Phụ lục 1 Bộ Y tế Báo cáo kết quả nghiên cứu đề tài cấp bộ Nghiên cứu ứng dụng phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lợng nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân lao Chủ nhiệm đề tài: TS BS Lê Thị Luyến TS DS Nguyễn Thị Liên Hơng Cơ quan chủ trì đề tài: Trờng Đại học Dợc Hà Nội 8418 Năm 2010 Phụ lục 1 Bộ Y tế Báo cáo kết quả nghiên cứu đề tài cấp bộ Nghiên cứu ứng dụng phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lợng nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân lao Chủ nhiệm đề tài: TS BS Lê Thị Luyến TS DS Nguyễn Thị Liên Hơng Cơ quan chủ trì đề tài: Trờng Đại học Dợc Hà Nội Cấp quản lý: Bộ Y Tế Thời gian thực hiện : từ tháng 12/2007 đến tháng 12/2010 Tổng kinh phí thực hiện đề tài: 460 triệu đồng Năm 2010 i mục lục Trang Mục lục i Danh mục các chữ viết tắt v Báo cáo thống kê kết quả thực hiện đề tài KHCN cấp Bộ vi Bản tự đánh giá tình hình thực hiện đề tài và những đóng góp mới của đề tài KHCN cấp Bộ xiv Đặt vấn đề 1 Phần 1: Tổng quan 1.1. Phơng pháp định lợng RMP, INH, PZA trong huyết tơng bằng HPLC 3 1.1.1. Phơng pháp chiết RMP, INH, PZA từ huyết tơng 4 1.1.2. Chơng trình sắc ký 5 1.1.3. Độ ổn định của RMP, INH, PZA trong huyết tơng 6 1.1.4. Các chỉ tiêu thẩm định phơng pháp định lợng 8 1.2. Dợc động học của RMP, INH, PZA 8 1.2.1. Dợc động học của RMP 8 1.2.2. Dợc động học của INH 10 1.2.3. Dợc động học của PZA 11 1.3. Các nghiên cứu về nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân 12 1.3.1. Các nghiên cứu khảo sát nồng độ thuốc trong huyết tơng 13 1.3.2. Nghiên cứu về các yếu tố liên quan nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng 14 1.3.3. Nghiên cứu về liên quan nồng độ thuốc chống lao và hiệu quả điều trị 18 Phần 2: Đối tợng, phơng tiện và phơng pháp nghiên cứu ii 2.1. Đối tợng nghiên cứu 19 2.1.1. Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân nghiên cứu 19 2.1.2. Tiêu chuẩn loại trừ 20 2.2. Vật liệu và phơng tiện nghiên cứu 20 2.2.1. Nguyên liệu, hoá chất, dung môi 20 2.2.2. Dụng cụ, thiết bị 20 2.2.3. Dung dịch chuẩn 21 2.2.4. Dụng cụ lấy máu và vận chuyển mẫu 21 2.3. Phơng pháp nghiên cứu 21 2.3.1. Xây dựng và thẩm định phơng pháp định lợng RMP, INH, PZA trong huyết tơng 21 2.3.1.1. Xây dựng phơng pháp định lợng 21 2.3.1.2. Thẩm định phơng pháp 22 2.3.2. Khảo sát nồng độ RMP, INH, PZA trong huyết tơng bệnh nhân lao 25 2.3.2.1. Thiết kế nghiên cứu 25 2.3.2.2. Phơng pháp tiến hành 26 2.3.3. Phơng pháp thống kê, xử lý số liệu 28 Phần 3: Kết quả nghiên cứu 3.1. Xây dựng và thẩm định phơng pháp định lợng 29 3.1.1. Xây dựng phơng pháp định lợng 29 3.1.1.1. Phơng pháp chiết RMP, INH, PZA từ huyết tơng 29 3.1.1.2. Chơng trình sắc ký 30 3.1.2. Thẩm định phơng pháp định lợng 32 3.1.2.1. Tính chọn lọc 32 3.1.2.2. Khoảng nồng độ tuyến tính 35 3.1.2.3. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lợng 36 3.1.2.4. Độ chính xác 37 3.1.2.5. Độ đúng 37 iii 3.1.2.6. Độ ổn định 38 3.2. Kết quả khảo sát nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng bệnh nhân lao 39 3.2.1. Đặc điểm nhóm bệnh nhân nghiên cứu 39 3.2.2. Nồng độ RMP, INH, PZA trong huyết tơng sau 2h uống thuốc 42 3.2.2.1. Nồng độ trung bình RMP, INH, PZA ở thời điểm 2h sau uống thuốc 42 3.2.2.2. Nồng độ RMP huyết tơng 43 3.2.2.3. Nồng độ INH huyếttơng 44 3.2.2.4. Nồng độ PZA huyết tơng 45 3.2.2.5. So sánh tỷ lệ bệnh nhân phân bố theo khoảng nồng độ điều trị 46 3.2.2.6. Số lợng bệnh nhân có nồng độ thuốc thấp hơn phạm vi điều trị 47 3.2.3. Phân tích một số yếu tố liên quan đến nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng 48 3.2.3.1. Những yếu tố có thể ảnh hởng đến nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng 48 3.2.3.2. ảnh hởng của nồng độ thuốc đến đáp ứng điều trị 55 Phần 4: Bàn luận 4.1. Phơng pháp định lợng RMP-INH-PZA trong huyết tơng 59 4.1.1. Phơng pháp chiết RMP, INH, PZA từ huyết tơng 59 4.1.2. Phơng pháp phân tích 60 4.1.3. Thẩm định phơng pháp phân tích 61 4.2. Nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng bệnh nhân ở thời điểm 2h sau uống thuốc 63 iv 4.2.1. Nồng độ trung bình RMP, INH, PZA ở thời điểm 2h sau uống thuốc 63 4.2.2. Phân bố tỷ lệ bệnh nhân theo phạm vi nồng độ điều trị 65 4.2.3. Các yếu tố liên quan đến nồng độ RMP, INH, PZA huyết tơng 69 4.2.4. ảnh hởng của nồng độ thuốc tới đáp ứng 2 tháng đầu điều trị 72 *Những ứng dụng bớc đầu và những hạn chế của nghiên cứu 75 Kết luận 77 Đề xuất 79 Tài liệu tham khảo Các phụ lục Phụ lục 1: Danh mục các bài báo đã công bố liên quan đến kết quả nghiên cứu Phụ lục 2: Các sản phẩm về đào tạo liên quan đến đề tài Phụ lục 3: Phơn g p há p định lợn g RMP và PZA tron g hu y ết tơn g Phơng pháp định lợng INH trong huyết tơng Phụ lục 4: Hồ sơ về đạo đức trong nghiên cứu Phụ lục 5: Phiếu theo dõi bệnh nhân nghiên cứu v Danh mục Những chữ viết tắt AFB - Trực khuẩn bền với acid (kháng acid) (Acid Fast Bacilli) ALT - Alanin aminotransferase AST - Aspartat transaminase AUC - Diện tích dới đờng cong nồng độ huyết tơng - thời gian (Area Under the Curve of Plasma Concentration - Time) CDC - Trung tâm Kiểm soát và dự phòng bệnh tật Mỹ (Center for Diseases Control and Prevention) Cmax - Nồng độ tối đa của thuốc trong huyết tơng CTCLQG - Chơng trình chống lao quốc gia E, EMB - Ethambutol FDA - Cơ quan quản lý Thực phẩm Dợc phẩm Mỹ (Food and Drug Administration) FDC - Thuốc viên hỗn hợp cố định liều (Fixed Dose Combination) H, INH - Isoniazid HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography) R, RMP - Rifampicin S, SM - Streptomycin t 1/2 - Thời gian bán thải của thuốc Tmax - Thời gian thuốc đạt nồng độ cao nhất trong huyết tơng kể từ khi uống WHO - Tổ chức Y tế thế giới (World Health Organization) Z, PZA - Pyrazinamid CA - Cinnamaldehyd àg - Microgam àm - Micromet àl - Microlit MeCN - Acetonitril MeOH - Methanol TCA - acid tricloacetic vi BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU CẤP BỘ I. THÔNG TIN CHUNG 1. Tên đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng nồng độ thuốc chống lao RHZ trong huyết tương bệnh nhân lao 2. Chủ nhiệm đề tài: 1. Họ và tên: Lê Thị Luyến Ngày, tháng, năm sinh: 22/2/1967 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sĩ Y học Chức vụ: chuyên viên chính Điện thoại: Tổ chức: 62732249 Nhà riêng: 37846918 Mobile: 0913597423 Fax: 6 2732243 E-mail: luyenle22@yahoo.com Tên tổ chức đang công tác: Vụ Khoa học và Đào t ạo, Bộ Y tế Địa chỉ cơ quan: 138A Giảng Võ, Hà Nội Địa chỉ nhà riêng: Số 21 Lô 4A Trung yên 10, Q. Cầu Giấy, Hà Nội 2. Họ và tên: Nguyễn Thị Liên Hương Ngày, tháng, năm sinh: 06/7/1974 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm/học vị: Tiến sỹ Dược học Chức vụ : Trưởng bộ môn Dược lâm sàng ĐH Dược Hà Nội Điện thoại: (CQ)/ 04.9330771 (NR)/ 04.8586359 Mobile: 0904308406 Fax: E-mail: lienhuong6774@yahoo.com Địa chỉ cơ quan: Trường Đại học Dược Hà Nội Địa chỉ nhà riêng: Số 8 Ngõ 72 Chính Kinh, Nhân Chính, Thanh Xuân, Hà Nội 3. Tổ chức chủ trì đề tài: Tr−êng §¹i häc D−îc Hµ Néi §iÖn tho¹i: 04 8255437 Fax: 04 9332332 E-mail: dhduocdn@netnam.org.vn §Þa chØ: 13 Lª Th¸nh T«ng – Hµ Néi vii II. TÌNH HÌNH THỰC HIỆN 1. Thời gian thực hiện đề tài: - Theo quyết định phê duyệt: từ tháng 12/2007 đến tháng 7/2010 - Thực tế thực hiện: từ tháng 3/2008 đến tháng 12/2010 - Được gia hạn - Lần 1 từ tháng 8/ 2010 đến tháng 1/2011 - Lần 2 …. 2. Kinh phí và sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 460 tr.đ, trong đó: + Kính phí hỗ trợ từ SNKH: 460 tr.đ. + Kinh phí từ các nguồn khác: 0 .tr.đ. b) Tình hình cấp và sử dụng kinh phí từ nguồn SNKH: Theo kế hoạch Thực t ế đạt được Số TT Thời gian (Tháng, năm) Kinh phí (Tr.đ) Thời gian (Tháng, năm) Kinh phí (Tr.đ) Ghi chú (Số đề nghị quyết toán) 1 2007 100 2007 100 100 2 2008 200 2008 200 200 3 2009 160 2009 160 160 c) Kết quả sử dụng kinh phí theo các khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Theo kế hoạch Thực tế đạt được Số TT Nội dung các khoản chi Tổng SNKH Nguồn khác Tổng SNKH Nguồn khác 1 Trả công lao động (khoa học, phổ thông) 207.5 207.5 0 207.5 207.5 0 2 Nguyên, vật liệu, năng lượng 160.2 160.2 0 160.2 160.2 0 3 Thiết bị, máy móc 0 0 0 0 0 0 4 Xây dựng, sửa chữa nhỏ 0 0 0 0 0 0 5 Chi khác 92.3 92.3 0 92.3 92.3 0 Tổng cộng viii 3. Cỏc vn bn hnh chớnh trong quỏ trỡnh thc hin ti/d ỏn: (Lit kờ cỏc quyt nh, vn bn ca c quan qun lý t cụng on xỏc nh nhim v, xột chn, phờ duyt kinh phớ, hp ng, iu chnh (thi gian, ni dung, kinh phớ thc hin nu cú); vn bn ca t chc ch trỡ ti, d ỏn (n, kin ngh iu chnh nu cú) S TT S, thi gian ban hnh vn bn Tờn vn bn Ghi chỳ 1 5316/Q-BYT ngy 25/12/2007 Quyt nh phờ duyt 2 8833/BYT-K2T ngy 22/02/2010 Cụng vn gia hn thi gian thc hin ti Gia hn thc hin n thỏng 1/2011 4. T chc phi hp thc hin ti, d ỏn: S TT Tờn t chc ng ký theo Thuyt minh Tờn t chc ó tham gia thc hin Ni dung tham gia ch yu Ghi chỳ* 1 Đại học Dợc Hà Nội Đại học Dợc Hà Nội - Xây dựng phơng pháp định lợng các thuốc trong huyết tơng. - Triển khai định lợng nồng độ thuốc trong huyết tơng - Nhp v phõn tớch d liu - Vit bỏo cỏo tng kt 2 BV Lao và bệnh phổi TƯ BV Lao và bệnh phổi TƯ 3 BV Lao và BP Hải Phòng BV Lao và BP Hải Phòng 4 BV Lao và BP Thái Nguyên BV Lao và BP Thái Nguyên - Lựa chọn bệnh nhân nghiên cứu - Lấy mẫu máu định lợng - Thu thập các dữ liệu lâm sàng, cận lâm sàng - Theo dõi bệnh nhân nghiên cứu. - Xét nghiệm vi khuẩn lao [...]... chống lao thiết yếu, có mặt trong các phác đồ điều trị bệnh lao Do đó nghiên cứu về nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân cần có dữ liệu nồng độ cả RMP, PZA, INH Định lợng nồng độ thuốc trong huyết tơng đòi hỏi các phơng tiện kỹ thuật và phơng pháp phân tích phù hợp Có nhiều phơng pháp định lợng thuốc chống lao trong huyết tơng, nhng phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là phơng pháp. .. hành nghiên cứu này, cha có phơng pháp định lợng nồng độ INH, PZA trong huyết tơng phù hợp với điều kiện hiện nay tại Việt Nam Những vấn đề đợc đề cập trên đây chính là lý do chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lợng nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân lao Mục tiêu nghiên cứu: 1 Xây dựng và thẩm định phơng pháp định lợng rifampicin,... (2005)[66] cho thấy 78% bệnh nhân có nồng độ < 8 àg/ml, 23% bệnh nhân có nồng độ RMP huyết tơng . TÀI NGHIÊN CỨU CẤP BỘ I. THÔNG TIN CHUNG 1. Tên đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng nồng độ thuốc chống lao RHZ trong huyết tương bệnh nhân lao. tài KHCN cấp Bộ 1. Tên đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lượng nồng độ thuốc chống lao trong huyết tương bệnh nhân lao 2. Chủ nhiệm đề tài: TS BS Lê. Báo cáo kết quả nghiên cứu đề tài cấp bộ Nghiên cứu ứng dụng phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao định lợng nồng độ thuốc chống lao trong huyết tơng bệnh nhân lao