Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học lông, tóc người Việt ứng dụng trong nhận dạng pháp y
Bộ GIáO DụC Và ĐàO TạO Bộ QuốC PHòNG HọC VIệN QUÂN Y NGUYễN QuốC HảI nghiên cứu một số đặc điểm SINH HọC lông, tóc ngời việt ứng dụng trong nhận dạng pháp y Chuyên ngành: Giải phẫu ngời Mã số: 62 72 01 01 Tóm tắt LUậN án tiến sĩ y học Hà Nội - 2008 Công trình đợc hoàn thành tại Học Viện Quân Y Ngời hớng dẫn khoa học: 1. PGS. TS. Nguyễn Trọng Toàn 2. PGS. TS. Hoàng Văn Lơng Phản biện 1: PGS. TS. Trần Thị Liên Phản biện 2: PGS. TS. Lê Quang Huấn Phản biện 3: TS. Nghiêm Xuân Dũng Luận án đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc tại: Học viện Quân y Vào hồi 8 giờ 30 ngày 30 tháng 7 năm 2008 Có thể tìm hiểu luận án tại: 1. Th viện Quốc gia. 2. Th viện Học viện Quân y 1. Nguyễn Quốc Hải, Nguyễn Trọng Toàn, Hoàng Văn Lơng (2003), Nghiên cứu đặc điểm hình thái lông, tóc ngời Việt ứng dụng trong công tác giám định pháp y, Tạp chí y dợc học quân sự, (2), tr. 20-27. Asia - Pacific military medicine 2. Nguyễn Quốc Hải, Hoàng Văn Lơng (2004), Đặc điểm hình thái đại thể và vi thể lông mu ngời Việt, Tạp chí y dợc học quân sự, (6), tr. 41-46 3. Hoàng Văn Lơng, Nguyễn Văn Ba, Nguyễn Quốc Hải (2005), Nghiên cứu cấu trúc và siêu cấu trúc lông, tóc ngời Việt bình thờng, Những vấn đề nghiên cứu cơ bản trong khoa học sự sống, tr. 625-627. 4. Nguyễn Quốc Hải, Hoàng Văn Lơng, Nguyễn Duy Bắc và cộng sự (2006), Phân tích trình tự vùng D-loop của ty thể từ các mẫu tóc của một số cá thể ng ời Việt, Tạp chí y - dợc học quân sự số đặc san, tr. 66 70. Danh mục các công trình đợc công bố 24 là các lá sừng xếp sát nhau, toàn bộ nhân và các bào quan đều thoái hoá trở thành chất sừng), phần trong cùng là tuỷ lông. 3. Lông tóc là chất liệu tốt nhất trong giám định nhận dạng Pháp y bằng phơng pháp phân tích ADN ty thể: - Đã tách chiết đợc ADN ty thể từ thân và chân tóc, nhân bản bằng kỹ thuật PCR, giải trình tự vùng HVS1 và HVS2. - Đã xác định đợc 7 đến 15 điểm đa hình vùng HVS1 và HVS2 trong tổng số 20 đối tợng nghiên cứu. 4. Đã xây dựng đợc 2 quy trình giám định lông tóc ứng dụng trong nhận dạng pháp y: * Qui trình giám định hình thái lông, tóc. * Qui trình giám định lông tóc bằng phân tích trình tự vùng HVS1 và HVS2 của ty thể. Kiến nghị - Cần đa các quy trình giám định hình thái lông, tóc và giám định mtADN thành các tiêu chuẩn thống nhất chung cho Ngành Pháp y. Giá trị của các giám định vật chứng lông, tóc cần đợc thống nhất giữa các cơ quan t pháp và hành pháp. - Xây dựng bộ atlat hình thái lông, tóc và ngân hàng lu trữ gene (đoạn HVS1 và HVS2) dành cho giám định lông, tóc. - Trang bị kính hiển vi so sánh, đào tạo các kỹ năng cho các giám định viên của các cơ sở pháp y về giám định nhận dạng và so sánh lông, tóc. 1 Đặt vấn đề Lông, tóc là một trong những vật chứng thờng gặp nhất tại hiện trờng các vụ án. Nhận dạng và so sánh lông, tóc có thể giúp ích cho việc chứng minh mối liên quan dấu vết vật thể với tình tiết, đối tợng và quá trình phạm tội. Ngày nay, các xét nghiệm AND có ý nghĩa quan trọng trong giám định cá thể và quan hệ huyết thống, điều tra tội phạm và quản lý nhân sự. Xác định, so sánh trình tự các đoạn siêu biến (hypervariable) HVS1 và HVS2 của D-loop là phơng pháp có độ tin cậy cao, đợc sử dụng rộng rãi trong khoa học hình sự và pháp y. Sự kết hợp giữa giám định vi thể với công nghệ ADN có những ảnh hởng sâu sắc tới việc xem xét dấu vết lông, tóc của khoa học pháp y và toà án. Các tiêu chuẩn dành cho thực hành so sánh pháp y lông, tóc đã đợc các nớc trên thế giới thống nhất trong hợp tác quốc tế. ở Việt Nam, các tiêu chuẩn nhận dạng, quy trình giám định lông, tóc còn cha thực sự đầy đủ, cha thống nhất. Ngoài ra, cha có các nghiên cứu ảnh hởng của các yếu tố lý, hoá học tới lông, tóc; phân biệt lông, tóc ngời với lông của các động vật sống gần ngời (chó, mèo); nghiên cứu ADN ty thể lông, tóc. Hơn nữa, đòi hỏi về sự thống nhất trong toàn ngành Pháp y, các cơ quan hành pháp trong nớc cũng nh hợp tác quốc tế ngày càng cấp thiết. Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài này với mục tiêu: - Nghiên cứu một số đặc điểm hình thái bình thờng của lông, tóc ở ngời Việt và những biến đổi của chúng dới ảnh hởng một số tác nhân thờng gặp trong khám nghiệm pháp y: cơ học, nhiệt độ, hoá học. - Nhận dạng đối tợng qua xác định trình tự vùng HVS1 và HVS2 của genome ty thể ở lông, tóc ngời. - Xây dựng quy trình giám định dấu vết lông, tóc sử dụng trong pháp y. 2 ý nghĩa thực tiễn và đóng góp mới của luận án 1. Đã đa ra đợc những đặc điểm hình thái đại thể, vi thể lông, tóc ngời Việt, có sự so sánh trên 2 giới, đồng thời cũng chỉ ra đợc các đặc điểm khác biệt giữa lông, tóc ngời và lông động vật gần ngời (chó, mèo). Đa ra đợc các tiêu chuẩn về đặc điểm hình thái có giá trị cao trong công tác giám định pháp y. Các đặc điểm tổn thơng của lông, tóc dới tác động của các yếu tố nh nhiệt, cơ học và hoá học đã đợc mô tả một cách đầy đủ, phân loại một cách khoa học. Những kết quả có tính chất cơ sở, là các tiêu chuẩn đặt nền móng và góp phần cho công tác giám định pháp y lông, tóc ở Việt Nam. 2. Đã sử dụng lông, tóc làm vật liệu để nghiên cứu nhận dạng bằng phân tích ADN ti thể cho kết quả tốt: tách chiết đợc ADN từ thân và chân tóc, nhân đợc các đoạn HVS1 và HVS2 của ADN ti thể bằng kỹ thuật PCR và giải trình tự gen của 20 đối tợng nghiên cứu. Đã phát hiện đợc từ 7 đến 15 điểm đa hình nucleotide trong các mẫu này. 3. Đã xây dựng đợc 2 quy trình giám định lông, tóc (bằng phơng pháp hình thái và phơng pháp phân tích ADN ty thể). Kết quả của luận án là những đóng góp mới cho công tác giám định cá thể, cũng nh cho nghiên cứu đa dạng di truyền (ADN ty thể) ngời Việt. Cấu trúc luận án Luận án có 134 trang gồm: Phần đặt vấn đề: 2 trang. Chơng 1: Tổng quan: 33 trang; Chơng 2: Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu: 19 trang; Chơng 3: Kết quả nghiên cứu: 47 trang; Chơng 4: Bàn luận: 30 trang. Phần kết luận, kiến nghị 2 trang. Luận án có 26 bảng; 1 sơ đồ; 49 hình; 3 phụ lục. 155 tài liệu tham khảo (tiếng Việt 13; tiếng Anh 141; tiếng Pháp 1). 23 Kết luận Qua việc nghiên cứu một số đặc điểm hình thái tóc, lông mu của 200 ngời bình thờng (100 nam và 100 nữ) và lông của 100 động vật (50 mèo và 50 chó) chúng tôi rút ra một số nhận xét sau: 1. Lông, tóc ngời Việt có các đặc điểm hình thái: - Tóc ngời Việt chủ yếu gặp dạng thẳng, mức độ xoăn 01, 02, có 98% tóc đen từ mức trung bình đến đen đậm. Sắc tố phân bố chủ yếu là dạng "đồng đều" một số ít gặp dạng phân bố "ngoại vi"; sắc tố ngng tập chủ yếu ở dạng thành" đờng sọc", lõi liên tục, hình tròn, đen đậm và chiếm 1/5 đờng kính thân tóc. - Lông mu ngời Việt chủ yếu gặp dạng sóng (hoặc xoăn) với mức độ xoăn 04, 05, màu đen từ mức trung bình đến đen đậm (100%). Sắc tố phân bố chủ yếu là dạng "đồng đều" một số ít gặp dạng phân bố "ngoại vi"; sắc tố ngng tập chủ yếu thành "đờng sọc", lõi liên tục, hình ovan và chiếm khoảng 1/5 đờng kính thân lông. - Đặc điểm hình thái vi thể của tóc có giá trị cao trong công tác giám định pháp y. Sử dụng 12 đặc điểm hình thái vi thể soi dọc và cắt ngang của tóc trong giám định có tỉ lệ chẩn đoán đúng là 86 %, 14% chẩn đoán sai, độ nhạy đạt 91,7%, độ đặc hiệu 76,9%. - Lông ngời khác với lông động vật. Lông các động vật chó, mèo có hình thái đại thể và vi thể khác biệt so với lông, tóc ngời. Các đặc điểm khác biệt gồm: hình dạng, kích thớc, cấu trúc lớp vỏ ngoài trên kính hiển vi điện tử quét, cấu trúc vi thể của thân tóc, tỉ lệ lõi trên thân tóc. 2. Các yếu tố cơ học, nhiệt học gây ra các hình thái tổn thơng khác nhau trên sợi tóc. Sự khác nhau giữa các tổn thơng gây ra bởi các yếu tố khác nhau đợc phân biệt một cách rõ ràng trên kính hiển vi điện tử quét. - Điều kiện môi trờng pH từ 7 đến 8 ít gây ảnh hởng đến cấu trúc đại thể và vi thể của lông, tóc. - Hình ảnh siêu cấu trúc của tóc trên kính hiển vi quét với độ phóng đại x10.000 và x20.000: phần ngoài của thân tóc, các tế bào xếp sát nhau, từ ngoài vào trong có 5 lớp tế bào đã biệt hoá (các lớp tế bào này chỉ 22 ở vùng HVS2, có 9 điểm đa hình chỉ xuất hiện ở 1 mẫu duy nhất, 2 điểm đa hình chỉ xuất hiện ở 2 mẫu. Bảng 4.5. Thống kê các điểm thay đổi trên cả 2 vùng HVS1 và HVS2 ở 20 mẫu nghiên cứu. STT Vị Trí thay đổi Mẫu thay đổi Tần số thay đổi (*) 1 60delT M1 0,05 2 A73G M1 - M20 1,00 3 93delA M11 0,05 4 G94A M15 0,05 5 C96A M10 0,05 6 G97C M1 0,05 7 T146A M1, M5, M13, M20 0,20 8 C150T M4, M6, M8, M9, M12, M17, M20 0,35 9 T152C M5, M14 0,10 10 A189G M8 0,05 11 C194T M7 0,05 12 T199C M1, M4, M6, M8, M9, M20 0,30 13 T204C M4, M8 0,10 14 G207A M10 0,05 15 249-250delAT M18 0,05 16 249delA M2, M3, M10, M11, M14, M16, M17, M19 0,40 17 A263G M1 - M20 1,00 18 309-310insCT M1, M3, M4, M6, M7, M9, M10, M17, M18,M20 0,50 19 T310C M1, M3, M4, M6, M7, M9, M10, M17, M18,M20 0,50 20 315-316insC M1 - M20 1,00 Phân tích kết hợp cả 2 vùng HVS1 và HVS2 chúng tôi thấy xuất hiện đa hình ở tất cả các mẫu nghiên cứu so với trình tự chuẩn rCRS. Trong đó mẫu xuất hiện nhiều điểm đa hình nhất là mẫu M20 với 16 điểm đa hình trên tổng số 676 bp (HVS1 + HVS2). Tiếp theo đó là mẫu M4 với 15 điểm đa hình, mẫu M3 và M5 với 14 điểm đa hình. Số mẫu ít điểm đa hình nhất là M2, M15 và M19 có 7 điểm đa hình trên tổng số 676 bp (bảng 4.5). 3 Chơng 1. Tổng quan 1.1. Đặc điểm hình thái lông, tóc ngời 1.1.1. Khái quát về sự phát triển của lông, tóc ở ngời Lông, tóc là một cấu trúc keratin hoá, là thành phần phụ của mô da. Màu sắc, hình dạng, kích thớc, sự phân bố và mức độ phát triển của lông trên cơ thể ngời là những đặc điểm mang tính chủng tộc và riêng cho từng cá thể . Trong cuộc đời một ngời lần lợt xuất hiện 3 loại lông: Lông sơ cấp (lông phôi); Lông thứ cấp: trớc khi sinh đến tuổi dạy thì; Lông tam cấp: (lông phụ thuộc hormon giới tính nam). 1.1.2. Đặc điểm cấu trúc của lông, tóc Về đại thể: lông gồm: gốc lông (nằm trong da - bao gốc: cổ lông, hành lông). Thân lông (nằm trên mặt da), ngọn lông. Theo hình thái, tóc đợc phân thành: 1. Tóc thẳng (straight hair); 2. Tóc có sóng (wave hair); 3. Tóc xoăn (curly hair): xoăn lỏng (loose curl), xoăn chặt (tight curd). Vi thể của lông, tóc Đặc tính vị thể của lông, tóc ngời đóng vai trò quan trọng trong công tác giám định hình sự khi khám nghiệm. * Màu sắc * Mật độ sắc tố * Sự phân bố sắc tố * Hình dạng ngng tập sắc tố * Sự liên tục của lõi tóc * Hình thái lớp vỏ ngoài * Sự lỗi của thân tóc * Đặc điểm hình thái ngọn tóc *Đặc điểm hình thái của phần cắt ngang của tóc ngời 1.2. Các phơng pháp nghiên cứu hình thái lông tóc 1.2.1. Phơng pháp nghiên cứu vi thể * Đo chiều dài thân tóc * Đo đờng kính thân tóc * Đo mức độ xoăn của tóc * Hình ảnh cắt ngang thân tóc 1.2.2. Nghiên cứu siêu cấu trúc lông, tóc 1.3. Nghiên cứu lông, tóc trong công tác hình sự Tác động của nhiệt, cơ học và hoá học đến lông, tóc. 4 1.4. Đặc điểm của hệ gen ty thể ngời Cấu tạo của hệ gen ty thể ngời Chiếm khoảng 1 đến 5% DNA của tế bào. Phân tử mạch kép, vòng, có từ 2 đến 10 bản sao trong mỗi ty thể. Đặc điểm di truyền của hệ gen ty thể ngời - ADN ty thể di truyền tế bào chất. - Di truyền theo dòng mẹ. - Đơn bội, không có sự tái tổ hợp. - Tốc độ đột biến lớn. - Một số mã di truyền khác hẳn gen nhân. - Bền theo thời gian trong các mô nh mô xơng, răng và tóc. - Các gen ty thể của ngời, cũng nh các động vật có vú khác, có một số mã di truyền khác hẳn gen nhân. Đặc điểm trình tự đoạn điểu khiển (D-Loop) ty thể Cấu trúc và chức năng Vùng không mã hoá chiếm khoảng 7% genome ty thể, đợc gọi theo 3 thuật ngữ: đoạn điều khiển, D-Loop và vùng siêu biến vì chứa các tín hiệu điều khiển sự tổng hợp ADN và RNA, tích luỹ các điểm đột biến cao gấp nhiều lần so mới ADN nhân. Cơ sở khoa học để đánh giá tính đa hình đoạn D-Loop ở ngời - Trình tự của đoạn D-Loop có tỷ lệ đột biến rất cao. - Sau 33 thế hệ sẽ xẩy ra sự khác nhau về hai đột biến. Tính đa hình trình tự đoạn D-Loop ở các tộc ngời trên thế giới Trình tự đoạn D-Loop chứa HVS1 và HVS2 đã đợc nghiên cứu rộng rãi. Từ 1981 số lợng dữ liệu về HVS1 và HVS2 đã tăng theo hàm số mũ và đợc lu giữ tại Ngân hàng trình tự gen quốc tế. Trình tự đoạn D-Loop đã đợc nghiên cứu ở tất cả 5 Châu lục. ý nghĩa việc nghiên cứu hệ gen ty thể ngời - Công cụ hữu hiệu để nghiên cứu sự tiến hoá ở ngời. - Chẩn đoán và điều trị các bệnh di truyền ty thể. - Xác định cá thể và quan hệ huyết thống trong giám định pháp y, điều tra tội phạm 21 4.6. Phân tích trình tự vùng HVS1 và HVS2 của genome ty thể ở các mẫu nghiên cứu Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành xác định trình tự vùng HVS1 và HVS2 trên 20 cá thể đợc chọn ngẫu nhiên từ các mẫu đã tiến hành nghiên hình thái cứu lông, tóc. Bảng 4.3. Thống kê điểm thay đổi nucleotide theo vị trí trên đoạn HVS1 ở 20 mẫu nghiên cứu (*) Tần số này tính trên tổng số 20 mẫu nghiên cứu. STT Vị trí thay đổi Mẫu thay đổi Tần số thay đổi (*) 1 C16070T M20 0,05 2 C16109T M3, M17 0,10 3 G16111S M12 0,05 4 T16125Y M3 0,05 5 G16131A M3, M4, M6, M9, M11, M14, M16, M17, M18 0,45 6 A16163G M2, M3, M14, M16, M17 0,25 7 A16164G M4 0,05 8 T16173C M2, M3, M11, M13, M14, M16, M17, M18, M20 0,45 9 A16082C M5 0,05 10 A16083C M5 0,05 11 A16084C M5 0,05 12 T16090C M3, M4, M5 0,15 13 C16193T M6, M9 0,10 14 G16214A M5 0,05 15 T16218C M5 0,05 16 C16224T M4, M6 M7, M8, M9, M12, M13, M15, M19,M20 0,50 17 C16258A M12, M4 0,10 18 C16261T M10 0,05 19 C16262T M5, M12 0,10 20 C16279T M20 0,05 21 C16292A M20, M13 0,10 22 C16293T M5, M12, M14 0,15 23 C16296T M11 0,05 T16298C M4, M6, M7, M9 0,20 24 T16299C M10, M20 0,10 25 T16305C M2, M3, M11, M14, M16, M17, M18 0,35 26 T16312C M13, M15, M19 0,15 27 T16363C M8, M10, M15, M19, M20 0,25 20 4.4. Nghiên cứu giá trị phơng pháp giám định hình thái tóc. Các nghiên cứu lâm sàng và nghiên cứu riêng lẻ (chuyên biệt) đã chứng minh rằng các so sánh pháp y lông, tóc cung cấp thông tin có giá trị đặc biệt có ý nghĩa đối với việc phân biệt giữa các cá thể. 3 câu hỏi ần giải quyết là: 1. Lông, tóc từ nguồn nghi ngờ có những đặc điểm vi thể nh lông tóc của một mẫu đã biết, có thể liên quan với nguồn lông, tóc đã biết. 2. Lông từ nguồn nghi ngờ khác biệt về vi thể với lông, tóc mẫu đã biết. 3. Lông từ nguồn nghi ngờ biểu hiện cả những đặc điểm giống và khác nhau nhỏ nhng không kết luận có liên quan hay không với mẫu đã biết. Một số tác giả cho rằng: sự phù hợp hay khác biệt phụ thuộc vào các đặc tính riêng của lông, tóc và khi có một số lợng lớn hơn các mối liên quan tại hiện trờng, một số lợng lớn hơn các mối tơng quan đan chéo nhau hoặc những thay đổi lớn hơn trong các mối liên quan. Phù hợp với ý kiến của các tác giả này, khi kết hợp đầy đủ các đặc điểm vi thể tóc soi dọc và cắt ngang, giá trị chẩn đoán hình thái vi thể tóc tăng một cách có ý nghĩa. Sử dụng 12 đặc điểm hình thái vi thể soi dọc và cắt ngang của tóc trong giám định có tỉ lệ chẩn đoán đúng là 86 %, 14% chẩn đoán sai, độ nhạy đạt 91,7%, độ đặc hiệu 76,9%. 4.5. Về hình ảnh tóc, lông mu dới tác động của môi trờng. Việc lựa chọn phơng pháp nghiên cứu phù hợp là bớc quyết định quan trọng của giám định, phơng pháp nghiên cứu trên kính hiển vi điện tử quét cho phép nhận dạng đầy đủ và đặc hiệu các đặc điểm hình thái bề mặt của tóc bị tổn thơng. Nghiên cứu sự tác động của môi trờng đến hình thái tóc, lông là rất đa dạng chúng tôi không thể đề cập hết. Tuy nhiên, những kết quả nghiên cứu đã cung cấp cho các nhà khám nghiệm pháp y có những khái niệm đầu tiên. Dựa trên các hình ảnh mô tả, phân loại tổn thơng thu đợc, có thể định hớng phán đoán nguyên nhân tổn thơng của đối tợng, phần nào giải quyết những vấn đề của thực tiễn khi gặp các mẫu lông, tóc bị tác động của nhiệt độ, co kéo, bị đập hoặc đã bị ngâm trong các môi trờng nớc nh ở ao, hồ, sông, suối 5 Chơng 2. đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 2.1. Đối tợng nghiên cứu 2.1.1. Đối tợng nghiên cứu đặc điểm hình thái: - 200 mẫu lông sinh dục, 200 mẫu tóc đợc lấy từ 100 nam và 100 nữ, ngời Việt Nam (dân tộc Kinh ), tuổi từ 18 đến 40. - Những ngời tham gia nghiên cứu không bị mắc bệnh da liễu, bệnh về lông, tóc và không nhuộm tóc. - Đối tợng động vật: Lông đợc lấy ở thân của 50 con chó và 50 con mèo 2 năm tuổi, không bị bệnh về lông. Mỗi con lấy 10 chiếc lông bằng cách nhổ để lấy cả chân lông. 2.1.2. Đối tợng nghiên cứu ADN: - 20 mẫu tóc các cá thể ngời sử dụng trong nghiên cứu hình thái đợc đánh số từ M1 đến M20, mỗi mẫu lấy 10 sợi tóc có chân. 2.2. Phơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu hình thái bình thờng của lông, tóc. Nghiên cứu đặc điểm đại thể lông, tóc Phân loại theo Bailey J., Schliebe S. A. (1985). - 3 dạng: thẳng, sóng và xoăn - 9 nhóm độ cong (từ 01 đến 09). - Hình thái ngọn tóc. Nghiên cứu đặc điểm vi thể của lông, tóc. * Hình ảnh vi thể trên tiêu bản soi dọc lông, tóc. Phơng pháp chuẩn bị mẫu: - Làm sạch mẫu: rửa mẫu bằng nớc xà phòng 15 phút, rửa lại bằng nớc cất 1 lần, ngâm trong ete 15 phút. - Làm tiêu bản vi thể: Cắt thành các đoạn ngắn 1 cm. sắp xếp thứ tự trên lam kính. Nhỏ keo Canada lên trên tóc và gắn phiến kính. Soi kiểm tra trên kính hiển vi quang học. - Phân loại vi thể tóc soi dọc theo Deedrick W. D., Koch L. S. (2004). 6 *Hình ảnh vi thể trên tiêu bản cắt ngang thân lông, tóc. Phơng pháp làm tiêu bản vi thể tóc cắt ngang: - Làm sạch mẫu, cắt thành các đoạn kích thớc 1 cm, bó chặt với nhau. Chuyển đúc trong parafin (các bó tóc đặt vuông góc với mặt cắt của block). Cắt lát bằng máy cắt lát vi thể, độ dày 3 5 àm. Nhuộm HE. - Các đặc điểm vi thể cắt ngang thân lông tóc đợc xác định theo phơng pháp của Deedrick W. D., Koch L. S. (2004). - Các kích thớc của lông, tóc đo trên ảnh chụp từ kính hiển vi quang học Nikon (Nhật). Thớc chuẩn đợc thiết lập cho mỗi vật kính bằng cách sử dụng thớc micrometer của Liên Xô cũ. Đo ở chế độ line trên chơng trình Image-Pro Plus của Mỹ . * Nghiên cứu giá trị của phơng pháp chẩn đoán bằng hình thái. - Lấy mẫu, tiến hành làm mù + Chọn mẫu: chọn ngẫu nhiên bằng rút thăm 50 mẫu từ 200 mẫu nghiên cứu. Các mẫu đợc loại bỏ các thông tin cá nhân. + Các đặc điểm hình thái cắt ngang, soi dọc bao gồm: Nhóm 7 tiêu chuẩn hình thái soi dọc Nhóm 5 tiêu chuẩn hình thái cắt ngang Nhóm 12 tiêu chuẩn (soi dọc, cắt ngang) Ghi các đặc điểm lên phiếu mới. So sánh kết quả giữa 2 phiếu. Lập bảng 2 hàng, 2 cột tính các giá trị chẩn đoán. * Nghiên cứu sự thay đổi hình thái lông, tóc do tác động của môi trờng * Gây tổn thơng thực nghiệm lông, tóc do đập, kéo, nhiệt. Nghiên cứu tổn thơngtrên kính hiển vi điện tử quét (SEM 5410-LV, hãng JEOL). * Phân loại tổn thơng. Mô tả đặc điểm hình thái tơng ứng. Biến đổi hình thái lông, tóc do tác động pH môi trờng: - Ngâm lông tóc trong nớc có pH 7, 7.4, 8 (1, 3, 6, 12 tháng). Đánh giá tổn thơng trên kính hiển vi quang học. Nghiên cứu hình thái đợc thực hiện tại Khoa Hình thái - Viện 69. 19 4.3. Về hình ảnh vi thể tóc, lông qua tiêu bản cắt ngang ở ngời, tóc có hình dạng tròn (53,1 - 76,5 %) các dạng khác ít gặp hơn. Lông mu chủ yếu gặp dạng hình ovan hoặc hình dẹt, lõi lông cũng có hình ovan hoặc dẹt. Đây là đặc điểm quan trọng để phân biệt giữa tóc và lông ngời. Về kích thớc, tóc có "đờng kính nhỏ nhất" lớn hơn lông, nhng lông có "đờng kính lớn nhất" lớn hơn, điều này là do hình dạng của thân tóc, lông khác nhau. Lông động vật (mèo, chó) có đờng kính nhỏ hơn tóc, lông ngời một cách rõ rệt. Đây là đặc điểm quan trọng để phân biệt giữa tóc, lông ngời và lông động vật. Theo chúng tôi, sự khác biệt về hình thái tóc, lông mu ngời và lông chó, lông mèo bao gồm: Bảng 4.1. So sánh sự khác biệt về một số đặc điểm hình thái tóc, lông mu và lông chó, lông mèo Đặc điểm Tóc ngời (tỷ lệ %) Lông mu ng ời (tỷ lệ%) Lông chó ( tỷ lệ %) Lông mèo ( tỷ lệ %) Hình dạng Thẳng(97,5%) Sóng(75%) Thẳng(100 %) Thẳng(100 %) Mức độ xoăn 01(76,5%) 04(56%) 01(100%) 01(100%) Màu sắc Đen (98,5 %) Đen (100 %) Không màu (84%) Không màu (82%) Phân bố sắc tố Đồng đều ( 67 % ) Đồng đều ( 62,5 % ) ít xuất hiện (86%) ít xuất hiện (82%) Ngng tập sắc tố Đờng sọc (67,5%) Đờng sọc (87%) Không (88%) Không (82%) Liên tục của lõi Liên tục ( 54,5 %) Liên tục ( 72,5%) Gián đoạn (80%) Gián đoạn (84%) Mờ đục của lõi Đen đậm (57%) Đen đậm (64%) đen đậm/sáng đục ( 94%) Đen đậm/sáng đục (88%) Hình cắt ngang Tròn (66%) Ovan ( 83% ) Tròn (100%) Tròn (100%) tuỷ/ đờng kính 0,23 0,25 0,67 0,71 18 Lông mèo, chó trên mẫu nghiên cứu của chúng tôi chỉ gặp dạng thẳng, đặc điểm này phù hợp với nhận xét của đa số các công trình nghiên cứu ở lông động vật gần ngời. Nh vậy, hình dạng đại thể và mức độ xoăn của lông, tóc cho phép chúng ta định khu đợc khu vực giải phẫu của vật chứng lông, phân biệt tơng đối dễ dàng giữa tóc và lông mu ở đa số các trờng hợp. Tuy nhiên, cha thể phân biệt đợc giữa lông ngời và lông động vật một cách chắc chắn. 4.2. Sự khác nhau về hình ảnh vi thể qua tiêu bản soi dọc thân lông, tóc ngời và lông động vật. Về màu sắc, sự phân bố sắc tố, dạng ngng tập sắc tố Đa số các tác giả nghiên cứu trên ngời Việt Nam ở tuổi trởng thành, tóc đen là dạng hay gặp nhất, kết quả của chúng tôi một lần nữa khẳng định kết luận này. Sử dụng phân loại của Deedrick W. D., Koch L. S. (2004), tóc đen đợc chia thành 4 loại: đen sáng, đen trung bình, đen sẫm và đen đậm, theo chúng tôi, đã góp phần làm đơn giản hoá việc phân loại màu tóc của ngời Việt. Kết quả nghiên cứu cho thấy, có sự khác biệt rõ rệt giữa lông, tóc ngời và lông động vật. Các đặc điểm tóc ngời Việt trên tiêu bản soi dọc: sự phân bố sắc tố dạng "đồng đều "; sắc tố " ngng tập thành đờng sọc" chiếm tỷ lệ chủ yếu ở tóc và lông. Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa hai giới ở các đặc điểm này. Vì vậy, các đặc điểm này một cách riêng lẻ, cha thể là yếu tố quyết định phân biệt tóc, lông ngời và lông động vật, trong nhận dạng cần kết hợp với các đặc điểm khác. Về đặc điểm hình thái lõi lông, tóc. Sự khác biệt giữa tóc, lông ở ngời và lông động vật về sự liên tục của lõi là rõ rệt. Một đặc điểm khác nhau hoàn toàn là kích thớc lõi lông động vật lớn hơn (1/2 đến 3/5 thân) so với tóc, lông ngời (1/5 thân). Nh vậy, để phân biệt giữa lông, tóc ngời và lông động vật (chó, mèo) thì đặc điểm về lõi (sự liên tục, mờ đục và kích thớc) là những yếu tố quyết định. 7 Nghiên cúu ADN ty thể lông, tóc. Phơng pháp tách chiết ADN tổng số từ tóc Bao gồm 11 bớc theo phơng pháp Sambrook và Russell. Điện di trên gel agarose Nhân gen bằng kỹ thuật PCR Mỗi một chu kỳ PCR gồm 3 giai đoạn sau: - Giai đoạn biến tính: - Giai đoạn gắn mồi: - Giai đoạn kéo dài chuỗi: Tinh sạch sản phẩm PCR theo Kit của hãng Promega. Xác định trình tự gen Trình tự các đoạn gen ty thể đợc xác định theo phơng pháp của Sanger, trên máy ABI PRISM ề 3100 Genetic Analyzer với sự hỗ trợ của phần mềm ABI PRISM ề 3100 Data Collection v2.0 và ADN Sequencing Analysis v5.1. - Các thí nghiệm đợc thực hiện tại Trung tâm nghiên cứu ứng dụng sinh y dợc học Học viện Quân y; Viện công nghệ sinh học Viện khoa học công nghệ Việt Nam. Xây dựng quy trình giám định dấu vết lông, tóc. Căn cứ vào kết quả nghiên cứu hình thái bình thờng của tóc, lông và đặc điểm tổn thơng của lông, tóc do cơ học, nhiệt độ và hoá học; kết quả nghiên cứu vùng HVS1 và HVS2 để xây dựng quy trình giám định lông, tóc. Phơng pháp xử lý số liệu - Các số liệu đợc xử lý thống kê theo phơng pháp thống kê y học trên máy vi tính theo chơng trình Epi - info 2003 và SPSS 11.5 . - Các chơng trình, phần mềm xử lý số liệu gen: SEQSCAPE, ADN STAR, BIOEDIT. 8 Chơng 3 . Kết quả 3.1. Hình ảnh đại thể của lông, tóc ngời và lông mèo 3.1.1. Hình dạng của lông, tóc ngời và lông mèo Tóc ngời có dạng thẳng chiếm tỷ lệ cao, dạng tóc xoăn, sóng có tỷ lệ thấp (1% - 2%). Lông mu hình dạng sóng chiếm tỷ lệ chủ yếu (66% - 82%), loại xoăn (18% -32%). Sự khác nhau giữa tóc và lông có ý nghĩa thống kê với p < 0,001. Lông mèo, lông chó chỉ gặp dạng thẳng. 3.1.2. Mức độ xoăn của lông, tóc ngời và lông động vật Mức độ xoăn của tóc ngời chủ yếu loại 01, sau đó là loại 02 và 03. Mức độ xoăn của lông mu chủ yếu loại 04, 05, 06. Mức độ xoăn của lông mu lớn hơn của tóc ở cả hai giới. Lông mèo, chó chỉ gặp dạng thẳng (01). 3.1.3. Hình thái ngọn tóc, lông ngời và lông động vật Hình thái ngọn tóc chủ yếu là dạng thuôn nhọn tự nhiên (90 %), dạng thuôn nhọn hơi tròn (10%). Ngọn lông mu có dạng thuôn nhọn, đầu tù. Kích thớc ngọn lông chó, mèo nhỏ hơn so với tóc và lông mu ngời. 3.2. Hình ảnh vi thể tóc, lông sinh dục ngời và lông động vật 3.2.1. Màu sắc của tóc, lông sinh dục ngời và lông động vật Tóc ngời chủ yếu gặp dạng màu đen trung bình và đen đậm. Lông sinh dục đen trung bình, đen sẫm và đen đậm. Màu lông và tóc khác biệt có ý nghĩa thống kê với p<0,05. Lông mèo, lông chó gặp chủ yếu loại không màu trên tiêu bản cắt dọc. 3.2.2. Sự phân bố sắc tố ở tóc, lông sinh dục ngời và lông động vật Các hạt sắc tố ở lông, tóc ngời phân bố đồng đều (65 đến 69%), phân bố "ngoại vi" (24 - 33%). Lông mèo, chó ít thấy xuất hiện sắc tố. 3.2.3. Dạng ngng tập sắc tố ở tóc, lông ngời và lông động vật Tóc, lông ngời gặp chủ yếu dạng ngng tập sắc tố tập trung thành đờng sọc chiếm tỉ lệ lớn, sau đó dạng thành khối. Tỉ lệ 2 dạng ngng tập của lông và tóc khác nhau có ý nghĩa thống kê ở cả 2 giới (p<0,01. test 2 ). Lông mèo, chó đa số dạng không ngng tập sắc tố (81%-89%), có một số ít (11%-19%) ngng tập thành đờng sọc. 17 Chơng 4. Bàn luận Giám định nhận dạng, so sánh pháp y lông, tóc là một mô tả so sánh sinh học đợc đặt trên cơ sở những khái niệm cơ bản nhất của các ngành kính hiển vi, sinh học, giải phẫu, mô học và nhân trắc học. Kết quả phụ thuộc vào khả năng nhận dạng giải phẫu vi thể của lông, tóc và việc định khu vùng cơ thể, xác định các đặc tính chủng tộc, tác động của bệnh lý, các tác động khác của môi trờng bên ngoài. Tính khoa học của nhận dạng, so sánh pháp y lông, tóc đợc thể hiện ở quy trình giám định: một quá trình thu thập và mô tả có hệ thống các vật chứng vật thể; nêu giả thuyết để làm sáng tỏ 2 mặt của một vấn đề: chứng minh là sai để loại bỏ hoặc tiếp tục thực hiện để khẳng định là đúng. Việc kiểm tra lông, toác có thể đợc sử dụng cho các mục đích liên quan và điều tra để cung cấp thông tin cho việc tái lập lại quá trình phạm tội. Khả năng thực hiện so sánh vi thể pháp y đợc dựa trên một số các yếu tố trình bày dới đây: - Có mẫu lông biết trớc thích hợp làm đại diện. - Khoảng giao động của các đặc điểm lông đã biết. - Điều kiện của lông cần điều tra. - Việc đào tạo và tính chuyên nghiệp của ngời giám định lông. - Sử dụng phơng pháp và thiết bị thích hợp. 4.1. Sự khác nhau về hình ảnh đại thể giữa lông, tóc ngời và lông động vật Tóc thờng đợc thấy có nhiều khác biệt giữa cá nhân hơn lông sinh dục. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tập trung các mối quan tâm đối với tóc và lông sinh dục. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với nhận định của Nguyễn Đình Khoa và CS., Bùi Bá Hợp và CS. về dạng tóc ngời Việt. Các tác giả đều cho rằng dạng tóc thẳng ở ngời Việt chiếm tỷ lệ trên 96 %. Một số tác giả nớc ngoài cũng có nhận xét tơng tự khi nghiên cứu các đặc điểm mang tính chủng tộc của lông, tóc ngời châu á: chủ yếu là dạng thẳng, khác biệt so với ngời châu Âu và châu Phi. [...]... 3.3.4 Giá trị phơng pháp chẩn đoán bằng hình thái 15 Xác định trình tự đoạn HVS2 Giá trị chẩn đoán nhóm 12 đặc điểm hình thái tóc (7 đặc điểm soi Đã xác định đợc trình tự vùng HVS2 có kích thớc 316 dọc, 5 đặc điểm cắt ngang) có 86 % chẩn đoán đúng, 14% chẩn đoán sai, nucleotide ở cả 20 mẫu nghiên cứu So sánh với trình tự rCRS, th y một số độ đặc hiệu đạt 91,7%, độ nh y 76,9% điểm thay đổi nucleotide trên... thuyết 12 13 3.7 Xác định trình tự đoạn HVS1 và HVS2 ở các mẫu nghiên cứu Xác định trình tự đoạn HVS1 Đã đọc đợc toàn bộ trình tự đoạn HVS1 ở 20 mẫu nghiên cứu Kết quả so sánh với trình tự chuẩn, đã phát hiện th y trên đoạn HVS1 có một số điểm đa hình, xuất hiện trong tất cả các mẫu nghiên cứu, chủ y u là các đa hình thay thế nucleotide Bảng 3.15: Danh sách các điểm đa hình trên đoạn HVS1 ở các mẫu nghiên. .. nucleotide trên tất cả các mẫu nghiên cứu 3.4 biến đổi Hình thái tóc dới tác động của môi trờng Bảng 3.16: Danh sách các điểm thay đổi nucleotide ở các mẫu nghiên cứu bên ngoài 3.4.1 Hình thái tóc, lông dới tác động của nhiệt độ trên đoạn HVS2 STT Tên mẫu Điểm thay đổi nucleotide STT Tên mẫu Điểm thay đổi nucleotide tăng, bề mặt gồ ghề, rễ vỡ, sợi tóc thờng g y ở vị trí n y Dới kính hiển 1 M1 60delT 55... đậm/sáng đục (94% ở mèo, 88% ở chó) 3.2.6 Đặc điểm vi thể của bờ trong của lớp vỏ ngoài Dạng bờ trong "rõ rệt" là chủ y u 3.2.7 Hình thái mặt ngoài lớp vỏ ngoài của lông, tóc ngời và lông động vật * Hình ảnh mặt ngoài tóc ngời đợc che phủ bởi một lớp v y sừng đều đặn, đợc kết dính chặt chẽ với nhau Hình ảnh mặt ngoài lông sinh dục ngời đợc tạo thành bởi một số lợng lớn v y sừng kết dính chặt chẽ ở vùng thân... ngọn * Lông mèo các v y sừng có hình dạng giống nh của ngời Lông mèo, chó có dạng tròn Tóc ngời có dạng tròn, lông sinh dục có dạng ovan Giữa hai giới khác nhau có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) 3.3.2 Sự phân bố sắc tố ở lông, tóc ngời và lông động vật cắt ngang Dạng đồng đều đợc th y ở cả ngời và động vật 3.3.3 Kích thớc các phần của thân lông, tóc ngời và lông động vật Kích thớc tuỷ tóc, lông chiếm khoảng... vật Lõi lông, tóc gặp ba dạng: liên tục chiếm tỉ lệ lớn, dạng liên tục/ gián đoạn, dạng gián đoạn hiếm gặp hơn Tỉ lệ lõi liên tục của lông nhiều hơn có ý nghĩa thống kê so với tóc đợc th y ở nữ (p < 0,01) 3.2.5 Đặc điểm về sự mờ đục của lõi tóc ngời Tính chất mờ đục của lõi tóc, lông dạng đen đậm chiếm tỉ lệ (55% - 67%), sáng đục (27%-37%), dạng đen đậm/sáng đục (5%-10%) Lông động vật, dạng đen đậm/sáng... M11 T16173C 82 M20 T16363C do đờng ch y ngắn và kích thớc các phân tử đều rất lớn Nh v y, ADN T16363C 20 khoảng 16 kb Các đoạn ADN thu đợc tập trung thành một vệt duy nhất T16312C 19 khoảng 10 kb đến khoảng 300 kb, có chứa cả ADN ty thể với kích thớc tổng số thu đợc đã đạt đợc những y u cầu về chất lợng Hình 3.35 Kết quả điện di ADN tổng số của một số mẫu nghiên cứu trên gel agarose 0,8% 3.6 Nhân đoạn... 38 M7 A263G 92 M17 T310C * Lông chó: Dạng lông cứng v y sừng có hình dạng tơng tự ở ngời, sắp 39 M7 309-310insCT 93 M18 A73G xếp tha hơn Dạng lông mềm, v y sừng hình tam giác, kích thớc đều 40 M7 T310C 94 M18 193-194delAT 41 M8 A73G 95 M18 A263G 3.3 Hình dạng cắt ngang lông, tóc ngời và động vật 42 M8 C150T 96 M18 309-310insCT 3.3.1 Hình dạng cắt ngang thân lông, tóc ngời và lông động vật 43 M8 A189G... tổng số đã tách chiết ở trên Từ kết quả điện di chứng tỏ lợng ADN thu đợc là khá lớn, sự đứt g y thấp và kích thớc ADN thu đợc phù hợp cho nghiên cứu, do đó chỉ cần tiến hành phản ứng với lợng ADN khuôn thích hợp Chu trình nhiệt của PCR Kết quả sản phẩm PCR thu đợc ở các mẫu là đặc hiệu, rõ nét, có kích thớc phù hợp với đoạn ADN cần nhân Các sản phẩm PCR n y đủ tiêu chuẩn để sử dụng cho các nghiên cứu. .. điểm bị phá vỡ từ bên trong * Hình ảnh tóc bị đứt không hoàn toàn: gập góc tại vị trí tổn thơng của sợi tóc, đứt một phần, bờ mép nham nhở * Hình ảnh tóc bị dập: Sợi tóc bị dẹt, có dạng hình thoi, tăng kích thớc ngang * Hình ảnh tóc bị cắt: mép cắt của lớp vỏ gọn, sắc nét, tạo thành bong mép bám, xuất hiện các đờng nứt rạn nhỏ 14 11 3.5 Tách chiết ADN tổng số Bảng 3.15 (tiếp) Tách chiết ADN tổng số . PHòNG HọC VIệN QUÂN Y NGUYễN QuốC HảI nghiên cứu một số đặc điểm SINH HọC lông, tóc ngời việt ứng dụng trong nhận dạng pháp y Chuyên ngành: Giải phẫu ngời Mã số: 62. tâm nghiên cứu ứng dụng sinh y dợc học Học viện Quân y; Viện công nghệ sinh học Viện khoa học công nghệ Việt Nam. X y dựng quy trình giám định dấu vết lông, tóc. Căn cứ vào kết quả nghiên. 15 điểm đa hình vùng HVS1 và HVS2 trong tổng số 20 đối tợng nghiên cứu. 4. Đã x y dựng đợc 2 quy trình giám định lông tóc ứng dụng trong nhận dạng pháp y: * Qui trình giám định hình thái lông,