TCNCYH 25 (5) - 2003 Nghiên cứu độc tính cấp và độc tính bán trờng diễn của bài thuốc Sinh tinh thang Phan Hoài Trung 1 , Đào Văn Phan 2 , Vũ Thị Phơng 2 , Nguyễn Khánh Hoà 2 1 Viện YHCT Quân đội, 2 Trờng Đại học Y Hà Nội Bài thuốc "Sinh tinh thang" là hợp tễ gia giảm vị từ 2 bài thuốc cổ phơng: "Tứ quân tử thang" và "Bát vị quế phụ" dùng để điều trị chứng suy giảm tinh trùng. Khi nghiên cứu độc tính cấp trên chuột và độc tính bán trờng diễn của thuốc trên thỏ, đã cho thấy: không xác định đợc độc tính cấp của thuốc và với liều 12,6g/kg thỏ (gấp 15 lần liều điều trị trên lâm sàng), thuốc không làm biến đổi các chỉ số huyết học cũng nh các chức năng gan, thận của động vật thực nghiệm. I. Đặt vấn đề Tình trạng suy giảm tinh trùng (SGTT) ngày nay có xu hớng gia tăng. Theo công bố của Tổ chức Y tế thế giới, tỷ lệ vô sinh chiếm khoảng 8% trong số các cặp vợ chồng [1]. Tỷ lệ vô sinh do chồng khá cao: từ 30,0 - 40,0% [2] thậm chí 46,5%. Nhiều nghiên cứu cho thấy, khoảng 90% vô sinh nam có suy giảm chất lợng và số lợng tinh trùng, trong đó đa số là do các rối loạn tự phát về quá trình sinh sản tinh trùng. Chính vì vậy, mặc dù hiện nay đã có nhiều phơng pháp điều trị SGTT, nhng kết quả còn tản mạn. Y học cổ truyền (YHCT) từ lâu đã rất quan tâm nghiên cứu điều trị những chứng bệnh của nam, trong đó có SGTT. Hiện nhiều cơ sở điều trị YHCT đã và vẫn đang áp dụng các bài thuốc YHCT chữa chứng SGTT [1], [3], nhng việc tổng kết đánh giá hiệu quả còn ít. Bài thuốc "Sinh tinh thang" đợc giới thiệu trong Thiên gia diệu phơng để điều trị chứng SGTT [4]. Cho đến nay cha có nghiên cứu nào đánh giá một cách hệ thống tác dụng điều trị chứng SGTT của bài thuốc này. Vì vậy, trớc khi tiến hành đề tài:"Nghiên cứu tác dụng của bài thuốc sinh tinh thang đến số lợng và chất lợng tinh trùng", cần phải đánh giá độc tính của bài thuốc. Trong bài báo này mục tiêu nghiên cứu của chúng tôi là xác định độc tính cấp, độc tính bán trờng diễn và ảnh hởng của bài thuốc đến một số chỉ số sinh học của động vật thực nghiệm. II. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Bài thuốc Sinh tinh thang Bài thuốc "Sinh tinh thang", do khoa Dợc viện Y học cổ truyền Quân đội bào chế dới dạng bột tan. Sản phẩm đợc đóng trong túi plastic, 42g/1túi, tơng đơng 1 thang thuốc sắc. Khi thử, pha bột thuốc với nớc, thuốc tan đợc tối đa ở tỷ lệ 1,7g trong 1 ml nớc và thu đợc thể tích 1,4ml dung dịch thuốc; hay 1ml dung dịch thuốc có chứa 1,21g bột thuốc. 2. Động vật thực nghiệm + Chuột nhắt trắng: 100 con (Mus musculus) chủng Swiss, cả hai giống, trọng lợng 20 + 2 gram, do viện Vệ sinh Dịch tễ trung ơng cung cấp. + Thỏ đực: 30 con, giống Newzealand, 6 tháng tuổi, trọng lợng 1,8-2,2kg. Do Trung tâm Nghiên cứu giống dê và thỏ Ba Vì cung cấp. Chuột và thỏ đợc nuôi trong điều kiện phòng thí nghiệm tại bộ môn Dợc lý, trờng Đại học Y Hà Nội. 3. Phơng pháp nghiên cứu a) Nghiên cứu độc tính cấp Xác định độc tính cấp LD 50 trên chuột nhắt trắng theo đờng uống bằng phơng pháp Litchfied - Wilcoxon [6] - Chuột đợc chia làm 10 lô, mỗi lô 10 con. 13 TCNCYH 25 (5) - 2003 - Cho chuột uống thuốc thử liều tăng dần từ liều tối đa không gây chết, đến liều gây chết 100%, trong một thể tích hằng định là 0,2 ml dung dịch thuốc / 10g chuột x 2 lần, cách nhau 2 giờ. - Ghi số chuột chết trong 72 giờ và tiếp tục theo dõi tình trạng chung của chuột sau 7 ngày uống thuốc. b) Phơng pháp xác định độc tính bán trờng diễn - Vì bài thuốc đã đợc sử dụng từ lâu trên ngời, cho nên chúng tôi suy từ liều trên ngời cho các thử nghiệm độc tính. - Các thỏ đực trong thí nghiệm này đều đợc chia ngẫu nhiên thành 3 nhóm, mỗi nhóm 10 con: Nhóm 1: làm chứng, uống dung môi NaCl 0,9 %. Nhóm 2: uống thuốc thử với liều 8,4g/kg thỏ/ 24 giờ; (gấp 10 lần liều vẫn dùng trên ngời). Nhóm 3: uống thuốc thử với liều 12,6g/ kg thỏ/ 24 giờ; (gấp 15 lần liều vẫn dùng trên ngời). Các thỏ uống cùng 1 thể tích hằng định là 10 ml/1 kg thân trọng thỏ, liên tục trong 30 ngày. - Theo dõi thỏ về: cân nặng, chức phận tạo máu, chức năng gan và thận, cấu trúc vi thể của gan và thận trớc, trong và sau thời gian thỏ uống thuốc: Chức phận tạo máu đợc đánh giá qua số lợng hồng cầu, bạch cầu, công thức bạch cầu, định lợng huyết cầu tố. Chức năng gan đợc đánh giá qua định lợng hoạt độ các transaminase trong huyết thanh. Chức năng thận đợc đánh giá qua định lợng ure, creatinin trong huyết thanh. Cấu trúc vi thể gan, thận của thỏ: sau 30 ngày uống thuốc liên tục, thỏ đợc giết (bằng cách bơm khí vào tĩnh mạch tai thỏ), phân lập gan, thận và quan sát cấu trúc dới kính hiển vi quang học. III. Kết quả 1. Độc tính cấp của bài thuốc Kết quả cho thấy, chuột uống thuốc với liều tăng dần từ 10g / kg (tơng đơng 1g/kg trên ngời hoặc gấp 12 lần liều vẫn dùng trên ngời) đến 55g / kg thể trọng (tơng đơng 5,5g/kg trên ngời hoặc gấp 56 lần liều vẫn dùng trên ngời), là mức liều tối đa có thể cho uống đợc; theo dõi trong 72 giờ không thấy chuột chết, mọi chuột đều ăn uống và hoạt động bình thờng trong suốt cả tuần. 2. Độc tính bán trờng diễn a) ảnh hởng của thuốc STT đến cân nặng của thỏ Bảng 1: Biến đổi trọng lợng các nhóm thỏ trong quá trình uống thuốc STT (n = 9) Lần cân Nhóm n Trớc điều trị (X SE) kg Ngày thứ 15 (X SE) kg Ngày thứ 30 (X SE) kg Chứng (1) 9 1,93 + 0,05 2,03 + 0,04 2,08 + 0,04 Thuốc liều I (2) 9 2,10 + 0,06 2,14 + 0,06 2,18 + 0,04 Thuốc liều II (3) 9 2,01 + 0,04 2,11 + 0,05 2,15 + 0,05 p (1) - (3) p (2) - (3) > 0,05 Sau 30 ngày uống thuốc liên tục, trọng lợng của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu so với nhóm chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p 1 - 3 > 0,05 và p 2 - 3 > 0,05. 14 TCNCYH 25 (5) - 2003 b) Theo dõi ảnh hởng của bài thuốc đến một số chỉ số huyết học của thỏ Kết quả nghiên cứu ảnh hởng của bài thuốc STT đến một số chỉ số huyết học của thỏ đợc ghi trong các bảng 2 - 3 Bảng 2: Biến đổi số lợng hồng cầu và hàm lợng hemoglobin của các nhóm thỏ trong quá trình uống thuốc. ( n = 9 ) Nhóm Chỉ số Chứng (a) (X SE) Thuốc liều I (b) (X SE) Thuốc liều2 (c) (X SE) p a - c p b - c N 0 5,2 + 0,10 5,5 + 0,08 5,3 + 0,09 N 15 5,2 + 0,06 5,2 + 0,08 4,9 + 0,1 Hồng cầu (x 10 12 /l) N 30 5,3 + 0,07 5,2 + 0,08 5,2 + 0,09 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 N 0 9,8 + 0,3 10,0 + 0,5 9,4 + 0,3 N 15 10,4 + 0,3 10,0 + 0,2 9,8 + 0,3 Hemog lobin (g/l) N 30 11,5 + 0,3 11,4 + 0,4 11,5 + 0,4 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 Qua số liệu ở bảng 2 cho thấy: trong quá trình uống thuốc, số lợng hồng cầu và hàm lợng hemoglobin giữa các nhóm thỏ không có sự khác biệt với p a - c > 0,05 và p b - c > 0,05. Đồng thời cũng thấy số lợng hồng cầu và hàm lợng hemoglobin của các nhóm thỏ ở từng thời điểm nghiên cứu biến đổi không rõ rệt với p 0 - 30 > 0,05 và p 15 - 30 > 0,05. Bảng 3: Biến đổi số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu của các nhóm thỏ trong quá trình uống thuốc. ( n = 9 ) Nhóm Chỉ số Chứng (a) (X SE) Thuốc liều I (b) (X SE) Thuốc liều II (c) (X SE) p a - c p b - c N 0 8,08 + 0,20 8,42 + 0,27 7,89 + 0,23 N 30 7,93 + 0,15 7,92 + 0,19 8,05 + 0,34 Số lợng (x10 9 /l) P > 0,05 > 0,05 N 0 76,3 + 5,1 76,7 + 8,4 78,1 + 8,5 N 30 74,8 + 8,1 79,1 + 8,6 78,2 + 8,9 Lym pho (%) P > 0,05 > 0,05 N 0 22,7 + 4,6 22,3 + 7,2 21,9 + 8,1 N 30 24,7 + 8,6 20,3 + 8,2 21,9 + 8,9 Trung tính (%) P > 0,05 > 0,05 N 0 2 2 1 N 30 1 2 2 Mono (%) P > 0,05 > 0,05 Qua bảng 3 cho thấy: không có sự biến đổi đáng kể về số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu của các nhóm thỏ trớc và sau thí nghiệm với p > 0,05. Đồng thời cũng thấy số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu giữa các nhóm thỏ uống thuốc và nhóm chứng không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p a - c > 0,05 và p b - c >0,05. 15 TCNCYH 25 (5) - 2003 c) ảnh hởng của bài thuốc đến chức năng gan của thỏ thí nghiệm Bảng 4. Biến đổi hàm lợng SGOT và SGPT của các nhóm thỏ sau khi uống thuốc Sinh tinh thang. ( n = 9 ) Nhóm Chỉ số Chứng (a) (X SE) Thuốc liều I (b) (X SE) Thuốc liều II (c) (X SE) p a - c p b - c N 0 78,7 + 0,7 80,4 + 0,9 79,9 + 0,6 N 15 81,7 + 0,7 79,4 + 1,1 81,8 + 1,2 SGOT (U/l) N 30 82,1 + 0,9 82,7 + 1,2 79,9 + 1,0 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 N 0 95,2 + 0,6 90,9 + 0,7 96,7 + 1,2 N 15 92,0 + 0,7 93,7 + 0,7 95,9 + 1,1 SGPT (U/l) N 30 95,2 + 1,1 89,9 + 1,2 94,8 + 1,3 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 Các số liệu trên bảng 4 cho thấy: hàm lợng men SGOT và SGPT ở các nhóm thỏ chứng, nhóm uống thuốc Sinh tinh thang liều I và liều II không có sự khác biệt với p a - c > 0,05 và p b - c > 0,05. Đồng thời cũng không thấy biến đổi hàm lợng men SGOT và SGPT của các nhóm thỏ ở các thời điểm trớc, trong và sau thí nghiệm với p 0 - 30 > 0,05 và p 15- 30 > 0,05. d) ảnh hởng của bài thuốc đến chức năng thận của thỏ thí nghiệm Bảng 5. Biến đổi hàm lợng ure và creatinin của các nhóm thỏ sau khi uống Sinh tinh thang (n = 9) Nhóm Chỉ số Chứng (a) (X SE) Thuốc liều I (b) (X SE) Thuốc liều II (c) (X SE) p a - c p b - c N 0 4,9 + 0,3 5,3 + 0,2 5,1 + 0,3 N 15 6,8 + 0,3 6,6 + 0,2 6,6 + 0,4 Ure Mmol/l) N 30 6,0 + 0,3 6,7 + 0,2 6,2 + 0,4 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 N 0 115,0 + 0,6 105,3 + 1,2 125,1 + 1,1 N 15 106,4 + 0,4 102,4 + 0,4 104,2 + 0,5 Creatinin (mmol/l) N 30 105,4 + 0,2 100,0 + 0,5 101,7 + 0,3 > 0,05 p 0 - 30 P 15 - 30 > 0,05 Hàm lợng Ure và Creatinin giữa các nhóm thỏ nghiên cứu không có sự khác biệt với p a - c > 0,05 và p b - c > 0,05. Đồng thời cũng không thấy biến đổi hàm lợng Ure và Creatinin của các nhóm thỏ trớc, trong và sau thí nghiệm với p 0 - 30 > 0,05 và p 15- 30 > 0,05. Cấu trúc vi thể gan và thận của các nhóm thỏ nghiên cứu: ở ngày thứ 30, quan sát cấu trúc gan, thận của các thỏ nhóm 3 (nhóm uống thuốc liều cao nhất), chúng tôi thấy: - Các bè gan cấu trúc bình thờng, không thấy thoái hoá tế bào gan, khoảng cửa có các mạch máu xung huyết. 16 TCNCYH 25 (5) - 2003 - Cấu trúc ống thận và cầu thận bình thờng, không thấy thoái hoá biểu mô lợp của ống thận. Iv. Bàn luận "Sinh tinh thang" là hợp tễ gia giảm vị từ 2 bài thuốc cổ phơng: "Tứ quân tử thang" và "Bát vị quế phụ". Đây là hai bài thuốc bổ cơ bản và đợc sử dụng rất rộng rãi trong nền y học cổ truyền từ rất xa xa. Nhng khi hai bài thuốc này kết hợp với nhau thì liệu bài thuốc mới "Sinh tinh thang" có gây độc đối với cơ thể hay không là điều cần phải đợc nghiên cứu. Nghiên cứu độc tính cấp của bài thuốc trên chuột nhắt trắng, chúng tôi đã không xác định đợc liều chết 50% của thuốc. Nói một cách khác, thuốc không có độc tính cấp khi dùng gấp 10 lần liều hiện dùng trên lâm sàng cho ngời. Nghiên cứu độc tính bán trờng diễn của bài thuốc trên thỏ, chúng tôi thấy các nhóm thỏ nhận thuốc đều ăn uống hoạt động bình thờng. Chúng có xu hớng tăng cân nhng xảy ra đều ở tất cả các nhóm, kể cả nhóm chứng (bảng 1), điều đó có nghĩa các thỏ đều phát triển tốt bởi chúng đang trong độ tuổi trởng thành (6 tháng tuổi). Các chỉ số huyết học (bảng 2 và bảng 3) nh số lợng hồng cầu, hàm lợng hemoglobin, số lợng bạch cầu và công thức bạch cầu ở các nhóm thỏ nghiên cứu đều không có sự biến đổi (p > 0,05). Đồng thời, hàm lợng SGOT, SGPT cũng nh ure và creatinin trong máu của các nhóm thỏ (bảng 4 và 5) không có sự biến đổi sau 30 ngày uống thuốc "Sinh tinh thang" (p > 0,05). So sánh hình thái cấu trúc vi thể gan và thận các nhóm thỏ dới kính hiển vi quang học, chúng tôi nhận thấy không có sự thay đổi về cấu trúc vi thể gan, thận giữa nhóm chứng với các nhóm dùng thuốc. Tuy nhiên, do cách gây chết thỏ đã làm các mạch máu ở khoảng cửa trong gan và khoảng kẽ của thận xung huyết. V. Kết luận Kết quả nghiên cứu độc tính cấp và bán trờng diễn của thuốc sinh tinh thang trên chuột và thỏ thực nghiệm cho thấy thuốc không có độc tính cấp. Với liều 12,6g/ kg thỏ, thuốc không làm biến đổi các chỉ số huyết học và các chức năng gan, thận của động vật thực nghiệm. Tài liệu tham khảo 1. Bành Khìu, Trần Ngọc Chấn. (1975), Điều trị 45 trờng hợp giảm tinh trùng bằng thuốc Đông y, Tóm tắt báo cáo trong Hội nghị Đông - Tây y, Cục Quân y; 16 - 17. 2. Phan Văn Quý (1997). Một số nhận xét về vô sinh nam tại Viện bảo vệ bà mẹ và trẻ sơ sinh năm 1995. Hội thảo về nguyên nhân và điều trị vô sinh nam nữ. Viện Bảo vệ sức khoẻ bà mẹ và trẻ sơ sinh - Tổ chức Materra (Freiburg - CHLB Đức), 20 - 21/1997; 27 - 33. 3. Viện Quân y phòng không - không quân. (1975), Điều trị 16 trờng hợp thiểu năng sinh dục bằng thuốc nam, Tóm tắt báo cáo trong Hội nghị Đông - Tây y, Cục Quân y; 18 - 19. 4. Viện Thông tin th viện Y học trung ơng, (1989), Thiên gia diệu phơng, Võ Văn Bình và cs. biên dịch, Hà Nội, tr: 195- 196. 5. Belsy M.A. (1979). Etiology and natural histology, workshop on the diagnosis and treatmen of infertility - Kenya, February, 11-42. 6. Litchfield J.T. st Wilcoxon F. (1949), A simplified method of evaluating dose- effect experiments. J. Pharmacol. 96, 99 113. Summary Study on the Acute and subchronic toxicity of "Sinh tinh thang" Remedy The STT, a traditional medication for treatment of spermatogensis insufficiency, has been determined the Acute and subdesonic toxicity studies of STT medication on mice and rabbit. The results of experiment showed that on rabbit the STT with the dose of 12,6 g / kg of body weight (so more than 15 times of clinical dosis) did not influence on the blood cells and heptic and renal function the DL50 in the mouse couldn't determine. 17 . chứng suy giảm tinh trùng. Khi nghiên cứu độc tính cấp trên chuột và độc tính bán trờng diễn của thuốc trên thỏ, đã cho thấy: không xác định đợc độc tính cấp của thuốc và với liều 12,6g/kg thỏ (gấp. tính của bài thuốc. Trong bài báo này mục tiêu nghiên cứu của chúng tôi là xác định độc tính cấp, độc tính bán trờng diễn và ảnh hởng của bài thuốc đến một số chỉ số sinh học của động vật. SGTT của bài thuốc này. Vì vậy, trớc khi tiến hành đề tài:" ;Nghiên cứu tác dụng của bài thuốc sinh tinh thang đến số lợng và chất lợng tinh trùng", cần phải đánh giá độc tính của bài