Công ngh nuôi c yệ ấ mô t bào th c v tế ự ậ Mục lục I. I. Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật II. II. Nhân giống vô tính in vitro Nhân giống vô tính in vitro III. III. Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro IV. IV. Nuôi cấy tế bào trần Nuôi cấy tế bào trần V. V. Thụ phấn và nuôi cấy phôi in virto Thụ phấn và nuôi cấy phôi in virto VI. VI. Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho các nguyên Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho các nguyên liệu thực vật liệu thực vật hoàn toàn sạch vi sinh vật hoàn toàn sạch vi sinh vật được nuôi trong mt dinh dưỡng nhân tạo được nuôi trong mt dinh dưỡng nhân tạo trong điều kiện vô trùng trong điều kiện vô trùng I.Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật • Tính toàn năng của tế bào thực vật: Tính toàn năng của tế bào thực vật: từ 1 dạng tế bào bất kì trong cơ thể thực từ 1 dạng tế bào bất kì trong cơ thể thực vật(lá,thân,hoa…)cũng đều có khả năng phát triển thành 1 cơ vật(lá,thân,hoa…)cũng đều có khả năng phát triển thành 1 cơ thể hoàn chỉnh thể hoàn chỉnh • Sự phân hóa của tb: Sự phân hóa của tb: sự chuyển hóa các tb phôi sinh thành tb mô chuyên sự chuyển hóa các tb phôi sinh thành tb mô chuyên biệt,đảm nhận các chức năng khác nhau biệt,đảm nhận các chức năng khác nhau • Sự phản phân hóa của tb: Sự phản phân hóa của tb: trong điều kiện cần thiết và thích hợp,các tb,cơ quan trong điều kiện cần thiết và thích hợp,các tb,cơ quan lại có thể trở về dạng phôi sinh và phân chia mạnh lại có thể trở về dạng phôi sinh và phân chia mạnh mẽ mẽ Tế bào phôi sinh Tế bào phôi sinh Tế bào dãn Tế bào dãn Tế bào phân hóa có Tế bào phân hóa có chức năng riêng biệt chức năng riêng biệt Phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Phân hóa tế bào II.Nhân giống vô tính in vitro Nhân giống 1 loài trong ống nghiệm trên mt nhân tạo và trong Nhân giống 1 loài trong ống nghiệm trên mt nhân tạo và trong điều kiện vô trùng điều kiện vô trùng Vô trùng Vô trùng mẫu cấy mẫu cấy Tạo cây Tạo cây in in vitro vitro Nhâm giống Nhâm giống in in vitro vitro Chuyển cây ra vườn Chuyển cây ra vườn ươm ươm  Quy trình nhân giống vô tính Quy trình nhân giống vô tính in vitro in vitro Chuẩn bị cây mẹ Chuẩn bị cây mẹ • Ưu điểm: Ưu điểm: nhân giống cây ở quy mô công nghiệp nhân giống cây ở quy mô công nghiệp nhân nhanh với hệ số nhân giống cao nhân nhanh với hệ số nhân giống cao sản phẩm cây giống đồng nhất,sạch bệnh sản phẩm cây giống đồng nhất,sạch bệnh tiết kiệm thời gian,thu hoạch lớn tiết kiệm thời gian,thu hoạch lớn • Nhược điểm: Nhược điểm: tính bất định về mặt di truyền tính bất định về mặt di truyền sự nhiễm mẫu sự nhiễm mẫu tạo ra độc tố tạo ra độc tố sự hóa thủy tinh thể sự hóa thủy tinh thể III.Nuôi cấy giao tử,tạo cây đơn bội invitro 1.Tạo cây đơn bội bằng 1.Tạo cây đơn bội bằng nuôi cấy bao phấn nuôi cấy bao phấn Nguyên lý: Nguyên lý: sự hình thành cây đơn sự hình thành cây đơn bội từ hạt phấn là sự bội từ hạt phấn là sự sinh sản đơn tính đực sinh sản đơn tính đực theo 3 phương thức theo 3 phương thức Sinh Sản Đơn Tính Đực Trực Tiếp Gián Tiếp Hỗn Hợp [...]... cây đơn bội Khi nuôi cấy bao phấn thường gặp hiện tượng bạch tạng IV .Nuôi cấy tế bào trần Phương pháp cơ bản để tách và nuôi cấy 1.Tách tế bào trần • Khử trùng mẫu lá • Ngâm mẫu trong dung dịch thẩm thấu để tế bào co nguyên sinh chất • Tách lớp mặt dưới lá • Ngâm mẫu trong hỗn hợp enzym • Tinh sạch tế bào trần • Nuôi cấy tế bào trần trong môi trường thích hợp 2.Tạo cây đơn bội bằng nuôi cấy noãn chưa... đặc tạo mô sẹo tái sinh chồi  cây hoàn chỉnh Sơ đồ nuôi cấy tế bào trần Ứng dụng nuôi cấy tế bào trần trong chọn tạo giống • Dung hợp tế bào trần: là sự kết hợp của hai hay nhiều tế bào trần tạo ra một khối tế bào trần, trong đó nhân của chúng có thể kết hợp hoặc tồn tại riêng rẽ  tạo ra các khối mô sẹo hoặc phôi soma, ứng dụng trong tạo con lai tế bào soma, có thể xáy ra theo 2 con đường: tự phát... bầu quả chứa noãn và nuôi cấy trong mt vô trùng • Đặt hạt phấn trực tiếp lên đầu nhụy thụ phấn thành công, phôi sẽ phát triển trong mt nuôi cấy • Nuôi cấy phôi in vitro Cứu phôi khi thụ phấn in vitro,có thụ tinh tạo thành hợp tự nhưng phôi không phát triển Phôi non được tách ra và nuôi cấy trong mt thích hợp để phát triển bình thường VI.Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Ưu điểm • Có thể... cellulose và đưa cơ thể thực vật về trạng thái từng tế bào riêng rẽ với kích thước không lớn hơn nhiều so với cơ thể vi sinh vật đã cho phép tiến hành kỹ thuật chọn dòng vi sinh vật đối với thực vật bậc cao V.Thụ phấn và nuôi cấy phôi in virto • Thụ phấn trong tự nhiên: Hạt phấn chín rơi vào núm nhụynảy mầm,tạo ống phấn Hai tinh tử 1n tới noãnthụ tinh kép (tạo phôi + hợp bào nội nhũ tam bội) • Bất... bội bằng nuôi cấy noãn chưa thụ tinh Nguyên lý: nuôi cấy noãn chưa thụ tinh phát triển thành cây đơn bội là sự sinh sản đơn tính cái Theo 2 phương pháp • Nuôi cấy noãn chưa thụ tinh tách rời • Nuôi cấy cùng lúc nhiều noãn trên 1 phần của lõi bắp Gặp khó khăn trong việc tách tb noãn cũng như dễ làm tổn thương mô 2.Tái sinh cây từ protoblast: • Tạo vách tế bào: khi đưa tb trần vào trong mt tái sinh sau... Chọn lọc cây đơn bội: đếm số lượng NST,đo hàm lượng DNA,so với cây mẹ Sơ đồ tạo cây đơn bội từ nuôi cấy bao phấn Khử trùng bề mặt Tách các bao phấn Hoa Loại bỏ chỉ nhị Nhuộm acetoarmine để xác định GĐPT của hạt phấn Nuôi cấy trên mt đặc Phát triển phôi Cây đơn bội Nuôi cấy trên mt lỏng • Ưu điểm Môi trường nuôi cấy đơn giản Tạo ra giống cây trồng sạch bệnh, có phẩm chất di truyền đồng đều Phát sinh phôi...Theo 2 phương pháp • Các bao phấn được nuôi cấy trên môi trường có agar hoặc môi trường lỏng và sự phát sinh phôi xảy ra trong bao phấn • Hạt phấn được tách rời khỏi bao phấn hoặc bằng phương pháp cơ học hoặc do nứt nẻ tự nhiên của bao phấn và được nuôi trên môi trường lỏng Quy trình nuôi cấy • Chọn bao phấn: hoa đầu tiên,hạt phấn thể 4 nhân sau lần nguyên phân... nuôi cấy trong mt thích hợp để phát triển bình thường VI.Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Ưu điểm • Có thể nhân giống cây trồng ở quy mô lớn,kể cả các đối tượng khó nhân giống • Tiết kiệm vật liệu giống • Cho ra được sản phẩm đồng nhất về mặt di truyền • Nhân nhanh các giống cây quý,hữu ích nhưng vẫn giữ được các đặc tính di tuyền mong muốn,giống cây sạch bệnh • Giúp loại trừ tính bất thụ . nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Ưu và nhược điểm của nuôi cấy mô tế bào thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm chung cho các nguyên Nuôi cấy mô tế bào thực vật : khái niệm. sở nuôi cấy mô tế bào thực vật • Tính toàn năng của tế bào thực vật: Tính toàn năng của tế bào thực vật: từ 1 dạng tế bào bất kì trong cơ thể thực từ 1 dạng tế bào bất kì trong cơ thể thực vật( lá,thân,hoa…)cũng. mẽ mẽ Tế bào phôi sinh Tế bào phôi sinh Tế bào dãn Tế bào dãn Tế bào phân hóa có Tế bào phân hóa có chức năng riêng biệt chức năng riêng biệt Phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Phân