BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NƠNG THƠN CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC 06/06-10 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THỨC ĂN CÔNG NGHIỆP NUÔI THƯƠNG PHẨM CÁ CHẼM (Lates calcarifer), CÁ GIÒ (Rachycentron canadum) PHỤC VỤ XUẤT KHẨU MÃ SỐ: KC.06.15/06-10 Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sản2 Chủ nhiệm đề tài: TS Vũ Anh Tuấn 8713 Tp Hồ Chí Minh 2011 BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THƠN CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC 06/06-10 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THỨC ĂN CÔNG NGHIỆP NUÔI THƯƠNG PHẨM CÁ CHẼM (Lates calcarifer), CÁ GIÒ (Rachycentron canadum) PHỤC VỤ XUẤT KHẨU MÃ SỐ: KC.06.15/06-10 Chủ nhiệm đề tài Viện Nghiên cứu NTTS TS Vũ Anh Tuấn Ban chủ nhiệm chương trình KC06/06-10 KT Chủ nhiệm Chương trình Phó Chủ nhiệm Bộ Khoa học Cơng nghệ Văn phịng Các Chương trình KT Giám Đốc Phó Giám đốc TS Phạm Hữu Giục TS Nguyễn Thiện Thành Tp Hồ Chí Minh 2011 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan báo cáo cơng trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu sản xuất thức ăn công nghiệp ni thương phẩm cá Chẽm (Lates calcarifer), cá Giị (Rachycentron canadum) phục vụ xuất khẩu, mã số KC.06.15/06-10” Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sảnII chủ trì Bộ Khoa Học Công Nghệ quan chủ quản Các kết quả, số liệu nêu báo cáo trung thực báo cáo, chép có đồng ý chủ nhiệm đề tài quan chủ trì Chủ nhiệm đề tài TS Vũ Anh Tuấn LỜI CẢM ƠN Xin cảm ơn Ban chủ nhiệm chương trình KC.06/06-10 Văn phịng Các Chương Trình, đặc biệt Ts Nguyễn Thiện Thành, Ts Nguyễn Văn Thành, Ts Phạm Hữu Giục thường xuyên hướng dẫn, đôn đốc tạo điều kiện tốt để đề tài triển khai thành công Xin cảm ơn Ban lãnh đạo Cơ quan Chủ trì Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sản II, Phân viện Nghiên cứu Thủy sản Minh hải cử cán tham gia đề tài, cung cấp sở vật chất để thực đề tài Cảm ơn Lãnh đạo hai quan phối hợp thực đề tài Viện Nghiên cứu Thiết kế Chế tạo Máy Nông nghiệp Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Miền bắc tạo điều kiện tốt đề đề tài triển khai thành công PHẦN I PHẦN MỞ ĐẦU DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA ĐỀ TÀI Số Chức danh khoa học, TT học vị, họ tên Ts Vũ Anh Tuấn ThS Đoàn Văn Cao ThS Đỗ Văn Hải Tổ chức công tác Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 Viện Nghiên cứu Thiết kế Chế tạo Máy Nông nghiệp Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Miền bắc - Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy sản I Ks Bạch Thị Quỳnh Mai Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 Ks Lê Hữu Hiệp Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sản2 Ks Trần Quốc Bình Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 Ks Nguyễn Thúy An Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 Ks Nguyễn Đình Kỳ Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sản2 Ks Nguyễn Thành Trung Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 10 ThS Lê Văn Ninh 11 Ts Lê Đức Trung Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 12 Ks.Phạm Minh Ghi Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 13 Ks Nguyễn Đình Kỳ Viện Nghiên cứu Ni Trồng Thủy sản2 14 Ks Nguyễn Văn Giang Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản2 Viện Nghiên cứu Thiết kế Chế tạo Máy Nơng nghiệp -1- VIỆN NGHIÊN CỨU NI CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRỒNG THỦY SẢN II Độc lập - Tự - Hạnh phúc Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2011 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I THÔNG TIN CHUNG Tên đề tài Nghiên cứu sản xuất thức ăn công nghiệp nuôi thương phẩm cá Chẽm (Lates calcarifer), cá Giò (Rachycentron canadum) phục vụ xuất Mã số: KC06.15/06-10 Thuộc chương trình: Nghiên cứu, phát triển ứng dụng khoa học công nghệ tiên tiến sản xuất sản phẩm xuất chủ lực, KC 06/06-10 Chủ nhiệm đề tài Họ tên: Vũ Anh Tuấn Ngày, tháng, năm sinh: 1975 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Tiến Sỹ Dinh Dưỡng Nuôi Trồng Thủy Sản Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Chức vụ: Phân viện phó Phân Viện Nghiên Cứu Thủy Sản Minh Hải, Kiêm Trưởng trại Thực Nghiệm Thủy Sản Bạc Liêu Điện thoại: Tổ chức: 0780 3838 722 Mobile: 0989 575 087 Fax: 0780 3838 722 E-mail: tuan_v_a@yahoo.com.vn -2- Tên tổ chức công tác: Phân Viện Nghiên Cứu Thủy Sản Minh Hải Địa tổ chức: 21-24 Phan Ngọc Hiển, P6, Tp Cà Mau Địa nhà riêng: số Mạc Đĩnh Chi, P5, Tp Cà Mau, tỷnh Cà Mau Tổ chức chủ trì đề tài/dự án: Tên tổ chức chủ trì đề tài: Viện Nghiên Cứu Ni Trồng Thủy Sản II Điện thoại: (08)-8299592 Fax: (08)-8226807 E-mail: pkhtc@hcm.vn Website: www.vienthuysan2.com.vn Địa chỉ: 116 Nguyễn Đình Chiểu, Quận 1, Tp Hồ Chí Minh Họ tên thủ trưởng tổ chức: TS Nguyễn Văn Hảo Số tài khoản: 931.01.01.000.47 Kho bạc Nhà nước Quận 1, Tp Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Bộ Khoa Học Cơng Nghệ II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực đề tài/dự án: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 03 năm 2008 đến tháng 12 năm 2010 - Thực tế thực hiện: từ tháng 03 năm 2008 đến tháng 12 năm 2010 - Được gia hạn (nếu có): khơng Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 3.284 triệu đồng, đó: + Kính phí hỗ trợ từ SNKH: 3.284 triệu đồng + Kinh phí từ nguồn khác: triệu đồng -3- + Tỷ lệ kinh phí thu hồi dự án (nếu có): b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn SNKH: Theo kế hoạch Thực tế đạt Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) 2008 1.200 2008 421 2009 1.142 2009 754 2010 942 2010 952 2010 2010 1156 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Ghi (Số đề nghị toán) 421 754 952 1156 Số TT Đối với đề tài: ST T Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Thực tế đạt Tổng SNKH 816 816 Nguồn khác 2.008 2.008 90 Tổng SNKH Nguồn khác 816 816 2.050 2.050 90 88 88 20 20 20 20 350 3.284 350 3.284 0 310 310 3.284 3.284 Đơn vị tính: Triệu đồng Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: Số Số, thời gian ban TT hành văn Số 194/VPCT1 TCKT ngày 22/10/2007 Số 2475/QĐ2 BKHCN ngày Tên văn Thủ tục mua sắm tài sản đề tài dự án Ghi Công văn đến Thành lập Hội đồng Khoa học Quyết định Công nghệ cấp Nhà nước tư vấn tuyển -4- 26/10/2007 Số 253/QĐBKHCN ngày 21/2/2008 Số146/VTSII ngày 20 tháng 06 năm 2008 Số 113/VPCTHCTH ngày 9/6/2008 Số 184/VTS ngày 23/6/2008 Số 206/VPCTCTKC.06/06-10 ngày 28/8/2008 Số 300/VPCTTCKT ngày 24/10/2008 Số 17/2009/KC06-10 ngày 14/4/2009 Số 24/2009/VPCTCTKC.06-10 ngày 3/7/2009 Số 25/VPCCTCTKC.06/06-10 ngày 7/7/2009 Số 319/VPCTCTKC.06/06-10 ngày 3/8/2009 Số 337/VTS2 ngày 21/8/2009 Số 347/VPCT- 10 11 12 13 14 chọn tổ chức cá nhân chủ trì đề tài để thực kế hoạch năm 2008 thuộc Chương trình KHCN trọng điểm cấp nhà nước giai đoạn 20062010 Phê duyệt kinh phí đề tài cấp nhà nước bắt đầu thực năm 2008 thuộc chương trình “Nghiên cứu, phát triển ứng dụng cơng nghệ tiên tiến sản xuất sản phẩm xuất chủ lực” mã số KC06.15/06-10 Chỉ định thầu cung cấp bể composite phục vụ ương ni cá chẽm, cá giị cho đề tài KC06.15/06-10 Điều chỉnh số hạng mục kinh phí đề tài KC06.15/06-10 Quyết định Quyết định Công văn đến Kiến nghị số vấn đề thực đề tài KC06.15/06-10 Tham luận Hội thảo khoa học Nông nghiệp Công văn đến Công văn đến Xây dựng kế hoạch đấu thầu Công văn đến Báo cáo sơ kết đánh giá kết thực kỳ Công văn đến Thay đổi địa điểm VPCT.KC.06/0610 Công văn đến Kiểm tra định kỳ đề tài, dự án đợt năm 2009 Công văn đến Triển khai thực đề tài mã số KC.06.15/06-10 Công văn đến Triển khai đề tài KC.06.15/06-10 Công văn Đôn đốc đăng ký bảo hộ quyền Công văn -5- CTKC.06/06-10 ngày 26/8/2009 15 Số 215/VTSII ngày 3/11/2009 16 Số 2539/QĐBKHCN ngày 12/11/2009 17 Số 431/VPCTCTKC.06/06-10 ngày 23/11/2009 18 Số 231/VTSII ngày 25/11/2009 SHCN, quyền giống trồng đến Phê duyệt dự tốn chi tiết gói thầu Quyết định mua sắm vật tư sắt thép để chế tạo máy Phê duyệt kế hoạch đấu thầu mua sắm Quyết định tài sản thiết bị, vật tư nguyên vật liệu năm 2009 Kiểm tra định kỳ đề tài, dự án đợt Công văn đến Phê duyệt hồ sơ yêu cầu tiêu chuẩn Quyết định đánh giá hồ sơ đề xuất gói thầu “vật tư sắt thép” Xin cấp tiếp kinh phí cho đề tài Công văn 19 Số 520/VTS ngày 4/12/2009 20 Số 151/VPCTTĐ- Gia hạn thời gian tổ chức đấu thầu, THKH ngày thời gian nộp hồ sơ đề xuất gói thầu 25/3/2010 vật tư sắt thép đề tài KC06.15/0610 21 Số 157/VPCTTĐ- Xác nhận khối lượng sản phẩm đề THKH ngày tài 30/3/2010 22 Số 138/TBXét duyệt toán ngân sách năm VPCTTĐ ngày 2009 14/4/2010 23 Số 153/VTSII Đăng ký thông báo mời chào hàng ngày 15/4/2010 cạnh tranh với báo đấu thầu 24 Số 179/VTSII Đăng ký thông báo tiếp tục phát hành ngày 29/4/2010 hồ sơ yêu cầu gia hạn thời gian tiếp nhận hồ sơ đề xuất với báo đấu thầu 25 Số 222/VTSII Báo cáo tình hình tổ chức chào hàng ngày 24/5/2010 cạnh tranh gói thầu “vật tư sắt thép” 26 Số 225/VPCTTĐ- Tiến độ thực đề tài, dự án THKH ngày thuộc chương trình 29/4/2010 27 Số 267/VPCTTĐ- Triển khai thực đấu thầu đề THKH ngày tài KC06.15/06-10 26/5/2010 28 Số 19/VPCTTĐ- Tiến độ thực đề tài, dự án CTKC06/06-10 KC06.15/06-10 -6- Công văn đến Công văn đến Công văn đến Công văn Công văn Công văn Công văn đến Công văn đến Công văn đến Phụ Lục Phương pháp phân tích PHÂN TÍCH ENZYME PHYTASE Ngun tắc Phytic Axít + H2O Phytase> D-myo-inositol 1,2,4,5,6-PKP + Pi Các chữ viết tắt D-myo-inositol 1,2,4,5,6-PKP = D-myo-inositol 1,2,3,4,5-Pentakisphosphate Phytic Axít = Myo-Inositol Hexakis[dihydrogen phosphate] Pi = Inorganic Phosphate Điều kiện: T = 37 oC, pH 2.5, bước sóng: 400nm, Phương pháp: So màu Chuẩn bị dung dịch chuẩn A 200 mM Glycine Buffer, pH 2.8 at 37oC (Chuẩn bị 100 mL nước tách ion sử dụng Glycine, Hydrochloride, Sigma Prod No G-2879 Điều chỉnh pH 2.8 37 0C với M HCl M NaOH.) B 44.1 mM Phytic Axít Solution, pH 2.5 37 0C (Phytic Axít) (Chuẩn bị 10 ml thuốc thử A, sử dụng Phytic Axít, Magnesium-Potassium Salt, Sigma Prod No P-7660 Điều chỉnh pH 2.5 37 C với M HCL) C 5% (w/v) Ammonium Molybdate Solution (Amm Moly) (Chuẩn bị 100 mL nước tách ion sử dụng Molybdic Axít, Ammonium Tetrahydrate Salt, Sigma Prod No M-0878.) D N Sulfuric Axít Solution (H2SO4) (Chuẩn bị 100 mL nước tách ion sử dụng Sulfuric Axít, Sigma Prod No S-1526.) E Acetone (Dùng Acetone, ACS Reagent Grade, Aldrich Stock No 17,9124) 98 F Dung dịch thị màu (CRS) (Chuẩn bị 10 mL cách thêm 25 ml of Reagent C vói 25 ml Thuốc thử D and 50 ml thuốc thử E Chuẩn bị hỗn hợp lúc trước sử dụng) G 50 mM Potassium Phosphate Solution (P Std) (Chuẩn bị 100 mL nước tách ion sử dụng Potassium Phosphate, Monobasic, Anhydrous, Sigma Prod No P-5379) H Dung dịch Phytase Enzyme (Immediately before use, chuẩn bị dung dịch có chứa 0.5 - 2.0 units/ml of Phytase thuốc thử A để lạnh) Cách tiến hành Dùng pipette (loại nhỏ milliter) lấy dung dịch sau vào bình Mẫu kiểm tra Mẫu trắng 0.50 Thuốc thử B (Phytic Axít) để ổn định 37 0C Sau đó, thêm Thuốc thử H (Enzyme Solution) 0,025 -Thuốc thử A (Buffer) -0,025 o Trộn hỗn hợp cách đảo ngược ủ 37 C xác 30 phút Sau đó, thêm Thuốc thử F (CRS) Nước tách ion 4,00 0,025 4,00 0,025 Lắc Chuyển sang cuvet đọc bước sóng A400nm cho mẫu trắng mẫu kiểm tra với máy quang phổ So màu Lập đường cong chuẩn: Đường cong chuẩn thiết lập cách dùng pipette nhỏ lấy dung dịch đưa bình thích hợp: Std Nước tách ion 0.04 Thuốc thử G (P Std) 0.01 Thuốc thử B (Phytic 0,50 A í hỗn hợp ủ 37oC Lắc ) Thuốc thử F (CRS) 4,00 Std 0.03 0.02 0,50 Std 0.02 0.03 0,50 Std 0.01 0.04 0,50 Std 0.05 0,50 Mẫu trắng 0.05 0,50 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00 99 Lắc Chuyển sang cuvet đọc với máy quang phổ bước sóng 400nm cho mẫu trắng mẫu kiểm tra Tính tốn Đường cong chuẩn: ∆A400nm Chuẩn = A400nm chuẩn - A400nm mẫu trắng chuẩn Chuẩn bị đường cong chuẩn cách vẽ biểu đồ với điểm ∆A400nm ∆A400nm kiểm tra = A400nm kiểm tra - A400nm mẫu trắng Xác định µmoles phosphate giải phóng bắng cách dùng đường cong chuẩn (µmoles Phosphate giải phóng)(df) Units/ml enzyme = (30) (0.025) df = yếu tố pha lỗng 30 = thời gian phân tích đơn vị xác định 0,025 = thể tích enzyme sử dụng units/ml enzyme Units/mg solid = mg solid/ml enzyme Định nghĩa đơn vị: Một đơn vị giải phóng 1,0 µmole P vơ từ 4,2 x 10-2 M Mg·K phytate (P-7660) phút pH 2,5 37oC Nồng độ phân tích cuối cùng: Trong 0,525 ml hỗn hợp phản ứng, nồng độ cuối 200 mM glycine, 42 mM phytic axít 0,013 – 0,050 đơn vị phytase 100 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CHẤT LƯỢNG NƯỚC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NH3-N Phương pháp phân tích: Phenate (indophenol) – F.Koroleff, 1969 – 1970 A Chuẩn bị hóa chất − Nước cất − Dung dịch phenol: Cân 11g tinh thể phenol hòa tan với 100ml cồn 950 chứa bảo quản chai thủy tinh nâu − Dung dịch Natri nitroprusside: Hòa tan 1.0g Natri nitroprusside (Na2Fe(CN)5NO.2H2O) vào 200ml nước cất trữ chai nâu (Dung dịch ổn định tháng) − Dung dịch citrate kiềm: Hòa tan 100g natri citrate (C6H5Na3O7) 5g xút (NaOH) vào 500ml nước cất (Dung dịch ổn định lâu) − Dung dịch Natrihypochlorite NaOCL 1.5N (hoặc 5%): có bán sẵn (ổn định tuần) − Dung dịch oxy hóa: Trộn 100ml dung dịch citrate kiềm 25ml dung dịch Natrihypochlorite trữ chai đóng nắp chặt Chuẩn bị phân tích − Dung dịch chuẩn NH4CL 1000mg/l: Hòa tan 1.9079g NH4CL vào 500ml nước cất Dung dịch pha dãy chuẩn b Cách thực − Dùng ống đong cho 50ml mẫu vào erlen dung tích 250 ml − Dùng pipet thêm 2ml dung dịch phenol vào lắc − Dùng pipet thêm 2ml dung dịch Natri nitroprusside 5ml dung dịch oxy hóa, sau lần thêm phải lắc − Để mẫu yên nhiệt độ phòng (20 -270C) 1giờ tối (miệng bình cần đậy giấy bạc để tránh nhiễm amonia từ khơng khí) 101 − Đọc độ hấp thụ mẫu bước sóng 630nm, máy DR 2000 Lưu ý: Tiến hành song song mẫu trắng (nước cất + thuốc thử) mẫu chuẩn tương tự đo hấp thụ Các mẫu để màu khoảng thời gian cho màu bền Tính tốn nồng độ ammonia mẫu cách so sánh độ hấp thu mẫu với chuẩn PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NO2-N Phương pháp phân tích: Diazo hóa, trắc quang – Bendschneider Robinson, 1952 a Chuẩn bị hóa chất − Nước cất loại nitrite: thêm 1ml acid H2SO4 đậm đặc 0.2ml dung dịch MnSO4 (Hòa tan 36.4g MnSO4.H2O 100ml nước cất ) vào lít nước cất Tạo màu hồng với 3ml dung dịch KMnO4 (400mg/l nước cất) Cất lại nước thiết bị thủy tinh - Sulfanilamide:hòa tan 5g sulfanilamide vào 300ml nước cất 5ml HCL đậm đặc Khuấy đều, sau thêm nước cất thành 500ml Dung dịch sử dụng vài tháng - N-(-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride:hòa tan 0.5g amine 500ml nước cất Dung dịch bảo quản trai nâu tránh ánh sáng Dung dịch cần thay màu nâu - Dung dịch chuẩn nitrite 100mg/l: sấy NaNO2 1000C Hịa tan 0.4925g vào lít nước cất Dung dịch có nồng độ 100mg/l cần trữ trai nâu có thêm 1ml chloroform dể bảo quản Dung dịch trữ vài tháng Dung dịch để pha dãy dung dịch chuẩn - Lưu ý: NaNO2 khơng phải hồn tồn tinh, cần chuẩn lại lượng NO2- dung dịch vừa pha Thêm lượng dư dung dịch chuẩn KMnO4 0.01M, làm phai màu KMnO4 lượng biết trước chất khử FSA 0.05M môi trường acid (H2SO4 2M) chuẩn ngược lại dung dịch chuẩn KMnO4 102 b Cách thực - Lọc mẫu giấy Whatman Đong 50ml mẫu qua lọc vào becher 100ml - Thêm 1ml dung dịch Sulfanilamide, lắc đều, để yên phút - Thêm 1ml dung dịch NED dihydrochloride, lắc đều, để yên 10 phút - Chuẩn bị tối thiểu 3mẩu chuẩn từ dung dịch chuẩn mẫu trắng (mẫu qua lọc thuốc thử) với quy trình tương tự - Tiến hành đo độ hấp thu mẫu, chuẩn máy quang phổ cuvet 1cm, chương trình 371, bước sóng 540nm cài đặt độ hấp thu zero mẫu trắng - Tính tốn nồng độ nitrite mẫu cách so sánh độ hấp thu mẫu chuẩn - Lưu ý: Khi tiến hành đo quang cần lưu ý đồng thời gian từ lúc cho thuốc thử đến lúc đo mẫu chuẩn PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PO43Phương pháp phân tích: Tạo phức với acid ascorbic, trắc quang – Murphy Riley, 1962 a Chuẩn bị hóa chất - Dung dịch amonium molybdate: Hòa tan 15g amonium paramolybdate (NH4)6Mo7O24.4H2O 500ml nước cất Dung dịch trữ chai nhựa, nơi tránh ánh sáng Dung dịch ổn định - Dung dịch acid sulfuric khoảng 5N: Thêm 140ml acid H2SO4 đặc vào 900ml nước cất Trữ lạnh chai thủy tinh - Dung dịch acid ascorbic: Hòa tan 27g acid ascorbic vào 500ml nước cất Trữ dung dịch chai nhựa, đông lạnh, dung dịch ổn định vài tháng - Dung dịch potassium antimonyl tartrate: Hòa tan 0.34g potassium antimonyl tartrate (tartar emetic) 250ml nước, làm ấm cần.Trữ chai thủy tinh, dung dịch ổn định vài tháng 103 - Hỗn hợp thuốc thử: Trộn 100ml amonium molybdate, 250ml acid sulfuric, 100ml acid ascorbic 50ml tartar emetic với Chỉ trộn trước phân tích, khơng trữ, lượng dùng đủ cho 50 mẫu - Lưu ý: Tất thuốc thử phải để nhiệt độ phòng trước trộn Pha theo thứ tự Nếu hỗn hợp hóa đục, lắc đến khơng đục Dung dịch chuẩn phosphate 50mg/l: Hòa tan 0.2195g KH2PO4 1000ml nước cất Dung dịch dùng để pha dung dịch 5mg/l b Cách thực − Chuẩn bi dụng cụ thủy tinh: Rửa tất dụng cụ thủy tinh dung dịch HCL (1:1), tráng vài lần nước cất khơng nhiễm phosphate − Lọc mẫu: dùng bình lọc milipore lọc khoảng 150ml mẫu Rót 25ml mẫu qua lọc vào erlen − Xác định phosphate: Thêm giọt thị phenophathalein vào mẫu Nếu màu đỏ xuất hiện, thêm giọt H2SO4 màu đỏ biến (thường giọt) Thêm 4ml hỗn hợp thuốc thử lắc điều Để mẫu yên 10 phút không 30 phút, dùng máy quang phổ đo hấp thu cuvet cm bước sống 880nm, chương trình 490 Chuẩn bị mẫu trắng: nước cất khơng có thuốc thử Ngồi cần chuẩn bị mẫu trắng dãy chuẩn bao gồm nước cất thuốc thử − Tính tốn nồng độ mẫu cách so sánh độ hấp thu mẫu chuẩn 104 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH H2S Phương pháp phân tích: Chuẩn độ - Chuẩn dung dịch Na2S2O3: Hòa tan 2g KI vào bình erlen có chứa 100ml nước cất Thêm 10ml acid H2SO4 10% vào bình Thêm 10ml K2Cr2O7 0.025N vào bình, để bình tối phút Pha lỗng đền 250ml nước cất Chuẩn Na2S2O3 đến nhạt màu rơm nhạt Thêm giọt thị hồ tinh bột chuẩn đến màu xanh Tính nồng độ Na2S2O3 theo cơng thức sau: N1*V1=N2*V2 Trong N1: Nồng độ K2Cr2O7 (meq/ml) V1: Thể tích K2Cr2O7 (ml) N2: Nồng độ Na2S2O3(meq/ml) V2: Thể tích Na2S2O3(ml) a Chuẩn bị hóa chất − CdCl2 2%: Cân 2g CdCl2 hịa tan vào nước cất thành 1lít − HCL đậm đặc − Dung dịch iod 0.1N: Cân 80g KI hịa tan với 50ml nước cất sau cho 12.7g I2 lắc cho tan hoàn toàn định mức thành 1lít Sau pha nồng độ 0.02N − Na2S2O3 0.02N: Dung dịch có nồng độ xấp xỉ 0.025N, hịa tan 6.3g Na2S2O3.5H2O vào nước cất đun sôi để nguội, pha loãng đến 1000ml.thêm giọt Chloroform để bảo quản Phải chuẩn lại để xác định nồng độ xác chuẩn lại sau vài ngày, trữ chai tối Chuyển dung dịch dung dịch có nồng độ Na2S2O3 0.02N 105 − Hồ tinh bột: Hòa tan 2g tinh bột vào 100ml nước cất, đun nóng, khuấy đến suốt thêm 0.5ml formalin bảo quản b Cách thực − Lấy đầy lọ mẫu nước cho vào 1ml CdCL2 2% đậy nút lắc đều, để yên phút, phân tích đêm phịng xét nghiệm phân tích − Hút 50ml nước mẫu cho vào erlen đem phân tích − Cho thêm 10ml dung dịch iod − Cho tiếp 5ml HCL lắc − Chuẩn độ đến màu vàng rơm nhỏ tiếp 1-3giọt hồ tinh bột chuẩn đến màu − Chuẩn độ Na2S2O3 0.021N − Tiến hành song song mẫu trắng nước cất − Kết quả: mg/l H2S = (V1-Vo)*N*1.7*1000/V Trong đó: V0 thể tích chuẩn độ mẫu trắng V1 thể tích chuẩn độ mẫu thực V thể tích mẫu đêm phân tích N nồng độ đương lượng chuẩn Phương pháp phân tích COD Cách thực Hút 50 mL mẫu cho vào erlen 250 mL, 50 mL mẫu trắng bắng nước cất Cho vào erlen mL NaOH 20% lắc Thêm vào erlen 10 mL KMnO4 0,01N lắc Tiến hành mẫu trắng tương tự mẫu thực 106 Đun bếp cách thủy 30’ kể từ lúc bếp nóng, sau để nguội nhiệt độ phòng Thêm vào mẫu 2mL H2SO4 1:3 Chuẩn độ Na3S2O3 0,01N Thêm 1,5-2mL dd KI 5% chuẩn tới vàng rơm Cho vào giọt hồ tinh bốt 1% chuẩn độ tiếp đến dd suốt Tính kết (V0-V1)*8*1000*N Mg/L COD = Vm Mẫu sau đun cất màu mẫu ô nhiễm phải pha lỗng V0 Thể tích Na2S2O3 chuẩn độ mẫu trắng V1 Thể tích Na2S2O3 chuẩn độ mẫu thực VmThể tích mẫu mang phân tích N Nồng độ Na2S2O3 chuẩn 0,01 N Chuẩn bị hóa chất KmnO4 0,1M: cân 3,161 g hịa tan với nước cất đun sơi để nguội bình định mức 1L Bảo quản chai nâu nút mài, dd ổn định sau ngày Dùng dd để pha dd có nồng độ 0,01M Na2S2O3 5H2O 0,1 M: cân 24,82 g hòa tan với nước cất đun sôi để nguội, cho thêm vào dd 0,1 g Na2CO3 viên NaOH lắc Bảo quản chai nâu nút mài KI 5%: cân 50 g hòa tan với nước cất thành 1L dd NaOH 20%: cân 20 g NaOH + nước cất thành 100 mL dd Chỉ thị hồ tinh bột 1%: cân g bột mì hịa tan với 100 mL nước cất đun sôi dd khoảng 3-5 phút cho thêm vào giọt formalin H2SO4 1:3: 100 mL axit + 300 mL nước cất 107 Phương pháp phân tích BOD Phương pháp phân tích: BOD5- Young, J.C; G.N Mc Dermott & D Jenkins, 1981 Chuẩn bị dung dịch pha loãng: nước pha loãng chuẩn bị chai lọ rộng miệng cách thổi khơng khí 200C vào nước cất lắc bão hòa oxy (>8 mg/L) Sau thêm mL dung dịch đệm phosphate, 1mL dung dịch magie sulphate, ml canxi clorua, mL sắt(III) clorua, định mức đến 1L nước cất Trung hòa mẫu nước đến pH=7 H2SO4 1N NaOH 1N Pha loãng mẫu nườc trước xác định nước hiếu khí chuẩn bị trước theo mức sau: 0,1-1% dòng chảy mạnh 1-5% mẫu nước cống chứa để lắng 5-25% nước bị oxy hóa 25-100% mẫu nước sông bị ô nhiễm Khi pha lỗng cần tránh khơng để oxy theo Khi pha loãng xong, cho mẫu vào chai để xác định BOD, đóng kín nút chai, chai dùng để ủ ngày nơi tối nhiệt độ 200C, chai dùng để xác định DO ban đầu mẫu pha lỗng Tính kết quả: Lượng BOD tính theo mgO2/mL D1-D2 BOD5 = P D1 lượng oxy hòa tan dung dịch mẫu pha lỗng sau 15’ D2 lượng oxy hịa tan mẫu sau ngày 108 Thể tích mẫu nước đem phân tích P (hệ số pha lỗng) = Thể tích mẫu nước + thể tích mẫu nước pha loãng Trong số trường hợp cần phải bổ sung thêm vi sinh vật vào nước pha loãng để đảm bảo đủ mật độ vi sinh vật trình phân hủy Khi tính theo cơng thức: (D1-D2) - (B1-B2)*F BOD5 = P B1 lượng oxy hòa tan nước trước pha lỗng có cấy vi sinh trước ủ (mg/L) B2 lượng oxy hòa tan nước sau pha lỗng có cấy vi sinh trước ủ (mg/L) F thể tích chất lỏng bổ sung vi khuẩn mẫu đối chứng %(hay mL) chất lỏng bổ sung vi khuẩn D1 F= %(hay mL) chất lỏng bổ sung vi khuẩn B1 Đối với trường hợp ủ mẩu tủ ủ có đầu lọc BOD khơng cần xác định DO ban đầu Kết hiển thị sau ngày ủ Các bước tiến hành Trữ mẫu: ∆t < 24 giờ: trữ mẫu 40C, báo cáo kết kèm thời gian trữ điều kiện trữ ∆t > 24 giờ: loại bỏ mẫu Hóa chất : Dung dịch đệm phosphate: Hòa tan 8,5 g KH2PO4, 21,75 g K2HPO4, 33,4 g Na2HPO4.5H2O 1,7 g NH4Cl khoảng 500 ml nước cất pha lỗng đến 1L Dung dịch có pH=7,2 109 MgSO4: hòan tan 22,5 g nước cất, định mức đến 1L CaCl2: hòan tan 27,5 g nước cất định mức đến 1L FeCl3: hòan tan 0,25 g nước cất, định mức đến 1L NaOH: 1N: hòan tan 40 g nước cất, định mức đến 1L H2SO4 1M: cho từ từ 28 ml đậm đặc vào nước cất định mức đến 1L Kết phân tích ANOVA yếu tố chất lượng nước A NOVA CODTP BODTP Between Groups Within Groups Tot al Between Groups Within Groups Tot al Sum of Squares 750 24 700 26 450 822 743 565 df Mean Square 875 117 F 213 Sig .814 411 457 8 899 456 ANOVA H2SGG H2SGT H2SCG H2SCT H2STP NH3GG Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 0,0008 0,0018 0,0026 0,0035 0,0026 0,0061 0,0008 0,0427 0,0435 0,0442 0,0049 0,0491 0,0118 0,0094 0,0212 0,0015 0,0009 0,0025 110 df 8 8 8 Mean Square 0,0004 0,0003 F 1,2711 Sig 0,3465 0,0017 0,0004 3,9974 0,0788 0,0004 0,0071 0,0544 0,9475 0,0221 0,0008 27,0639 0,0010 0,0059 0,0016 3,7570 0,0875 0,0008 0,0002 4,8790 0,0552 NH3GT NH3CG NH3CT NH3TP PO4GG PO4GT PO4CG PO4CT PO4TP NO2GG NO2GT NO2CG NO2CT Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total Between Groups Within Groups Total 0,0040 0,0009 0,0049 0,0074 0,0013 0,0088 0,0012 0,0020 0,0032 0,0039 0,0315 0,0354 0,0106 0,3125 0,3231 0,1492 0,1401 0,2894 0,2023 0,0458 0,2481 0,0095 0,2801 0,2896 0,0037 0,3576 0,3613 0,0022 0,0004 0,0026 0,0033 0,0022 0,0054 0,0001 0,0000 0,0002 0,0014 0,0014 0,0028 111 8 8 8 8 8 8 0,0020 0,0002 12,7084 0,0070 0,0037 0,0002 16,5888 0,0036 0,0006 0,0003 1,8239 0,2405 0,0020 0,0052 0,3724 0,7040 0,0053 0,0521 0,1018 0,9048 0,0746 0,0234 3,1940 0,1136 0,1012 0,0076 13,2576 0,0063 0,0048 0,0467 0,1018 0,9047 0,0018 0,0596 0,0307 0,9699 0,0011 0,0001 17,1870 0,0033 0,0016 0,0004 4,5047 0,0639 0,0001 0,0000 7,9083 0,0208 0,0007 0,0002 2,9421 0,1287 NO2TP Between Groups Within Groups Total 0,0036 0,0011 0,0047 112 0,0018 0,0002 9,5215 0,0138 ... 31, gồm có sản phẩm thức ăn 29/11/20 loại thức cá Chẽm giống, thức ăn ăn cá 11 ăn Chẽm thịt, thức ăn cho cá Giò giống, thức ăn cho cá Giò thịt - Lý thay đổi (nếu có): Thay đổi sản phẩm thực tế... NỘI DUNG 7: NGHIÊN CỨU LẬP CÔNG THỨC THỨC ĂN, SẢN XUẤT THỨC ĂN VÀ NUÔI THỬ NGHIỆM .222 3.7.1 Kết thành lập công thức thức ăn cho cá Chẽm giống, cá Chẽm thịt, cá Giò giống, cá Giò thịt ... 126 Công thức thức ăn cho cá Chẽm giống 222 Bảng 127 Công thức thức ăn cho cá Chẽm thịt 222 Bảng 128 Công thức thức ăn cho Giò giống 223 Bảng 129 Công thức thức ăn cho cá Giò