Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng do Trypanosoma evansi gây ra ở trâu, bò một số tỉnh miền núi phía Bắc và đề xuất biện pháp phòng trị
i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐỖ THỊ VÂN GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, ỨNG DỤNG KIT CHẨN ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG DO TRYPANOSOMA EVANSI GÂY RA Ở TRÂU, BÒ MỘT SỐ TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐỖ THỊ VÂN GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, ỨNG DỤNG KIT CHẨN ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG DO TRYPANOSOMA EVANSI GÂY RA Ở TRÂU, BÒ MỘT SỐ TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Chuyên ngành: Ký sinh trùng vi sinh vật học thú y Mã số: 62 64 01 04 LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Thị Kim Lan TS Nguyễn Quốc Doanh THÁI NGUYÊN - 2014 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu kết nghiên cứu luận án hoàn toàn trung thực chưa công bố công trình khác Mọi thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài nghiên cứu hoàn thành Luận án cảm ơn TÁC GIẢ Đỗ Thị Vân Giang ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành Luận án này, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới GS TS Nguyễn Thị Kim Lan - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên TS Nguyễn Quốc Doanh - Viện Thú y Quốc gia trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình suốt q trình nghiên cứu hồn thành Luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám đốc, Ban Đào tạo Sau Đại học - Đại học Thái Nguyên; Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Khoa Chăn nuôi thú Y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên Viện Khoa học sống tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cô nhóm thực đề tài cấp Nhà nước: «Nghiên cứu sản xuất protein tái tổ hợp phục vụ chế tạo kit phát ký sinh trùng Trypanosoma evansi ký sinh gia súc Việt Nam» kết hợp với tơi q trình triển khai đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn Chi cục Thú y, trạm Thú y thuộc tỉnh Thái Nguyên, Hòa Bình, Lạng Sơn, Lai Châu hộ chăn ni trâu, bò địa bàn tỉnh nghiên cứu tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn: PGS TS Phan Địch Lân - nguyên Viện trưởng Viện Thú y Quốc gia, PGS TS Tô Long Thành - Giám đốc Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung Ương, TS Phạm Thị Tâm - Phó chủ nhiệm khoa Cơng nghệ Sinh học Viện Đại Học Mở giúp đỡ q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn em sinh viên Khóa 39, 40, 41 chuyên ngành Thú y Chăn nuôi Thú y giúp thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban chủ nhiệm Khoa thầy, cô Khoa Kỹ thuật Nông Lâm - trường CĐ Kinh tế - Kỹ thuật - ĐH Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ để theo học hồn thành chương trình đào tạo Tơi vơ biết ơn thành viên gia đình, bạn bè đồng nghiệp bên tôi, giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hoàn thành Luận án Thái Nguyên, ngày tháng năm 2013 NGHIÊN CỨU SINH iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT - : Đến % : Tỷ lệ phần trăm CS : Cộng Nxb : Nhà xuất TMT : Tiên mao trùng ĐC : Đối chứng SGN : Sau gây nhiễm EPC : Kháng thể đối chứng dương ENC : Kháng thể đối chứng âm mg : Miligam kg TT : kg thể trọng TP : Thành phố spp : species plural VSG : Variant Surface Glycoprotein SDS : Sodium Dodecyl Sulfate VSG : Variant Surface Glycoprotein SAT : Slide Agglutination Test T evansi : Trypanosoma evansi T rubidus : Tabanus rubidus T kiangsuensis : Tabanus kiangsuensis S calcitrans Stomoxys calcitrans : iv DANH MỤC BẢNG BIỂU TT bảng Nội dung bảng Trang Bảng 3.1 Kết định danh loài tiên mao trùng tỉnh miền núi phía Bắc 61 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu, bị tỉnh miền núi phía Bắc 62 Bảng 3.3 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu, bò theo lứa tuổi 66 Bảng 3.4 Tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu theo mùa vụ 68 Bảng 3.5 Tỷ lệ phát bệnh tiên mao trùng trâu theo mùa vụ 69 Kết định danh, phân bố tần suất xuất loài ruồi, mịng hút máu Tỷ lệ lồi ruồi, mịng số mẫu thu thập Bảng 3.7 địa phương nghiên cứu Bảng 3.8 Quy luật hoạt động theo tháng lồi ruồi, mịng hút máu Bảng 3.6 71 78 81 Bảng 3.9 Quy luật hoạt động lồi ruồi, mịng hút máu 82 Bảng 3.10 Thời gian T evansi xuất máu chuột bạch sau gây nhiễm 84 Bảng 3.11 Thời gian chết chuột bạch sau gây nhiễm T evansi 86 Bảng 3.12 Tỷ lệ triệu chứng lâm sàng chủ yếu chuột bạch gây nhiễm 87 Bảng 3.13 Bệnh tích đại thể chuột bạch bị bệnh tiên mao trùng gây nhiễm 89 So sánh khối lượng thể nội quan chuột đối chứng gây nhiễm T evansi Bảng 3.15 Thời gian T evansi xuất máu thỏ sau gây nhiễm Bảng 3.14 Tần suất xuất T evansi máu thỏ gây nhiễm thời gian thỏ chết Bảng 3.17 Thời gian xuất triệu chứng lâm sàng chủ yếu thỏ gây nhiễm Bảng 3.16 Bảng 3.18 Bệnh tích đại thể chủ yếu thỏ bị bệnh TMT gây nhiễm 90 92 93 95 96 Thời gian T evansi bắt đầu xuất thời gian trâu gây nhiễm có biểu lâm sàng Bảng 3.20 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu trâu gây nhiễm 101 Bảng 3.21 Sự thay đổi số tiêu sinh lý máu trâu sau gây nhiễm 102 Bảng 3.22 Công thức bạch cầu trâu đối chứng gây nhiễm 104 Bảng 3.23 Bệnh tích đại thể chủ yếu trâu bị bệnh TMT gây nhiễm 106 Bảng 3.19 97 v Bảng 3.24 Tỷ lệ phát kit CATT số mẫu huyết (+) 107 Bảng 3.25 Tỷ lệ phát kit ELISA số mẫu huyết (+) 108 Tỷ lệ trâu nhiễm tiên mao trùng Thái Nguyên qua ứng dụng kit huyết chẩn đoán Bảng 3.27 Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc trypanosoma Bảng 3.26 Bảng 3.28 Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc azidin Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc trypamidium samorin Bảng 3.30 Thời gian T evansi chuột sử dụng thuốc diminavet Bảng 3.29 Bảng 3.31 Hiệu lực phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 109 111 112 113 114 116 vi DANH MỤC CÁC HÌNH, BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ TT hình Nội dung hình Hình 3.1 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm TMT trâu, bị tỉnh miền núi phía Bắc Trang 64 Hình 3.2 Đồ thị tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu, bò theo lứa tuổi 66 Hình 3.3 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm tiên mao trùng trâu theo mùa vụ 68 Hình 3.4 Biểu đồ tỷ lệ phát bệnh tiên mao trùng trâu theo mùa vụ 70 Hình 3.5 Biểu đồ tỷ lệ lồi ruồi, mòng hút máu số mẫu thu thập 79 Hình 3.6 Đồ thị diễn biến thân nhiệt trâu đối chứng gây nhiễm T evansi 99 Biểu đồ tỷ lệ loại bạch cầu trâu gây nhiễm T evansi so với trâu đối chứng Hình 3.8 Biểu đồ hiệu lực phác đồ điều trị bệnh TMT cho trâu, bị Hình 3.7 105 116 vii MỤC LỤC MỞ ĐẦU……………………………………………………………………………1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài .3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài Những đóng góp đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc phân loại tiên mao trùng 1.1.2 Dịch tễ học bệnh tiên mao trùng .8 1.1.3 Đặc điểm bệnh lý lâm sàng bệnh 14 1.1.4 Chẩn đoán bệnh tiên mao trùng 17 1.1.5 Phòng, trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò, ngựa 22 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG 27 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 27 1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 31 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .46 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 46 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 46 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 46 2.2 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU .47 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 47 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tiên mao trùng trâu, bò tỉnh miền núi phía Bắc .47 2.3.2 Khả gây bệnh T evansi số động vật gây nhiễm 48 2.3.3 Ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng địa phương 49 2.3.4 Xác định khả mẫn cảm T evansi với số loại thuốc chuột bạch………………………………………………………………………….49 2.3.5 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng đề xuất biện pháp phòng chống bệnh 49 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 49 viii 2.4.1 Phương pháp thu thập mẫu 49 2.4.2 Phương pháp phát tiên mao trùng mẫu 51 2.4.3 Phương pháp định danh tiên mao trùng 51 2.4.4 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm bệnh lý, lâm sàng bệnh T evansi gây động vật gây nhiễm .52 2.4.5 Phương pháp định loại ruồi, mịng hút máu - mơi giới truyền bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 56 2.4.6 Phương pháp ứng dụng kit huyết phát trâu, bò bị bệnh tiên mao trùng 56 2.4.7 Phương pháp nghiên cứu khả mẫn cảm T evansi với số loại thuốc chuột bạch 58 2.4.8 Xây dựng phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng cho trâu, bò 59 2.4.9 Một số quy định nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tiên mao trùng .60 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 60 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 61 3.1 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH TIÊN MAO TRÙNG Ở TRÂU, BÒ TẠI TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC 61 3.1.1 Định danh loài tiên mao trùng phân lập từ trâu, bị tỉnh miền núi phía Bắc 61 3.1.2 Tình hình nhiễm tiên mao trùng trâu, bị tỉnh miền núi phía Bắc 62 3.1.3 Nghiên cứu ruồi, mòng hút máu truyền bệnh tiên mao trùng 71 3.2 KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA T EVANSI TRÊN MỘT SỐ ĐỘNG VẬT GÂY NHIỄM 84 3.2.1 Khả gây bệnh T evansi chuột bạch 84 3.2.2 Khả gây bệnh T evansi thỏ 91 3.2.3 Khả gây bệnh T evansi trâu 97 3.3 ỨNG DỤNG KIT TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG Ở CÁC ĐỊA PHƯƠNG .107 3.3.1 Tỷ lệ phát kit số mẫu huyết dương tính .107 3.3.2 Ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng .109 3.4 XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG MẪN CẢM CỦA T EVANSI VỚI MỘT SỐ LOẠI THUỐC TRÊN CHUỘT BẠCH 110 V KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA T EVANSI TRÊN TRÂU Ảnh 30: Trâu lơ đối chứng lơ thí nghiệm gây nhiễm T evansi Ảnh 31: Đo thân nhiệt lấy máu trâu sau gây nhiễm Ảnh 32: Trâu gây nhiễm T evansi có triệu chứng run rẩy, da khơ, lơng xù; thủy thũng mi mắt có dử đặc, bại chân sau Mổ khám trâu ngày thứ 30 SGN Gan sưng xuất huyết Thận sưng, màng bao thận khó bóc Lách sưng xuất huyết Phổi xuất huyết Cơ tim nhão, có sợi tơ huyết bám van tim Ảnh 33: Bệnh tích đại thể trâu bị bệnh tiên mao trùng gây nhiễm Ảnh 34: Thu thập mẫu bệnh phẩm trâu làm tiêu vi thể Bệnh tích vi thể trâu gây nhiễm T evansi Đại thực bào Ảnh 35: Mô lách xuất huyết, xâm nhập tế bào viêm Ảnh 36: Các xoang lách bị giãn, xuất nhiều tế bào viêm đại thực bào (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 lần) (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 400 lần) Các lớp tim giãn rộng Ảnh 37: Các lớp tim bị giãn (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 lần) Ảnh 38: Các sợi tim phì đại (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 400 lần) Tĩnh mạch nan hoa giãn Tế bào gan bị thối hóa Ảnh 39: Các xoang gan tĩnh mạch nan hoa giãn, tế bào gan thối hóa (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 400 lần) Ống thận bị giãn rộng Ảnh 40: Mô thận xuất huyết, Ảnh 41: Ống thận xuất huyết giãn rộng ống thận giãn ứ dịch phù (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 400 lần) (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 lần) Dịch phù ứ lại phế nang Ảnh 42: Dịch phù ứ lại phế nang (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 lần) Ảnh 43: Các phế nang sung huyết, xâm nhập nhiều tế bào viêm (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 400 lần) Các nang lymphô tăng sinh Khoảng gian nang xơ hóa Tế bào viêm Ảnh 44: Nang lym phơ tăng sinh (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 200 lần) Ảnh 45: Khoảng gian nang xơ hóa, xâm nhập tế bào viêm (Tiêu nhuộm HE, độ phóng đại 400 lần) VI ỨNG DỤNG KIT CATT TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TMT Ảnh 46: Ứng dụng kit CATT chẩn đoán bệnh TMT cho trâu, bò VII ỨNG DỤNG KIT ELISA TRONG CHẨN ĐỐN BỆNH TMT Dụng cụ, hóa chất sử dụng với kit ELISA Pha loãng mẫu huyết Đập đĩa ELISA Phủ huyết vào giếng Kết phản ứng ELISA Ảnh 47: Ứng dụng kit ELISA chẩn đốn bệnh TMT cho trâu, bị VIII KHẢ NĂNG MẪN CẢM CỦA T EVANSI VỚI MỘT SỐ LOẠI THUỐC Ảnh 48: Thí nghiệm khả kháng thuốc T evansi chuột bạch gây nhiễm Các thuốc sử dụng phác đồ Các thuốc sử dụng phác đồ Ảnh 49: Các thuốc sử dụng ba phác đồ điều trị bệnh TMT cho trâu, bò Các thuốc sử dụng phác đồ PHỤ LỤC Kết giải trình tự gen Rotat 1.2 T evansi phân lồi dựa trình tự gen Rotat 1.2 mã hóa kháng nguyên Trypanosoma evansi Kết trình tự gen Rotat 1.2 T evansi Trypanosoma evansi RoTat 1.2 gene for variable surface glycoprotein, (LS01) Length=758 Score = 1400 bits (758), Expect = 0.0 Identities = 758/758 (100%), Gaps = 0/758 (0%) Strand=Plus/Plus Query Sbjct Query 61 Sbjct 61 Query 121 Sbjct 121 Query 181 Sbjct 181 Query 241 Sbjct 241 Query 301 Sbjct 301 Query 361 Sbjct 361 Query 421 Sbjct 421 Query 481 Sbjct 481 Query 541 Sbjct 541 Query 601 Sbjct 601 Query 661 Sbjct 661 Query 721 Sbjct 721 ACGGAATTTGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGCAGAATTTTCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGGAATTTGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGCAGAATTTTCC 60 AATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAACACACGCAGCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAACACACGCAGCA 120 60 120 CTAATCAATCTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAGCTCACAGAAGAAACCCTT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTAATCAATCTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAGCTCACAGAAGAAACCCTT 180 AAGACTTTAGCAGACGACGCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGAATGCGCACGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGACTTTAGCAGACGACGCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGAATGCGCACGA 240 ACAAGCAACAAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAACCGAAAAATAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACAAGCAACAAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAACCGAAAAATAT 300 TTTGGCAAGGACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTaaaaaaaGAGGAGATA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTGGCAAGGACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTAAAAAAAGAGGAGATA 360 GAAGGAACAGAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAACTCGATCGAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAAGGAACAGAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAACTCGATCGAC 180 240 300 360 420 420 AAGCTGCAACAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAATAGAAAAGTTa |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGCTGCAACAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAATAGAAAAGTTA 480 aaaaaaGAAGTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGcaaaaaacaaagcaagcacaaaa |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAAAAAGAAGTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGCAAAAAACAAAGCAAGCACAAAA 540 gttactgaaacaaacgaaacttgcgaaaagaaagAGGTAGATAAATGCGAGAAGCCATGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTTACTGAAACAAACGAAACTTGCGAAAAGAAAGAGGTAGATAAATGCGAGAAGCCATGC 600 AAGGTTGTCGAAGCAAATGGTGCTAAAAAGTGCACATTGGACAAGGATGAGGCCAAAAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGGTTGTCGAAGCAAATGGTGCTAAAAAGTGCACATTGGACAAGGATGAGGCCAAAAAA 660 TTAGAAGAAAAGACAGATGGTAAAACAAACACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTAGAAGAAAAGACAGATGGTAAAACAAACACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAA 720 GCTTCCCCTCTTTTTCTTGCGGTTTTGCTGAATTCGTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTTCCCCTCTTTTTCTTGCGGTTTTGCTGAATTCGTA 758 758 480 540 600 660 720 Trypanosoma evansi RoTat 1.2 gene for variable surface glycoprotein, (HB01) Length=1432 Score = 1319 bits (714), Expect = 0.0 Identities = 728/735 (99%), Gaps = 0/735 (0%) Strand=Plus/Plus Query 10 Sbjct 698 Query 70 Sbjct 758 Query 130 Sbjct 818 Query 190 Sbjct 878 Query 250 Sbjct 938 Query 310 Sbjct 998 Query 370 Sbjct 1058 Query 430 Sbjct 1118 Query 490 Sbjct 1178 Query 550 Sbjct 1238 Query 610 Sbjct 1298 Query 670 Sbjct 1358 Query 730 Sbjct 1418 GGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGCAGAATTTTCCAATAATTTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGCAGAATTTTCCAATAATTTC 69 GGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAACACACGCAGCACTAATCAAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAACACACGCAGCACTAATCAAT 129 CTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAGCTCACAGAAGAAACCCTTAAGACTTTA |||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||| CTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAACTCACAGAAGAAACCCTTAAGACTTTA 189 GCAGACGACGCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGAATGCGCACGAACAAGCAAC ||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCAGACGACCCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGAATGCGCACGAACAAGCAAC 249 AAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAACCGAAAAATATTTTGGCAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAACCGAAAAATATTTTGGCAAG 757 817 877 937 309 997 GACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTaaaaaaaGAGGAGATAGAAGGAACA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTAAAAAAAGAGGAGATAGAAGGAACA 369 GAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAACTCGATCGACAAGCTGCAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||| GAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAACTCGATCGACAAGTTGCAA 429 CAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAATAGAAAAGTTaaaaaaaGAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAATAGAAAAGTTAAAAAAAGAA 489 GTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGcaaaaaacaaagcaagcacaaaagttactgaa |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGCAAAAAACAAAGCAAGCACAAAAGTTACTGAA 549 acaaacgaaacttgcgaaaagaaagAGGTAGATAAATGCGAGAAGCCATGCAAGGTTGTC ||| | |||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACAGATGAAACTTGCGAAAAAAAAGAGGTAGATAAATGCGAGAAGCCATGCAAGGTTGTC 1057 1117 1177 1237 609 1297 GAAGCAAATGGTGCTAAAAAGTGCACATTGGACAAGGATGAGGCCAAAAAATTAGAAGAA ||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GAAGCGAATGGTGCTAAAAAGTGCACATTGGACAAGGATGAGGCCAAAAAATTAGAAGAA 669 AAGACAGATGGTAAAACAAACACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAAGCTTCCCCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGACAGATGGTAAAACAAACACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAAGCTTCCCCT 729 CTTTTTCTTGCGGTT ||||||||||||||| CTTTTTCTTGCGGTT 744 1432 1357 1417 Trypanosoma evansi RoTat 1.2 gene for variable surface glycoprotein, (LC01) Length=1637 Score = 3024 bits (1637), Expect = 0.0 Identities = 1637/1637 (100%), Gaps = 0/1637 (0%) Strand=Plus/Plus Query Sbjct Query 61 Sbjct 61 Query 121 Sbjct 121 Query 181 Sbjct 181 Query 241 Sbjct 241 Query 301 Sbjct 301 Query 361 Sbjct 361 Query 421 Sbjct 421 Query 481 Sbjct 481 Query 541 Sbjct 541 Query 601 Sbjct 601 Query 661 Sbjct 661 Query 721 Sbjct 721 Query 781 Sbjct 781 TAGAACAGTTTCTGTACTATATTGATTACCCCTGTTTTCAGCGCTTCTAGAGACGAGCTG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAGAACAGTTTCTGTACTATATTGATTACCCCTGTTTTCAGCGCTTCTAGAGACGAGCTG 60 GACTTTTCTGCGTCTGTGCGACATAACGCAAACCACAGGAAACATGCAAACCAAGGCGCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GACTTTTCTGCGTCTGTGCGACATAACGCAAACCACAGGAAACATGCAAACCAAGGCGCT 120 CGTTGGCGTACTCTTATTTGTACTGTATCGGAGCACAACGGATGCCGCCAATGTAGCTCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGTTGGCGTACTCTTATTTGTACTGTATCGGAGCACAACGGATGCCGCCAATGTAGCTCT 180 TAAAGGCAACGTCTGGAAGCCATTGTGCGAACTCGCGGCAGCGACCAGGAACGGGCCAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAAAGGCAACGTCTGGAAGCCATTGTGCGAACTCGCGGCAGCGACCAGGAACGGGCCAAG 240 CCACGGCACGGCGCACTTCGCAGCGATCGAAAATAGCGTCGAAACGTACACTAAGTTAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCACGGCACGGCGCACTTCGCAGCGATCGAAAATAGCGTCGAAACGTACACTAAGTTAAA 300 ACTAAAGCTCTTGATTTACGCGGCGGCCAAAGGCAGCACCACCGAAGCAAGCGCAGCAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACTAAAGCTCTTGATTTACGCGGCGGCCAAAGGCAGCACCACCGAAGCAAGCGCAGCAAG 360 60 120 180 240 300 360 AGGGTTAGCAGCGGCCGCAGATAGACACATACGAGCAGCGGCCACCACGGCGAAAGACAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGGGTTAGCAGCGGCCGCAGATAGACACATACGAGCAGCGGCCACCACGGCGAAAGACAA 420 AAGCAGGGTAATTCTGCCCGCAGTTGCCTATGGCGGCGAAGTCGCAGGGGCGATTTCATC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGCAGGGTAATTCTGCCCGCAGTTGCCTATGGCGGCGAAGTCGCAGGGGCGATTTCATC 480 GGCGCTAAAATTTCTAAAGCACGCGGTTGGCAACAGCAAGTTTTGTGTGGGCAAAGCCGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGCGCTAAAATTTCTAAAGCACGCGGTTGGCAACAGCAAGTTTTGTGTGGGCAAAGCCGA 540 CGGCACAAATGCCGACGGTAACAACGAAATCGACGCGCTAGGGTGCGGCGAAGCCAACTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGGCACAAATGCCGACGGTAACAACGAAATCGACGCGCTAGGGTGCGGCGAAGCCAACTA 600 TGACACCTCGGCCCCAGGAGACAGCTACCTAGAGGGCGACATAAGCGCCGATGGCTTCAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGACACCTCGGCCCCAGGAGACAGCTACCTAGAGGGCGACATAAGCGCCGATGGCTTCAC 660 420 480 540 600 660 AAAACTAACAGCCGTTGCAGCGGGCAATGGACATGTAGGAAGCAACACCTGCGGGGTGTT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAAACTAACAGCCGTTGCAGCGGGCAATGGACATGTAGGAAGCAACACCTGCGGGGTGTT 720 TAAAGCAATAACCGGCAACGACGGCGAGGCCGGCGGGATCAAAATCGCGACCAGCAACAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TAAAGCAATAACCGGCAACGACGGCGAGGCCGGCGGGATCAAAATCGCGACCAGCAACAT 780 CAAGGTGCACCTCGCACACGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAAGGTGCACCTCGCACACGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAGAACGAGC 840 720 780 840 Query 841 Sbjct 841 Query 901 Sbjct 901 Query 961 Sbjct 961 Query 1021 Sbjct 1021 Query 1081 Sbjct 1081 Query 1141 Sbjct 1141 Query 1201 Sbjct 1201 Query 1261 Sbjct 1261 Query 1321 Sbjct 1321 Query 1381 Sbjct 1381 Query 1441 Sbjct 1441 Query 1501 Sbjct 1501 Query 1561 Sbjct 1561 Query 1621 Sbjct 1621 AGAATTTTCCAATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGAATTTTCCAATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTATTTAGGCCGAAC 900 ACACGCAGCACTAATCAATCTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAACTCACAGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACACGCAGCACTAATCAATCTGAAGAGGTTGGAAATGGAGAAGGTACCGGAACTCACAGA 960 AGAAACCCTTAAGACTTTAGCAGACGACCCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGAAACCCTTAAGACTTTAGCAGACGACCCGGCCGCAACGGCAACCCTAAACGTTGAGGA 1020 ATGCGCACGAACAAGCAACAAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ATGCGCACGAACAAGCAACAAGAAGATAACAACAACAGAACCACCGAAACCGCCCATAAC 900 960 1020 1080 1080 CGAAAAATATTTTGGCAAGGACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTaaaaaa |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CGAAAAATATTTTGGCAAGGACAAGTCTAAAATCAAGGAGTTGTGGAACAATTTAAAAAA 1140 aGAGGAGATAGAAGGAACAGAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGAGGAGATAGAAGGAACAGAAGATGACACAACAAAGAAAGTAGCGCTAGAAACCGTCAA 1200 CTCGATCGACAAGTTGCAACAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTCGATCGACAAGTTGCAACAGGCATTGGAGTTTTACACAGCGCGAGCCGCTTACACAAT 1260 AGAAAAGTTaaaaaaaGAAGTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGCAAAAAACAAAGC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGAAAAGTTAAAAAAAGAAGTAGATAAGTTGCAAGCAGAATCAGATGCAAAAAACAAAGC 1320 AAGCACAAAAGTTACTGAAACAGATGAAACTTGCGaaaaaaaaGGAACAGGAGCTGAATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGCACAAAAGTTACTGAAACAGATGAAACTTGCGAAAAAAAAGGAACAGGAGCTGAATG 1140 1200 1260 1320 1380 1380 CAAAGATGGTTGTAAATTGACCGGCGTTGTCGACAATAAAAAGTGCGTAGTGGATCCGGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAAAGATGGTTGTAAATTGACCGGCGTTGTCGACAATAAAAAGTGCGTAGTGGATCCGGA 1440 TTTTGTCAAAAAGGAAGTAGAGGGAGTTAAAGCGGAAAATGATGGAAAAACAACCACAAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTTGTCAAAAAGGAAGTAGAGGGAGTTAAAGCGGAAAATGATGGAAAAACAACCACAAA 1500 CACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAAGCTTCCCCTctttttcttgcggttttgct |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CACCACAGGAAGCAATTCTCTTCTCATCAAAGCTTCCCCTCTTTTTCTTGCGGTTTTGCT 1560 tttttaagtttttcccctctttttcttcctttAAAATTCTTGCTACTTGAAAAACTTTCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTTTAAGTTTTTCCCCTCTTTTTCTTCCTTTAAAATTCTTGCTACTTGAAAAACTTTCT 1620 GATATATTTTAACACCT ||||||||||||||||| GATATATTTTAACACCT 1637 1637 1440 1500 1560 1620 T.evansi RoTat 1.2 glycoprotein,(TN01) gene for variable surface Length=475 Score = 878 bits (475), Expect = 0.0 Identities = 475/475 (100%), Gaps = 0/475 (0%) Strand=Plus/Plus Query 414 Sbjct Query 474 Sbjct 61 Query 534 Sbjct 121 Query 594 Sbjct 181 Query 654 Sbjct 241 Query 714 Sbjct 301 Query 774 Sbjct 361 Query 834 Sbjct 421 AAGACAAAAGCAGGGTAATTCTGCCCGCAGTTGCCTATGGCGGCGAAGTCGCAGGGGCGA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGACAAAAGCAGGGTAATTCTGCCCGCAGTTGCCTATGGCGGCGAAGTCGCAGGGGCGA 473 TTTCATCGGCGCTAAAATTTCTAAAGCACGCGGTTGGCAACAGCAAGTTTTGTGTGGGCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTTCATCGGCGCTAAAATTTCTAAAGCACGCGGTTGGCAACAGCAAGTTTTGTGTGGGCA 533 AAGCCGACGGCACAAATGCCGACGGTAACAACGAAATCGACGCGCTAGGGTGCGGCGAAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AAGCCGACGGCACAAATGCCGACGGTAACAACGAAATCGACGCGCTAGGGTGCGGCGAAG 593 CCAACTATGACACCTCGGCCCCAGGAGACAGCTACCTAGAGGGCGACATAAGCGCCGATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCAACTATGACACCTCGGCCCCAGGAGACAGCTACCTAGAGGGCGACATAAGCGCCGATG 60 120 180 653 240 GCTTCACAAAACTAACAGCCGTTGCAGCGGGCAATGGACATGTAGGAAGCAACACCTGCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTTCACAAAACTAACAGCCGTTGCAGCGGGCAATGGACATGTAGGAAGCAACACCTGCG 713 GGGTGTTTAAAGCAATAACCGGCAACGACGGCGAGGCCGGCGGGATCAAAATCGCGACCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGGTGTTTAAAGCAATAACCGGCAACGACGGCGAGGCCGGCGGGATCAAAATCGCGACCA 773 GCAACATCAAGGTGCACCTCGCACACGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCAACATCAAGGTGCACCTCGCACACGGCCTAATCGAAGGCAAAGTTGACGACCAGCCAG 833 AACGAGCAGAATTTTCCAATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTA ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AACGAGCAGAATTTTCCAATAATTTCGGACAAGGAAAAGCACACCACACTGATTA 300 360 420 888 475 Cây phân loài dựa trình tự gen Rotat 1.2 mã hóa kháng ngun Trypanosoma evansi PHỤ LỤC Diễn biến thân nhiệt trâu gây nhiễm gây nhiễm tiên mao trùng đối chứng Lô gây nhiễm Lô gây nhiễm Lô đỗi chứng Thời gian Thời gian Thời gian theo dõi Trâu Trâu theo dõi Trâu Trâu Trâu theo dõi Trâu Trâu Trâu sau gây sau gây sau gây 0 0 0 0 nhiễm ( C) ( C) nhiễm ( C) ( C) ( C) nhiễm ( C) ( C) ( C) (ngày) (ngày) (ngày) - (X) 38.1 38.3 38.3 38.5 38.3 38.2 38.4 38.4 37.9 38.4 38.4 38.5 38.5 38.3 38.3 38.4 38.3 38.6 38.5 38.5 38.2 37.9 38.2 38.2 38.5 39.5 38.4 39.7 38.5 38.4 38.2 38.4 39.4 39.2 39.5 39.3 39.3 38.4 38.3 37.8 10 39.6 38.1 38.2 38.3 39.4 38.5 38.2 38.4 11 38.3 37.8 38.3 39.3 39.0 38.1 37.8 38.4 12 38.2 37.7 37.8 39.3 38.7 38.4 38.1 38.2 13 39.6 38.4 37.8 38.2 38.5 38.3 38.3 38.4 14 39.5 39.1 10 39.3 38.1 38.5 10 38.2 38.4 38.3 15 38.4 38.6 11 38.5 38.2 38.4 11 38.3 38.2 38.0 16 38.3 38.4 12 38.5 38.1 38.9 12 38.3 38.4 38.2 17 38.2 38.4 13 38.5 38.0 38.3 13 38.2 38.1 38.0 18 37.8 38.6 14 38.3 38.8 38.9 14 37.8 38.4 38.1 19 38.5 38.7 15 38.5 38.5 38.5 15 38.3 38.3 38.3 20 38.3 37.7 16 38.7 38.0 38.3 16 38.5 38.0 38.3 21 38.3 38.4 17 38.9 38.5 39.0 17 38.3 38.0 38.2 22 38.7 38.5 18 38.5 38.4 38.6 18 38.4 37.9 37.9 23 38.3 38.5 19 38.5 38.4 38.5 19 38.3 38.1 38.1 24 38.5 37.7 20 38.8 37.8 38.4 20 38.4 37.9 38.3 25 38.5 37.6 21 38.3 37.9 37.7 21 38.1 38.4 38.3 ... VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐỖ THỊ VÂN GIANG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ, ỨNG DỤNG KIT CHẨN ĐOÁN BỆNH TIÊN MAO TRÙNG DO TRYPANOSOMA EVANSI GÂY RA Ở TRÂU, BÒ MỘT SỐ TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC VÀ... tễ, ứng dụng kit chẩn đoán bệnh tiên mao trùng Trypanosoma evansi gây trâu, bò số tỉnh miền núi phía Bắc đề xuất biện pháp phòng trị? ?? 3 Mục tiêu đề tài Xác định loài Trypanosoma gây bệnh tiên mao. .. GIAN NGHIÊN CỨU .47 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 47 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tiên mao trùng trâu, bò tỉnh miền núi phía Bắc .47 2.3.2 Khả gây bệnh T evansi số