HIỆU QUẢ CỦA DỊCH CHIẾT NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO TẰM DÂU, Paecilomyces tenuipes ĐẾN KHẢ NĂNG BƠI CỦA CHUỘT guyễn Mậu Tuấn 1 , Trương Phi Hùng 1 , guyễn Thái Huy 1 , Dương Thị gọc 2 SUMMARY Effect of liquid extract from winter worm-summer grass fungus, Paecilomyces tenuipes on swimming ability of mice The effect of fungus, Paecilomyces tenuipes on body activity strengthening was surveyed based on the swimming ability of white mice. Experimental mouse groups were given drinking fungus liquid extracted in water or in alcohol with the amount of 250 µl/mouse/per day equal to 890 mg dried fungus/kg of body weight while control group was given drinking distilled water for 4 weeks. Swimming time until exhaustion of mice in groups drinking fungus liquid extracted in water or in alcohol was longer than that in control group, its ratios in comparison with control are 163.7 and 172.7% respectively (P<0.05). There was no any difference in term of viability, living habit and body weight among mice in control group and treatment groups. Keywords: Paecilomyces tenuipes, winter worm-summer grass, swimming ability. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm Đông trùng hạ thảo tằm dâu, Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson (= Isaria japonica Yasuda hoặc Isaria tenuipes) là một loài nấm được dùng trong y học cổ truyền của Trung Quốc, nó là giai đoạn vô tính của nấm Cordyceps takaomontana Yakushiji et Kumazawa (Spatafora, J. W. và Blackwell M., 1993). Nấm P. tenuipes xâm nhiễm nhộng hay sâu và sau đó hình thành các quả thể màu vàng mọc thẳng hay phân nhánh ra bên ngoài của vật chủ. Theo y học truyền thống của Trung Hoa, quả thể của nấm P. tenuipes có giá trị cao về mặt dược liệu do các tác dụng về dược lý và sinh học của chúng (Borchers và cộng sự, 1999; Nam K. S và cộng sự, 2001; Kikuchi H. và cộng sự, 2004) như Leucinostatins A, D, Polygalactosamine kháng khối u, Saintopin, Sphingofungins E và F, UCE1022, Paeciloquinones A, B, C, D, E và F, Ergosterol peroxide, Acetoxyscirpenediol Các hoạt chất Ergosterol peroxide và Acetoxyscirpenediol tách chiết từ nấm P. tenuipes nuôi cấy nhân tạo có khả năng ức chế các dòng tế bào ung thư ở người như tế bào khối u dạ dày, tế bào ung thư gan, tế bào ung thư ruột kết-ruột thẳng. 1 Trung tâm Nghiên cứu Thực nghiệm Nông Lâm nghiệp Lâm Đồng, 2 Công ty Vacxin sinh phNm à Lt. Hình 1. N m ông trùng h tho tm dâu, Paecilomyces tenuipes nuôi cy trên tm Hot tính ca Acetoxyscirpenediol mnh hơn Cisplatin là hot cht ang ưc dùng iu tr cho các bnh nhân ung thư hin nay là 4 n 6,6 ln (N am và cng s, 2001). Phương pháp nuôi cy nm nhân to trên giá th tm-nhng  làm dưc liu hoc thc ăn b dưng ang ph bin ti các nưc như N ht Bn, Trung Quc và Hàn Quc (Yahagi, 1985; Kikuchi và cng s, 2004) và hin nay ã ưc nghiên cu sn xut thành công ti Trung tâm N ghiên cu Thc nghim N ông Lâm nghip Lâm ng. Mc ích ca nghiên cu này nhm kim tra an toàn và tác dng ca nm ông trùng h tho tm dâu, Paecilomyceps tenuipes da trên sc sng và kh năng bơi ca chut sau khi ưc cho ung dch chit ca nm. II. VÂT LIU VÀ PHƯƠN G PHÁP N GHIÊN CU 1. Vật liệu nghiên cứu N m ông trùng h tho, Paecilomyceps tenuipes ưc nuôi cy trên tm dâu, Bombyx mori ti Trung tâm N ghiên cu Thc nghim N ông Lâm nghip Lâm ng. Chut bch c ging Swiss. 2. Phương pháp nghiên cứu - Chiết dung dịch nấm: Theo phương pháp ca Jung và cng s (2004), tóm lưc như sau: 30 gr nm ã sy khô ưc un cách thu trong nưc (chit trong nưc) hoc cn 30 0 (chit trong cn)  nhit  70 0 C, thi gian 20 gi. Dung dich chit ưc iu chnh còn 500 ml/mi mu. - B trí thí nghim: Chut trng c ging Swiss 4 tun tui ưc ly t Tri Sui Du-Vin Vacxin và ch phNm sinh hc, N ha Trang và ưa v à Lt. Sau 1 tun  chut phc hi và thích nghi vi môi trưng mi, chut ưc phân chia thành 3 nhóm, mi nhóm 8 con, chut thí nghim có trng lưng ban u t 16-17 gr/con. - N hóm 1: Cho ung dch chit trong nưc - N hóm 2: Cho ung dch chit trong cn. - N hóm 3: i chng (cho ung nưc tit trùng). Chut ưc nuôi và theo dõi hàng ngày theo phương pháp ca Phòng Kim nh (Công ty Vacxin sinh phNm à Lt) và b trí thí nghim theo phương pháp ca Jung và cng s (2004), liu ung dch nm  các công thc thí nghim là 250 l dch chit/chut/ngày (tương ương 890 mg nm khô/kg th trng); i chng ưc ung nưc vô trùng liên tip trong 4 tun. Chut  các công thc ưc theo dõi các biu hin hình thái, sc sng, s tăng trng trong sut quá trình thí nghim.  ánh giá kh năng bơi, các nhóm chut ưc tp cho bơi 3 ln/tun, mi ln 15 phút. N hit  ca nưc luôn duy trì  khong 34 ± 1 0 C. Sau 4 tun chut ưc cho bơi  tính thi gian t lúc bt u cho n khi ui sc. III. KT QU VÀ THO LUN 1. Sức sống của chuột thí nghiệm Bảng 1. Sức sống của chuột ở các công thức sau 4 tuần thí nghiệm * Công thức Thành phần Liều uống /ngày /chuột (µl)** Số chuột TN Sức sống (%) 1 Dịch chiết trong nước 250 8 100 2 Dịch chiết trong cồn 250 8 100 Đối chứng Nước cất vô trùng 250 8 100 *: Thí nghim ưc tin hành ln 1 vào năm 2007 và ln 2 vào tháng 9-2008, ti Phòng Kim nh, Công ty Vacxin sinh phNm à Lt (trưc ây là Vin Vacxin à Lt). **: Tương ương khong 890 mg nm khô/kg th trng. Kt qu cho thy chut ung dch nm ông trùng h tho chit trong nưc, chit trong cn và i chng (ưc ung nưc vô trùng) u sng khe mnh trong 4 tun thí nghim và tt c chut u biu hin bình thưng v hình thái, tp tính trong ăn, ung và các hot ng khác trong c 2 ln thí nghim dù liu dùng cho chut/ngày là rt cao so vi th trng ca chut. iu này cho thy vi liu ung hàng ngày tương ương khong 890 mg nm ông trùng h tho tm dâu, Paecilomyces tenuipes/kg th trng là an toàn i vi chut bch. Theo dõi và ánh giá sc sng, biu hin hình thái, tp tính ca chut ưc tin hành da theo tiêu chuNn và phương pháp ca phòng Kim nh Công ty Vacxin và sinh phNm à Lt. Cordyceps sp. ươc ghi nhn như là thuc b cho tăng cưng chc năng sinh tn trong y hc truyn thng ca Trung Quc (Shin và cng s, 2001) và Paecilomyces tenuipes (còn gi là Cordyceps takaomontana) cũng là mt thành viên ca nhóm nm này. Kt qu so sánh sc sng chut  các công thc có ung dch chit ca nm vi i chng ung nưc tit trùng sau 4 tun thí nghim hoàn toàn không có s khác bit sau 2 ln th nghim vi liu dùng hàng ngày khá cao so vi th trng ca chut, tt c chut u sng 100% và không có bt kỳ biu hin bt thưng nào v tp tính, màu sc ca mt và lông iu này cho thy nm không gây c tính cp và an toàn cho chut khi s dng  liu tương ương khong 890 mg/kg th trng. Nấm Cordyceps đã được chứng minh là không có độc tố với ngưỡng rộng về hiệu quả sinh hóa và sinh lý đối với cơ thể (John Holliday và Matt Cleaver, 2008); không có báo cáo gây độc nào do nấm này được công bố và các mẫu thực nghiệm trên động vật đã không thể tìm ra liều gây chết 50% (LD 50 ) khi dùng đến liều 80 gr/kg thể trọng/ngày trong thời gian 7 ngày (Wu và cộng sự, 1996). 2. Tăng trọng của chuột sau 4 tuần thí nghiệm Bảng 2. Kết quả tăng trọng của chuột ở các công thức sau 4 tuần thí nghiệm Công thức Dao động TL ban đầu (gr) Tỷ lệ tăng trọng TN lần 1 (%) Tỷ lệ tăng trọng TN lần 2 (%) Tỷ lệ tăng trọng bình quân (%) 1 (chiết trong nước) 16-17 48,7 56,3 52,2 2 (chiết trong cồn) 16-17 41,2 56,8 49,0 Đối chứng (nước cất vô trùng) 16-17 44,8 51,48 48,14 (Thí nghim ưc tin hành vào tháng 9-2008, ti Phòng Kim nh, Công ty Vacxin sinh phNm à Lt, trưc ây là Vin Vacxin à Lt. Liu ung: 250 l/chut/ngày, mi công thc 8 chut, tương ương 890 mg nm khô/kg th trng). T l tăng trng bình quân ca chut sau 2 ln thí nghim  các công thc 1 (chit trong nưc), công thc 2 (chit trong cn) và i chng ln lưt là 52,2; 49; và 48,14% (bng 2). S tăng trng ca chut  các công thc là hoàn toàn bình thưng, các sai khác là ngu nhiên, trong nghiên cu này chúng tôi không ánh giá tách bit tng giai on mà ch xem xét chung cho c thí nghim, mc dù mt s nghiên cu ca Bác s H Vit Sang trên bài thuc ca Ama Kông cho thy có s tăng trng hơn so vi i chng trong thi kỳ u nhưng sau ó có tác dng c ch tăng trng (http://www.amakong.com.vn/article.php?i d=44). 3. Khả năng bơi Thi gian bơi ca chut  công thc 1 (chit trong nưc) và công thc 2 (chit trong cn) u dài hơn so vi i chng; chut i chng có thi gian bơi dao ng t 3 n 4 gi, còn  các công thc ưc ung dch chit ca nm thưng là trên 5 gi; t l tăng so vi i chng ln lưt là 163,7 và 172,7% (bng 3). S khác bit này là có ý nghĩa rng nm có tác dng tăng cưng th lc cho chut. Bảng 3. Thời gian bơi của chuột ở các công thức Chuột Thời gian chuột bơi (phút) ở các công thức 1 (chiết trong nước) 2 (chiết trong cồn) Đối chứng (nước tiệt trùng) 1 300 358 240 2 359 358 210 3 295 345 182 4 345 325 180 5 355 359 200 BQ 330.8 a 349 a 202.4 b % so với ĐC 163.7 172.7 100 (Thí nghim ưc tin hành vào tháng 9-2008, ti Phòng Kim nh, Công ty Vacxin sinh phNm à Lt (trưc ây là Vin Vacxin à Lt). Phương pháp chut bơi Breckman thưng ưc dùng khá ph bin  ánh giá tác dng ca các loi hot cht, tho dưc n kh năng bơi ca chut (Jung và cng s 2004; Nguyễn Trần Châu và cộng sự, 2007). Kết quả thời gian bơi của chuột (bảng 3) ở các công thức được uống dịch chiết của nấm trong nước và dịch chiết trong cồn đều cao hơn so với đối chứng uống nước tiệt trùng. Điều đó cho thấy nấm có tác dụng tăng cường khả năng vận động của chuột. Trong phạm vi nghiên cứu này chưa thể theo dõi được các diễn biến về sự thay đổi một số thành phần sinh hóa trong máu của chuột như hàm lượng glycogen, lipid, ammonia và lactate của huyết tương vì hoạt động bơi gây ra thay đổi sinh hoá máu (Moriura và cộng sự, 1996) và người ta cho rằng ammonia và lactate máu tích tụ trong quá trình vận động (Dawson và cộng sự, 1971; Banister và cộng sự, 1983; Mutch và Banister, 1983) cũng như tỷ lệ acid lactic tích tụ trong máu cho thấy quan hệ nghịch với thời gian bơi (Wilber 1959). Nghiên cứu của Jung và cộng sự (2004) đã cho thấy, dịch chiết của nấm Paecilomyces tenuipes đã làm giảm hàm lượng ammonia và lactate của huyết tương so với nhóm đối chứng và đã gia tăng khả năng bơi ở chuột và ông cũng cho rằng dịch chiết của Paecilomyces tenuipes có thể gia tăng sử dụng mỡ của chuột trong quá trình bơi. Đây là ưu điểm trong suốt quá trình vận động, vì việc sử dụng một phần lớn lượng mở cho phép tiết giảm glycogen và do vậy làm giảm mệt nhọc (Walberg và cộng sự, 1983). Thời gian bơi của chuột và vai trò dịch chiết của nấm liên quan chặt chẽ đến các quá trình trao đổi chất, sự vận động của cơ thể từ đó đã dẫn đến sự khác biệt có ý nghĩa về thời gian bơi giữa các nhóm được uống dịch chiết nấm so với đối chứng. Để hiểu rõ cơ chế tác động và các mối quan hệ giữa chúng cần tiến hành bổ sung các nghiên cứu khác, nhưng với kết quả đạt được cho phép khẳng định: Nấm Paecilomyces tenuipes- một dược liệu truyền thống đang sử dụng phổ biến tại các nước Nhật Bản, Trung Quốc và Hàn Quốc đã gia tăng khả năng vận động cho sinh vật sử dụng một cách hiệu quả. IV. KẾT LUẬN 1. Liều uống hàng ngày tương đương khoảng 890 mg nấm Đông trùng hạ thảo tằm dâu, Paecilomyces tenuipes/kg thể trọng là an toàn đối với chuột bạch. 2. Tỷ lệ tăng trọng bình quân của chuột ở các công thức được uống dịch chiết của nấm và nước cất là tương đương nhau. 3. Thời gian bơi của chuột ở các công thức uống dịch chiết nấm trong nước và trong cồn đều dài hơn so với đối chứng, tỷ lệ tăng lần lượt là 163,7 và 172,7%. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 Kikuchi Haruhisa, Yasuhiro Miyagawa, Yuko Sahashi, Satoshi Inatomi, Asami Haganuma, orimichi akahataa and Yoshiteru Oshimaa., 2004. Novel trichothecanes, paecilomycine A, B, and C, isolated from entomopathogenic fungus, Paecilomyces tenuipes. Tetrahedron Letters 45, 6225-6228. 2 John Holliday and Matt Cleaver, 2008. Medicinal value of the caterpillar fungi species of the genus Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes). A review. International Journal of Medicinal Mushrooms, 10 (3):219-234. 3 Jung Kyungah, Kim In-Ho, Han Daeseok., 2004. Effect of medicinal plant extracts on forced swimming capacity in mice. Journal of Ethnopharmacology 93, 75-81 4 Moriura, T., Matsuda, H., Kubo, M., 1996. Pharmacological study on Agkistrodon blomhoffii blomhoffii Boie. V. Anti-fatigue effect of the 50% ethanol extract in acute weight-loaded forced swimming-treated rats. Biological and Pharmaceutical Bulletin 19, 62-66. 5 Shin, K.H., Lim, S.S., Lee, S.H., Lee, Y.S., Cho, S.Y., 2001. Antioxidant and immunostimulating activities of the fruiting bodies of Paecilomyces japonica, a new type of Cordyceps sp. Annals of the New York Academy of Sciences 928, 261-273. 6 Wu T, Yang KC, Wang CM, Lai JS, Ko K, Chang PY, Liou SH, 1996. Lead poisoning caused by contaminated Cordyceps, a chinese herbal medicine: two case reports. Sci Total Environ 5, 182-193. 7 http://www.amakong.com.vn/article.ph p?id=44 gười phản biện: PGS.TS. guyễn Văn Viết T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 7 . HIỆU QUẢ CỦA DỊCH CHIẾT NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO TẰM DÂU, Paecilomyces tenuipes ĐẾN KHẢ NĂNG BƠI CỦA CHUỘT guyễn Mậu Tuấn 1 , Trương Phi Hùng 1 ,. mg nấm Đông trùng hạ thảo tằm dâu, Paecilomyces tenuipes/ kg thể trọng là an toàn đối với chuột bạch. 2. Tỷ lệ tăng trọng bình quân của chuột ở các công thức được uống dịch chiết của nấm. nhóm đối chứng và đã gia tăng khả năng bơi ở chuột và ông cũng cho rằng dịch chiết của Paecilomyces tenuipes có thể gia tăng sử dụng mỡ của chuột trong quá trình bơi. Đây là ưu điểm trong suốt