Bài giảng thực hành độc chất học KỸ THUẬT XỬ LÝ MẪU ĐỂ PHÂN TÍCH CHẤT ĐỘC HỮU CƠ I. MỤC TIÊU 1. Chuẩn bị đúng,đầy đủ: dụng cụ, hoá chất, mẫu để tiến hành xử lý. 2. Thao tác đúng, đủ kỹ thuật xử lý mẫu. 3. Tự nhận xét được kết quả đã làm: Đúng? Sai? II. NỘI DUNG 1. Nguyên tắc: Các chất độc hữu cơ được tách ra khỏi mẫu thử nhờ các loại dung môi hữu cơ trong môi trường pH phù hợp. 2. Quy trình kỹ thuật 2.1 Chuẩn bị: - Dụng cụ: Bình nón 500mL, Bình chiết, giá đỡ bình chiết, cơi thuỷ tinh, đũa thuỷ tinh, bình nón nồi cách thuỷ, giấy lọc, kéo hoặc máy xay, khay thuỷ tinh… - Hoá chất: Giấy thử pH, Ether dầu hoả, cồn 96 o , acid tartric hoăc oxalic, dung môi hữu cơ(DMHC) Ether hoặc Cloroform, NH 4 OH, HCl, NaHCO 3 … - Mẫu thử: Phủ tạng, dịch sinh học, mẫu tang vật như thức ăn, nước uống… 2.2 Tiến hành: 2.2.1 Làm sạch mẫu Với mẫu thử là phủ tạng, dịch sinh học hoặc mẫu tang vật mà có nhiều Albumin ta phải tiến hành thêm bước phá bỏ mẫu và lọc loại Albumin như sau: - Ta cắt hoặc xay nhỏ mẫu, ngâm cồn và acid tartric( hoặc oxalic) tới pH 4-5 trong bình nón dung tích khoảng 500mL, đậy kín để 24h. Sau đó ta lọc qua bằng giấy lọc. Đem cô trên cách thuỷ tới dạng sền sệt sau đó để nguội. Dùng đũa thuỷ tinh khuấy nhẹ và cho thêm từ từ cồn 96 o rồi lọc qua giấy lọc, lại tiếp tục cô trên cách thuỷ. Ta làm như vậy khoảng 2-3 lần tới khi cho thêm cồn vào không xuất hiện tủa trắng nữa. Như vậy là quá trình lọc loại Albumin đã hoàn thành( chú ý luôn luôn kiểm tra pH). Dịch cô sau cùng ta hoà vào 40-50mL nước( có thể lọc qua giấy lọc) Điều chỉnh pH 4-5. Như vậy ta đã có dịch lọc sạch có thể đem chiết. Với mẫu là dịch sinh học, hoặc tang vật mà ít hoặc không có Albumin ta có thể tiến hành chiết tách ngay. 1 Bài giảng thực hành độc chất học 2.2.2 Chiết tách: ta tiến hành chiết tách mẫu theo sơ đồ sau: Sơ đồ chiết mẫu Dung dịch nước lọc phủ tạng(pH= 4-5) +20ml Ether dầu hoả, lắc nhẹ, để tách lớp Lớp nước +NH 4 OHpH=9-10 +20ml DMHC x2 lần Lớp DMHC cô trên cách thuỷ Cắn A Lớp nước +HCl 10% tới pH trung tính +NaHCO3 tới pH=8-9 +20ml DMHC x2 lần Lớp DMHC, cô trên cách thuỷ  cắn khô Phân tích tìm: -Thuốc ngủ Gardenal và Meprobamat -Thuốc trừ sâu: Lân hữu cơ, Clo hữu cơ, carbamat và 1 số loại khác -Các sulfamid v.v… Lớp nước( bỏ) Lớp DMHC bốc hơi cắn tìm Morphin Cắn B Phân tích tìm: -Ancaloid -Base hữu cơ -Một số loại thuốc 2 Lớp Ether dầu hoả ở phần trên (bỏ) Lớp nước( phần dưới) +20ml dung môi hữu cơ x2 lần,lắc nhẹ 5 phút, để tách lớp Bài giảng thực hành độc chất học 3. Kết quả: Sau khi chiết tách ta có được các cắn khô. Cắn này ta đem phân tích tìm các chất độc hữu cơ tương ứng. Yêu cầu các mẫu chiết phải sạch không bị lẫn tạp bẩn tránh gây sai sót trong quá trình phân tích. 4. Chú ý: Trong quá trình phân tích ta cần chú ý những điếm sau: - Thường xuyên kiểm tra pH - Trong quá trình chiết nếu có nhũ dịch ta cần phá nhũ bằng cồn 96 o - Cắn thu được không được bốc hơi quá khô. 5. Lượng giá: - Các loại DMHC dùng để chiết: + Ether + Cloroform - Phá tủa Albumin ta dùng………. - Cắn B dùng để phân tích tìm: + Base hữu cơ + Alcaloid + 1 số loại thuốc - pH dùng để chiết Morphin là: ……. 3 . lớp Lớp nước +NH 4 OHpH=9-10 +20ml DMHC x2 lần Lớp DMHC cô trên cách thuỷ Cắn A Lớp nước +HCl 10% tới pH trung tính +NaHCO3 tới pH=8-9 +20ml DMHC x2 lần Lớp DMHC, cô trên cách thuỷ  cắn khô Phân. pH, Ether dầu hoả, cồn 96 o , acid tartric hoăc oxalic, dung môi hữu cơ(DMHC) Ether hoặc Cloroform, NH 4 OH, HCl, NaHCO 3 … - Mẫu thử: Phủ tạng, dịch sinh học, mẫu tang vật như thức ăn, nước. điếm sau: - Thường xuyên kiểm tra pH - Trong quá trình chiết nếu có nhũ dịch ta cần phá nhũ bằng cồn 96 o - Cắn thu được không được bốc hơi quá khô. 5. Lượng giá: - Các loại DMHC dùng để chiết: +