aceton (1 g / 50 ml) khó tan methylen clorid7 Prednisolon tồn dạng muối natri phosphat cải thiện độ tan nước Prednisolon natri phosphat hòa tan nước với tỷ lệ 1:3, chủ yếu bào chế dạng dung dịch nhỏ mắt Tuy nhiên khả thấm vào giác mạc so với prednisolon17 ➢ Hệ số phân bố dầu nước: log P = 1,6218 Log P thông số hóa lý thể tính ưa mỡ thuốc lực thuốc màng sinh học bao gồm biểu mô giác mạc Log P thay đổi tùy theo thay nhóm chức corticosteroid trạng thái ion hóa Prednisolon acetat (log P = 2,4) chất ưa béo prednisolon (log P = 1,62)17 - Nghiên cứu Syed Ghulam Musharraf cho thấy prednisolon biểu nhạy cảm với tác nhân thủy phân acid kiềm, nhiệt ẩm, điều kiện quang hóa Trong điều kiện acid (HCl 5M), prednisolon bị phân huỷ tới 95,2% Trong điều kiện căng thẳng (NaOH 5M), prednisolon bị phân hủy tới 96,6% Trong điều kiện stress oxy hóa (6% H2O2), prednisolon bị phân hủy tới 11,7% Trong điều kiện căng thẳng nhiệt (nhiệt khô) prednisolon bị phân huỷ 15,9% Trong điều kiện căng thẳng quang học, prednisolon bị phân hủy đến 5,5% Prednisolon không bị ảnh hưởng điều kiện 40 ᵒC/ 75% RH19 Ngoài ra, prednisolon hấp thụ xạ UV tham gia vào q trình quang hóa, dẫn đến phân hủy nó20 Quá trình phân hủy quang prednisolon xạ UVB dựa hai đường: quang phân trực tiếp tự nhạy cảm thông qua loại oxy phản ứng quang hóa21 Tính chất hóa học - Định tính: ➢ Phổ hấp thụ hồng ngoại15 ➢ Sắc ký lỏng: Pic thu sắc ký đồ dung dịch thử (2) phải có thời gian lưu diện tích pic tương tự với pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (4)15 • Dung dịch thử (2): Hòa tan 25,0 mg chế phẩm hỗn hợp dung mơi pha lỗng thành 20,0 ml với dung mơi Pha lỗng 1,0 ml dung dịch thu thành 10,0 ml hỗn họp dung môi • Dung dịch đối chiếu (4): Hòa tan 25,0 mg prednisolon chuẩn hỗn hợp dung mơi vả pha lỗng thành 20,0 ml với dung mơi Pha lỗng 1,0 ml dung dịch thu thành 10,0 ml hỗn hợp dung môi - Định lượng: ➢ Phương pháp sắc ký lỏng15 ➢ Phương pháp quang phổ hồng ngoại (IR)22 ➢ Phương pháp quang phổ UV-Vis22 1.1.3 Tác dụng, định Prednisolon thuốc chống viêm corticosteroid Prednisolon có tác dụng rõ rệt chống viêm, chống dị ứng ức chế miễn dịch Đối với bệnh mắt prednisolon định trường hợp viêm màng bồ đào viêm mắt không đáp ứng với corticosteroid chỗ7 Viêm màng bồ đào bệnh mắt phổ biến, nguyên phúc tạp, tổn thương lâm sàng thường nặng nề, nhiều biến chứng, hay tái phát dẫn đến mù loa Bệnh lý viêm ba thành phần mống mắt, thể mi hắc mạc gọi viêm màng bồ đào Các triệu chứng viêm màng bồ đào đáp ứng viêm màng bồ đào với qúa trình nhiễm khuẩn, chấn thương phản ứng viêm theo chế miễn dịch, tự miễn với kháng nguyên xâm nhập kháng nguyên màng bồ đào Các bạch cầu đa nhân, bạch cầu toan, tương bào góp phần vào trình viêm màng bồ đào tế bào lympho tế bào viêm chiếm ưu nội nhãn viêm màng bồ đào Những chất trung gian hóa học giai đoạn viêm nhiễm cấp tính gồm serotonin, bổ thể plasmin Các leukotrien, kinin, prostaglandin làm biến đổi pha thứ hai đáp ứng viêm cấp, bổ thể hoạt hóa tác nhân thu hút bạch cầu…23 Hàm lượng dạng thuốc nhỏ mắt có thị trường chứa prednisolon: Dạng dung dịch thuốc nhỏ mắt prednisolon natri phosphat 1%, hỗn dịch nhỏ mắt prednisolon acetat lọ 5ml 1%7 Nồng độ prednisolon xác định dung dịch nước mắt người sau dùng chỗ 50 μl prednisolon acetat (1%) prednisolon natri phosphat (0,5%) Nồng độ đỉnh trung bình prednisolon thủy dịch sau 02 sử dụng 669 µg / ml 25,6 µg / ml prednisolon acetat prednisolon natri phosphat Những kết chứng minh khả thấm sâu vào giác mạc prednisolon acetat cao 26 lần so với prednisolon phosphat17 Chế phẩm hỗn dịch bán thị trường prednisolon acetat có phản ứng bất lợi khả phát triển bệnh tăng nhãn áp (IOP), tổn thương dây thần kinh thị giác khơng thường xun, hình thành đục thủy tinh thể bao sau chậm lành vết thương24 Sự đồng liều lượng sau sai số dùng thuốc vấn đề việc chuẩn bị hỗn dịch dùng mắt Ngoài ra, hỗn dịch thuốc nhỏ mắt phải vơ khuẩn để ổn định kích thước tiểu phân dược chất q trình pha chế khơng tiệt khuẩn sản phẩm nhiệt mà phải tiến hành pha chế - sản xuất điều kiện vô khuẩn 1.2 Hệ vi tự nhũ (Self-microemulsifying drug delivery system) 1.2.1 Khái niệm Hệ thống phân phối thuốc tự nhũ hóa (SEDDS) hỗn hợp đẳng hướng dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt (hoặc chất hịa tan) thuốc, có khả tạo thành vi nhũ tương dầu nước mịn điều kiện khuấy nhẹ sau pha loãng pha nước Kích thước giọt nhũ tương nhỏ độ bền nhiệt động học khả cải thiện SKD cao Dựa vào kích thước giọt nhũ tương tạo thành sau tiếp xúc với pha nước, hệ tự nhũ chia thành 03 loại: - Hệ tự nhũ tạo nhũ tương (SEDDS – Self-Emulsifying Drug Delivery System) - Hệ tự nhũ tạo vi nhũ tương (SMEDDS – Self-Microemulsifying Drug Delivery System) - Hệ tự nhũ tạo nhũ tương nano (SNEDDS – Self-Nanoemulsifying Drug Delivery System) So sánh đặc điểm hệ tự nhũ trình bày Bảng 1.125 Bảng 1.1 Phân loại so sánh đặc điểm hệ tự nhũ khác Kích thước nhũ tương/ Cảm quan nhũ tương/ vi nhũ tương/ nano nhũ vi nhũ tương/ nano tương tạo thành nhũ tương tạo thành SEDDS 200 nm - µm Đục < 12 SMEDDS Dưới 200 nm Trong đến mờ > 12 SNEDDS Dưới 100 nm Trong > 12 Hệ tự nhũ HLB chất diện hoạt 1.2.2 Ưu điểm hệ vi tự nhũ so với nhũ tương khác Bảo quản: SMEDDS có ưu điểm giống nhũ tương, tạo điều kiện thuận lợi cho hòa tan thuốc kỵ nước Nhũ tương bị kết bơng trải qua q trình tạo kem khoảng thời gian, SMEDDS ổn định mặt nhiệt động học bảo quản dễ dàng26 Tính ổn định: Trái ngược với vi nhũ tương / nano, SMEDDS không chứa nước đó, chúng cải thiện độ ổn định vật lý và/hoặc hóa học lưu trữ lâu dài Tuân thủ: Hầu hết công thức SMEDDS dạng viên nang viên nén, chiếm thể tích nhỏ hơn, dễ sử dụng cải thiện tuân thủ bệnh nhân26 Bắt đầu tác dụng nhanh chóng: SMEDDS có khả tạo điều kiện cho thuốc hấp thu nhanh qua đường uống, dẫn đến bắt đầu tác dụng nhanh chóng26 Dễ sản xuất mở rộng quy mơ: SMEDDS dễ dàng sản xuất quy mơ lớn u cầu trang thiết bị đơn giản26 1.2.3 Nhược điểm SMEDDS Phương pháp hòa tan truyền thống khơng hiệu phóng thích hoạt chất phụ thuộc vào tiêu hóa27 Chưa có phương pháp chuẩn để đánh giá in vitro cho SMEDDS27,28 Sự phát triển dựa mối tương quan in vitro - in vivo cơng thức SMEDDS khác cần phát triển thử nghiệm in vivo mơ hình động vật thích hợp27 Nồng độ chất diện hoạt cao công thức (30 – 60%) gây kích ứng đường tiêu hóa27,28 Kết tủa thuốc pha lỗng cao tác dụng pha lỗng dung mơi ưa nước28 1.2.4 Xây dựng công thức hệ vi tự nhũ Khi xây dựng SMEDDS, thuốc phải kết hợp vào hỗn hợp tá dược thích hợp; việc phát triển công thức thường bắt đầu với việc lựa chọn tá dược Trong nghiên cứu lựa chọn sơ bộ, số tá dược xác định thích hợp để nghiên cứu thêm tính an tồn, khả hịa tan thuốc độ ổn định chúng tá dược, số đặc điểm khác Lựa chọn ban đầu tá dược có triển vọng sau xây dựng giản đồ pha để xác định tỷ lệ pha trộn thích hợp cho cơng thức đồng nhất, quan trọng khả hòa tan đủ để thuốc kết hợp29 Hiểu rõ đặc tính tá dược hiệu suất chúng công thức yêu cầu cần thiết để phát triển thành công công thức Để xây dựng SMEDDS thành công cho hiệu điều trị tối đa, cần phải xem xét đầy đủ yếu tố sau30: - Độ tan hoạt chất tá dược - Lựa chọn dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt / chất đồng hòa tan dựa độ tan hoạt chất giản đồ pha xây dựng - Thêm hoạt chất vào cơng thức ảnh hưởng đến q trình tự nhũ hóa mức độ định, làm thay đổi tỉ lệ tối ưu pha dầu chất diện hoạt 1.2.4.1 Pha dầu Pha dầu chất lỏng khơng phân cực dùng làm mơi trường hịa tan hoạt chất đồng thời giúp tăng khả hấp thu thuốc Các tá dược phổ biến sử dụng dầu thực vật triglycerid Triglyceride phân loại thêm LCT, MCT SCT Khả làm dung môi cho thuốc chủ yếu định nồng độ hữu hiệu nhóm este MCT lựa chọn dầu phổ biến cho SMEDDS chúng có khả chống oxy hóa có khả hịa tan cao so với LCT nồng độ hiệu cao nhóm este MCT tạo từ trình chưng cất dầu dừa gọi glyceryl tricaprylat bao gồm acid béo C8 C10 bão hòa trạng thái lỏng29 Một số loại dầu thường dùng công thức SMEDDS: Capryol 90, Capmul MCM, Labrafil M 2125 CS, Captex 355, Captex 200, dầu ô liu, Miglyol 812… 1.2.4.2 Chất diện hoạt Việc lựa chọn chất diện hoạt quan trọng việc xây dựng SMEDDS Chất diện hoạt hoạt chất mà công thức bao gồm 02 phần: đầu thân nước đuôi thân dầu, làm giảm sức căng bề mặt mặt phân cách hai chất lỏng trộn lẫn với tạo thành hệ phân tán đồng Chất diện hoạt chia thành nhóm chính: anion, cation, khơng phân cực lưỡng cực Khi xây dựng hệ vi tự nhũ thường dùng chất diện hoạt không phân cực có số HLB lớn 12 với tỷ lệ khoảng 30 – 60%31 Việc sử dụng hỗn hợp chất diện hoạt để đạt HLB cần thiết cho trình tạo nhũ thường chứng minh cung cấp đặc tính tự nhũ hóa vượt trội so với việc sử dụng chất diện hoạt sở hữu HLB mong muốn32 Một số chất diện hoạt sử dụng cho SMEDDS trình bày Bảng 1.233,34 Bảng 1.2 Chất chất diện hoạt sử dụng hệ SMEDDS Chất diện hoạt HLB Span 20 8,60 Span 80 4,30 Kolliphor EL 13,0 Kolliphor RH40 15,0 Tween 20 16,67 Tween 80 13,71 Poloxamer 188 (Pluronic F68) 29,0 1.2.4.3 Chất đồng diện hoạt và/ đồng hòa tan Chất đồng diện hoạt có giá trị HLB 10-14 sử dụng giúp tăng tính linh động bề mặt phân cách hai pha, điều chỉnh HLB chất diện hoạt, tăng độ tan hoạt chất giúp tạo nhũ tương bền, ổn định.Việc bổ sung chất đồng diện hoạt chất hịa tan SMEDDS dẫn đến việc mở rộng vùng vi nhũ hóa giản đồ pha29 Transcutol HP, Ethanol, polyethylene glycol (PEG), propylene glycol, glycerol… minh họa chất đồng diện hoạt/ chất đồng hòa tan thường sử dụng33,35 1.2.5 Đặc điểm lý hóa SMEDDS Kích thước hạt: Kích thước giọt nhũ tương yếu tố quan trọng hiệu suất tự nhũ hóa định tốc độ mức độ giải phóng dược chất khả hấp thu Phương pháp tán xạ ánh sáng động (Dynamic light scattering – 10 DLS) phương pháp phổ biến sử dụng để xác định kích thước tiểu phân với kết thu phép đo thường kích thước giọt trung bình lần đo lặp lại Nguyên tắc phương pháp DLS đo chuyển động Brown tiểu phân nano hỗn dịch thể mối liên quan đến vận tốc chuyển động chúng thông qua hệ số khuếch tán Kích thước tiểu phân phải nhỏ 200 nm36,37 Độ phân cực: Độ phân cực giọt nhũ tương yếu tố quan trọng việc xác định hiệu tạo nhũ HLB, chiều dài chuỗi mức độ khơng bão hịa acid béo, trọng lượng phân tử phần ưa nước nồng độ chất nhũ hóa có ảnh hưởng đến độ phân cực giọt dầu Độ phân cực thể lực hợp chất thuốc dầu / nước loại lực hình thành Sự giải phóng nhanh chóng thuốc vào pha nước thúc đẩy phân cực38 Điện Zeta: Điện tích giọt dầu SMEDDS đặc tính khác cần đánh giá Điện tích giọt dầu SMEDDS thông thường âm diện acid béo tự do; nhiên, việc kết hợp lipid cation, chẳng hạn oleylamin khoảng nồng độ 1,0 – 3,0%, tạo SMEDDS cation Do đó, hệ thống có giá trị điện n dương khoảng 35-45 mV Giá trị tiềm dương bảo toàn sau kết hợp hợp chất thuốc38 Độ bền pha loãng: Độ bền độ pha loãng khả nhũ tương tạo thành để trì đặc tính tương tự mức độ pha lỗng khác để đạt cấu hình giải phóng dược chất đồng nhất39 Độ truyền qua (% T): đo máy quang phổ UV-Vis Hệ phân tán đồng kích thước tiểu phân nhỏ có độ truyền qua cao37 Nghiên cứu ổn định nhiệt động lực học: Tính ổn định vật lý công thức quan trọng hiệu suất Ngồi ra, tính ổn định vật lý dẫn đến phân tách pha tá dược không ảnh hưởng đến hiệu suất cơng thức mà cịn ảnh hưởng đến hình thức bên Ba thử nghiệm sau sử dụng để kiểm tra tính ổn định cơng thức SMEDDS chọn: ly tâm, thử nghiệm đông- rã đông thử nghiệm nóng- lạnh39 11 1.2.6 Giản đồ pha Xây dựng giản đồ pha bước trước bắt đầu xây dựng công thức Giản đồ pha hữu ích để xác định vùng nhũ hóa tốt kết hợp dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt Giản đồ ba pha có hình tam giác, cạnh tương ứng với thành phần (trong trường hợp cơng thức có nhiều 03 thành phần cạnh hình tam giác gồm 02 thành phần chất diện hoạt/chất đồng diện hoạt, pha dầu/chất đồng hòa tan,… với tỷ lệ xác định) Giản đồ pha thường xây dựng phương pháp chuẩn độ nước phương pháp pha loãng40 - Phương pháp chuẩn độ nước: Hỗn hợp chất diện hoạt đồng diện hoạt chuẩn bị với tỷ lệ thích hợp (1:2, 2:1, 1:1 kl/kl), hỗn hợp gọi hỗn hợp Smix Pha dầu hỗn hợp Smix phối hợp theo tỷ lệ 9:1 đến 1:9 Thêm lượng nhỏ từ từ nước cất vào hỗn hợp khuấy nhiệt độ phịng để cân Q trình chuẩn độ dừng lại thể tích nước ghi lại hỗn hợp trở nên trong mờ Sau cân bằng, hỗn hợp tiếp tục chuẩn độ với nước trở nên đục, ghi nhận lượng nước Những mẫu đẳng hướng xem nằm vùng vi nhũ tương Dựa vào kết này, phần trăm pha dầu, chất diện hoạt đồng diện hoạt lựa chọn sử dụng để xây dựng công thức SMEDDS41 - Phương pháp pha loãng: Pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt chuẩn bị theo tỷ lệ khác Nồng độ pha dầu thường từ 25 - 75% (kl/kl), nồng độ chất diện hoạt từ 30 - 75% (kl/kl), nồng độ chất đồng diện hoạt từ 30% (kl/kl) Đối với hỗn hợp, tổng nồng độ ba thành phần luôn 100% Ba mươi sáu hỗn hợp với nồng độ chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt dầu khác chuẩn bị Mỗi công thức đánh giá khả tạo thành vi nhũ tương cách pha lỗng nước cất hai lần theo tỷ lệ thích hợp Kích thước hạt nhũ tương sau phân tán xác định thiết bị chuyên dụng Kích thước hạt nhũ tương 200 nm trở xuống nhỏ chọn41 12 1.2.7 Các nghiên cứu hệ SMEDDS giới Trên giới có nhiều nghiên cứu SMEDDS, số nghiên cứu trình bày Bảng 1.333 Bảng 1.3 Một số SMEDDS hoạt chất gần Hoạt chất Pha dầu Labrafil, estol, Atorvastatin isopropyl Buparvaquon Lovastatin Chất đồng diện hoạt Cremophor RH PG, PEG 400, 40, Cremophor EL Transcutol myristat Simvastatin Chất diện hoạt Capryol 90 Cremophor EL Capryol 90 Cremophor EL (9,82%) (70,72%) Capryol 90 Cremophor RH 40 (20%) (40%) Carbitol Labrasol (17,68%) Transcutol P (40%) Coconut oil Atorvastatin isopropyl Tween 80 PEG 400 and glycerin Cremophor RH40 Soluphor P myristate Lurasidon Capmul MCM hydrochlorid Một số nghiên cứu SMEDDS cấp sáng chế trình bảng Bảng 1.433 Bảng 1.4 Một số SMEDDS cấp sáng chế U.S Patent Nhà phát minh 8728518 Liu (2014) 20110160168 Dhingra (2011) 20100331356 Legen and Igor (2010) Imwitor 308 7588786 Khan et al (2009) Coenzyme Q10 20060275358 Lin and Jing (2006) Coenzyme Q10 20040248901 Lee and Jin (2004) Itraconazol Thuốc Butylphthalide (1%–65%) Testosteron 13 1.3 Vi tự nhũ nhỏ mắt 1.3.1 Đặc điểm cấu tạo mắt liên quan đến hấp thu dược chất Mắt quan đảm nhiệm chức thị giác, có nhiệm vụ thu nhận kích thích ánh sáng dạng màu sắc hình ảnh để truyền vỏ não, giúp ta nhận biết giới bên Về cấu tạo, quan thị giác gồm phần: nhãn cầu, phận bảo vệ nhãn cầu, đường thần kinh trung khu phân tích thị giác Nhãn cầu (bulbus oculi) phận quan thị giác Cấu tạo gồm thành phần42: - Vỏ bọc nhãn cầu bao gồm giác mạc củng mạc Giác mạc nuôi dưỡng nhờ thẩm thấu từ mạch máu quanh rìa, từ nước mắt thủy dịch Củng mạc cấu tạo từ nhiều lớp băng xơ dày đan chéo vững chắc, có nhiệm vụ bảo vệ cho lớp màng môi trường bên - Màng mạch hay gọi màng bồ đào bao gồm ba phần mống mắt, thể mi hắc mạc Trong mống mắt thể mi màng bồ đào trước, hắc mạc gọi màng bồ đào sau Nhiệm vụ chung màng đồ đào ni dưỡng nhãn cầu điều hịa nhãn áp - Võng mạc gọi màng thần kinh, nằm lịng màng bồ đào Đó nơi tiếp nhận kích thích ánh sáng từ ngoại cảnh truyền trung phân tích thị giác vỏ não - Tiền phòng hậu phòng - Các môi trường suốt Cấu tạo giải phẫu mắt trình bày Hình 1.243 14 Hình 1.2 Cấu tạo giải phẫu mắt Trong điều kiện bình thường, khơng gây mê, thể tích nước mắt người trung bình µl, với thể tích tối đa ước tính mà túi lệ chứa nhỏ mắt vào khoảng 30 µl Tốc độ luân chuyển nước mắt trung bình người khoảng 16% phút điều kiện tăng lên 30% phút kích thích từ việc nhỏ thuốc Việc khơi phục lượng nước mắt bình thường người cần khoảng - phút, với 80% lượng thuốc nhỏ mắt dùng bị nước 15 – 30 giây sau nhỏ thuốc Kết thời gian tiếp xúc ngắn thuốc với màng hấp thu mắt lý khiến 5% lượng thuốc dùng chỗ đến mơ đích44,45 Phân phối thuốc chỗ vào vùng trước mắt (giác mạc, mống mắt – thể mi, thủy tinh thể) bị cản trở số yếu tố dòng chảy nước mắt, chớp mắt rào cản biểu mơ, sinh khả dụng thuốc thủy dịch < 5% Chảy nước mắt chớp mắt dẫn đến thời gian lưu trú ngắn thuốc nhỏ mắt, phần lớn liều thuốc vào ống lệ mũi vịng vài phút Do đó, dùng thuốc thường xuyên điều 15 cần thiết sử dụng thuốc nhỏ mắt chỗ Đối với loại thuốc có thời gian bán thải dài, liều dùng hai đến bốn lần ngày, kiểm sốt Tuy nhiên, loại thuốc có thời gian bán thải ngắn phải dùng liều sau đến hai giờ, điều ảnh hưởng đến tuân thủ bệnh nhân Cần có biện pháp tiếp cận kéo dài thời gian lưu trú tái phát để tăng sinh khả dụng thuốc vùng trước mắt sau dùng thuốc nhỏ mắt Ngoài yếu tố hạn chế hấp thu thuốc vào mắt nói trên, thuốc cịn phải vượt qua nhiều hàng rào mô mạch máu (như kết mạc, củng mạc, màng bồ đào, màng Bruch biểu mô sắc tố võng mạc (RPE – Retinal Pigment Epithelium) giác mạc, thủy dịch, thủy tinh thể dịch kính) để tiếp cận võng mạc thần kinh sau sử dụng chỗ46 Tổ chức mắt bảo vệ hàng rào sinh lý mắt bên hàng rào máu võng mạc bên Hàng rào sinh lý mắt bao gồm: lớp màng nước mắt, giác mạc kết mạc Lớp màng nước mắt tiết tuyến lệ bao gồm ba lớp: lớp lipid ngoài, lớp nước lớp dịch nhầy bao phủ bề mặt lớp biểu mô giác mạc kết mạc44 Màng nước mắt người chất lỏng đệm nhẹ có độ pH khoảng 7,2 – 7,5 có độ dày ước tính khoảng – mm45 Lớp màng nước mắt tiếp xúc trực tiếp với mơi trường có khả bảo vệ mắt cao Thể tích ước tính nhỏ thuốc hầu hết công thức thuốc nhỏ mắt 35 – 56 μl, thể tích mà mắt khỏe mạnh giữ 30 μl Sự khác biệt thể tích kích thích phản xạ chớp mắt Một yếu tố quan trọng khác tốc độ rửa trôi thuốc nhanh, dẫn đến giảm thiểu thời gian tiếp xúc thuốc mô mắt Tuy nhiên, tỷ lệ cịn phụ thuộc vào đặc tính thuốc44 Ngoài màng nước mắt, yếu tố quan trọng khác việc rửa trôi thuốc thủy dịch Thủy dịch chất lỏng suốt thể mi tiết chứa đầy tiền phòng hậu phịng42 Dịch nước mắt có chứa xấp xỉ 0,7% protein albumin, globulin lysozym nên xảy liên kết tạo phức dược chất – protein, làm giảm hấp thu dược chất vào niêm mạc mắt có dược chất dạng tự hấp thu47 16 Kết mạc mô ưa nước thấm peptit bao gồm chất nhầy Kết mạc có nhiều mạch máu thân kết mạc màng có tính thấm tốt với nhiều dược chất, thấm dược chất từ vùng trước giác mạc vào phần bên mắt qua đường kết mạc không đáng kể so với giác mạc Dược chất hấp thu qua kết mạc chủ yếu vào tuần hoàn máu gây nhiều tác dụng khơng mong muốn, hấp thu qua kết mạc xem yếu tố làm giảm sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt dược chất cần thấm sâu vào tổ chức bên giác mạc, trừ trường hợp đích tác dụng thuốc kết mạc Giác mạc hàng rào gây cản trở cho hấp thu dược chất từ thuốc nhỏ mắt Giác mạc cấu tạo biểu mô, lớp đệm nội mô47 Biểu mô đặc trưng lipid tế bào liên kết chặt chẽ với nhau, hạn chế tính thấm phân tử ưa nước ion hóa Cả biểu mô mô đệm không thấm vào đại phân tử (trên 50.000 kD) Nội mô, lớp giác mạc, lớp tế bào ưa mỡ bao gồm phospholipid44 Lớp đệm nằm lớp biểu mơ nội mơ có hàm lượng nước cao, nên có dược chất thân nước hay dược chất dạng ion hóa dễ dàng khuếch tán qua lớp đệm Như có dược chất vừa thân nước vừa thân dầu có mức độ ion hóa vừa phải, tức khả hịa tan hai pha dễ dàng thấm qua hàng rào lipid hàng rào nước lớp mơ giác mạc47 Ngồi ra, mắt bảo vệ hàng rào khác hàng rào máu - mắt, bao gồm hàng rào máu - thủy dịch (BAB - Blood–aqueous barrier) hàng rào máu - võng mạc (BRB - Blood-retinal barrier) - Hàng rào máu – thủy dịch (BAB) thuộc vùng trước mắt ngăn chặn xâm nhập khơng đặc hiệu chất hịa tan khác nhãn cầu Chỉ dược chất thân dầu nhỏ qua hàng rào máu – thủy dịch48 - Hàng rào máu - võng mạc (BRB) thuộc vùng sau mắt, bao gồm tế bào nội mô võng mạc tế bào biểu mô sắc tố võng mạc (RPE - retinal pigment epithelial) Hàng rào máu - võng mạc ngăn chặn xâm nhập chất độc hại, nước thành phần huyết tương vào võng mạc, ngăn chặn xâm nhập thuốc nhỏ mắt Những rào cản bị vượt qua 17 loại tiểu phân nano, ví dụ, gel chỗ tiểu phân nano lutein biến tính chất thâm nhập (P-NE GEL) cung cấp lutein đến võng mạc cách hiệu Hơn nữa, nghiên cứu Electroretinography sử dụng để đánh giá chức võng mạc chẩn đoán bệnh nhãn khoa thần kinh Kết cho thấy hiệu điều trị cải thiện so với nhóm đối chứng, hiệu P-NE GEL tìm thấy tối đa48 P-glycoprotein protein đa kháng (MRP) có tế bào biểu mô đỉnh đáy mô mắt Hai bơm ảnh hưởng đến sinh khả dụng thuốc mắt Pglycoprotein chịu trách nhiệm loại bỏ phân tử cation, MRP chất vận chuyển anion44 Ngoài rào cản tĩnh động, mắt cịn có rào cản trao đổi chất Các enzym chuyển hóa có tất mơ mắt, với thể mi biểu mơ sắc tố võng mạc có hoạt động trao đổi chất cao Các enzym chuyển hóa CYT P450 enzym lysosome44 1.3.2 Dịch mô nước mắt (STF: simulated tear fluid) Một số công thức dịch mô nước mắt (nước mắt nhân tạo) sử dụng thử nghiệm in vitro đề cập đây: - Công thức (mô ion có dịch nước mắt): natri clorid 0,670 g, natri bicarbonat 0,200 g, calci clorid dihydrat 0,008 g nước cất pha tiêm vừa đủ 100g.Công thức điều chỉnh đến pH 7,4 HCl49 - Công thức (mô thành phần protein ion): BSA 0,268 g, lysozym 0,268 g, γ – globulin 0,134 g, calci clorid dihydrat 0,008 g, D – glucose 0,150 g, natri clorid 0,650 g nước cất vừa đủ 100 g49 Công thức sử dụng nhiều nghiên cứu tính chất hệ vi tự nhũ nhỏ mắt in vitro12,50 1.3.3 Một số nghiên cứu hệ tự nhũ nhỏ mắt Hệ tự nhũ cách tiếp cận phát có hiệu việc tăng sinh khả dụng thuốc giải phóng thuốc nhanh chóng Các cơng thức tự nhũ ý nhiều số công thức để phân phối thuốc qua mắt Khi 18 SEDDS pha loãng với nước mắt tiết bề mặt mắt tạo giọt hình thành giọt vi nhũ tương dầu/ nước nhỏ có diện tích bề mặt tiếp xúc lớn11 Các công thức nano dùng cho mắt cho thấy thời gian lưu lại vùng trước giác mạc kéo dài, tăng tỷ lệ hấp thu thuốc vào bên mô, tăng cường sinh khả dụng mắt, cải thiện thoát dịch qua giác mạc Sự tương tác tá dược thân dầu có cơng thức nano với lớp lipid màng nước mắt cho phép chế phẩm mắt lưu lại túi kết mạc lâu hơn48 Nermeen Adel ElKasabgy xây dựng hệ thống phân phối thuốc SNEDDS với mục đích tăng cường sinh khả dụng thuốc econazol nitrat cách sử dụng dầu Capmul® MCM C10, chất diện hoạt Kolliphor® RH40 chất đồng diện hoạt Transcutol® HP Tác giả sử dụng hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) chất ức chế kết tủa để cải thiện độ hòa tan thuốc sau sử dụng SNEDDS chuẩn bị với % (kl/kl) HPMC khơng có HPMC đánh giá kiểm tra khả kích ứng thí nghiệm HET - CAM Kết cho thấy hệ thống tối ưu hóa với kích thước < 15 nm, PdI < 0,15, khơng có dấu hiệu kích ứng tăng khả dụng sinh học mắt SNEDDS Nghiên cứu hiệu việc sử dụng HPMC 15 cp việc trì kết tủa thuốc tăng cường khả dụng sinh học cách trì trạng thái bão hịa thuốc13 Ibrahim A Elbahwy cộng có nghiên cứu hệ thống phân phối thuốc tự nhũ bám dính cung cấp thời gian lưu trú mắt kéo dài cho econazol Trong nghiên cứu, họ tổng hợp thành công kết hợp S-protected thiolated Eudragit® L100-55 vào SEDDS thơng qua ghép nối ion với benzalkonium chlorid SEDDS phát triển cho thấy khả bám dính niêm mạc mắt cao giải phóng econazol nitrat bền vững51 Seung Pil Bang cộng nghiên cứu thuốc nhỏ mắt cyclosporin A với hệ thống phân phối thuốc tự nhũ hóa nano cải thiện đặc tính hóa lý hiệu chống lại bệnh khô mắt mô hình khơ mắt chuột Nghiên cứu chứng minh thuốc nhỏ mắt SNEDDS – CsA (trong nghiên cứu gồm hai công thức T-sporin (SNEDDS-T); Taejoon Pharma, Seoul, South Korea Cyporin-N (SNEDDS-N); 19 Hanlim Pharma, Seoul, South Korea)) chỗ cải thiện đặc tính dược học hiệu lâm sàng in vivo so với thuốc nhỏ mắt nhũ tương nhãn khoa CsA 0,05 % Hơn nữa, chế phẩm SNEDDS - CsA bảo vệ biểu mô giác mạc tế bào kết mạc cách ức chế viêm hiệu nhũ tương nhãn khoa chứa CsA Cả hai SNEDDS có phân bố kích thước giọt nhỏ đồng so với nhũ tương nhãn khoa chứa CsA mật độ quang học tương tự đệm phosphat pH ổn định, trái ngược với độ đục cao pH không ổn định nhũ tương nhãn khoa CsA14 Rahul Tiwari cộng khảo sát hệ thống phân phối thuốc SMEDDS để phân phối prednisolon mắt để điều trị viêm màng bồ đào Tất công thức hiển thị kích thước giọt cầu trung bình nhỏ 100 nm Công thức SMEDDS nghiên cứu cho thấy tính bền vững hóa lý Các nghiên cứu in vivo mắt thỏ cho thấy cải thiện rõ rệt hoạt tính chống viêm cơng thức nghiên cứu so với công thức thị12 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, nguyên liệu, hóa chất, dung môi dùng nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Hệ vi tự nhũ prednisolon (SMEDDS - prednisolon) thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon Thuốc so sánh: Pred Forte (Ấn Độ) 2.1.2 Nguyên liệu, hóa chất, dung mơi Các ngun liệu, hóa chất, dung mơi sử dụng nghiên cứu trình bày Bảng 2.1, 2.2, 2.3 Bảng 2.1 Nguyên liệu sử dụng để điều chế hệ SMEDDS-prednisolon STT Nguyên liệu Tiêu chuẩn Nhà sản xuất Xuất xứ Prednisolon TCCS Thermo scientific Mỹ Prednisolon chuẩn TCCS Sigma-Aldrich Mỹ Capryol® 90 TCCS Gattefossé Pháp Acid oleic TCCS Xilong Trung Quốc Captex® 355 TCCS ABITEC Mỹ Captex® 200 TCCS ABITEC Mỹ LabrafacTM PG TCCS Gattefossé Pháp LabrafacTM WL 1349 TCCS Gattefossé Pháp Acid caprylic TCCS Xilong Trung Quốc 10 Capmul® MCM TCCS ABITEC Mỹ 11 Lauroglycol 90 TCCS Gattefossé Pháp 12 Kolliphor® RH 40 TCCS BASF Pháp 13 Kolliphor® EL TCCS BASF Pháp 14 Tween 20 TCCS Xilong Trung Quốc 15 Tween 80 TCCS Xilong Trung Quốc 16 Labrasol® TCCS Gattefossé Pháp 17 Propylen glycol TCCS Xilong Trung Quốc 18 Transcutol® HP TCCS Gattefossé Pháp 21 19 PEG 400 TCCS Gattefossé Pháp 20 Glycerol TCCS Xilong Trung Quốc Bảng 2.2 Hóa chất sử dụng điều chế hệ SMEDDS - prednisolon STT Hóa chất Tiêu chuẩn Nhà sản xuất Xuất xứ Natri clorid TCCS Xilong Trung Quốc Natri bicarbonat TCCS Xilong Trung Quốc Calci clorid dihydrat TCSS Xilong Trung Quốc Bảng 2.3 Dung môi sử dụng nghiên cứu STT Dung môi Tiêu chuẩn Nhà sản xuất Xuất xứ Methanol TCCS Merck Đức Methanol TCCS Xilong Trung Quốc Acid hydroclorid TCCS Xilong Trung Quốc Acid citric TCCS Xilong Trung Quốc Natri hydroxid TCCS Xilong Trung Quốc Công thức nước mắt nhân tạo (NMNT) sử dụng nghiên cứu: Natri clorid 0,670 g; natri bicarbonat 0,200 g; calci clorid dihydrat 0,008 g nước cất pha tiêm vừa đủ 100g Công thức điều chỉnh đến pH 7,4 HCl49 2.1.3 Trang thiết bị Trang thiết bị sử dụng nghiên cứu trình bày Bảng 2.4 Bảng 2.4 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu STT Tên thiết bị Mã số Nguồn gốc Bể siêu âm Sonorex Super RK 510H Đức Bếp cách thủy điều nhiệt Memmert WNB/WNE 7-45 Đức Cân phân tích Satorius – CPA 224S Đức Máy vortex Labnet International Mỹ Hệ thống sắc ký HPLC Thermo Scientific Ultimate Mỹ 3000 Máy đo pH Máy đo quang phổ UV-Vis Shimadzu UV-1800 Mettler Toledo Thụy Sĩ Nhật 22 Máy khuấy từ Stuart CB 162 Đức Máy ly tâm eppendorf Hermle Z233M-2 Đức 10 Máy đo kích thước hạt, Zetasizer Nano ZS Anh zeta 11 Tủ sấy Gallenkamp WB/OP 7-45 Đức 12 Tủ lạnh Samsung Hàn Quốc 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm 2.2.1.1 Khảo sát độ tan prednisolon tá dược Khảo sát độ tan prednisolon tá dược tiềm tạo hệ vi tự nhũ (pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt) xác định phương pháp bão hòa Cách tiến hành: Cân lượng dư prednisolon cho vào Eppendorf có chứa sẵn g loại pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt Hỗn hợp vortex 10 phút, siêu âm 30 phút để ổn định vòng 24 Các mẫu thu đem ly tâm 12000 vòng/ phút 10 phút, dịch thu lọc qua màng lọc cellulose acetat 0,45 µm pha lỗng methanol đến nồng độ thích hợp Nồng độ hoạt chất xác định phương pháp UV-Vis bước sóng 242,8 nm Mẫu trắng tá dược khảo sát pha loãng điều kiện methanol Các pha dầu khảo sát gồm: Capryol® 90, Capmul® MCM, LauroglycerolTM 90, acid oleic, Captex® 355, Captex® 200, LabrafacTM PG, acid caprylic, LabrafacTM WL 1349 Các chất diện hoạt khảo sát gồm: Tween 20, Tween 80, Labrasol, Kolliphor® RH40, Kolliphor® EL Chất đồng diện hoạt khảo sát gồm: Glycerol, Propylen glycol, Polyethylen glycol 400 (PEG 400), Transcutol® HP 2.2.1.2 Sàng lọc tá dược dùng điều chế SMEDDS Sàng lọc pha dầu: Từ kết khảo sát độ tan prednisolon pha dầu, chọn dầu cho khả hòa tan prednisolon tốt 23 Sàng lọc chất diện hoạt: - Chất diện hoạt chọn dựa theo hiệu nhũ hóa pha dầu khả hòa tan prednisolon Hiệu nhũ hóa đánh giá thơng qua thời gian để hình thành vi nhũ tương đồng đo độ truyền qua % T Chất diện hoạt tạo vi nhũ tương đồng với thời gian hình thành ngắn phần trăm độ truyền qua cao chọn52 - Cách thực hiện: Cân 300 mg chất diện hoạt cho vào Eppendorf chứa 300 mg pha dầu Hỗn hợp đun cách thủy 45 − 60 °C 10 phút vortex 02 phút Cân 50 mg hỗn hợp cho vào bình định mức 50 ml pha loãng nước cất hai lần vừa đủ 50 ml Lắc để hình thành vi nhũ tương/ nhũ tương đồng Xác định thời gian để hình thành vi nhũ tương/ nhũ tương đồng Để ổn định 02 đo % T bước sóng 638 nm, sử dụng nước cất hai lần làm mẫu trắng Mẫu có độ truyền qua gần 100% khả tạo thành vi nhũ tương chất diện hoạt cao52,53 Sàng lọc chất đồng diện hoạt / đồng hòa tan: - Chất đồng diện hoạt chọn dựa theo hiệu nhũ hóa pha dầu chất diện hoạt chọn Hiệu nhũ hóa chất đồng diện hoạt đánh giá thơng qua thời gian để hình thành vi nhũ tương đồng đo độ truyền qua %T Chất đồng diện hoạt tạo vi nhũ tương đồng với thời gian hình thành ngắn phần trăm độ truyền qua cao chọn52 - Cách thực hiện: Cân 100 mg chất cho vào Eppendorf chứa 200 mg chất diện hoạt 300 mg pha dầu chọn Hỗn hợp đun cách thủy 45 − 60 °C 10 phút vortex 02 phút Cân 50 mg hỗn hợp cho vào bình định mức 50 ml pha loãng nước cất hai lần vừa đủ 50 ml Lắc để hình thành vi nhũ tương/ nhũ tương đồng Xác định thời gian để hình thành vi nhũ tương/ nhũ tương đồng Để ổn định 02 đo % T bước sóng 638 nm, sử dụng nước cất hai lần làm mẫu trắng Mẫu có độ truyền qua gần 100% khả tạo thành vi nhũ tương chất diện hoạt cao52,53 24 2.2.1.3 Xây dựng giản đồ pha Từ kết độ tan prednisolon tá dược xác định Mục 2.2.1.1 kết khả nhũ hóa xác định theo Mục 2.2.1.2, tiến hành xây dựng giản đồ pha phương pháp pha loãng, ghi nhận vùng điểm có khả tạo vi nhũ tương vẽ lại trang web TernaryPlot.com Cách tiến hành: Các hỗn hợp gồm pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt với tỷ lệ thành phần từ 10% đến 80% (kl/kl), bước nhảy 10% tổng tỷ lệ ba thành phần 100% cân vào Eppendorf Sau đó, hỗn hợp đun cách thủy nhiệt độ 45 - 50 °C 10 phút, vortex để hỗn hợp đồng để yên 24 Các hỗn hợp pha loãng 10 lần với NMNT để yên 12 Hệ tự nhũ hình thành đánh giá theo cảm quan với 05 mức nhũ tương suốt, nhũ tương mờ, nhũ tương đục mờ, nhũ tương đục nhũ tương đục theo Hình 2.1 Vùng tạo nhũ tương suốt mờ vùng vi nhũ tương Các công thức với tỷ lệ pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt khác nằm vùng vi nhũ tương chọn công thức SMEDDS tiềm để thực nghiên cứu (A) (B) (C) (D) (E) Hình 2.1 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành (A): Trong suốt, (B): Trong mờ, (C): Đục mờ, (D): Đục, (E): Rất đục 2.2.1.4 Điều chế hệ SMEDDS Trong vùng tạo vi nhũ tương giản đồ pha, chọn công thức có tỷ lệ pha dầu dao động từ 10% đến 30%, chất diện hoạt từ 30% đến 60% Các công thức hệ SMEDDS điều chế sau: cân dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt chọn từ kết độ tan prednisolon tá 25 dược xác định Mục 2.2.1.1 kết khả nhũ hóa xác định theo Mục 2.2.1.2, theo tỷ lệ chọn vào ống nghiệm, vortex đến đồng để mẫu ổn định nhiệt độ phòng vòng 24 trước đánh giá tiêu mô tả Mục 2.2.1.5 2.2.1.5 Đánh giá tính chất SMEDDS Cảm quan: Quan sát màu sắc, tính chất công thức theo thời gian Hỗn hợp đánh giá bền hỗn hợp suốt, khơng có tượng tách lớp, kết tinh, kem, kết hay lắng cặn Ảnh hưởng độ pha loãng lên độ bền vững SMEDDS nền: Pha loãng SMEDDS 10 lần 25 lần môi trường NMNT (pH 7,4), để yên vòng 12 nhiệt độ phòng, ghi nhận thời gian SMEDDS bị tủa, bị đục, tách lớp thay đổi màu sắc theo thời gian Xác định độ bền nhiệt động học SMEDDS nền: Các công thức đạt yêu cầu độ bền thử nghiệm ảnh hưởng độ pha loãng lựa chọn để đánh giá độ bền nhiệt động - Chu kỳ nóng – lạnh: Các cơng thức khảo sát với 06 chu kỳ, thời gian chu kỳ 12 giờ, 06 để nhiệt độ ngăn mát tủ lạnh, 06 nhiệt độ 45 C Sau 06 chu kì, mẫu ly tâm 12000 vịng/phút vòng 10 phút để phát kết tinh tách pha Sau pha lỗng cơng thức SMEDDS 10 lần với NMNT quan sát cảm quan Hệ đạt yêu cầu không xảy tượng kết tủa, tách lớp hay kết - Ly tâm: Các cơng thức đạt chu kỳ nóng – lạnh ly tâm 12000 vòng/phút vòng 10 phút Những công thức không tách pha, kết tủa dùng để thực thử nghiệm đông – rã đông - Chu kỳ đông – rã đông: Tiến hành với 06 chu kỳ, thời gian chu kỳ 12 giờ, 06 để ngăn đông tủ lạnh 06 để nhiệt độ phịng Sau 06 chu kì, mẫu ly tâm 12000 vòng/phút vòng 10 phút để phát kết tinh tách pha Sau pha lỗng cơng thức SMEDDS 10 lần với NMNT 26 quan sát cảm quan Hệ đạt yêu cầu không xảy tượng kết tủa, tách lớp hay kết Đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành từ SMEDDS nền: Các công thức SMEDDS đạt yêu cầu độ bền thử nghiệm ảnh hưởng độ pha loãng thử nghiệm độ bền nhiệt động chọn đo phân bố kích thước giọt Các mẫu SMEDDS pha loãng 10 lần với NMNT tiến hành đo theo quy trình thao tác chuẩn kèm theo thiết bị Zetasizer Nano ZSP (thông số đo cố định bao gồm nhiệt độ buồng đo 25 C; góc tán xạ 173) SMEDDS đạt yêu cầu công thức có phân bố kích thước giọt < 200 nm, PdI < 0,525 2.2.2 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS - prednisolon 2.2.2.1 Khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS Từ kết đánh giá tính chất hệ SMEDDS Mục 2.2.1.5 lựa chọn số công thức SMEDDS đạt yêu cầu đánh giá khả tải prednisolon Các tỷ lệ khảo sát bao gồm mức nồng độ từ 1%; 1,5%; 2% 2,5% (kl/kl) Các tiến hành: Cân xác g hỗn hợp công thức tá dược SMEDDS vào Eppendrof vortex đến đồng Thêm prednisolon theo tỷ lệ tải khảo sát vào Eppendrof, vortex siêu âm vòng 30 phút Sau siêu âm, ly tâm với tốc độ 12000 vòng/phút 10 phút, loại công thức bị kết tủa Các công thức để yên nhiệt độ phòng 24 Pha loãng 10 lần NMNT, quan sát sau 0, 02, 04, 06 Công thức chọn hệ tạo vi nhũ tương suốt mờ, khơng tủa 2.2.2.2 Xây dựng quy trình điều chế SMEDDS - prednisolon Cách tiến hành: Cân xác hệ tá dược gồm pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt với tỉ lệ xác định vào lọ thủy tinh, khuấy máy khuấy từ tốc độ 500 vịng/phút đến đồng Cân xác lượng prednisolon xác định Mục 2.2.2.1 thêm vào hỗn hợp khuấy tốc độ 500 vòng/phút 15 phút sau siêu âm 30 phút để thu SMEDDS - prednisolon hồn chỉnh Các cơng thức sau điều chế để yên ổn định 24 Phương pháp điều chế hệ SMEDDS - prednisolon minh họa qua Hình 2.2 27 Cân tá dược theo tỷ lệ công thức Cân prednisolon Khuấy từ tá dược tốc độ 500 vòng/phút đồng Phối hợp predisolon vào hệ tá dược Hệ SMEDDS- prednisolon Khuấy từ tốc độ 500 vòng/phút 15 phút, siêu âm 30 phút Hình 2.2 Lưu đồ điều chế SMEDDS – prednisolon 2.2.2.3 Đánh giá tính chất SMEDDS - prednisolon Cảm quan Các công thức đạt thử nghiệm tải hoạt chất prednisolon dùng để đánh giá cảm quan Quan sát màu sắc, tính chất cơng thức theo thời gian Hỗn hợp đánh giá bền hỗn hợp suốt, khơng có tượng tách lớp, kết tinh, kem, kết hay lắng cặn Ảnh hưởng độ pha loãng lên độ bền vững SMEDDS - prednisolon Các công thức SMEDDS - prednisolon pha loãng 10, 25 lần với NMNT (pH 7,4) Quan sát hệ vi nhũ tương tạo thành thời điểm sau pha loãng 02, 04, 06 sau pha lỗng Cơng thức đạt công thức tạo vi nhũ tương suốt mờ, khơng tủa hoạt chất sau pha lỗng ổn định khoảng thời gian quan sát Đánh giá độ bền nhiệt động SMEDDS – prednisolon Các công thức đạt yêu cầu độ bền thử nghiệm ảnh hưởng độ pha loãng lựa chọn để đánh giá độ bền nhiệt động Cách tiến hành: - Chu kỳ nóng – lạnh: Các cơng thức khảo sát với 12 chu kỳ, thời gian chu kỳ 12 giờ, 06 để nhiệt độ ngăn mát tủ lạnh, 06 nhiệt độ 45C Sau 06 chu kì, mẫu ly tâm 12000 vòng/phút vòng 10 phút để 28 phát kết tinh tách pha Sau pha lỗng cơng thức 10 lần với NMNT quan sát cảm quan Hệ đạt yêu cầu không xảy tượng kết tủa, tách lớp hay kết - Ly tâm: Các công thức đạt chu kỳ nóng – lạnh ly tâm 12000 vịng/phút vịng 10 phút Những cơng thức khơng tách pha, kết tủa dùng để thực thử nghiệm đông – rã đông - Chu kỳ đông – rã đông: Tiến hành với 12 chu kỳ, thời gian chu kỳ 12 giờ, 06 để ngăn đông tủ lạnh 06 để nhiệt độ phòng Sau 06 chu kì, mẫu ly tâm 12000 vịng/phút vòng 10 phút để phát kết tinh tách pha Sau pha lỗng cơng thức 10 lần với NMNT quan sát cảm quan Hệ đạt yêu cầu không xảy tượng kết tủa, tách lớp hay kết bơng Đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành zeta Các công thức SMEDDS - prednisolon đạt yêu cầu độ bền thử nghiệm ảnh hưởng độ pha loãng thử nghiệm độ bền nhiệt động chọn đo phân bố kích thước giọt zeta Cách tiến hành đo kích thước giọt: Các cơng thức pha lỗng 10 lần với NMNT ống thủy tinh có nắp, lắc Để ổn định tiến hành đo theo quy trình thao tác chuẩn kèm theo máy (thơng số đo cố định bao gồm nhiệt độ buồng đo 25C; góc tán xạ 173) Cách tiến hành đo zeta: SMEDDS - prednisolon pha loãng 10 lần dung dịch NaCl, đo zeta thiết bị Zetasizer Nano ZSP Cơng thức có phân bố kích thước giọt 200 nm, PdI < 0,5 giá trị zeta lớn chọn công thức tối ưu25 2.2.2.4 Đánh giá độ lặp lại công thức tối ưu Tiến hành pha chế lặp lại SMEDDS - prednisolon theo công thức tối ưu đạt (cỡ mẫu 20g) Đánh giá độ lặp lại thử nghiệm công thức tối ưu về: khả tải hoạt chất prednisolon, ảnh hưởng độ pha loãng, độ bền nhiệt động, phân bố kích thước hạt zeta Mỗi thử nghiệm lặp lại 03 lần Kết trung bình 29 ba lần thử nghiệm kết ban đầu (trong trình sàng lọc) cơng thức tối ưu phải khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 2.2.2.5 Định lượng thẩm định quy trình định lượng prednisolon SMEDDS phương pháp HPLC Định lượng prednisolon SMEDDS phương pháp HPLC, tiến hành theo USP 44 với điều kiện thử nghiệm sau22: Điều kiện sắc ký: - Cột : L10 (250 x 4,6 mm; 5µm) - Tốc độ dòng : 1,0 ml/phút - Detector : 254 nm - Thể tích tiêm : 10 µl - Nhiệt độ cột : 15 oC - Pha động : Đệm citrat methanol (70:30) (Dung dịch đệm citrat: Hòa tan 0,6336 g acid citric vào 1L nước tinh khiết, điều chỉnh dung dịch pH 6,2 natri hydroxit 1N Lọc qua màng lọc 0,45µm, siêu âm để loại khí) Cơng thức tính Hàm lượng prednisolon tính theo cơng thức: Trong đó: - Sc, St: Diện tích pic prednisolon dung dịch chuẩn dung dịch thử - mc, mt: Khối lượng cân chuẩn thử (mg) - C%: Hàm lượng (%) prednisolon chuẩn - Dc: Hệ số pha loãng mẫu chuẩn - Dt: Hệ số pha loãng mẫu thử Chuẩn bị mẫu: - Dung môi pha mẫu: Methanol - nước (1:1) - Dung dịch mẫu trắng: dung mơi pha lỗng, lọc qua màng lọc 0,45 µm 30 - Dung dịch tương thích hệ thống: Hịa tan lượng prednisolon hydrocortison dung mơi pha mẫu để dung dịch chuẩn có nồng độ tương ứng 100 µg/ml 90 µg/ml - Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 50 mg prednisolon chuẩn vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 35 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm cho tan, vừa siêu âm vừa lắc, để nguội, điền đầy vừa đủ thể tích dung môi pha mẫu, lắc thu dung dịch chuẩn gốc Pha loãng ml dung dịch chuẩn gốc thành 50 ml với mơi trường hịa tan, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch thử: Cân xác khoảng 500 mg chế phẩm vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 30 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm 15 phút, vừa siêu âm vừa lắc, để nguội Bổ sung dung môi pha mẫu vừa đủ thể tích, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm - Dung dịch placebo: chuẩn bị tương tự mẫu thử khơng có hoạt chất Sự phù hợp hệ thống sắc ký - Tiêm dung dịch chuẩn 06 lần vào hệ thống sắc ký - Độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic từ 06 lần tiêm lặp lại không lớn 2,0% - Thời gian lưu: 0,8 hydrocortison prednisolon - Độ phân giải pic hydrocortison prednisolon không nhỏ 1,5 Định lượng: Yêu cầu hàm lượng prednisolon thực tế định lượng phải nằm khoảng giá trị 90,0% – 115,0% so với hàm lượng thực tế Thẩm định quy trình phân tích định lượng prednisolon HPLC theo ICH tiêu: Phương pháp thẩm định độ đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác, độ - Độ đặc hiệu ➢ Sắc ký đồ dung dịch mẫu trắng, dung dịch placebo không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu chất chuẩn 31 ➢ Sắc ký đồ mẫu thử cho pic có thời gian lưu tương tự với pic chất chuẩn sắc ký đồ mẫu chuẩn Trên sắc ký đồ dung dịch thử xuất thêm pic khác (pic tạp) khơng phải pic hoạt chất cần phân tích, pic hoạt chất cần phân tích phải tách hịan toàn khỏi pic tạp đáp ứng yêu cầu chung phương pháp sắc ký lỏng quy định dược điển ➢ Pic hoạt chất cần phân tích sắc ký đồ mẫu thử phải tinh khiết - Tính tuyến tính ➢ Pha dung dịch chuẩn gốc prednisolon mg/ml: Cân xác khoảng 50 mg prednisolon chuẩn vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 35 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm cho tan, vừa siêu âm vừa lắc, để nguội, điền đầy vừa đủ thể tích dung mơi pha mẫu, lắc (nồng độ mg/ml) ➢ Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn: pha từ dung dịch chuẩn gốc trình bày Bảng 2.1 Bảng 2.1 Dãy dung dịch chuẩn prednisolon Mẫu 0,060 0,080 0,100 0,120 0,140 Dung dịch chuẩn gốc (1 mg/ml) Dung môi pha mẫu vđ (ml) 50 25 50 25 50 Nồng độ (mg/ml) ➢ Tiến hành: Triển khai sắc ký, ghi nhận kết Vẽ đường biểu diễn tương quan nồng độ diện tích pic, dùng phân tích hồi quy để kiểm tra ý nghĩa hệ số phương trình hồi quy tính tương thích phương trình ➢ u cầu: R2 ≥ 0,995 - Độ ➢ Xác định độ phương pháp cách thêm xác lượng chất chuẩn cần phân tích vào dung dịch placebo ➢ Chuẩn bị 03 loại mẫu tự tạo cách thêm xác lượng chất chuẩn prednisolon vào mẫu giả dược Lượng chất chuẩn thêm vào tương ứng 32 với 03 mức nồng độ 80%, 100% 120% so với mức nồng độ mẫu thử Tại mức nồng độ, thực 03 mẫu độc lập ➢ Dung dịch mẫu tự tạo: Cân lượng giả dược khoảng 500mg cho vào bình định mức 100 ml (thực 09 lần), thêm xác lượng dung dịch chuẩn 0,080 mg/ml, 0,100 mg/ml, 0,120 mg/ml (tương ứng với nồng độ khoảng 80%, 100%, 120% so với nồng độ mẫu thử) vào bình định mức trên, thêm khoảng 30 ml dung môi pha mẫu, lắc siêu âm 15 phút, vừa siêu âm vừa lắc, để nguội Bổ sung dung mơi pha mẫu vừa đủ thể tích, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm ➢ Phân tích mẫu theo qui trình phân tích Xác định độ phương pháp theo công thức: Độ hay tỉ lệ thu hồi (%) = Lượng hoạt chất thu hồi Lượng hoạt chất thêm vào x 100 % ➢ Yêu cầu: Độ phương pháp phải nằm khoảng 90% đến 107% giá trị RSD ≤ 2,0% - Độ xác ➢ Độ lặp lại phương pháp Dung dịch chuẩn: dùng dung dịch chuẩn phần tính tương thích hệ thống Tiến hành phân tích 06 dung dịch thử nồng độ 100% Xác định hàm lượng hoạt chất có mẫu Độ lặp lại phương pháp xác định giá trị RSD (%) kết định lượng hàm lượng hoạt chất có mẫu Yêu cầu: Giá trị RSD (%) kết định lượng hàm lượng prednisolon có mẫu ≤ 2,0% ➢ Độ xác trung gian Thực tương tự phần độ lặp với kiểm nghiệm viên thứ hai vào ngày khác, máy sắc ký Yêu cầu: Ở điều kiện có RSD ≤ 2,0% (n=6) Kết hàm lượng hoạt chất 02 điều kiện kiểm nghiệm có RSD ≤ 2,0% (n=12) 33 2.2.2.6 Đánh giá khả giải phóng hoạt chất in vitro prednisolon từ SMEDDS - prednisolon Dụng cụ: - Máy khuấy từ - Màng cellulose acetat 0,45 µm - Tế bào Franz: dùng loại thẳng đứng có đường kính khoang cho 19 - 20 mm, thể tích khoang nhận 19 ml Tiến hành: - Đặt cá từ vào khoang nhận, cho 19 ml môi trường NMNT ổn định nhiệt độ 37 ± C - Đặt màng cellulose acetat vào khoang cho khoang nhận tế bào Franz, cố định hai khoang Màng cellulose acetat ngâm môi trường thử 30 phút trước gắn vào thiết bị - Gắn tế bào khuyếch tán vào máy khuấy từ Tốc độ khuấy từ 100 vòng/phút - Điều chỉnh để nhiệt độ ổn định theo yêu cầu quy trình thử Mẫu cho vào thiết bị nhiệt độ môi trường đạt đến nhiệt độ quy định - Cho 200 µl dung dịch thử vào khoang cho tế bào Franz - Lấy mẫu: mẫu 0,5 ml lấy thời điểm xác định (5 phút, 10 phút, 15 phút, 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút, 240 phút, …) đồng thời bổ sung lại thể tích lấy mẫu mơi trường NMNT ổn định nhiệt 37 ± C Pha loãng mẫu tiến hành định lượng prednisolon phương pháp đo quang bước sóng 248 nm Mỗi mẫu thử nghiệm lặp lại lần Đánh giá kết - Dung dịch mẫu chuẩn: dung dịch prednisolon chuẩn nồng độ 10 µg/ml - Phần trăm giải phóng hoạt chất qua màng thười điểm lấy mẫu lần thứ lần thứ n tính theo cơng thức Lần thứ nhất: Q1 = a Lần thứ n: Qn = a A1 Cc Vcell Ac m.b.100 A1 Cc Vcell Ac m.b.100 (%) (%) + Vlm Vcell ∑n-1 i=1 Qi (%) 34 Trong đó: Q1: Hàm lượng phần trăm hoạt chất giải phóng lần lấy mẫu thứ (%) Qi: Hàm lượng phần trăm hoạt chất giải phóng lần lấy mẫu lần thứ i (%) Qn: Hàm lượng phần trăm hoạt chất giải phóng lần lấy mẫu lần thứ n (%) A1: Độ hấp thu mẫu lấy lần thứ sau pha loãng An: Độ hấp thu mẫu lấy lần thứ n sau pha loãng Ac: Độ hấp thu dung dịch chuẩn Cc: Nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml) a: Độ pha lỗng mẫu thử Vcell: Thể tích khoang nhận (ml) Vlm: Thể tích lần lấy mẫu (ml) m: khối lượng SMEDDS - prednisolon vào khoang cho (g) b: nồng độ hoạt chất trong SMEDDS - prednisolon (%) Định lượng thẩm định quy trình định lượng prednisolon thử nghiệm đánh giá khả giải phóng hoạt chất phương pháp UV-Vis Định lượng Hàm lượng prednisolon thử nghiệm khả giải phóng hoạt chất xác định phương pháp UV-Vis, đo bước sóng 248nm Thẩm định quy trình định lượng - Tính đặc hiệu Chuẩn bị mẫu prednisolon chuẩn mẫu thử có nồng độ 10 µg/ml môi trường NMNT, mẫu giả dược chứa thành phần tá dược mẫu thử khơng có chứa hoạt chất Dung dịch chuẩn: cân xác khoảng 10 mg prednisolon chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml Hòa tan mẫu với khoảng ml methanol, siêu âm 15 phút bổ sung methanol đến vạch Hút xác ml dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch NMNT đến vạch, lắc đều, thu dung dịch chuẩn có nồng độ 10 µg/ml 35 Dung dịch thử: cân xác khoảng 0,5 g SMEDDS- prednisolon, cho vào bình định mức 10 ml Hòa tan mẫu với khoảng ml methanol, siêu âm 15 phút bổ sung methanol đến vạch Hút xác ml dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch NMNT đến vạch, lắc đều, thu dung dịch mẫu thử có nồng độ 10 µg/ml Dung dịch placebo: chuẩn bị mẫu giống mẫu thử khơng có hoạt chất prednisolon Dung dịch mẫu trắng: dung dịch NMNT Yêu cầu: Quy trình đạt độ đặc hiệu phổ UV prednisolon dung dịch thử, chuẩn có bước sóng hấp thu cực đại Đồng thời, mẫu trắng mẫu giả dược khơng có đỉnh hấp thu prednisolon mẫu chuẩn mẫu thử - Độ tuyến tính Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc: cân xác khoảng 50,0 mg prednisolon chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml Hòa tan mẫu với khoảng 10 ml methanol, siêu âm 15 phút bổ sung methanol Từ dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 1000 ppm pha dung dịch chuẩn có nồng độ 100 ppm NMNT Từ dung dịch chuẩn, điều chế dung dịch có nồng độ µg/ml, µg/ml, µg/ml, 10 µg/ml, 15 µg/ml, 20 µg/ml dung dịch NMNT trình bày Bảng 2.2 Đo độ hấp thu bước sóng 248nm ghi lại kết Vẽ đường biểu diễn tương quan nồng độ độ hấp thu A Từ suy phương trình hồi quy ŷ = ax+b Sử dụng “phân tích hồi quy” với trắc nghiệm t (Student) để kiểm tra ý nghĩa cá hệ số phương trình hồi quy trắc nghiệm F (Fisher) để kiểm tra tính thích hợp phương trình hồi quy Bảng 2.2 Dãy dung dịch chuẩn prednisolon Mẫu Nồng độ (µg/ml) 10 15 20 Dung dịch gốc 100 ppm 0.5 0,7 7,5 Dung dịch NMNT vđ (ml) 50 100 10 10 50 10 36 - Độ xác Chuẩn bị 06 mẫu thử có nồng độ 10 µg/ml , tiến hành quang tính hàm lượng trung bình prednisolon có mẫu thử Tính giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) kết hàm lượng 06 mẫu u cầu: Quy trình đạt độ xác giá trị thống kê có RSD ≤ 2,0 % - Độ Thêm vào mẫu placebo lượng chất chuẩn 80%, 100% 120% hàm lượng hoạt chất có mẫu (lượng thêm vào cho thu dung dịch thử có nồng độ µg/ml, 10 µg/ml, 12 µg/ml) Chuẩn bị 03 mẫu nồng độ, tổng cộng có 09 dung dịch Đo độ hấp thu dung dịch tính tỷ lệ phục hồi Yêu cầu: Phương pháp định lượng đạt độ phục hồi nồng độ nằm khoảng giới hạn 98 - 102% 2.2.2.7 Sơ đánh giá độ ổn định SMEDDS - prednisolon Việc khảo sát độ ổn định thuốc thực dựa theo Hướng dẫn ASEAN Bảo quản công thức điều kiện 30 ± 2oC /75 ± 5% RH 40 ± 2oC/75 ± 5% RH 03 tháng Mẫu đánh giá cảm quan, định tính, định lượng, kích thước giọt, PdI, zeta vi nhũ tương tạo thành sau tháng, 01 tháng, 03 tháng 2.2.3 Xây dựng cơng thức đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon 2.2.3.1 Xây dựng quy trình bào chế thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon Bổ sung acid boric vitamin E với tỷ lệ khác vào công thức hệ SMEDDS prednisolon Thành phần tá dược bào chế thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon bao gồm: Capryol® 90, Kolliphor® RH40, Transcutol® HP, acid boric, vitamin E Thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon bào chế theo bước sau: - Điều chế hệ SMEDDS – prednisolon trình bày Mục 2.2.2.2 - Hòa tan vitamin E vào hệ SMEDDS – prednisolon nêu trên, khuấy từ đồng 37 - Hòa tan acid boric đồng - Lọc qua màng celluolose acetat 0,22 µm Bảo quản nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng 2.2.3.2 Đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS prednisolon Ngoài tiêu SMEDDS - prednisolon nêu Mục 2.2.2.3: Cảm quan, ảnh hưởng độ pha lỗng lên cơng thức, đánh giá độ bền nhiệt động, đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành zeta, định lượng Công thức thuốc nhỏ mắt SMEDDS- prednisolon đánh giá thêm tiêu pH, độ vô khuẩn - pH: pH SMEDDS - prednisolon đo máy đo pH Mettler Toledo - Đánh giá độ vô khuẩn: Theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V, Phụ lục 13.7 - Đánh giá độ nhớt: Được thực máy đo độ nhớt 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm 3.1.1 Khảo sát độ tan prednisolon tá dược Kết độ tan prednisolon pha dầu, chất diện hoạt đồng diện hoạt/ đồng hịa tan trình bày Bảng 3.1, Hình 3.1 Bảng 3.1 Độ tan prednisolon tá dược Tên tá dược Phân nhóm Độ tan (mg/g) Capryol® 90 12,41 ± 0,012 Capmul® MCM 10,24 ± 0,01 LauroglycolTM 90 6,04 ± 0,007 LabrafacTM PG 1,31 ± 0,05 Captex® 200 1,32 ± 0,01 Acid caprylic 1,19 ± 0,017 Captex® 355 1,19 ± 0,022 LabrafacTM lipophile WL 1349 1,06 ± 0,148 Acid oleic 1,06 ± 0,016 Kolliphor® RH40 22,73 ± 0,029 Tween 20 16,03 ± 0,012 Tween 80 14,98 ± 0,020 Labrasol® 12,55 ± 0,071 Kolliphor® EL 11,54 ± 0,012 Transcutol® HP 36,31 ± 0,017 Chất đồng diện hoạt/ PEG 400 33,47 ± 0,017 đồng hòa tan Propylen glycol 28,11 ± 0,013 Glycerol 6,21 ± 0,021 Pha dầu Chất diện hoạt Độ tan (mg/g): XTB ± SD Độ tan prednisolon tá dược (mg/g) 39 45 40 Dầu Chất diện hoạt Chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi 33.47 35 28.11 30 25 22.73 20 15 36.31 16.03 14.98 12.55 11.54 12.41 10.24 10 6.21 6.04 1.31 1.3 1.19 1.19 1.06 1.06 Hình 3.1 Biểu đồ so sánh độ tan prednisolon tá dược Nhận xét: Độ tan bão hòa dược chất tất tá dược tiêu chí quan trọng việc xây dựng công thức SMEDDS ổn định, không tủa hoạt chất sau hòa tan Trong số dầu khảo sát, prednisolon có khả hịa tan tốt Capryol® 90, Capmul® MCM, LauroglycolTM 90, Captex® 200, Acid caprylic, Captex® 355, LabrafacTM lipophile WL 1349, Acid oleic Sự khác độ tan prednisolon tá dược có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Độ tan prednisolon chất diện hoạt giảm dần theo thứ tự: Kolliphor® RH40, Tween 20, Tween 80, Labrasol®, Kolliphor® EL, Span 80 Sự khác độ tan prednisolon tá dược có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Chất diện hoạt chọn dựa theo hiệu nhũ hóa pha dầu độ tan chúng prednisolon, nên chất diện hoạt sàng lọc thử nghiệm để lựa chọn chất diện hoạt phù hợp 40 Độ tan prednisolon chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi giảm dần theo thứ tự: Transcutol® HP, PEG 400, PG, Glycerol Sự khác độ tan prednisolon tá dược có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi chọn dựa theo hiệu nhũ hóa pha dầu độ tan chúng prednisolon, nên chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi sàng lọc thử nghiệm để lựa chọn chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi phù hợp 3.1.2 Sàng lọc tá dược dùng điều chế SMEDDS 3.1.2.1 Sàng lọc pha dầu Lựa chọn pha dầu cho SMEDDS dựa vào khả hòa tan prednisolon Từ kết Bảng 3.1 cho thấy, độ tan prednisolon dầu khác khảo sát cho thấy Capryol® 90 (12,41 ± 0,012 mg/g) có khả hịa tan prednisolon tốt nhất, chọn Capryol® 90 làm pha dầu cho khảo sát 3.1.2.2 Sàng lọc chất diện hoạt Khảo sát khả nhũ hóa chất diện hoạt tiến hành mô tả Mục 2.2.1.2 đánh giá kết % T bước sóng 638 nm thời gian hình thành vi nhũ tương đồng chất diện hoạt với pha dầu Capryol® 90 Mẫu % T gần 100% khả tạo vi nhũ tương chất diện hoạt cao Kết trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết sàng lọc chất diện hoạt Thời gian hình thành Chất diện hoạt % T (a) Kolliphor® RH40 99,8 ± 0,01 2,50 ± 0,30 Kolliphor® EL 97,2 ± 0,01 3,00 ± 0,45 Tween 20 98,2 ± 0,02 6,20 ± 0,42 Tween 80 89,3 ± 0,07 7,52 ± 0,58 Labrasol 51,9 ± 0,10 9,20 ± 0,50 Span 80 75,3 ± 0,08 13,03 ± 0,40 (a), (b): XTB ± SD vi nhũ tương (b) (giây) 41 Nhận xét: Từ kết đánh giá % T chất diện hoạt với pha dầu Capryol® 90 Capmul® MCM cho thấy Kolliphor® RH40 cho % T cao Labrasol®, Tween 20, Tween 80 Span 80 Qua sàng lọc cho thấy Kolliphor® RH40 có khả tự nhũ hóa tốt so với Labrasol®, Tween 20, Tween 80 Span 80 % T Kolliphor® RH40 với pha dầu 99% cho thấy ổn định nhũ tương hình thành % T Kolliphor® RH40 với pha dầu khác nghĩa thống kê so với % T Labrasol®, Tween 20, Tween 80 Span 80 với pha dầu (p < 0,05) Kolliphor® RH40 diện hoạt có khả hịa tan prednisolon tốt Vì chọn Kolliphor® RH40 làm chất diện hoạt để tiến hành bước khảo sát 3.1.2.3 Sàng lọc chất đồng diện hoạt/ đồng dung môi Thử nghiệm tiến hành mô tả Mục 2.2.1.2 Kết đo % T thời gian hình thành vi nhũ tương đồng chất đồng diện hoạt nghiên cứu pha dầu Capryol® 90 chất diện hoạt Kolliphor® RH40 trình bày Bảng 3.3 Bảng 3.3 Kết sàng lọc chất đồng diện hoạt Thời gian hình thành Chất đồng diện hoạt %T Transcutol® HP 99,8 ± 0,03 3,50 ± 0,05 PEG 400 99,5 ± 0,08 3,83 ± 0,58 Propylen glycol 98,8 ± 0,06 4,00 ± 0,50 (a) vi nhũ tương (b) (giây) (a), (b): XTB ± SD Nhận xét: Việc lựa chọn chất đồng diện hoạt giống chất diện hoạt định hiệu nhũ hóa khả hịa tan hoạt chất Do đó, chất đồng diện hoạt có khả hịa tan nhũ hóa pha dầu Capryol® 90 chất diện hoạt Kolliphor® RH40 cao ưu tiên lựa chọn Hiệu nhũ hóa đánh giá thơng qua thời gian hình thành vi nhũ tương đồng % T Từ kết nghiên cứu cho thấy % T Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Capryol® 90: Kolliphor® 42 RH40: PEG 400 cao Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Propylen glycol Thời gian nhũ hóa Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 khơng khác có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) nhanh so với hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Propylen glycol Vì chọn chất đồng diện hoạt Transcutol® HP PEG 400 cho thử nghiệm 3.1.3 Xây dựng giản đồ pha Từ kết sàng lọc tá dược Mục 3.1.2, chọn pha dầu Capryol® 90, chất diện hoạt Kolliphor® RH40 chất đồng diện hoạt Transcutol® HP PEG 400 Thực xây dựng hai giản đồ pha Mục 2.2.1.3 Kết trình bày Hình 3.2 Phụ lục giản đồ pha Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : Transcutol® HP Hình 3.4 Phụ lục giản đồ pha Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400 Hình 3.2 Giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP (A) (B) (C) (D) Hình 3.3 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP (A): Trong suốt, (B): Trong mờ, (C): Đục, (D): Rất đục 43 Nhận xét: Kết nghiên cứu cho thấy - Ở tỷ lệ 10% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 Transcutol® HP: 10 - 80%) nhũ tương tạo suốt, ngoại trừ hệ D/DH/ĐDH = 10/10/80 đục - Ở tỷ lệ 20% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 Transcutol® HP: 10 - 70%) nhũ tương tạo mờ đục, ngoại trừ hệ D/DH/ĐDH = 20/10/70, 20/20/60 tạo nhũ tương đục - Ở tỷ lệ 30% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 Transcutol® HP: 10 - 60%) nhũ tương tạo đục, ngoại trừ D/DH/ĐDH = 30/40/30, 30/50/20 tạo nhũ tương mờ - Ở tỷ lệ 40 - 80% Capryol® 90 tất tỷ lệ khác Kolliphor® RH40 Transcutol® HP cho nhũ tương đục Nhũ tương suốt mờ vi nhũ tương Các cơng thức với tỷ lệ Capryol® 90, Kolliphor® RH40 Transcutol® HP tạo vi nhũ tương pha lỗng cơng thức SMEDDS tiềm năng, lựa chọn cho thử nghiệm Hình 3.4 Giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 44 (A) (B) (C) (D) (E) Hình 3.5 Các mức đánh giá cảm quan hệ vi nhũ tương tạo thành Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 (A): Trong suốt, (B): Trong mờ, (C): Đục mờ, (D): Đục, (E): Rất đục Nhận xét: Kết nghiên cứu cho thấy rằng: - Ở tỷ lệ 10% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 PEG 400: 10 - 80%) nhũ tương tạo suốt, ngoại trừ hệ D/DH/ĐDH = 10/10/80 đục mờ - Ở tỷ lệ 20% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 PEG 400: 10 - 70%), hệ D/DH/ĐDH = 20/30/50, 20/40/40, 20/50/30 tạo nhũ tương tạo mờ hệ D/DH/ĐDH = 20/20/60, 20/60/20, 20/70/10 tạo nhũ tương đục - Ở tỷ lệ 30% Capryol® 90 (Kolliphor® RH40 PEG 400: 10 - 60%), hệ D/DH/ĐDH = 30/40/30, 30/50/20 tạo nhũ tương tạo mờ, hệ D/DH/ĐDH = 30/30/40, 30/60/10 tạo nhũ tương đục hệ D/DH/ĐDH = 30/10/60, 30/20/50 tạo nhũ tương đục - Ở tỷ lệ 40 - 80% Capryol® 90 tất tỷ lệ khác Kolliphor® RH40 Transcutol® HP cho nhũ tương đục mờ, đục đục Nhũ tương suốt mờ vi nhũ tương Các công thức với tỷ lệ Capryol® 90, Kolliphor® RH40 PEG 400 tạo vi nhũ tương pha lỗng cơng thức SMEDDS tiềm năng, lựa chọn cho thử nghiệm 3.1.4 Điều chế hệ SMEDDS Trong vùng tạo vi nhũ tương giản đồ pha, chọn cơng thức có tỷ lệ pha dầu từ 10% đến 30%, chất diện hoạt từ 30% đến 60% 09 cơng thức SMEDDS chọn trình bày Bảng 3.4, Bảng 3.5 điều chế mô tả Mục 2.2.1.4 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 Bảng 3.4 Các công thức chọn để khảo sát với Capryol® 90, Kolliphor® RH40 Transcutol® HP T1 (1:4:5) T4 (2:3:5) T7 (3:4:3) T2 (1:5:4) T5 (2:4:4) T8 (3:5:2) T3 (1:6:3) T6 (2:5:3) Các tỷ lệ ngoặc đơn tỷ lệ (%, kl/kl) Capryol® 90, Kolliphor® RH40 Transcutol® HP Bảng 3.5 Các cơng thức chọn để khảo sát với Capryol® 90, Kolliphor® RH40 PEG 400 P1 (1:4:5) P4 (2:3:5) P7 (3:4:3) P2 (1:5:4) P5 (2:4:4) P3 (1:6:3) P6 (2:5:3) P8 (3:5:2) Các tỷ lệ ngoặc đơn tỷ lệ (%, kl/kl) Capryol® 90, Kolliphor® RH40, PEG 400 3.1.5 Đánh giá tính chất hệ SMEDD Quan sát cảm quan; khảo sát ảnh hưởng độ pha loãng pH lên độ bền vững SMEDDS nền; độ bền nhiệt động hệ SMEDDS mô tả Mục 2.2.1.5 3.1.5.1 Cảm quan Các công thức SMEDDS suốt, khơng có tượng tách lớp, kem, kết T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 Hình 3.6 Cảm quan cơng thức T1 – T8 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 Hình 3.7 Cảm quan công thức P1 – P8 T8 P8 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 46 3.1.5.2 Ảnh hưởng độ pha loãng lên độ bền vững SMEDDS Kết ảnh hưởng độ pha loãng lên độ bền vững SMEDDS 18 công thức từ T1 – T6 P1 – P6 trình bày Phụ lục Nhận xét: - SMEDDS tạo thành vi nhũ tương suốt mờ pha lỗng mơi trường NMNT khơng xảy tượng bị tủa, bị đục, tách lớp thay đổi màu sắc theo thời gian vòng 06 - Do tất cơng thức lựa chọn cho thử nghiệm 3.1.5.3 Độ bền nhiệt động hệ SMEDDS Sau thực chu kì nóng – lạnh, ly tâm chu kì đơng – rã đơng, khơng có tượng tách lớp, kết tủa hay kết 16 công thức Nhận xét: SMEDDS ổn định đạt độ bền nhiệt động 3.1.5.4 Đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành từ SMEDDS Đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành từ SMEDDS mô tả Mục 2.2.1.5 Kết trình bày Bảng 3.6, Bảng 3.7, Hình 3.8, Hình 3.9 Phụ lục Phụ lục Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 47 Bảng 3.6 Kết đo kích thước giọt vi nhũ tương SMEDDS (Capryol® 90:Kolliphor® RH40:Transcutol® HP) Kích thước giọt trung bình (nm) Cơng thức Dải phân bố (nm-nm) PdI Kích thước giọt peak (nm) Kích thước giọt peak (nm) T1 (1:4:5) 15,68 ± 0,046 8,87 - 28,21 0,039 ± 0,009 16,60 ± 0,1504 - T2 (1:5:4) 14,14 ± 0,035 8,72 - 28,21 0,036 ± 0,009 14,93 ± 0,0611 - T3 (1:6:3) 13,99 ± 0,061 7,53 - 28,21 0,036 ± 0,008 14,79 ± 0,0200 - T4 (2:3:5) 23,40 ± 0,098 13,54 - 43,82 0,031 ± 0,003 24,65 ± 0,0700 - T5 (2:4:4) 19,72 ± 0,038 10,10 - 43,82 0,055 ± 0,015 21,14 ± 0,2108 - T6 (2:5:3) 17,43 ± 0,083 8,72 - 37,84 0,078 ± 0,006 19,05 ± 0,0737 - T7 (3:4:3) 23,81 ± 0,075 13,54 - 50,75 0,058 ± 0,006 25,56 ± 0,1002 - T8 (3:5:2) 20,27 ± 0,061 11,70 - 43,82 0,051 ± 0,006 21,65 ± 0,2335 - Các tỷ lệ ngoặc đơn tỷ lệ (%, kl/kl) Capryol® 90:Kolliphor® RH40 : Transcutol® HP −: Khơng xuất peak Kích thước giọt trung bình, kích thước giọt peak 1, PdI: XTB ± SD Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kích thước giọt trung bình (nm) 48 30 25 20 15 10 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 (1:4:5) (1:5:4) (1:6:3) (2:3:5) (2:4:4) (2:5:3) (3:4:3) (3:5:2) Hình 3.8 Biểu đồ so sánh kích thước giọt trung bình thay đổi tỷ lệ Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : Transcutol® HP Nhận xét: Từ kết đo kích thước giọt hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP cho thấy: - Ở tỷ lệ dầu, tăng tỷ lệ chất diện hoạt, giảm tỷ lệ chất đồng diện hoạt kích thước giọt giảm xuống so sánh cơng thức T1-T2-T3, T4-T5-T6; T7T8, P1-P2-P3, P4-P5-P6, P7-P8 kích thước giọt giảm xuống cặp công thức khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Cùng tỷ lệ chất diện hoạt, tăng tỷ lệ dầu giảm tỷ lệ chất đồng diện hoạt kích thước giọt tăng lên so sánh công thức T1-T5-T7, T2-T6-T8 kích thước giọt tăng lên cặp cơng thức khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Cùng tỷ lệ chất đồng diện hoạt, tăng tỷ lệ dầu giảm tỷ lệ chất diện hoạt kích thước giọt tăng lên so sánh cơng thức T3-T6-T7 kích thước giọt tăng lên cặp cơng thức khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Các công thức từ T1-T8 đạt yêu cầu kích thước giọt, PdI SMEDDS Tất mẫu có phân bố 01 đỉnh nên chọn cho thử nghiệm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 49 Bảng 3.7 Kết đo kích thước giọt vi nhũ tương SMEDDS (Capryol® 90:Kolliphor® RH40:PEG 400) Kích thước giọt Kích thước giọt peak (nm) peak (nm) 0,059 ± 0,017 17,63 ± 0,3606 - 7,53 - 32,67 0,051 ± 0,010 16,13 ± 0,0435 - 8,72 - 28,21 0,058 ± 0,014 15,31 ± 0,1210 - 20,74 ± 0,1904 292,8 ± 4,851 (77,8%) (22,2%) 21,41 ± 0,2635 627,7 ± 41,75 (51,6%) (48,4%) 18,90 ± 0,1607 840,7 ± 357,8 (53,8%) (46,2%) 23,79 ± 0,1701 329,2 ± 12,07 (76,2%) (23,8%) 23,22 ± 0,3477 4521 ± 96,26 (96,1%) (3,9%) Dải phân bố Cơng thức Kích thước giọt trung bình (nm) P1 (1:4:5) 16,41 ± 0,087 8,72 - 37,84 P2 (1:5:4) 15,05 ± 0,140 P3 (1:6:3) 14,31 ± 0,026 P4 (2:3:5) 23,88 ± 0,060 P5 (2:4:4) 46,26 ± 0,756 P6 (2:5:3) 35,99 ± 0,698 P7 (3:4:3) 27,75 ± 0,155 P8 (3:5:2) 21,96 ± 0,093 (nm-nm) 10,10 - 43,82 105,7 - 712,4 11,70 - 37,84 190,1 - 5560 10,10 - 32,67 190,1 - 5560 11,70 - 50,75 122,4 - 825 10,10 - 50,75 3091 - 5560 PdI 0,352 ± 0,003 0,629 ± 0,009 0,643 ± 0,035 0,352 ± 0,006 0,193 ± 0,013 Các tỷ lệ ngoặc đơn tỷ lệ (%, kl/kl) Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 −: Khơng xuất peak; Kích thước giọt trung bình, kích thước giọt peak 1, kích thước giọt peak 2, PdI: XTB ± SD Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 50 Kích thước giọt trung bình (nm) 50 45 40 35 30 25 20 15 10 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 (1:4:5) (1:5:4) (1:6:3) (2:3:5) (2:4:4) (2:5:3) (3:4:3) (3:5:2) Hình 3.9 Biểu đồ so sánh kích thước giọt trung bình thay đổi tỷ lệ Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400 Nhận xét: Từ kết đo kích thước giọt Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400 cho thấy: - Ở tỷ lệ dầu, công thức P1 – P2 – P3 có kích thước giọt giảm xuống kích thước giọt cơng thức khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Kích thước giọt trung bình tỷ lệ dầu 20% 30% lớn so với tỷ lệ dầu 10% có ý nghĩ thống kê (p < 0,05) - Khi tỷ lệ dầu tăng từ 10% lên 20% - 30% xuất phân bố 02 đỉnh Vì tỷ lệ dầu 10% tỷ lệ tối ưu cho hệ Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400 - Cơng thức P1, P2, P3 đạt yêu cầu kích thước giọt, PdI SMEDDS P1, P2, P3 có phân bố 01 đỉnh nên chọn cho thử nghiệm 3.2 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS – prednisolon 3.2.1 Khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS Khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS mô tả Mục 2.2.2.1 kết định lượng prednisolon trình bày Bảng 3.8, Bảng 3.9 Phụ lục 5, Phụ lục Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 51 Bảng 3.8 Kết khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS (Capryol® 90:Kolliphor® RH40:Transcutol®HP) Tải 1,0% prednisolon Cơng thức Tỷ lệ (%) D/DH/ĐDH (kl/kl/kl) Tải 1,5% prednisolon PL LT Tải 2,0% prednisolon PL LT giờ giờ Tải 2,5% prednisolon PL LT giờ giờ PL LT giờ giờ giờ giờ A1 1:4:5 t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A KT - - A2 1:5:4 t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A KT - - A3 1:6:3 t-đn A A A A t-đn A A A A T - - - - - - - - - A4 2:3:5 t-đn B B B B t-đn B B B B t-đn B B B B t-đn B KT - - A5 2:4:4 t-đn B B B B t-đn B B B B t-đn B B B B T - - - - A6 2:5:3 t-đn B B B B t-đn B B B B T - - - - - - - - - A7 3:4:3 t-đn B B B B t-đn B B B B T - - - - - - - - - A8 3:5:2 t-đn B B B B t-đn B B B B T - - - - - - - - - D/DH/ĐDH: Dầu/ Diện hoạt/ Đồng diện hoạt; LT: Ly tâm; PL: Pha loãng; t-đn: Trong - Đồng nhất; A: Trong suốt, B: Trong mờ; T: Tủa; KT: Kết tinh; -: Không thực Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 52 Nhận xét: - Ở tỷ lệ tải 1,0% prednisolon, công thức từ A1 đến A8 tạo SMEDDS - prednisolon đồng giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha loãng với NMNT 10 lần, công thức từ A1 đến A8 tạo vi nhũ tương suốt mờ sau pha loãng sau 06 pha lỗng Do cơng thức A1 đến A8 chọn để khảo sát khả tải prednisolon tỷ lệ 2,0% - Ở tỷ lệ tải 2,0% prednisolon, công thức A1, A2, A4, A5 tạo SMEDDS – prednisolon đồng nhất, công thức A3, A6, A7, A8 tạo tủa giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha loãng với NMNT 10 lần, công thức A1, A2, A4, A5 tạo vi nhũ tương suốt mờ sau pha loãng sau 06 pha lỗng Do cơng thức A1, A2, A4, A5 chọn để khảo sát khả tải prednisolon tỷ lệ 2,5% - Ở tỷ lệ tải 2,5% prednisolon, công thức A1, A2, A4 tạo SMEDDS – prednisolon đồng nhất, công thức A5 tạo tủa giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha lỗng với NMNT 10 lần, cơng thức A1, A2, A4 tạo vi nhũ tương suốt mờ sau pha loãng bị kết tinh sau 02 pha loãng - Các công thức A1, A2, A4, A5 với tỷ lệ tải 2,0% lựa chọn cho thử nghiệm Các công thức ký hiệu A1-2, A2-2, A4-2, A5-2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 53 Bảng 3.9 Kết khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS (Capryol® 90 : Kolliphor® RH40 : PEG 400) Tải 1,0% prednisolon Cơng thức Tỷ lệ (%) D/DH/ĐDH (kl/kl/kl) Tải 1,5% prednisolon PL LT Tải 2,0% prednisolon PL giờ giờ LT Tải 2,5% prednisolon PL LT giờ giờ PL LT giờ giờ giờ giờ F1 1:4:5 t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A KT - - F2 1:5:4 t-đn A A A A t-đn A A A A t-đn A A A A T - - - - F3 1:6:3 t-đn A A A A t-đn A A A A T - - - - - - - - - F5 3:5:2 t-đn B B B B t-đn B B B B T - - - - - - - - - D/DH/ĐDH: Dầu/ Diện hoạt/ Đồng diện hoạt; LT: Ly tâm; PL: Pha loãng; t-đn: Trong - Đồng nhất; A: Trong suốt, B: Trong mờ; T: Tủa; KT: Kết tinh; -: Không thực Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 54 Nhận xét: - Ở tỷ lệ tải 1,0% prednisolon, công thức từ F1 đến F4 tạo SMEDDS - prednisolon đồng giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha lỗng với NMNT 10 lần, cơng thức F1, F2, F3, F5 tạo vi nhũ tương suốt mờ sau pha loãng sau 06 pha lỗng Do cơng thức F1, F2, F3, F5 chọn để khảo sát khả tải prednisolon 2,0% - Ở tỷ lệ tải 2,0% prednisolon, công thức F1, F2 tạo SMEDDS – prednisolon đồng nhất, công thức F3, F4 tạo tủa giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha loãng với NMNT 10 lần, công thức F1, F2 tạo vi nhũ tương suốt sau pha loãng sau 06 pha lỗng Do cơng thức F1, F2 chọn để khảo sát khả tải prednisolon tỷ lệ 2,5% - Ở tỷ lệ tải 2,5% prednisolon, công thức F1 tạo SMEDDS – prednisolon đồng giai đoạn pha chế ly tâm Ở giai đoạn pha loãng với NMNT 10 lần, công thức F1 tạo vi nhũ tương suốt sau pha loãng bị kết tinh sau 02 pha lỗng - Các cơng thức F1, F2 với tỷ lệ tải 2,0% lựa chọn cho thử nghiệm Các công thức ký hiệu F1-2, F2-2 3.2.2 Điều chế hệ SMEDDS - prednisolon 2,0% Điều chế hệ SMEDD- prednisolon 2,0% có khối lượng 5g theo Mục 2.2.2.2 Tỷ lệ thành phần cơng thức trình bày Bảng 3.10 Bảng 3.10 Thành phần công thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 Cơng thức Prednisolon Capryol® Kolliphor® Transcutol® 90 RH40 HP PEG Tổng 400 cộng A1-2 0, g 0,49 g 1,96 g 2,45 g 5g A2-2 0, g 0,49 g 2,45 g 1,96 g 5g A4-2 0, g 0,98 g 1,47 g 2,45 g 5g A5-2 0, g 0,98 g 1,96 g 1,96 g 5g F1-2 0, g 0,49 g 1,96 g 2,45 g 5g F2-2 0, g 0,49 g 2,45 g 1,96 g 5g Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 55 3.2.3 Đánh giá tính chất SMEDDS – prednisolon 3.2.3.1 Cảm quan Các công thức SMEDDS – prednisolon suốt, đồng nhất, khơng có tượng tách lớp, kem, kết sau pha chế 3.2.3.2 Ảnh hưởng độ pha loãng lên độ bền vững SMEDDS prednisolon Thực theo Mục 2.2.2.3, kết độ ổn định môi trường NMNT công thức SMEDDS - prednisolon tiềm A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F22 trình bày Bảng 3.11 Bảng 3.11 Độ ổn định môi trường NMNT SMEDDS – prednisolon Độ pha lỗng mơi trường NMNT Cơng X 10 X 25 thức 02 04 06 giờ 02 04 06 A1-2 A A A A A A A A A2-2 A A A A A A A A A4-2 B B B B B B B B A5-2 B B B B B B B B F1-2 A A A A A A A A F2-2 A A A A A A A A Độ đục vi nhũ tương tạo thành: A: Trong suốt, B: Trong mờ Nhận xét: - Tất công thức tạo vi nhũ tương suốt mờ sau pha loãng sau 06 pha lỗng Như vậy, tất cơng thức ổn định mơi trường NMNT - Do tất công thức lựa chọn cho thử nghiệm 3.2.3.3 Đánh giá độ bền nhiệt động SMEDDS - prednisolon Khảo sát độ bền nhiệt động SMEDDS – prednisolon 2,0% mô tả Mục 2.2.2.3 kết trình bày Bảng 3.12 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 56 Bảng 3.12 Độ bền nhiệt động công thức SMEDDS – prednisolon 2,0% Công thức Hệ SMEDDS - prednisolon Nóng – lạnh Ly tâm Hệ vi nhũ tương tạo thành Đơng – Nóng – rã đơng lạnh Ly tâm Đông – rã đông A1-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt A2-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt A4-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt A5-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt F1-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt F2-2 Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Nhận xét: Trong chu kỳ nóng lạnh, tất cơng thức SMEDDS – prednisolon suốt sau 12 chu kỳ Các công thức tiếp tục thử nghiệm ly tâm Trong ly tâm, tất công thức SMEDDS – prednisolon suốt đồng sau ly tâm Các công thức tiếp tục thử nghiệm chu kỳ đông – rã đông Trong chu kỳ đông – rã đông, tất công thức SMEDDS – prednisolon suốt 12 chu kỳ Từ kết nghiên cứu cho thấy rằng, tất công thức SMEDDS – prednisolon ổn định mặt nhiệt động 3.2.3.4 Đo phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành zeta Kết đo phân bố kích thước giọt SMEDDS – prednisolon thực mơ tả Mục 2.2.2.3 kết trình bảy Bảng 3.13 Phụ lục Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 57 Bảng 3.13 Kết đo kích thước tiểu phân zeta dung dịch NaCl công thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 Cơng Kích thước giọt Dãy phân bố thức trung bình (nm) (nm – nm) A1-2 15,59 ± 0,05 8,721 – 28,21 0,05 ± 0,006 -1,27 A2-2 14,58 ± 0,072 8,721 – 28,21 0,049 ± 0,010 -1,49 A4-2 23,92 ± 0,045 13,64 – 43,82 0,040 ± 0,008 -1,50 A5-2 19,99 ± 0,122 11,70 - 37,84 0,061 ± 0,006 -1,88 F1-2 15,98 ± 0,025 8,721 – 28,21 0,041 ± 0,005 -1,34 F2-2 14,66 ± 0,026 8,721 – 28,21 0,044 ± 0,002 -1,92 PdI Thế zeta (mV) Kích thước giọt trung bình, PdI: XTB ± SD Nhận xét: Kết đánh giá phân bố kích thước giọt zeta vi nhũ tương tạo thành công thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 cho thấy: phân bố kích thước giọt vi nhũ tương tất công thức kiểu đỉnh, nằm vùng 50 – 100nm, có hệ số đa phân tán PdI nhỏ 0,5, nghĩa phân bố kích thước hẹp Thế zeta tất cơng thức có giá trị tuyệt đối thấp 25 mV, xem chưa đủ để tạo hiệu ứng ổn định nhờ tương tác tĩnh điện học Tuy nhiên, chất diện hoạt sử dụng cơng thức Kolliphor® RH40, xem chất diện hoạt có gắn chuỗi PEG cấu trúc, gốc tạo hiệu ứng ổn định nhờ tương tác cản trở cấu trúc không gian để đảm bảo khả phân tán tốt nước Công thức A4-2, A5-2 với tỷ lệ dầu 20% chọn để đảm bảo độ tan tối đa prednisolon hệ SMEDDS54 tránh kết tủa tách pha công thức vi nhũ tương tạo thành55 Công thức A5-2 cho vi nhũ tương có kích thước giọt trung bình nhỏ có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với mẫu vi nhũ tương từ công thức A4-2 (23,92 ± 0,045 nm so với 19,99 ± 0,122 nm) Vì vậy, công thức A5-2 chọn công thức tối ưu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 58 3.2.4 Đánh giá độ lặp lại công thức tối ưu Thực theo Mục 2.2.2.4, kết khảo sát độ lặp lại công thức tối ưu A5-2 (20g/ mẫu) trình bày Bảng 3.14 Hình 3.10 Bảng 3.14 Đánh giá độ lặp lại công thức tối ưu A5-2 Các thử nghiệm Kết Pha chế Khả tải hoạt chất Trong 24 Trong Trong – đồng Ly tâm Pha loãng 10 lần Ảnh hưởng độ pha loãng Pha loãng 25 lần Trong mờ 06 Trong mờ Trong mờ 06 Trong mờ Chu kỳ nóng lạnh Trong Ly tâm Trong – đồng Chu kỳ đông rã đơng Trong Kích thước giọt trung bình 19,68 ± 0,053 PdI 0,043 ± 0,012 Kiểu phân bố đỉnh Độ bền nhiệt động Phân bố kích thước giọt Thế zeta Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn -1,32 ± 0,16 mV Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 59 A C B Pha lỗng 10 lần Pha loãng 25 lần Pha loãng 10 lần Pha lỗng 25 lần Hình 3.10 (A).Cảm quan cơng thức tối ưu A5-2, (B).Cảm quan ảnh hưởng độ pha lỗng thời điểm cơng thức tối ưu A5-2, (C).Cảm quan ảnh hưởng độ pha loãng thời điểm 06 công thức tối ưu A5-2 Nhận xét: Kết đánh giá công thức tối ưu A5-2 quy mô 20 g/mẫu cho thấy công thức đạt độ lặp lại khả tải hoạt chất, độ ổn định môi trường, độ bền pha lỗng, độ bền nhiệt động, kiểu phân bố kích thước giọt vi nhũ tương (kết đạt quy mơ thí nghiệm g/mẫu) Các kết kích thước giọt vi nhũ tương trung bình, PdI zeta vi nhũ tương quy mô 20 g/mẫu g/mẫu khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Do cơng thức A5-2 đạt độ lặp lại 3.2.5 Định lượng thẩm định quy trình định lượng prednisolon SMEDDS phương pháp HPLC 3.2.5.1 Định lượng prednisolon SMEDDS phương pháp HPLC Tiến hành định lượng prednisolon SMEDDS công thứ A5-2 theo Mục 2.2.2.5 Mẫu thực 06 lần, lấy kết trung bình, kết trình bày Bảng 3.15 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 60 Bảng 3.15 Kết định lượng prednisolon SMEDDS cơng thứ A5-2 Chuẩn n Diện tích pic: 2239718,00 m = 50,0247 mg Khối lượng cân (mg) Diện tích pic (µV x giây) Kết định lượng (%) 504,03 2040514,00 90,42 508,21 2030993,50 89,26 TB (%) 90,03 508,17 2056672,50 90,40 C= 0,1000494 mg/ml Nhận xét: Kết định lượng công thức A5-2 đạt yêu cầu nằm khoảng từ 90 – 110% Sự phù hợp hệ thống sắc ký Hình 3.11 Sắc ký đồ dung dịch tương thích hệ thống Bảng 3.16 Bảng kết diện tíc pic từ 06 lần tiêm dung dịch chuẩn STT Lượng cân mẫu chuẩn (mg) Diện tích pic (µV x giây) 2242497 2244183 50,03 2238641 2232833 2234400 2245754 Trung bình 2239718 RSD (%) 0,2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 61 Nhận xét: - Độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic từ 06 lần tiêm dung dịch chuẩn lặp lại không lớn 2,0% - Thời gian lưu: 0,92 hydrocortison prednisolon - Độ phân giải pic hydrocortison prednisolon 1,9029 Quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu phù hợp hệ thống sắc ký 3.2.5.2 Kết thẩm định quy trình định lượng prednisolon hệ SMEDDS phương pháp HPLC Quy trình thẩm định thực theo Mục 2.2.2.5 Tính đặc hiệu Kết khảo sát tính đặc hiệu quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Hình 3.12, Hình 3.13, Hình 3.14, Hình 3.15, Hình 3.16 Bảng 3.17 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu trắng thẩm định tính đặc hiệu Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu placebo thẩm định tính đặc hiệu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 62 Hình 3.14 Sắc ký đồ mẫu chuẩn thẩm định tính đặc hiệu Hình 3.15 Sắc ký đồ mẫu thử thẩm định tính đặc hiệu Hình 3.16 Sắc ký đồ đồ thị kiểm tra độ tinh khiết pic prednisolon mẫu thử Bảng 3.17 Thời gian lưu diện tích pic mẫu chuẩn mẫu thử Mẫu Thời gian lưu (phút) Diện tích pic (µV x giây) Chuẩn 18,87 2239718 Thử 18,53 2042727 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 63 Nhận xét: - Sắc ký đồ mẫu trắng, mẫu placebo không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu chất chuẩn - Sắc ký đồ mẫu thử cho pic có thời gian lưu tương tự với pic chất chuẩn sắc ký đồ mẫu chuẩn Trên sắc ký đồ mẫu thử xuất thêm pic tạp tách hịan tồn khỏi pic prednisolon - Pic prednisolon sắc ký đồ mẫu thử đạt yêu cầu độ tinh khiết HPLC (PA: purity angle < TH: purity threshold) Như quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu tính đặc hiệu Tính tuyến tính Kết khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Bảng 3.18, Hình 3.17 Bảng 3.18 Sự tương quan nồng độ prednisolon diện tích pic Nồng độ prednisolon (mg/ml) Diện tích pic (µV x giây) 0,06 1290487 0,08 1700506 0,10 2242996 0,12 2684475 0,14 3118332 Diện tích pic (µV x giây) Mẫu 3500000 3000000 2500000 2000000 1500000 1000000 500000 0.000 ŷ = 23186840,701x R² = 0,998 0.020 0.040 0.060 0.080 0.100 0.120 0.140 0.160 Nồng độ (mg/ml) Hình 3.17 Đồ thị mối tương quan tuyến tính nồng độ diện tích pic prednisolon Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 64 Nhận xét: Dùng cơng cụ Regression MS-Excel để kiểm tra tính phù hợp phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số hồi quy Kết trình bày Bảng 3.19 Bảng 3.19 Kết xử lý thống kê Các hệ số Giá trị Hệ số R2 0,998 Giá trị F 1749,117 Giá trị p hệ số a 3,008 x 10-5 Giá trị p hệ số b 0,1461 F0,05 10,12 Giá trị F phương trình hồi quy lớn F0,05 nên phương trình hồi quy có tính tương thích, giá trị p hệ số a nhỏ 0,05 nên hệ số a có ý nghĩa thống kê, giá trị p hệ số b lớn 0,05 nên hệ số b khơng có ý nghĩa thống kê Do phương trình hồi quy truyến tính ŷ = 23186840,701x, hệ số tương quan R2 = 0,998 Như quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC có tương quan tuyến tính nồng độ prendisolon diện tích pic khoảng nồng độ dung dịch chuẩn 0,060 - 0,140 mg/ml Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 65 Độ Kết khảo sát độ quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Bảng 3.20 Bảng 3.20 Kết thẩm định độ quy trình định lượng prednisolon Lượng Mẫu cân placebo (mg) 80% 100% 120% Lượng Lượng chất Diện tích hoạt chuẩn pic (µV x chất tìm thêm vào giây) lại (mg) (mg) Tỷ lệ Tỷ lệ phục phục hồi RSD hồi trung (%) (%) bình (%) 500,1 2,001 1742307 2,000 99,94 501,5 2,001 1745721 2,003 100,13 502,6 2,001 1745768 2,004 100,13 500,5 5,002 2230745 5,053 101,01 500,7 5,002 2229150 5,049 100,94 500,5 5,002 2226904 5,045 100,84 501,7 3,001 2682160 3,013 100,39 500,8 3,001 2642034 2,970 98,95 501,2 3,001 2669094 2,999 99,92 100,1 0,11 100,9 0,08 99,8 0,74 Trung bình (%): 100,25 RSD (%): 0,65 Nhận xét: - Tỷ lệ hồi phục tất cá nồng độ khoảng 98,0% - 102,0% giá trị RSD ≤ 2,0% - Như vậy, quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu độ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 66 Độ xác - Tính tương thích hệ thống ➢ Kết khảo sát tính tương thích hệ thống quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Bảng 3.21 Bảng 3.21 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống quy trình định lượng prendnisolon chế phẩm Thời gian lưu Diện tích pic Chiều cao pic Số đĩa lý (phút) ( µV x giây) (µV) thuyết 18,985 2242497 0,9533437 9750,244 18,980 2244183 0,9544947 9696,719 18,946 2238641 0,9569770 9702,368 18,858 2232833 0,9622225 9720,834 18,768 2234400 0,9586734 9825,244 18,687 2245754 0,9547399 9821,811 18,871 2239718 0,957 9753 0,6 0,2 0.3 0,6 Stt Trung bình RSD (%) Nhận xét: Thời gian lưu, diện tích pic số đĩa lý thuyết có RSD ≤ 2,0% Như vậy, quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu tính tương thích hệ thống Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 67 - Độ lặp lại ➢ Kết khảo sát độ lặp lại quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Bảng 3.22 Bảng 3.22 Kết thẩm độ lặp lại quy trình định lượng prendnisolon Lượng cân Nồng độ Diện tích pic Hàm lượng mẫu thử (mg) (mg/ml) ( µV x giây) prednisolon (%) 509,56 0,102 2057893,0 90,20 504,04 0,101 2035209,5 90,19 509,60 0,102 2078042,0 91,08 509,94 0,102 2070740,0 90,70 510,15 0,102 2069032,0 90,59 510,32 0,102 2064439,0 90,35 Stt Trung bình RSD (%) 90,52 0,38 Nhận xét: Kết định lượng prednisolon chế phẩm mẫu có RSD ≤ 2,0% Như quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu độ lặp lại Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 68 - Độ xác trung gian ➢ Kết khảo sát độ xác trung gian quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC trình bày Bảng 3.23 Bảng 3.23 Kết thẩm định độ xác trung gian quy trình định lượng prendnisolon Kiểm nghiệm viên Kiểm nghiệm viên Ngày phân tích: 05/10/2022 Ngày phân tích: 06/10/2022 Lượng STT Lượng cân Diện tích Hàm lượng cân Diện tích Hàm lượng mẫu pic ( µV x prednisolon mẫu pic ( µV x prednisolon thử giây) (%) thử giây) (%) (mg) (mg) 504,03 2040514,0 90,42 504,04 2035209,5 90,19 501,21 2030993,5 90,51 510,15 2069032,0 90,59 507,17 2056672,5 90,57 510,32 2064439,0 90,35 501,54 2041483,5 90,91 509,56 2057893,0 90,20 504,11 2065493,5 91,51 509,60 2078042,0 91,08 503,89 2057935,5 91,22 509,94 2070740,0 90,70 Trung bình 90,86 Trung bình 90,52 RSD (%) 0,48 RSD (%) 0,37 Trung bình (n=12) RSD (n=12) 90,69 % 0,39 % Nhận xét: Giá trị RSD (%) kết định lượng kiểm nghiệm hai kiểm nghiệm viên ≤ 2,0% Độ sai khác kết định lượng hai kiểm nghiệm viên ≤ 2,0% Như vậy, quy trình định lượng prednisolon chế phẩm phương pháp HPLC đạt yêu cầu độ xác trung gian Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 69 3.2.6 Đánh giá khả giải phóng hoạt chất in vitro prednisolon từ SMEDDS - prednisolon Giải phóng hoạt chất in vitro công thức A5-2 Pred Forte tiến hành mơ tả Mục 2.2.2.6 Kết trình bày Bảng 3.24 Hình 3.18 Bảng 3.24 Kết đánh giá GPHC công thức A5-2 Pred Forte Thời gian (phút) Công thức A5-2 Pred Forte 2,81 ± 0,39 2,14 ± 0,28 10 4,67 ± 0,29 2,06 ± 0,37 15 6,26 ± 0,64 3,19 ± 0,6 30 13,59 ± 0,45 7,66 ± 0,22 60 27,12 ± 0,54 12,99 ± 0,58 120 44,21 ± 0,4 22,37 ± 0,48 180 53,53 ± 0,51 23,84 ± 0,48 240 67,36 ± 0,63 25,14 ± 1,3 300 72,86 ± 0,81 30,69 ± 1,27 360 74,92 ± 0,74 32,14 ± 1,85 XTB ± SD 72.86 74.92 30.69 32.14 67.36 GPHC (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 53.53 44.21 27.12 13.59 2.81 2.14 4.67 22.37 6.26 23.84 25.15 12.99 2.06 3.19 7.67 10 15 30 60 120 180 240 300 360 Thời gian (phút) A5-2 Pred Forte Hình 3.18 Đồ thị biểu diễn khả GPHC theo thời gian A5 – Pred Forte Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 70 Nhận xét: Cơng thức A5-2 hoạt chất giải phóng 74,92% vịng 360 phút, Pred Forte hoạt chất giải phóng 32,14% sau 360 phút Sự giải phóng hoạt chất thời điểm A5-2 Pred Forte khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Thời điểm phút, công thức A5-2 bắt đầu GPHC (2,81%), thời điểm 15 phút đến 240 phút GPHC tăng lên đáng kể từ 6,26% lên đến 67,36%, từ thời điểm 300 phút đến 360 phút khả GPHC hệ khơng có thay đổi đáng kể 72,86% đến 74,92% Đối với công thức Pred Forte, thời điểm phút phần trăm dược chất giải phóng 2,14%, thời điểm 15 phút đến 120 phút phần trăm dược chất giải phóng tăng lên đáng kể từ 3,19% đến 22,37%, 120 phút đến 360 phút tăng chậm từ 22,37% đến 32,14% chứng tỏ prednisolon gần đạt độ tan bão hịa mơi trường phân tán Từ kết thấy, cơng thức A5-2 có khả GPHC nhanh phần trăm dược chất giải phóng qua màng cao so với Pred Forte Thẩm định quy trình định lượng prednisolon thử nghiệm GPHC phương pháp UV-Vis Tính đặc hiệu Kết khảo sát độ đặc hiệu quy trình định lượng prednisolon thử nghiệm GPHC trình bày Hình 3.19, Hình 3.20, Hình 3.21, Hình 3.22 Hình 3.23 Mẫu chuẩn Mẫu thử Mẫu giả dược Mẫu trắng Hình 3.19 Phổ hấp thu mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu giả dược mẫu trắng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 71 Hình 3.20 Phổ hấp thu mẫu trắng bước sóng 248nm Hình 3.21 Phổ hấp thu mẫu thử bước sóng 248 nm Hình 3.22 Phổ hấp thu mẫu giả dược bước sóng 248 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 72 Hình 3.23 Phổ hấp thu mẫu chuẩn bước sóng 248 nm Nhận xét: Phổ UV mẫu chuẩn, mẫu thử có độ hấp thu cực đại bước sóng 248nm Mẫu trắng mẫu giả dược khơng cho độ hấp thu bước sóng Vậy phương pháp định lượng prednisolon thử nghiệm GPHC đạt yêu cầu độ đặc hiệu Độ tuyến tính Kết khảo sát khoảng tuyến tính prednisolon có nồng độ từ đến 20 µg/ml mơi trường NMNT trình bày Bảng 3.25 Hình 3.24 Bảng 3.25 Kết thẩm định khoảng tuyến tính prednisolon Mẫu Nồng độ (µg/ml) 10 15 20 Độ hấp thu λ = 248nm 0,0405 0,2127 0,3042 0,4252 0,6307 0,8334 Phương trình hồi quy R2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ŷ = 0,0416x + 0,0054 0,9997 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Độ hấp thu prednisolon 73 1.0000 ŷ = 0,0416x R² = 0,9997 0.8000 0.6000 0.4000 0.2000 0.0000 10 15 20 25 Nồng độ (µg/ml) Hình 3.24 Đồ thị độ tuyến tính prednisolon môi trường NMNT Dùng công cụ Regression MS-Excel để kiểm tra tính phù hợp phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số hồi quy Kết trình bày Bảng 3.26 Bảng 3.26 Kết xử lý thống kê Các hệ số Giá trị Hệ số R2 0,9997 Giá trị F 15020.33 Giá trị p hệ số a 1,2 x 10-6 Giá trị p hệ số b 0,067482 F0,05 10,128 Nhận xét: Giá trị F phương trình hồi quy lớn F0,05 nên phương trình hồi quy có tính tương thích, giá trị p hệ số a nhỏ 0,05 nên hệ số a có ý nghĩa thống kê, giá trị p hệ số b lớn 0,05 nên hệ số b khơng có ý nghĩa thống kê Sự tương quan tuyến tính nồng độ độ hấp thu khoảng nồng độ từ – 20 µg/ml theo phương trình y = 0,0416x hệ số tương quan R2 = 0,9997 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 74 Độ xác Kết thẩm định độ xác quy trình định lượng prednisolon mơi trường NMNT trình bày Bảng 3.27 Bảng 3.27 Kết thẩm định độ xác Mẫu Độ hấp thu 248nm Hàm lượng (mg) 0,4297 0,4327 0,4317 0,4123 10,32 10,40 10,38 9,91 RSD (%) TB 0,4111 0,4136 0,4238 9,88 9,92 10,18 1,14% Nhận xét: Với RSD thấp 2,0% (1,14%), quy trình định lượng prednisolon nêu đạt yêu cầu độ xác Độ Kết thẩm định độ quy trình định lượng prednisolon mơi trường NMNT trình bày Bảng 3.28 Bảng 3.28 Kết thẩm định độ Mức khảo sát 80% 100% 120% Lần đo mẫu Lượng thêm Độ hấp thu vào (µg/ml) mẫu thử Lượng tìm thấy (µg/ml) Tỷ lệ Tỷ lệ hồi hồi phục phục trung (%) bình (%) 0,3373 8,12 101,5 0,3322 7,99 99,875 0,3235 7,77 97,125 10 0,4235 10,18 101,8 10 0,4175 10,03 100,3 10 0,4229 10,16 101,6 12 0,5067 12,18 101,5 12 0,4956 11,91 99,25 12 0,5060 12,16 101,33 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 99,5 101,23 100,69 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 75 Nhận xét: Tỷ lệ phục hồi mức độ nằm khoảng 98 – 102% Vậy quy trình định lượng prednisolon nêu đạt yêu cầu độ Quy trình định lượng prednisolon mơi trường NMNT đạt tính đặc hiệu, độ tuyến tính, độ xác độ khoảng tuyến tính từ – 20 µg/ml 3.2.7 Sơ đánh giá độ ổn định SMEDDS - prednisolon Đánh giá độ ổn định SMEDDS - prednisolon theo Mục 2.2.2.7 Kết độ ổn định công thứ A5-2 điều kiện 30 ± oC /75 ± % RH 40 ± oC/75 ± % RH tháng, 01 tháng, 03 tháng cảm quan, định tính, định lượng, kích thước giọt, PdI, zeta vi nhũ tương tạo thành thể Bảng 3.29, Bảng 3.30, Hình 3.25 Hình 3.26 Phụ lục 8, Phụ lục 11 Bảng 3.29 Thời gian lưu diện tích pic sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử Mẫu Thời gian lưu (phút) Diện tích pic (µV x giây) Chuẩn 19,030 2258675 Thử 18,918 2057893 Hình 3.25 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn phương pháp HPLC Hình 3.26 Sắc ký đồ dung dịch thử phương pháp HPLC Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 76 Bảng 3.30 Kết độ ổn định công thức A5-2 Điều kiện bảo quản 30 ± 2oC / 75 ± 5% RH 40 ± 2oC/ 75 ± 5% RH Kích thước giọt Thế zeta Thời điểm Cảm quan Định tính Định lượng tháng Trong Đạt 90,03 ± 0,3% 19,72 ± 0,038 0,055 ± 0,015 -1,62 tháng Trong Đạt 79,92 ± 4,62% 19,72 ± 0,035 0,060 ± 0,008 -1,37 tháng Trong Đạt 71,82 ± 3,57% 19,75 ± 0,089 0,059 ± 0,006 -1,23 tháng Trong Đạt 90,03 ± 0,3 % 19,88 ± 0,157 0,054 ± 0,013 -1,52 tháng Trong Đạt 75,10 ± 2,33% 19,99 ± 0,122 0,061 ± 0,006 -1,84 tháng Trong Đạt 64,29 ± 0,52% 19,80 ± 0,284 0,062 ± 0,006 -1,83 (nm) PdI (mV) Kích thước giọt, PdI, định lượng: XTB ± SD Nhận xét: - Cảm quan công thức A5-2 suốt suốt không tủa suốt thời gian bảo quản điều kiện 30 ± 2oC /75 ± 5% RH 40 ± 2oC/75 ± 5% RH ; kích thước giọt, PdI tháng khơng khác có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) điều kiện bảo quản - Kết định lượng hai điều kiện bảo quản giảm sau thời gian 03 tháng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở điều kiện 30 ± 2oC /75 ± 5% RH giảm 18,22% sau 03 tháng 40 ± 2oC/75 ± 5% RH giảm 25,74% sau 03 tháng - Định tính thể Bảng 3.29 Hình 3.25, Hình 3.26: Pic thu sắc ký đồ dung dịch thử có thời gian lưu diện tích pic tương tự với pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn - Dựa vào pic kết định lượng Phụ lục 11 cho thấy thời điểm phút 22 phút xuất pic ngồi pic prednisolon, pic pic tạp chất prednisolon Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 77 3.3 Xây dựng cơng thức đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon 3.3.1.1 Xây dựng quy trình bào chế thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon Tiến hành điều chế 5g công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon theo quy trình Mục 2.2.3.1 Thành phần công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon: - Công thức 1: SMEDDS – prednisolon, 1% Acid boric, 0,05% Vitamin E - Công thức 2: SMEDDS – prednisolon, 1% Acid boric, 0,1% Vitamin E - Công thức 3: SMEDDS – prednisolon, 2% Acid boric, 0,05% Vitamin E - Công thức 4: SMEDDS – prednisolon, 2% Acid boric, 0,1% Vitamin E 3.3.1.2 Đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS prednisolon Đánh giá thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon theo Mục 2.3.2.3 2.2.3.2 Kết tiêu đánh giá trình bày Bảng 3.31 Phụ lục 10 Phụ lục 12 Đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon sau 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc 40 ± 2oC/75 ± 5% RH trình bày Bảng 3.32 Phụ lục 12 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 78 Bảng 3.31 Kết tiêu đánh giá công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS - prednisolon Chỉ tiêu đánh giá Cảm quan Ảnh hưởng độ pha loãng Độ bền nhiệt động Công thức Công thức Công thức Công thức Trong suốt Trong suốt Trong suốt Trong suốt Trong mờ Trong mờ Trong mờ Trong mờ Trong – Trong – Trong – Trong – đồng đồng đồng đồng 22,90 ± Kích thước giọt (nm) 23,27 ± 0,040 23,34 ± 0,084 22,99 ± 0,075 PdI 0,113 ± 0,013 0,118 ± 0,007 0,089 ± 0,014 Thế zeta (mV) -1,39 -1,35 -1,25 -1,14 pH 6,008 5,939 5,528 5,489 Độ nhớt (cps) 38,8 38,2 38,5 38,4 Độ vô khuẩn Đạt Đạt Đạt Đạt Định lượng (%) 93,68% 95,29% 94,06% 94,33% 0,038 0,072 ± 0,003 Đo phân bố kích thước giọt, PdI: XTB ± SD Bảng 3.32 Kết tiêu đánh giá công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon sau 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc Chỉ tiêu đánh giá Cơng thức Công thức Công thức Công thức Trong suốt Trong suốt Trong suốt Trong suốt Trong mờ Trong mờ Trong mờ Trong mờ Kích thước giọt (nm) 23,13 ± 0,07 23,00 ± 0,05 23,00 ± 0,07 22,84 ± 0,08 PdI 0,102 ± 0,006 0,077 ± 0,003 0,076 ± 0,153 0,073 ± 0,007 Thế zeta (mV) -1,01 -1,13 -1,26 -1,14 pH 5,544 5,505 5,092 5,005 65,89 % 58,70% 66,76% 57,60% Cảm quan Ảnh hưởng độ pha loãng Định lượng Đo phân bố kích thước giọt, PdI: XTB ± SD Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 79 Nhận xét: Qua đánh giá độ ổn định 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc 40 ± 2oC/75 ± 5% RH cho thấy : - Các tiêu cảm quan, ảnh hưởng độ pha loãng, phân bố kích thước giọt, PdI kết tuần 01 tuần khơng khác có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Kết định lượng pH công thức tuần 01 tuần có khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) - Dựa vào pic kết định lượng Phụ lục 12 cho thấy thời điểm phút 22 phút xuất pic pic prednisolon, pic pic tạp chất prednisolon Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 80 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm 4.1.1 Sàng lọc tá dược dùng bào chế SMEDDS 4.1.1.1 Lựa chọn pha dầu Pha dầu dùng công thức dầu dùng nghiên cứu mắt Hơn thuốc không tan nước thường hòa tan hiệu dầu tổng hợp so với dầu thực vật thơng thường56 Vì dầu: Capryol® 90, Capmul® MCM, LauroglycolTM 90, Captex® 200, acid caprylic, Captex® 355, LabrafacTM lipophile WL 1349, acid oleic lựa chọn cho khảo sát độ tan prednisolon pha dầu Việc lựa chọn dầu cho SMEDDS có vai trị quan trọng ảnh hưởng đến ổn định vi nhũ tương tạo thành, độ tan dược chất Nếu chất diện hoạt đồng diện hoạt, sử dụng để hình thành vi nhũ tương, có nguy kết tủa thuốc pha lỗng cơng thức SMEDDS làm di chuyển phân tử ưa nước vào môi trường nước chất diện hoạt đồng diện hoạt57,58 Do đó, dầu coi tá dược quan trọng công thức SMEDDS Hơn nữa, khả hòa tan thuốc pha dầu ảnh hưởng nhiều đến khả lưu giữ thuốc SMEDDS Khi lựa chọn dầu có khả hịa tan hoạt chất thấp cần phải sử dụng lượng lớn dầu hòa tan thuốc để đạt liều điều trị mong muốn Khi cần thêm lượng diện hoạt đồng diện hoạt/ đồng dung mơi nhiều Từ độc tính tác dụng phụ tăng lên59 Các loại dầu có chuỗi hydrocacbon dài khó tạo vùng vi nhũ tương đạt yêu cầu chuỗi khó xuyên qua bề mặt phân cách tạo thành chất diện hoạt đồng diện hoạt Các loại dầu mạch ngắn thâm nhập sâu vào phần kỵ nước chất diện hoạt tạo bề mặt phân cách pha ổn định cần thiết cho hình thành vi nhũ tương60 Các este acid béo mạch trung bình đóng vai trị tối ưu việc hình thành vi nhũ tương sử dụng thường xun cơng thức nhãn khoa61 Qua q trình khảo sát độ tan pha dầu cho thấy Capryol® 90, Capmul® MCM hai este acid béo mạch trung bình cho độ tan prednisolon cao dầu cịn lại Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 81 4.1.1.2 Lựa chọn chất diện hoạt Các chất diện hoạt lựa chọn khảo sát chất diện hoạt sử dụng nghiên cứu thuốc nhỏ mắt Để tạo hệ phân tán có kích thước nano, chất diện hoạt thành phần khơng thể thiếu công thức bào chế Chất diện hoạt có nhiệm vụ làm giảm sức căng bề mặt phân cách hai pha dầu pha nước từ tạo thành hệ phân tán đồng Khả gây kích ứng mắt chất diện hoạt: chất diện hoạt cation gây kích ứng chất diện hoạt anion, chất diện hoạt khơng ion gây kích ứng62,63 Vì vậy, lựa chọn chất diện hoạt sử dụng nghiên cứu chất diện hoạt khơng ion hóa Ngồi ra, chất diện hoạt không ion không bị ảnh hưởng thay đổi pH mơi trường khơng tích điện, có độ tương thích cao với thành phần khác có độ ổn định lý hóa tốt64 Các chất diện hoạt lựa chọn có số HLB nằm khoảng 8-18 dễ dàng tạo vi nhũ tương dầu/nước Các chất diện hoạt thành phần công thức có ảnh hưởng đến khả thấm dược chất qua giác mạc Khi có mặt chất diện hoạt lượng dược chất thấm qua giác mạc tăng lên đáng kể Ở nồng độ thấp, chất diện hoạt kết hợp vào lớp lipid kép màng gây thay đổi tính phân cực màng tế bào từ làm tăng khả thấm xuyên màng dược chất Các chất diện hoạt khác có ảnh hưởng khác đến khả thấm phân tử dược chất qua giác mạc65 Bảng 4.1 Chỉ số HLB chất diện hoạt khảo sát Chất diện hoạt HLB Kolliphor® RH40 15,0 Tween 20 16,7 Tween 80 15,0 Labrasol® 14,0 Kolliphor® EL 13,0 4.1.1.3 Lựa chọn chất đồng diện hoạt Các chất đồng diện hoạt lựa chọn khảo sát chất đồng diện hoạt sử dụng nghiên cứu thuốc nhỏ mắt Chất đồng diện hoạt có vai trị quan Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 82 trọng việc hình thành ổn định vi nhũ tương tạo thành: với chất diện hoạt làm giảm sức căng bề mặt phân cách pha, tăng tính linh động lớp chất diện hoạt, tăng tính mềm dẻo, linh hoạt màng phân cách, tạo điều kiện cho vi nhũ tương hình thành dễ dàng ổn định hơn66 Sự có mặt chất đồng diện hoạt làm tăng khả hòa tan hệ dược chất 4.1.2 Điều chế SMEDDS Lựa chọn công thức SMEDDS tạo thành vi nhũ tương suốt mờ làm công thức SMEDDS tiềm Qua hai giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP: PEG 400 cho thấy tỷ lệ dầu từ 10% – 30% tạo vi nhũ tương suốt mờ Chọn tất cơng thức có tỷ lệ dầu 20% 30%, cơng thức pha lỗng tạo thành vi nhũ tương mờ Các công thức tạo thành vi nhũ tương suốt tỷ lệ dầu 10% Để so sánh việc tăng giảm dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt ảnh hưởng đến tính chất vi nhũ tương tạo thành Đề tài chọn cơng thức có tỷ lệ D/CHD/ĐDH = 1:4:5; 1:5:4; 1:6:3 Vì hai hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP: PEG 400 chọn tỷ lệ cơng thức D/DH/ ĐDH 1:4:5; 1:5:4; 1:6:3; 2:3:5; 2:4:4; 2:5:3, 3:4:3; 3:5:2 cho khảo sát Việc khảo sát tất tính chất hệ SMEDDS trước tải hoạt chất với mục đích loại bỏ cơng thức từ làm giảm bớt số lượng cơng thức cần khảo sát tải hoạt chất 4.2 Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS – prednisolon 4.2.1 Khả tải prednisolon hệ SMEDDS Lượng hoạt chất tải vào công thức SMEDDS dựa độ tan hoạt chất SMEDDS đề tài lựa chọn tải hoạt chất theo mức tỷ lệ % prednisolon (kl/kl) Ưu điểm phương pháp đảm bảo thuốc hịa tan hồn tồn cơng thức SMEDDS57 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 83 Khi khảo sát tỷ lệ tải tải khác chứng minh chất đồng diện hoạt làm tăng khả hòa tan hệ dược chất chứng minh qua cặp công thức A4 - A5, F1 – F2, A1 – A5 F2 – F5 Hoạt chất tải công thức SMEDDS pha lỗng mơi trường NMNT tạo tượng kết tinh phân tán vào mơi trường nước, diện hoạt đồng diện hoạt thân nước có cơng thức SMEDDS bị hịa tan pha lỗng với môi trường nước di chuyển phân tử ưa nước vào mơi trường nước, từ khả dung môi57 4.2.2 Lựa chọn công thức tối ưu So sánh mức độ kích ứng cơng thức A5-2 so với công thức A4-2 cho thấy công thức A5-2 có mức độ kích ứng thấp A4-2 Về mức độ gây kích ứng cho mắt Kolliphor® RH40 khơng gây kích ứng cho mắt67 Transcutol® HP sử dụng mức 30% dung dịch nước vào mắt thỏ gọi kích ứng nhẹ, tổn thương quan sát sau dùng thuốc cho thấy khả hồi phục hoàn toàn vào ngày thứ nhất68 Nghiên cứu Shahla S Smail cộng sự, sử dụng lượng Kolliphor® RH40 Transcutol® HP để kiểm tra khả gây kích ứng kết mạc cho thấy Kolliphor® RH40 khơng gây kích ứng kết mạc, Transcutol® HP cho khả gây kích ứng mức độ nhẹ 55 Nghiên cứu Nermeen Adel ElKasabgy, nghiên cứu kích ứng sử dụng HET-CAM test việc sử dụng nồng độ cao Transcutol® HP gây tượng kích ứng13 Vì vậy, cơng thức A5-2 với tỷ lệ Transcutol® HP thấp có mức độ kích ứng thấp cơng thức A4-2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 84 4.2.3 So sánh kích thước giọt tạo thành SMEDDS SMEDDS – prednisolon Bảng 4.2 So sánh kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành SMEDDS – prednisolon SMEDDS Cơng thức SMEDDS-prednisolon Kích thước trung bình (nm) Cơng thức SMEDDS Kích thước trung bình (nm) A1-2 15,59 ± 0,05 T1 (1:4:5) 15,65 ± 0,046 A2-2 14,58 ± 0,072 T2 (1:5:4) 14,14 ± 0,035 A4-2 23,92 ± 0,045 T4 (2:3:5) 23,40 ± 0,098 A5-2 19,99 ± 0,122 T5 (2:4:4) 19,72 ± 0,038 F1-2 15,98 ± 0,025 P1 (1:4:5) 16,41 ± 0,087 F2-2 14,66 ± 0,026 P2 (1:5:4) 15,05 ± 0,140 Kích thước trung bình (nm): XTB ± SD Từ bảng so sánh cho thấy, kích thước giọt cơng thức SMEDDS – prednisolon khơng có khác biệt so với cơng thức SMEDDS Dựa vào kết độ tan prednisolon Mục 3.1.1 Capryol® 90, Kolliphor® RH40, Transcutol® HP PEG 400 prednisolon tan nhiều Transcutol® HP PEG 400 sau Kolliphor® RH40 cuối Capryol® 90 Cho thấy phân tán SMEDDS – prednisolon mơi trường để tạo vi nhũ tương prednisolon lõi lipid bề mặt phân cách pha 2% tải prednisolon nhỏ nên khơng có thay đổi kích thước giọt mẫu vi nhũ tương tạo thành từ SMEDDS SMEDDS – prednisolon 4.2.4 Khả GPHC in vitro prednisolon từ SMEDDS – prednisolon Về mơi trường giải phóng: lựa chọn mơi trường NMNT có pH 7,4 Đây môi trường sử dụng nghiên cứu đánh giá giải phóng dược chất in vitro12,50,69 Đối với dạng bào chế chỗ, nghiên cứu khuếch tán thuốc cách sử dụng mơ (ví dụ da người giác mạc) phản ánh trực tiếp hấp thụ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 85 thuốc sinh khả dụng cơng thức Tuy nhiên, tính sẵn có tính qn mơ hạn chế Ngồi ra, việc phân tích mẫu phức tạp có liên quan đến mẫu sinh học Màng nhân tạo tổng hợp lựa chọn thay tốt cho mơ xét tính đơn giản khả tái tạo nghiên cứu GPHC cho mục đích kiểm tra chất lượng sản phẩm Màng phải bán thị trường tái sản xuất chất lượng, trơ (khơng có tương tác vật lý hóa học với phân tử thuốc mơi trường giải phóng) Chúng phải có tính thẩm thấu cao thuốc nghiên cứu Để mô điều kiện sinh lý nơi phân phối thuốc, màng liên kết sinh học (ví dụ: Strat-M®, mơ da người) có sẵn cho mục đích in vitro Hiện tại, khơng có loại màng cho công thức nhãn khoa Theo đó, giác mạc động vật (ví dụ giác mạc thỏ) sử dụng rộng rãi nghiên cứu in vitro công thức nhãn khoa để bắt chước môi trường in vivo Đề tài sử dụng màng cellulose acetat 0,45µm bước đầu khảo sát in vitro, màng số nghiên cứu thuốc nhãn khoa sử dụng69 Có nhiều thiết bị đánh giá GPHC khác sử dụng nghiên cứu in vitro chế phẩm thuốc dùng cho mắt thiết bị thử hòa tan USP với cánh khuấy nhỏ thiết bị USP 4; tế bào Franz phương pháp thẩm tích34,69 Cho đến nay, phương pháp báo cáo thường xuyên cho nghiên cứu thuốc dùng cho mắt phương pháp tế bào khuếch tán Franz giới thiệu Shah et al vào năm 199169 Do tế bào Franz thiết bị lựa chọn nghiên cứu đánh giá giải phóng in vitro cơng thức SMEDDS – prednisolon 4.2.5 Về độ ổn định SMEDDS – prednisolon Về kết định lượng prednisolon SMEDDS – prednisolon giảm sau 03 tháng hai điều kiện bảo quản Kết sắc ký đồ định lượng prednisolon (Phụ lục 11) cho thấy có xuất pic thời gian rửa giải phút 22 phút, diện tích pic tăng dần theo thời gian bảo quản cho thấy có xuất tạp phân hủy Việc giảm hàm lượng hoạt chất prednisolon bị ảnh hưởng pH Trong nghiên cứu năm 2020, nhóm tác giả Sriprasad Acharya1, Bharath Raja Guru Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 86 cho thấy pH 7,4, tỷ lệ prenisolon bị phân huỷ cao pH 4,5 (45,74% so với 23%)70 Ngồi ra, có tương tác prednisolon với tá dược chứa nhóm ethoxy Tác giả Albert E Allen đề cập tương tác dược chất nhóm corticoid với tá dược chứa nhóm ethoxy71 4.3 Xây dựng công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon Sau khảo sát độ tan acid boric SMEDDS – prednisolon đề tài lựa chọn tỷ lệ 1% 2% để khảo sát định lượng predsolon môi trường pH khác Acid boric ngồi việc làm giảm pH cịn chất sát khuẩn72 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 87 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đề tài thực kết sau: Mục tiêu 1: Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS tiềm - Qua khảo sát độ tan lựa chọn pha dầu Capryol® 90; khảo sát thời gian nhũ hóa chất diện hoạt/ đồng diện hoạt lựa chọn Kolliphor® RH40 chất diện hoạt Transcutol® HP, PEG 400 làm chất đồng diện hoạt - Xây dựng giản đồ pha lựa chọn tỷ lệ D/DH/ĐDH 1:4:5, 1:5:4, 1:6:3, 2:3:5, 2:4:4, 2:5:3, 3:4:3, 3:5:2 cho hai hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 - Đánh giá tính chất SMEDDS lựa chọn cơng thức cho Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP T1 (1:4:5), T2 (1:5:4), T3 (1:6:3), T4 (2:3:5), T5 (2:4:4), T6 (2:5:3), T7 (3:4:3), T8 (3:5:2) Và công thức cho Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 P1 (1:4:5), P2 (1:5:4), P3 (1:6:3) Mục tiêu 2: Xây dựng đánh giá công thức SMEDDS – prednisolon - Khảo sát khả tải prednisolon SMEDDS lựa chọn tỷ lệ tải tối ưu 2% Hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP lựa chọn 04 cơng thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2 hệ Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 lựa chọn 02 công thức F1-2, F2-2 - Đánh giá tính chất SMEDDS – prednisolon: tất công thức đạt yêu cầu khảo sát Để đảm bảo độ tan tối đa prednisolon SMEDDS tránh kết tủa, tách pha vi nhũ tương tạo thành kết đo kích thước giọt đề tài lựa chọn công thức A5-2 công thức tối ưu - Đánh giá độ lặp công thức tối ưu: công thức tối ưu cho kết kích thước giọt, PdI zeta quy mô 20g/ mẫu cho kết khác khơng có ý nghĩa thống kê so với kết quy mô 5g/ mẫu - Kết định lượng prednisolon SMEDDS HPLC đạt yêu cầu - Các tiêu thẩm định quy trình định lượng prednisolon SMEDDS phương pháp HPLC theo ICH đạt yêu cầu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 88 - Đánh giá khả giải phóng hoạt chất in vitro cho thấy cơng thức A5-2 cho khả GPHC nhanh kéo dài GPHC với Pred Forte - Các tiêu thẩm định quy trình định lượng prednisolon thử nghiệm giải phóng hoạt chất phương pháp UV-Vis theo ICH đạt yêu cầu Mục tiêu 3: Xây dựng công thức đánh giá tiêu lý hóa thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon - Lựa chọn 04 thành phần công thức thuốc nhỏ mắt để thực khảo sát tiêu lý hóa - Đánh giá tiêu lý hóa công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon thời điểm ban đầu 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc: cơng thức đạt tiêu cảm quan, ảnh hưởng độ pha loãng, độ bền nhiệt động, phân bố kích thước giọt, PdI, zeta, pH, độ nhớt, độ vô khuẩn Kiến nghị Do giới hạn thời gian, đề tài đề xuất nội dung sau để hoàn thiện nghiên cứu: Khắc phục vấn đề công thức thuốc nhỏ mắt chứa SMEDDS – prednisolon Đánh giá mức độ kích ứng in vivo Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Saettone MF, Bucci M, Speiser P Ophthalmic Drug Delivery: Biopharmaceutical, Technological and Clinical Aspects Springer Science & Business Media; 2013 Dai Y, Zhou R, Liu L, et al Liposomes containing bile salts as novel ocular delivery systems for tacrolimus (FK506): in vitro characterization and improved corneal permeation International journal of nanomedicine 2013;8:1921 Selvaraj S, Karthikeyan J, Saravanakumar N Chitosan loaded microspheres as an ocular delivery system for acyclovir Int J Pharm Pharm Sci 2012;4(1):12532 Pignatello R, Ricupero N, Bucolo C, et al Preparation and characterization of eudragit retard nanosuspensions for the ocular delivery of cloricromene Aaps Pharmscitech 2006;7(1):E192-E198 Shah J, Nair AB, Jacob S, et al Nanoemulsion based vehicle for effective ocular delivery of moxifloxacin using experimental design and pharmacokinetic study in rabbits Pharmaceutics 2019;11(5):230 Kumar R, Sinha V Preparation and optimization of voriconazole microemulsion for ocular delivery Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 2014;117:82-88 Bộ Y tế Dược thư quốc gia Việt Nam Nhà xuất Y học; 2018: 1173 Hanafy AF, Abdalla AM, Guda TK, et al Ocular anti-inflammatory activity of prednisolone acetate loaded chitosan-deoxycholate self-assembled nanoparticles International journal of nanomedicine 2019;14:3679 Gaafar PM, Abdallah OY, Farid RM, Abdelkader H Preparation, characterization and evaluation of novel elastic nano-sized niosomes (ethoniosomes) for ocular delivery of prednisolone Journal of liposome research 2014;24(3):204215 10 Sheng Y, Yang X, Pal D, Mitra AK Prodrug approach to improve absorption of prednisolone International journal of pharmaceutics 2015;487(1-2):242-249 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 11 Gautam N, Kesavan K Development of microemulsions for ocular delivery Therapeutic delivery 2017;8(5):313-330 12 Tiwari R, Dubey V, Kesavan K Ocular self-microemulsifying drug delivery system of prednisolone improves therapeutic effectiveness in the treatment of experimental uveitis Ocular Immunology and Inflammation 2019;27(2):303-311 13 ElKasabgy NA Ocular supersaturated self-nanoemulsifying drug delivery systems (S-SNEDDS) to enhance econazole nitrate bioavailability International journal of pharmaceutics 2014;460(1-2):33-44 14 Bang SP, Yeon CY, Adhikari N, et al Cyclosporine A eyedrops with self- nanoemulsifying drug delivery systems have improved physicochemical properties and efficacy against dry eye disease in a murine dry eye model PloS one 2019;14(11):e0224805 15 Bộ Y tế Dược điển Việt Nam V Nhà xuất Y học; 2018:787 16 Yalkowsky S, He Y An extensive compilation of aqueous solubility data for organic compounds extracted from the AQUASOL database Handbook of Aqueous Solubility Data 2010:1252 17 Gaballa SA, Kompella UB, Elgarhy O, et al Corticosteroids in ophthalmology: Drug delivery innovations, pharmacology, clinical applications, and future perspectives Drug Delivery and Translational Research 2021;11(3):866-893 18 Zhao YH, Le J, Abraham MH, et al Evaluation of human intestinal absorption data and subsequent derivation of a quantitative structure–activity relationship (QSAR) with the Abraham descriptors Journal of pharmaceutical sciences 2001;90(6):749-784 19 Razzaq SN, Khan IU, Mariam I, Razzaq SS Stability indicating HPLC method for the simultaneous determination of moxifloxacin and prednisolone in pharmaceutical formulations Chemistry central journal 2012;6(1):1-10 20 Cacciari RD, Reynoso E, Montejano HA, Biasutti MA Photodegradation of prednisolone under UVB solar irradiation Role of photogenerated ROS in the Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh degradation mechanism Photochemical & Photobiological Sciences 2017;16(11):1717-1726 21 Kryczyk-Poprawa A, Kwiecień A, Opoka W Photostability of topical agents applied to the skin: A review Pharmaceutics 2019;12(1):10 22 USP44 Vol 2; 2018: 1341-1342 23 Viêm màng bồ đào PGS.TS Hoàng Thị Phúc Nhãn khoa (dùng cho đào tạo bác sĩ đa khoa) Nhà xuất giáo dục; 2007:102-109 24 K Suresh P, K Sah A Patent perspectives for corticosteroids based ophthalmic therapeutics Recent patents on drug delivery & formulation 2014;8(3):206-223 25 Chavda VP, Shah D Self-emulsifying delivery systems: one step ahead in improving solubility of poorly soluble drugs Nanostructures for cancer therapy Elsevier; 2017:653-718 26 Kreilgaard M Influence of microemulsions on cutaneous drug delivery Advanced drug delivery reviews 2002;54,:S77-S98 27 Thakare P, Mogal V, Borase P, Dusane J, Kshirsagar S A review on self- emulsified drug delivery system Journal of pharmaceutical and biological evaluations 2016;3(2):140-153 28 Anand S, Gupta R, Prajapati S Self-micro emulsifying drug delivery system Asian J Pharm Clin Res 2016;9(2):33-38 29 Maurya SD, Arya RK, Rajpal G, Dhakar RC Self-micro emulsifying drug delivery systems (SMEDDS): a review on physico-chemical and biopharmaceutical aspects Journal of Drug Delivery and Therapeutics 2017;7(3):55-65 30 Sunitha R, Sireesha DS, Aparna M Novel Self-emulsifying Drug Delivery System-An approach to enhance bioavailability of poorly water soluble drugs International Journal of Research in Pharmacy and Chemistry 2011;1(4):828-838 31 Gursoy RN, Benita S Self-emulsifying drug delivery systems (SEDDS) for improved oral delivery of lipophilic drugs Biomedicine & pharmacotherapy 2004;58(3):173-182 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 32 Wang L, Dong J, Chen J, Eastoe J, Li X Design and optimization of a new self-nanoemulsifying drug delivery system Journal of colloid and interface science 2009;330(2):443-448 33 Kaushik D Recent developments in self-microemulsifying drug delivery system: an overview Asian Journal of Pharmaceutics (AJP) 2019;13(02) 34 Gawin-Mikołajewicz A, Nartowski KP, Dyba AJ, et al Ophthalmic nanoemulsions: from composition to technological processes and quality control Molecular pharmaceutics 2021;18(10):3719-3740 35 Talele SG, Gudsoorkar V, Pharmacy M Novel approaches for solidification of SMEDDS Int J Pharm Biosci 2016;15:90-101 36 Kumar A, Sharma S, Kamble R Self emulsifying drug delivery system (SEDDS): Future aspects Int J Pharm Pharm Sci 2010;2(4):7-13 37 Jaiswal P, Aggarwal G Bioavailability enhancdement of poorly soluble drugs by smedds: a review Journal of drug delivery and therapeutics 2013;3(1) 38 Kyatanwar AU, Jadhav KR, Kadam VJ Self micro-emulsifying drug delivery system (SMEDDS) Journal of Pharmacy Research 2010;3(2):75-83 39 Ibrahim T, El-Megraba N, Abdallaha M Self-emulsifying drug delivery formulations Zagazig Journal of Pharmaceutical Sciences 2018;27(1):1-21 40 Khedekar K, Mittal S Self emulsifying drug delivery system: A review International journal of pharmaceutical sciences and research 2013;4(12):4494 41 Sharma V, Singh J, Gill B, Harikumar S SMEDDS: A novel approach for lipophilic drugs International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research 2012;3(8):2441 42 Đại cương giải phẫu sinh lý mắt PGS.TS Hoàng Thị Phúc Nhãn khoa (dùng cho đào tạo bác sĩ đa khoa) Nhà xuất giáo dục; 2007:9-11 43 Nhà xuất Y học Atlat giải phẫu người 2013 44 Koutsoviti M, Siamidi A, Pavlou P, Vlachou M Recent Advances in the Excipients Used for Modified Ocular Drug Delivery Materials 2021;14(15):4290 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 Ahmed I The noncorneal route in ocular drug delivery Ophthalmic drug delivery systems CRC Press; 2003:356-385 46 Gupta RB, Kompella UB Nanoparticle technology for drug delivery Taylor & Francis New York; 2006:320 47 Thuốc nhỏ mắt GS.TS Võ Xuân Minh, PGS.TS Phạm Ngọc Bùng Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc Nhà xuất y học; 2013:180-200 48 Singh M, Bharadwaj S, Lee KE, Kang SG Therapeutic nanoemulsions in ophthalmic drug administration: Concept in formulations and characterization techniques for ocular drug delivery Journal of Controlled Release 2020;328:895916 49 Balasubramaniam J, Kant S, Pandit JK In vitro and in vivo evaluation of Gelrite® gellan gum-based ocular delivery system for indomethacin ACTA PHARMACEUTICA-ZAGREB- 2003;53(4):251-262 50 Mohanambal E Formulation and evaluation of pH triggered in situ gelling system of levofloxacin Madurai Medical College, Madurai; 2010 51 Elbahwy IA, Lupo N, Ibrahim HM, et al Mucoadhesive self-emulsifying delivery systems for ocular administration of econazole International journal of pharmaceutics 2018;541(1-2):72-80 52 Nasr A, Gardouh A, Ghorab M Novel solid self-nanoemulsifying drug delivery system (S-SNEDDS) for oral delivery of olmesartan medoxomil: design, formulation, pharmacokinetic and bioavailability evaluation Pharmaceutics 2016;8(3):20 53 Jaiswal P, Aggarwal G, Harikumar SL, Singh K Development of self- microemulsifying drug delivery system and solid-self-microemulsifying drug delivery system of telmisartan International journal of pharmaceutical investigation 2014;4(4):195 54 Singh AK, Chaurasiya A, Singh M, et al Exemestane loaded self- microemulsifying drug delivery system (SMEDDS): development and optimization Aaps Pharmscitech 2008;9(2):628-634 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 55 Smail SS, Ghareeb MM, Omer HK, Al-Kinani AA, Alany RG Studies on surfactants, cosurfactants, and oils for prospective use in formulation of ketorolac tromethamine ophthalmic nanoemulsions Pharmaceutics 2021;13(4):467 56 Salawi A Self-emulsifying drug delivery systems: a novel approach to deliver drugs Drug Delivery 2022;29(1):1811-1823 57 Li S, Madan P, Lin S Effect of ionization of drug on drug solubilization in SMEDDS prepared using Capmul MCM and caprylic acid asian journal of pharmaceutical sciences 2017;12(1):73-82 58 Youssef AAA, Cai C, Dudhipala N, Majumdar S Design of topical ocular ciprofloxacin nanoemulsion for the management of bacterial keratitis Pharmaceuticals 2021;14(3):210 59 Li H, Pan T, Cui Y, et al Improved oral bioavailability of poorly water-soluble glimepiride by utilizing microemulsion technique International journal of nanomedicine 2016;11:3777 60 Peng C, Bengani L, Jung H, et al Emulsions and microemulsions for ocular drug delivery Journal of Drug Delivery Science and Technology 2011;21(1):111121 61 Hegde RR, Verma A, Ghosh A Microemulsion: new insights into the ocular drug delivery International Scholarly Research Notices 2013;2013 62 Maurer JK, Parker RD, Carr GJ Ocular irritation: microscopic changes occurring over time in the rat with surfactants of known irritancy Toxicologic pathology 1998;26(2):217-225 63 Kim S-K Chitin and chitosan derivatives: advances in drug discovery and developments Prospective corollary of ophthalmic nanomedicine CRC press; 2013:323 64 Mahdi ES, Sakeena MH, Abdulkarim MF, et al Effect of surfactant and surfactant blends on pseudoternary phase diagram behavior of newly synthesized palm kernel oil esters Drug design, development and therapy 2011:311-323 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 65 Sahoo RK, Biswas N, Guha A, Sahoo N, Kuotsu K Nonionic surfactant vesicles in ocular delivery: innovative approaches and perspectives BioMed research international 2014;2014 66 Ibrahim SS The role of surface active agents in ophthalmic drug delivery: a comprehensive review Journal of Pharmaceutical Sciences 2019;108(6):19231933 67 Aldosari BNA Development and evaluation of self-nanoemulsifying drug delivery systems for oral delivery of indomethacin UCL (University College London); 2018 68 Ether DGM Opinion on Diethylene Glycol Monoethyl Ether (degee) 2013; 69 Bao Q, Shen J, Jog R, et al In vitro release testing method development for ophthalmic ointments International journal of pharmaceutics 2017;526(1-2):145156 70 Acharya S, Guru BR Prednisolone encapsulated PLGA nanoparticles: Characterization, cytotoxicity, and anti-inflammatory activity on C6 glial cells Journal of Applied Pharmaceutical Science 2020;10(4):014-021 71 Allen AE, Gupta VD Stability of hydrocortisone in polyethylene glycol ointment base Journal of Pharmaceutical Sciences 1974;63(1):107-109 72 Sheskey PJ, Cook WG, Cable CG Handbook of pharmaceutical excipients Eighth ed Pharmaceutical Press; 2017 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC TỶ LỆ CÁC THÀNH PHẦN CÔNG THỨC XÂY DỰNG GIẢN ĐỒ PHA Bảng Tỷ lệ thành phần cơng thức xây dựng giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: Transcutol® HP Cơng Capryol® 90 Kolliphor® RH40 Transcutol® HP Kết CT01 10 10 80 Trong suốt CT02 10 20 70 Trong suốt CT03 10 30 60 Trong suốt CT04 10 40 50 Trong suốt CT05 10 50 40 Trong suốt CT06 10 60 30 Trong suốt CT07 10 70 20 Trong suốt CT08 10 80 10 Trong mờ CT09 20 10 70 Rất đục CT10 20 20 60 Rất đục CT11 20 30 50 Trong mờ CT12 20 40 40 Trong mờ CT13 20 50 30 Trong mờ CT14 20 60 20 Đục CT15 20 70 10 Đục CT16 30 10 60 Rất đục CT17 30 20 50 Rất đục CT18 30 30 40 Rất đục CT19 30 40 30 Trong mờ CT20 30 50 20 Trong mờ CT21 30 60 10 Rất đục CT22 40 10 50 Rất đục CT23 40 20 40 Rất đục thức Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh CT24 40 30 30 Rất đục CT25 40 40 20 Rất đục CT26 40 50 10 Rất đục CT27 50 10 40 Rất đục CT28 50 20 30 Rất đục CT29 50 30 20 Rất đục CT30 50 40 10 Rất đục CT31 60 10 30 Rất đục CT32 60 20 20 Rất đục CT33 60 30 10 Rất đục CT34 70 10 20 Rất đục CT35 70 20 10 Rất đục CT36 80 10 10 Rất đục Bảng Tỷ lệ thành phần cơng thức xây dựng giản đồ pha Capryol® 90: Kolliphor® RH40: PEG 400 Cơng Capryol® 90 Kolliphor® RH40 PEG 400 Kết CT01 10 10 80 Đục mờ CT02 10 20 70 Trong suốt CT03 10 30 60 Trong suốt CT04 10 40 50 Trong suốt CT05 10 50 40 Trong suốt CT06 10 60 30 Trong suốt CT07 10 70 20 Trong suốt CT08 10 80 10 Trong suốt CT09 20 10 70 Rất đục CT10 20 20 60 Đục CT11 20 30 50 Trong mờ thức Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh CT12 20 40 40 Trong mờ CT13 20 50 30 Trong mờ CT14 20 60 20 Đục CT15 20 70 10 Đục CT16 30 10 60 Rất đục CT17 30 20 50 Rất đục CT18 30 30 40 Đục CT19 30 40 30 Trong mờ CT20 30 50 20 Trong mờ CT21 30 60 10 Đục CT22 40 10 50 Rất đục CT23 40 20 40 Rất đục CT24 40 30 30 Đục mờ CT25 40 40 20 Rất đục CT26 40 50 10 Rất đục CT27 50 10 40 Rất đục CT28 50 20 30 Rất đục CT29 50 30 20 Rất đục CT30 50 40 10 Rất đục CT31 60 10 30 Rất đục CT32 60 20 20 Rất đục CT33 60 30 10 Rất đục CT34 70 10 20 Rất đục CT35 70 20 10 Rất đục CT36 80 10 10 Rất đục Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ẢNH HƯỞNG CỦA ĐỘ PHA LOÃNG LÊN ĐỘ BỀN VỮNG CỦA SMEDDS NỀN T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Hình Cảm quan sau pha lỗng 10 lần với NMNT T1 – T8 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Hình Cảm quan sau pha loãng 25 lần với NMNT T1 – T8 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 Hình Cảm quan sau pha loãng 10 lần với NMNT P1 – P8 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 Hình Cảm quan sau pha loãng 25 lần với NMNT P1 – P8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ SMEDDS NỀN (CAPRYOL® 90: KOLLIPHOR® RH40: TRANSCUTOL® HP) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ SMEDDS NỀN (CAPRYOL® 90: KOLLIPHOR® RH40: PEG 400) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC HÌNH CHỤP KẾT QUẢ KHẢ NĂNG TẢI PREDNISOLON CỦA CÔNG THỨC SMEDDS TIỀM NĂNG (CAPRYOL® 90: KOLLIPHOR® RH40: TRANSCUTOL® HP) A1-1% A11,5% A2-1% A21,5% A3-1% A31,5% A4-1% A41,5% A1-2% A2-2% A4-2% A5-2% Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn A5-1% A51,5% A1-2,5% A6-1% A7-1% A61,5% A2-2,5% A71,5% A8-1% A81,5% A4-2,5% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC HÌNH CHỤP KẾT QUẢ KHẢ NĂNG TẢI PREDNISOLON CỦA CƠNG THỨC SMEDDS TIỀM NĂNG (CAPRYOL® 90: KOLLIPHOR® RH40: PEG 400) F1-1% F2-1% F1-2% F3-1% F5-1% F2-2% Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn F1-1,5% F2-1,5% F3-1,5% F5-1,5% F1-2,5% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ SMEDDS - PREDNISOLON A B C D E F Hình (A), (B), (C), (D), (E), (F) kích thước giọt trung bình cơng thức A1-2, A2-2, A4-2, A5-2, F1-2, F2-2 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ SMEDDS - PREDNISOLON THỜI ĐIỂM THÁNG, 01 THÁNG, 03 THÁNG A B Hình Kết đo kích thước giọt công thức A5-2 tháng (A): điều kiện thường; (B): điều kiện lão hóa cấp tốc A B Hình Kết đo kích thước giọt cơng thức A5-2 01 tháng (A): điều kiện thường; (B): điều kiện lão hóa cấp tốc A B Hình Kết đo kích thước giọt cơng thức A5-2 03 tháng điều kiện thường (A): điều kiện thường; (B): điều kiện lão hóa cấp tốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ THUỐC NHỎ MẮT CHỨA SMEDDS PREDNISOLON Hình Kết đo kích thước giọt CT1 Hình 10 Kết đo kích thước giọt CT2 Hình 11 Kết đo kích thước giọt CT3 Hình 12 Kết đo kích thước giọt CT4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 10 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ KÍCH THƯỚC GIỌT TRUNG BÌNH VI NHŨ TƯƠNG TẠO THÀNH TỪ THUỐC NHỎ MẮT CHỨA SMEDDS – PREDNISOLON SAU 01 TUẦN Ở ĐIỀU KIỆN LÃO HĨA CẤP TỐC Hình 13 Kết đo kích thước giọt CT1 Hình 14 Kết đo kích thước giọt CT2 Hình 15 Kết đo kích thước giọt CT3 Hình 16 Kết đo kích thước giọt CT4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG MẪU A5-2 Ở THỜI ĐIỂM THÁNG, 01 THÁNG, 03 THÁNG TRONG ĐIỀU KIỆN THƯỜNG VÀ ĐIỀU KIỆN LÃO HÓA CẤP TỐC Hình 17 Sắc ký đồ định lượng mẫu A5-2 thời điểm tháng Hình 18 Sắc ký đồ định lượng mẫu A5-2 thời điểm 01 tháng điều kiện thường Hình 19 Sắc ký đồ định lượng mẫu A5-2 thời điểm 01 tháng điều kiện lão hóa cấp tốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 20 Sắc ký đồ định lượng mẫu A5-2 thời điểm 03 tháng điều kiện thường Hình 21 Sắc ký đồ định lượng mẫu A5-2 thời điểm 03 tháng điều kiện lão hóa cấp tốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ ĐỊNH LƯỢNG CÁC CÔNG THỨC THUỐC NHỎ MẮT Ở THỜI ĐIỂM BAN ĐẦU VÀ 01 TUẦN TRONG ĐIỀU KIỆN LÃO HĨA CẤP TỐC Hình 22 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm ban đầu Hình 23 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc Hình 24 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm ban đầu Hình 25 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 26 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm ban đầu Hình 27 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc Hình 28 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm ban đầu Hình 29 Sắc ký đồ định lượng mẫu CT thời điểm 01 tuần điều kiện lão hóa cấp tốc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 13 COA CHẤT CHUẨN PREDNISOLON Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn