Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐỐI KHÁNG VI KHUẨN Vibrio spp VÀ NGHIÊN CỨU NÂNG CAO TỶ LỆ SỐNG ẤU TRÙNG CÁ CHẼM (Lates calcarifer) BẰNG CÁC CHỦNG VI KHUẨN PHÂN HỦY N-HEXANOYL HOMOSERINE LACTONE (1) Phạm Minh Nhựt(1), Nguyễn Thị Ngọc Tĩnh(2) Khoa Môi trường Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Kỹ thuật Công nghệ Tp.HCM, Việt Nam; (2) Phòng Sinh học Thực nghiệm, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy Sản II ABSTRACT Twenty nine isolates from sea bass (Lates calcarifer) and black tiger shrimp (Penaeus monodon) were tested to evaluate ability to degrade HHL, for Vibrio spp antogonism in vitro, safety and protection of sea bass larvae against Vibrio spp infection in in vivo condition within 48 hours, and survival rate improvability of sea bass larvae in pilot hatchery scale Among 29 tested isolates, fifteen were able to degrade HHL at medium to high level, and/or to antagonise Vibrio spp These fifteen isolates were tested for the safety to sea bass larvae Only nine isolates (six from sea bass and three from black tiger shrimp) were safe toward sea bass larvae during of 48 hours However, these nine isolates did not have ability to protect sea bass larvae in Vibrio spp experimental infection In pilot scale hatchery condition, three isolates from black tiger shrimp could not improve survival rate of sea bass larvae In contrast, five among six isolates from sea bass showed positive effect on survival of sea bass larvae after 30 day of hatchery Keywords: cá chẽm, N-hexanoyl homoserine lactone, tính đối kháng, Vibrio spp GIỚI THIỆU Trong 30 năm trở lại đây, ngành nuôi trồng thủy sản nƣớc ta đà phát triển mạnh với sản lƣợng không đáp ứng cho nhu cầu nƣớc mà cịn xuất nƣớc tồn giới Chính thế, nhu cầu nguồn giống bệnh đạt chất lƣợng để cung cấp cho trang trại nuôi trồng thủy sản lớn Tuy nhiên, trình sản xuất giống, bệnh vi sinh vật gây vấn đề quan trọng, gây chết ấu trùng hàng loạt, dẫn đến tổn thất nghiêm trọng trại sản xuất Bệnh vi khuẩn gây ấu trùng cá chẽm làm ảnh hƣởng đến khả cung cấp nguồn giống đạt chất lƣợng cho trang trại trực tiếp ảnh hƣởng đến suất thủy hải sản Trƣớc thực tế đó, để tồn đáp ứng đƣợc nhu cầu cấp thiết nguồn giống, trang trại sản xuất giống sử dụng số biện pháp để phòng trị bệnh vi sinh vật nhƣ sử dụng kháng sinh, hóa chất Chính việc sử dụng kháng sinh, hóa chất tràn lan nhƣ dẫn đến tình trạng dƣ lƣợng kháng sinh sản phẩm đầu Bên cạnh đó, khả tạo chủng vi sinh vật kháng thuốc, hậu ngành ni trồng thủy sản lớn Đứng trƣớc thực trạng đó, giải pháp sinh học đƣợc nhà khoa học nghiên cứu ứng dụng để kiểm soát dịch bệnh nuôi trồng thủy sản Một hƣớng nghiên cứu nhiều triển vọng sử dụng chế phẩm probiotics để phòng bệnh vi sinh vật Ở Việt Nam, probiotics đƣợc sử dụng rộng rãi thời gian gần nhƣng nguồn cung cấp probiotics công ty sản xuất thƣờng không rõ nguồn gốc xuất xứ Do đó, việc nghiên cứu phân lập chế phẩm vi sinh điều kiện Việt Nam đƣợc tiến hành thời gian gần bƣớc đầu thu đƣợc kết đáng kể Hiện nay, cá chẽm (Lates calcarifer) đối tƣợng thủy sản có giá trị kinh tế cao Việt Nam Tuy nhiên, tỷ lệ sống ấu trùng đối tƣợng không cao, không ổn định mẫn cảm với tác nhân gây bệnh (chủ yếu nhóm Vibrio) Việc sử dụng kháng sinh không mang lại hiệu cao phòng bệnh vi sinh vật mà lại làm tăng khả kháng thuốc Trong thời gian gần đây, số nhà khoa học giới phát số vi khuẩn có khả ức chế phân tử tín hiệu ―quorum sensing‖ (các phân tử vi khuẩn tiết dùng trình giao tiếp có liên 176 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 quan đến độc lực vi khuẩn gây bệnh) Vì vậy, việc phân lập chủng vi khuẩn có đặc tính nói sử dụng q trình ni trồng thủy sản, đặc biệt cơng tác sản xuất giống có ý nghĩa quan trọng việc kiểm soát vi khuẩn gây bệnh nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá biển VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Các gốc vi khuẩn thí nghiệm Các chủng vi khuẩn sử dụng thí nghiệm đƣợc phân lập từ đƣờng ruột cá chẽm, tôm sú thƣơng phẩm tôm post larvae khỏe mạnh Và chúng đƣợc phân lập dựa khả phân hủy phân tử tín hiệu AHL Đánh giá khả phân hủy HHL gốc vi khuẩn Các gốc vi khuẩn đƣợc ni cấy bình bình tam giác có chứa 10 ml mơi trƣờng LB có bổ sung HHL với nồng độ ppm Mật độ vi khuẩn khảo sát sử dụng lần lƣợt 105, 106 cfu/ml Mỗi gốc vi khuẩn đƣợc thực lặp lại lần tƣơng ứng với nồng độ Các bình tam giác ủ lắc với tốc độ 120 vòng/phút Tốc độ phân hủy HHL gốc vi khuẩn đƣợc đánh giá thời điểm 0, 3, 6, 12 sau nuôi cấy Tại thời điểm thu mẫu, hút ml dịch vi khuẩn từ bình tam giác cho vào eppendorf vơ trùng Tiến hành ly tâm 5000 vòng/phút 10 phút để loại bỏ sinh khối vi khuẩn Sau đó, lấy 10 μl dịch lọc cho vào đĩa môi trƣờng LB agar tráng sẵn 50 l vi khuẩn C violaceum với mật độ 106 cfu/ml tiến hành ủ 24 Tiến hành đo đƣờng kính vịng trịn sắc tố violacein tính tốn nồng độ HHL cịn lại thời điểm Đánh giá đặc tính đối kháng gốc vi khuẩn Vibrio spp Các gốc Vibrio spp sử dụng thí nghiệm V harveyi BB120, V parahaemolyticus V alginolyticus Đánh giá tính đối kháng sinh khối vi khuẩn Vibrio spp Các hỗn hợp vi khuẩn khảo sát đƣợc nuôi cấy môi trƣờng TSB Mật độ vi khuẩn sử dụng thử nghiệm 106 cfu/ml Mỗi nghiệm thức đƣợc lặp lại lần Mật độ Vibrio spp sử dụng 105 cfu/ml Các gốc vi khuẩn khảo sát sau nuôi cấy môi trƣờng TSB đƣợc pha lỗng để có đƣợc mật độ 106 cfu/ml Sau 50 l dịch đƣợc cấy trải môi trƣờng TSA bổ sung NaCl Đem ủ nhiệt độ 300C 24 Các chủng Vibrio spp đƣợc xác định mật độ tiến hành cấy trải 50 l môi trƣờng TSA bổ sung NaCl Chờ cho đĩa thạch thật khô, sử dụng ống trụ đƣờng kính mm đục lỗ đĩa thạch Đối với đĩa thạch chứa vi khuẩn khảo sát sau nuôi cấy, chọn vùng vi khuẩn phát triển dầy đặc, tiến hành đục khối thạch chứa sinh khối vi khuẩn Dùng kẹp vô trùng gắp khối thạch đặt vào giếng đĩa trải chủng Vibrio spp Đem ủ nhiệt độ 300C 24 Sau thời gian 24 giờ, đo vòng kháng khuẩn xung quanh giếng thạch Đánh giá tính đối kháng dịch sau ly tâm vi khuẩn Vibrio spp Các hỗn hợp vi khuẩn khảo sát đƣợc ni cấy mơi trƣờng TSB có bổ sung NaCl Mật độ vi khuẩn sử dụng 106 cfu/ml Mỗi nghiệm thức đƣợc lặp lại lần Mật độ Vibrio spp sử dụng lần lƣợt 105 cfu/ml Các gốc vi khuẩn khảo sát đƣợc nuôi môi trƣờng TSB bổ sung NaCl tủ ấm lắc 24 Sau đó, xác định mật độ tiến hành pha lỗng để có đƣợc mật độ 106 cfu/ml Cấy chuyển 50 l vào bình tam giác chứa môi trƣờng TSB bổ sung NaCl nuôi cấy tủ ấm lắc nhiệt độ 300C 24 Đối với chủng Vibrio spp., tiến hành cấy chuyển sang môi trƣờng TSB bổ sung NaCl nuôi cấy tủ ấm lắc nhiệt độ 300C 24 Sau 24 nuôi cấy, hút ml dịch vi khuẩn cho vào eppendorf vơ trùng đem ly tâm 5000 vịng/phút 10 phút để loại bỏ sinh khối vi khuẩn lấy dịch 177 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 Đối với chủng Vibrio spp sau xác định mật độ, tiến hành cấy trải 50 l môi trƣờng TSA bổ sung NaCl Chờ cho đĩa khô, dùng ống trụ đƣờng kính mm đục lỗ đĩa thạch Hút 100 l dịch sau ly tâm cho vào lỗ thạch sau đục Sau đó, đem ủ nhiệt độ 300C 24 Sau 24 đo vòng kháng khuẩn xung quanh lỗ thạch Đánh giá mức độ an toàn gốc vi khuẩn khảo sát ấu trùng cá chẽm Từ kết hai thí nghiệm trên, gốc vi khuẩn có khả phân hủy HHL tốt hoặc/và đối kháng với Vibrio spp điều kiện in vitro đƣợc chọn lựa Những gốc đƣợc đánh giá mức độ an toàn ấu trùng cá chẽm Thí nghiệm đƣợc bố trí khay có ô, ô chứa 10 ml nƣớc biển vô trùng với mật độ ấu trùng cá chẽm con/ô Mỗi gốc vi khuẩn đƣợc tiến hành lặp lại lần Thí nghiệm đƣợc bố trí gồm 16 nghiệm thức có nghiệm thức đối chứng khơng bổ sung vi khuẩn 15 nghiệm thức có bổ sung riêng lẻ loại vi khuẩn khảo sát Các gốc vi khuẩn khảo sát đƣợc bổ sung vào giếng (6 giếng/ gốc vi khuẩn) với mật độ 106 cfu/ml bổ sung lần Trong suốt q trình thí nghiệm, khơng cho ấu trùng cá chẽm ăn Tiến hành theo dõi tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm thời điểm 48 Đánh giá tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gốc vi khuẩn khảo sát gây nhiễm với Vibrio spp Kết thúc thí nghiệm 3, có gốc vi khuẩn đạt mức độ an toàn ấu trùng cá chẽm sau thời gian 48 đƣợc sử dụng tiếp cho thí nghiệm Thí nghiệm đƣợc bố trí khay nhựa, khay có ô ô đƣợc bố trí thể tích nƣớc biển vô trùng 50 ml Mỗi nghiệm thức đƣợc bố trí lặp lại lần Mật độ ấu trùng cá chẽm con/1 Thí nghiệm đƣợc bố trí gồm 10 nghiệm thức có nghiệm thức đối chứng bổ sung vi khuẩn Vibrio spp nghiệm thức bổ sung Vibrio spp gốc vi khuẩn riêng lẻ khảo sát Không cho cá ăn thời gian thí nghiệm Sục khí nhẹ lần ngày sau đếm xong ấu trùng cá sống loại bỏ ấu trùng cá chết Vi khuẩn khảo sát đƣợc sử dụng với mật độ 107 cfu/ml chủng Vibrio spp đƣợc sử dụng mật độ 108 cfu/ml Các chủng Vibrio spp đƣợc bổ sung vào sau bổ sung vi khuẩn khảo sát Tiến hành theo dõi tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm sau 24 48 sau bổ sung vi khuẩn tiến hành đánh giá tỷ lệ sống sót ấu trùng cá chẽm thời điểm Đánh giá hiệu nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gốc vi khuẩn khảo sát điều kiện bể ƣơng Kết thúc thí nghiệm in vitro in vivo, chọn lọc đƣợc gốc vi khuẩn Ch101, Ch102, Ch104, Ch201, Ch501, Ch601, T207, T401 T402 phân lập từ cá chẽm tôm sú Tuy nhiên, khối lƣợng công việc lớn điều kiện thí nghiệm hạn chế nên thí nghiệm khơng đƣợc tiến hành đợt phải đƣợc tiến hành đợt thí nghiệm, đợt đƣợc tiến hành với gốc vi khuẩn Ở đợt, vi khuẩn khảo sát đƣợc bổ sung trực tiếp vào nƣớc trƣớc cho trứng vào ấp hai ngày lần trực tiếp vào nƣớc nuôi với mật độ vi khuẩn 105 cfu/ml Song song đó, vi khuẩn khảo sát đƣợc làm giàu qua thức ăn tự nhiên (rotifer artemia) với mật độ vi khuẩn 105 cfu/ml trƣớc cho cá ăn Không bổ sung vi khuẩn nghiệm thức đối chứng Sử dụng gốc vi khuẩn cho nghiệm thức đợt nghiệm thức hỗn hợp gốc vi khuẩn khảo sát đợt Mỗi nghiệm thức đƣợc bố trí ngẫu nhiên đƣợc lặp lại lần Thí nghiệm đƣợc bố trí bể composite 0,5 m3 ấu trùng cá chẽm nở với mật độ 30 con/lít Nƣớc biển phải đƣợc xử lý trƣớc sử dụng Chế độ chăm sóc, quản lý cho ăn đƣợc áp dụng theo quy trình ƣơng cá chẽm Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản Nam Bộ Đánh giá tỷ lệ sống nghiệm thức vào ngày thứ 30 Theo dõi hoạt động cá ngày biểu bệnh (nếu có) Theo dõi tiêu vi sinh: Vibrio tổng số nƣớc Theo dõi tiêu môi trƣờng: nhiệt độ, pH, NH3-N, NO2-N 178 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 Vào cuối đợt thí nghiệm, tất bể ƣơng cá bể nhân sinh khối vi khuẩn phải đƣợc xử lý kỹ chlorine KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Đánh giá khả phân hủy HHL gốc vi khuẩn Tiến hành khảo sát phân hủy HHL gốc vi khuẩn mật độ 105 106 cfu/ml Mục tiêu thí nghiệm nhằm đánh giá khả phân hủy phân tử HHL theo thời gian Khả phân hủy HHL gốc vi khuẩn vào đƣờng kính vịng trịn sắc tố violacein màu xanh hình thành q trình thí nghiệm Từ kết đó, dựa vào đƣờng tƣơng quan tuyến tính để tính tốn nồng độ HHL cịn lại mẫu sau thời điểm thu mẫu Kết đánh giá mức độ phân hủy HHL gốc vi khuẩn khảo sát thời điểm 12 đƣợc thể Bảng Bảng 1: Mức độ phân hủy HHL gốc vi khuẩn phân lập từ cá chẽm thời điểm 12 Phân hủy HHL STT Ký hiệu vi khuẩn 105 cfu/ml 106 cfu/ml Ch101 +++ + Ch102 +++ ++ Ch103 + + Ch104 + + Ch201 +++ ++ Ch301 + + Ch305 + + Ch401 + ++ Ch501 ++ + 10 Ch506 + ++ 11 Ch601 ++ + 12 Ch602 + + 13 Pl101 ++ + 14 Pl103 + + 15 Pl301 + + 16 Pl303 + + 17 Pl606 +++ + 18 T101 + + 19 T102 + + 20 T201 ++ + 21 T204 ++ ++ 22 T207 + + 23 T302 +++ ++ 24 T303 +++ ++ 25 T306 + + 26 T401 + + 27 T402 + + 28 T501 + +++ 29 T602 +++ +++ Trong (+++): gốc vi khuẩn phân hủy HHL mạnh (nồng độ HHL thời điểm 12 giờ) (++): gốc vi khuẩn phân hủy HHL trung bình (nồng độ HHL nhỏ ppm thời điểm 12 giờ) (+): gốc vi khuẩn phân hủy HHL yếu (nồng độ HHL lớn ppm thời điểm 12 giờ) Dựa vào kết phân hủy HHL gốc vi khuẩn khảo sát, nhận thấy tất gốc vi khuẩn khảo sát có khả phân hủy HHL theo thời gian, nhiên, khả phân hủy HHL chúng khác Nhìn chung, mức độ phân hủy HHL mật độ vi khuẩn ban đầu 105 cfu/ml cao so với mật độ vi khuẩn ban đầu 106 cfu/ml Chúng nhận thấy khả phân hủy HHL gốc vi khuẩn mật độ vi khuẩn 105 cfu/ml 106 cfu/ml có khác biệt có ý nghĩa phƣơng diện thống kê học (P < 0,05) Điều thể 179 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 tích thí nghiệm, mật độ vi khuẩn cao dễ xảy khả ức chế lẫn nhau, khả phân hủy HHL gốc vi khuẩn mật độ 106 cfu/ml mạnh mật độ 105 cfu/ml Tinh ctv (2007b) nghiên cứu gốc vi khuẩn EC đƣợc phân lập từ tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) thí nghiệm đƣợc bố trí 48 với nồng độ HHL ban đầu ppm, mật độ vi khuẩn bổ sung 106 cfu/ml Kết thí nghiệm gốc vi khuẩn EC phân hủy HHL hoàn toàn thời gian 48 gốc có khả phân hủy HHL tốt phân hủy HHL hoàn toàn 24 Trong đó, gốc phân lập từ cá chẽm, tơm sú post larvae điều kiện thí nghiệm chúng tơi lại phân hủy HHL hồn tồn thời gian 12 mật độ vi khuẩn 105 cfu/ml Đánh giá đặc tính đối kháng gốc vi khuẩn khảo sát Vibrio spp Đặc tính đối kháng sinh khối vi khuẩn Vibrio spp Kết đặc tính đối kháng sinh khối vi khuẩn Vibiro spp đƣợc trình bày Bảng Mức độ đối kháng sinh khối gốc vi khuẩn khảo sát Vibrio spp Ký hiệu vi khuẩn V alginolyticus V parahaemolyticus V harveyi BB120 Ch102 + – – Ch104 + – – Ch201 + – – Pl101 + – – T207 ++ – – T401 ++ – – T402 ++ + + Đối chứng – – – Trong (++): gốc vi khuẩn đối kháng với Vibrio spp mạnh (đƣờng vòng kháng khuẩn lớn 15 mm) (+): gốc vi khuẩn đối kháng với Vibrio spp yếu (đƣờng kính vòng kháng khuẩn nhỏ 15 mm lớn mm) (-): gốc vi khuẩn không đối kháng với Vibrio spp (khơng tạo vịng kháng khuẩn) Từ Bảng 2, nhận thấy số gốc vi khuẩn khảo sát có gốc vi khuẩn (Ch102, Ch104, Ch201, Pl101, T207, T401 T402) có đặc tính đối kháng với Vibrio spp Cả gốc có đặc tính kháng lại V alginolyticus qua việc hình thành vịng trịn kháng khuẩn xung quanh lỗ thạch Tuy nhiên, số gốc vi khuẩn này, có gốc vi khuẩn T402 hình thành vịng tròn kháng khuẩn chủng Vibrio spp., vịng trịn kháng V alginolyticus lớn Điều chứng tỏ T402 có khả ức chế phát triển gốc Vibrio khảo sát Đặc tính đối kháng dịch sau ly tâm vi khuẩn Vibrio spp Đặc tính đối kháng dịch sau ly tâm vi khuẩn Vibrio spp đƣợc trình bày Bảng Bảng 3: Mức độ đối kháng dịch sau ly tâm gốc vi khuẩn khảo sát Vibrio spp Ký hiệu vi khuẩn V alginolyticus V parahaemolyticus V harveyi BB120 Ch104 + – – Ch201 + – – Đối chứng – – – Trong (++): gốc vi khuẩn đối kháng với Vibrio spp mạnh (đƣờng kính vòng kháng khuẩn lớn 15 mm) (+): gốc vi khuẩn đối kháng với Vibrio spp yếu (đƣờng kính vịng kháng khuẩn nhỏ 15 mm lớn mm) (-): gốc vi khuẩn không đối kháng với Vibrio spp (khơng tạo vịng kháng khuẩn) Trong số dịch sau ly tâm loại bỏ sinh khối vi khuẩn đƣợc khảo sát có dịch hai gốc vi khuẩn Ch104 Ch201 có khả ức chế phát triển V alginolyticus nhƣng khơng có khả ức chế phát triển V parahaemolyticus V harveyi BB120 Tuy nhiên, mức độ ức chế dịch sau ly tâm vi khuẩn khơng cao vịng kháng khuẩn hình 180 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Mơi trường Công nghệ sinh học năm 2011 thành không rõ ràng Điều chứng tỏ hai gốc vi khuẩn Ch104 Ch201 tiết số hợp chất có khả ức chế phát triển V alginolyticus, khơng có diện vi khuẩn mơi trƣờng Do đó, khả ức chế Vibrio spp gốc vi khuẩn hiệu sử dụng sinh khối chúng so với sử dụng dịch môi trƣờng nuôi cấy Điều có nghĩa đa số gốc vi khuẩn khảo sát, chúng tiết hợp chất có hoạt tính ức chế phát triển Vibrio spp có diện sinh khối vi khuẩn mơi trƣờng Từ kết khảo sát đặc tính phân hủy HHL gốc vi khuẩn khả đối kháng Vibrio spp điều kiện in vitro chúng tơi nhận thấy khơng có tƣơng quan khả phân hủy HHL ức chế phát triển Vibrio spp AHL phân tử tín hiệu quorum sensing đƣợc tìm thấy V harveyi V parahaemolyticus, tiết phân tử tín hiệu điều khiển trình hình thành độc lực gốc vi khuẩn (Defoirdt ctv, 2004) Việc bất hoạt phân tử tín hiệu quorum sensing vi khuẩn gây bệnh làm giảm đáng kể biểu yếu tố độc lực, ngƣời ta chứng minh đƣợc nhiều loại vi khuẩn có khả phân hủy AHL phân tử diện môi trƣờng nồng độ từ M đến mM (Defoirdt ctv, 2004) Những gốc vi khuẩn thí nghiệm đƣợc phân lập từ dựa khả phân hủy AHL nên chúng phân hủy đƣợc HHL Tuy nhiên, thời gian 12 theo dõi thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy gốc vi khuẩn khảo sát có khả phân hủy HHL mức độ khác với nồng độ HHL ban đầu ppm Sự phân hủy HHL gốc vi khuẩn chúng tạo lactonase acyclase (Dong ctv, 2000; Molina ctv, 2008) Tốc độ phân hủy HHL gốc vi khuẩn nhanh hay chậm mức độ thích nghi với môi trƣờng chúng, khả tiếp xúc với HHL đồng thời khả tạo enzyme Vì vi khuẩn gây bệnh sử dụng phân tử tín hiệu AHL để điều khiển yếu tố độc lực, phân hủy phân tử tín hiệu làm giảm khả gây bệnh vi khuẩn vật chủ, nhƣng không ức chế phát triển vi khuẩn gây bệnh Do đó, gốc vi khuẩn sử dụng thí nghiệm có khả phân hủy HHL nhƣng nhƣ khơng có nghĩa tất chúng có khả ức chế phát triển vi khuẩn Vibrio spp Trong số gốc vi khuẩn thí nghiệm có gốc vi khuẩn Ch102, Ch104, Ch201 ức chế phát triển V alginolyticus với mức độ (+) gốc vi khuẩn phân lập từ tơm sú T207, T401 T402 ức chế V alginolyticus với mức độ (++) đặc biệt gốc T402 khả ức chế V alginolyticus, chúng cịn có khả ức chế V parahaemolyticus V harveyi với mức độ (+) Điều chứng tỏ gốc vi khuẩn có diện chúng mơi trƣờng, chúng có khả tiết số hợp chất ức chế phát triển Vibrio spp Các hợp chất vi khuẩn tiết để ức chế phát triển Vibrio spp bacteriocin, acid hữu cơ, lysozyme poly--hydroxy butyrate (PHB) (Defoirdt ctv, 2004) siderophore (Gatesoupe, 1997; Verschuere ctv, 2000) Đánh giá mức độ an toàn gốc vi khuẩn khảo sát ấu trùng cá chẽm Từ gốc vi khuẩn chọn lọc đƣợc từ hai thí nghiệm trên, tiến hành khảo sát mức độ an toàn gốc vi khuẩn ấu trùng cá chẽm Mục đích thí nghiệm nhằm xác định gốc vi khuẩn có phải tác nhân gây bệnh gốc vi khuẩn an toàn ấu trùng cá chẽm Thí nghiệm đƣợc theo dõi 48 Trong số gốc vi khuẩn đƣợc chọn lọc có gốc vi khuẩn phân lập từ cá chẽm, gốc vi khuẩn phân lập từ post larvae gốc vi khuẩn phân lập từ tôm sú Bảng 3: Mức độ an toàn chủng vi khuẩn ấu trùng cá chẽm Chủng vi khuẩn Tỷ lệ sống (%) Ch101 93,33 ± 10,33cd Ch102 86,67 ±16,33cd Ch104 90 ± 10,95cd Ch201 93,33 ± 10,33cd Ch501 96,67 ± 8,16d Ch601 90 ± 10,95cd Pl101 20 ± 30,98a Pl606 20 ± 30,98a T207 90 ± 10,95cd 181 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 63,33 ± 32,66bc 63,33 ± 16,73bc 90 ± 10,95cd 86,67 ± 16,32cd 63,33 ± 24,22bc 50 ± 20,98ab 100d T302 T303 T401 T402 T501 T602 Đối chứng Dựa bảng nhận thấy tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm có khác chủng vi khuẩn khảo sát so với đối chứng Xét phƣơng diện thống kê học thời điểm 48 giờ, tỷ lệ sống nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) Điều chứng tỏ bổ sung vi khuẩn ảnh hƣởng đến tỷ lệ sống khác ấu trùng cá chẽm Đối với chủng Ch101, Ch102, Ch104, Ch201, Ch501 Ch601, tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với đối chứng nên chủng không gây hại đến ấu trùng cá chẽm Trong đó, chủng vi khuẩn phân lập từ tôm sú xét phƣơng diện thống kê học thời điểm 48 giờ, tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm bổ sung chủng Pl101, Pl606, T602, T302, T303 T501 có mức độ an tồn thấp cách có ý nghĩa so với đối chứng Điều chứng tỏ chủng vi khuẩn Pl606, T602, T302, T303 T501 khơng an tồn cho ấu trùng cá chẽm, chủng khơng đƣợc sử dụng cho thí nghiệm Nhƣ vậy, chín chủng vi khuẩn Ch101, Ch102, Ch104, Ch201, Ch501, Ch601 T207, T401 T402 tiếp tục đƣợc sử dụng cho thí nghiệm khảo sát hiệu nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm điều kiện in vivo Đánh giá tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với Vibrio spp có diện chủng vi khuẩn khảo sát Thí nghiệm đƣợc thực nhằm đánh giá khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với Vibrio spp có diện gốc vi khuẩn chọn lọc đƣợc thí nghiệm 4.1, 4.2 4.3 Bảng 4: Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với Vibrio spp có sƣ diện gốc vi khuẩn khảo sát Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gây nhiễm (%) Chủng vi khuẩn V parahaemolyticus V alginolyticus Ch101 0 Ch102 0 Ch104 8,33 Ch201 8,33 Ch501 0 Ch601 13,33 T207 21,43 18,75 T401 0 T402 28,57 9,09 Từ kết nhận thấy số gốc vi khuẩn khảo sát, có số gốc vi khuẩn có khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm so với đối chứng điều kiện gây nhiễm Vibrio spp nhƣ gốc Ch104, Ch601, T207 nhƣng khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng Kết không tƣơng đồng với kết thí nghiệm in vitro Điều thí nghiệm đánh giá khả đối kháng gốc vi khuẩn với Virio spp điều kiện in vitro có hai đối tƣợng vi khuẩn khảo sát Vibrio spp Trong đó, điều kiện in vivo vi khuẩn khảo sát Vibrio spp cịn có diện vật chủ, nên tƣơng tác với Vibrio spp gốc vi khuẩn khảo sát tƣơng tác với vật chủ Chính điều làm cho khả phân hủy phân tử tín hiệu AHL và/hay hoạt tính ức chế phát triển Vibrio spp bị giảm xuống, từ làm cho khả bảo vệ ấu trùng cá chẽm gốc vi khuẩn không đạt hiệu quả, đặc biệt gốc T402 Đây gốc vi khuẩn đặc biệt ngồi khả phân hủy HHL (mặc dù tƣơng đối yếu), cịn thể khả ức chế ba chủng Vibrio thí nghiệm 182 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 mức độ ức chế V alginolyticus mạnh Trong thí nghiệm in vivo, gốc thể khả bảo vệ ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với V alginolyticus V parahaemolyticus tốt thời điểm 24 Tuy tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm có diện gốc vi khuẩn khảo sát gây nhiễm với Vibrio spp thấp nhƣng điều khơng có nghĩa gốc vi khuẩn hồn tồn khơng có tác dụng nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm Một số gốc vi khuẩn khảo sát giúp nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm chƣa đạt đến mức độ bảo hộ cho ấu trùng cá chẽm so với đối chứng nhƣ gốc vi khuẩn Ch104, Ch201, Ch601, T207, T402 Hiệu nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gốc vi khuẩn điều kiện ƣơng Từ kết thí nghiệm in vitro thử nghiệm tính đối kháng gốc vi khuẩn khảo sát Vibrio spp ấu trùng cá chẽm, chọn lọc đƣợc số gốc vi khuẩn với đặc tính có lợi để tiến hành thí nghiệm đánh giá ảnh hƣởng gốc vi khuẩn đến tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm Các gốc vi khuẩn đƣợc sử dụng thí nghiệm là: T207, T401, T402, Ch102, Ch104, Ch201, Ch101, Ch501, Ch601 đƣợc chia thành đợt thí nghiệm Bảng 5: Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm đợt thí nghiệm Nghiệm thức Tỷ lệ sống (%) Đối chứng 84,33 ± 5,24b T207 34,67 ± 8,08a T401 18,78 ± 9,89a T402 22,89 ± 10,63a Hỗn hợp 24,89 ± 1,54a Dựa vào bảng 5, tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm bổ sung chủng vi khuẩn giảm thấp có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Việc cung cấp chủng vi khuẩn khảo sát không cải thiện tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm mà làm cho ấu trùng cá chẽm chết nhiều so với nghiệm thức đối chứng đợt phải kết thúc thời điểm 14 ngày Điều chứng tỏ chủng vi khuẩn T207, T401 T402 chủng phân lập từ tơm sú thƣơng phẩm khơng thích hợp với ấu trùng cá chẽm nên cung cấp vi khuẩn qua thức ăn tự nhiên cung cấp trực tiếp, vi khuẩn xâm nhập vào đƣờng ruột khơng tƣơng thích với hệ vi sinh vật đƣờng ruột ấu trùng cá chẽm Bảng 6: Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm đợt thí nghiệm Nghiệm thức Tỷ lệ sống (%) Đối chứng 8,52 ± 0,47b Ch102 11,48 ± 3,24bc Ch104 10,23 ± 3,64bc Ch201 1,34 ± 0,64a Hỗn hợp 14,34 ± 0,67c Dựa vào bảng 6, nhận thấy tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm ngày thứ 30 thấp Tỷ lệ sống cao nghiệm thức hỗn hợp đạt 14,34 % Nguyên nhân chất lƣợng trứng sử dụng đợt không tốt nên ảnh hƣởng đến tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm Khi xét phƣơng diện thống kê học với trắc nghiệm Duncan, tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm thức có khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm thức bổ sung Ch201 thấp (1,34 %) tỷ lệ sống nghiệm thức bổ sung hỗn hợp vi khuẩn cao (14,34%) cao nghiệm thức đối chứng cách có ý nghĩa phƣơng diện thống kê học (p < 0,05), tỷ lệ sống nghiệm thức Ch102 Ch104 khơng có khác biệt có ý nghĩa so với đối chứng đánh giá trắc nghiệm Duncan (p > 0,05) Điều chứng tỏ việc bổ sung vi khuẩn có hiệu việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm Việc sử dụng hỗn hợp ba chủng vi khuẩn cho tỷ lệ sống cao so với việc sử dụng chủng riêng lẻ cao đối chứng, chứng tỏ hỗn hợp vi khuẩn có tác dụng bổ trợ việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm Riêng chủng Ch201 lại cho tỷ lệ sống thấp nhiều so với đối chứng nghiệm thức lại, điều chủng không ức chế đƣợc phát triển Vibrio nƣớc mật độ Vibrio nƣớc cao nên làm cho ấu trùng chết nhiều 183 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 Bảng 7: Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm đợt thí nghiệm Nghiệm thức Tỷ lệ sống (%) Đối chứng 29,84 ± 11,13a Ch101 35,89 ± 15,56ab Ch501 58,6 ± 15,23b Ch601 49,06 ± 13,21ab Hỗn hợp 58,73 ± 2,13b Tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm đợt đƣợc thể bảng Chúng nhận thấy rằng, tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm đợt cao cao nhiều so với đợt trƣớc nghiệm thức đối chứng Điều nguồn trứng cá thụ tinh sử dụng cho đợt tốt nhiều so với đợt trƣớc Và tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm thức có khác rõ rệt Khi đánh giá khác biệt nghiệm thức với trắc nghiệm Duncan, chúng tơi nhận thấy có khác biệt có ý nghĩa tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm thức Ch501 hỗn hợp so với nghiệm thức đối chứng, tỷ lệ sống nghiệm thức bổ sung Ch101 Ch601 lại khơng có khác biệt có ý nghĩa so với đối chứng Qua đợt này, lần cho phép kết luận việc bổ sung vi khuẩn có hiệu việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm so với không bổ sung vi khuẩn việc sử dụng hỗn hợp vi khuẩn cho hiệu cao hẳn so với sử dụng chủng riêng rẽ Tóm lại, chủng vi khuẩn khảo sát có tác dụng nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm chủng vi khuẩn khác theo nguồn gốc phân lập, có nghĩa có chủng vi khuẩn phân lập từ cá chẽm thể hiệu việc nâng cao tỷ lệ sống phát triển ấu trùng cá chẽm Trong ba đợt, đợt với ba chủng phân lập từ tơm sú thƣơng phẩm có tỷ lệ sống ấu trùng thấp so với đối chứng, điều chứng tỏ chủng không phù hợp với hệ vi sinh đƣờng ruột ấu trùng cá chẽm nên khơng có khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng mà ngƣợc lại cịn có khả gây chết ấu trùng Mặc dù chủng đƣợc kiểm tra khả an toàn ấu trùng cá chẽm nhƣng đợt tiến hành theo dõi 48 h, thời gian ngắn nên khơng thể đánh giá hết mức độ an tồn Trong đó, chủng vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cá chẽm hồn tồn khơng gây hại đến ấu trùng cá chẽm suốt thí nghiệm Do đó, chủng vi khuẩn phân lập từ đối tƣợng nên sử dụng cho đối tƣợng cho kết tốt Từ kết thí nghiệm chứng minh chủng vi khuẩn phân lập có tính đặc hiệu theo loài Do chất lƣợng trứng thụ tinh hai đợt không đồng nên đánh giá chủng vi khuẩn đợt hiệu việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm so với chủng sử dụng đợt Nhìn chung, bổ sung vi khuẩn có hiệu việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm hai đợt, ngoại trừ chủng Ch201 đợt Ngoài khả nâng cao tỷ lệ sống, chúng cịn có khả kìm hãm phát triển Vibrio nƣớc, tác nhân gây chết ấu trùng cá chẽm Hiệu nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm chủng vi khuẩn chủ yếu nâng cao khả tiêu hóa ấu trùng, tăng khả hấp thụ dinh dƣỡng làm chúng phát triển nhanh làm thời gian biến thái chúng rút ngắn lại Đồng thời, chủng ức chế độc lực Vibrio vi khuẩn gây bệnh khác thông qua việc bẻ gãy phân tử tín hiệu quorum sensing chúng sản xuất chất ức chế làm Vibrio gây hại cho ấu trùng cá chẽm Hơn nữa, qua đợt nhận thấy hiệu sử dụng chủng vi khuẩn cao sử dụng dạng hỗn hợp Vì chủng vi khuẩn đƣợc thử nghiệm vi khuẩn có lợi nên sử dụng chung chúng hỗ trợ lẫn tốt so với chủng riêng rẽ thích nghi với điều kiện môi trƣờng khác nên hiệu cao Tóm lại, chủng vi khuẩn đƣợc sử dụng thí nghiệm đƣợc phân lập từ cá chẽm, tơm sú thƣơng phẩm post larvae dựa khả phân hủy phân tử tín hiệu quorum sensing vi khuẩn gram âm (phân từ AHL) có chủng vi khuẩn phân lập từ cá chẽm có hiệu tốt việc nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm, điều chứng tỏ nguồn gốc phân lập vi khuẩn có ý nghĩa quan trọng việc chọn lọc đƣợc chủng vi khuẩn tốt cho đối tƣợng mà quan tâm Hơn nữa, việc chọn lọc chủng vi khuẩn theo khả phân hủy AHL 184 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 hƣớng Việt Nam Những chủng vi khuẩn có khả ức chế độc lực vi khuẩn gây bệnh từ nâng cao khả sống ấu trùng cá chẽm Trên giới nhƣ Việt Nam, có nhiều cơng trình nghiên cứu nâng cao tỷ lệ sống nhiều loại động vật nuôi trồng thủy sản probiotic nhƣ tôm sú (Penaeus monodon), tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) (Gomez ctv, 2008), cá bơn (Ringo, 1999; Tinh ctv, 2008), bào ngƣ (Macey Coyne, 2005) … Trong nghiên cứu Gomez ctv (2008) đánh giá khả nâng cao tỷ lệ sống tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) chủng vi khuẩn probiotics cách cho ăn ngày/lần với thời gian theo dõi lần lƣợt 15, 30 45 ngày thấy tỷ lệ sống tơm thẻ thời điểm đạt tỷ lệ cao (từ 83,33 % đến 92,66 %) Gomez ctv (2008) nhận thấy chủng vi khuẩn có sản xuất enzyme tiêu hóa nhƣ protease enzyme tiêu hóa có vai trị quan trọng việc nâng cao khả tiêu hóa vật chủ Nhìn chung, theo kết nghiên cứu đạt đƣợc, chủng vi khuẩn có đặc tính probiotic có khả nâng cao tỷ lệ sống động vật thí nghiệm Đây tín hiệu đáng khả quan, tình hình tác nhân gây bệnh động vật thủy sản ngày nhiều, việc lạm dụng kháng sinh dẫn đến tình trạng kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh probiotic giải pháp khả thi để nâng cao chất lƣợng giống nhƣ chất lƣợng tôm hay cá nuôi thƣơng phẩm KẾT LUẬN Tất chủng vi khuẩn khảo sát có khả phân hủy phân tử AHL (phân tử tín hiệu quorum sensing vi khuẩn gram âm) thời gian 12 h nhƣng mức độ phân hủy chúng không giống phụ thuộc vào thời gian khảo sát Khả phân hủy AHL có mối tƣơng quan với khả ức chế độc lực vi khuẩn gây bệnh, nhiên khơng thiết phải có mối tƣơng quan với khả ức chế tăng trƣởng Vibrio spp điều kiện in vitro Một số chủng phân hủy AHL yếu nhƣng lại có khả đối kháng mạnh với Vibrio spp (nhƣ chủng T402), ngƣợc lại số chủng phân hủy AHL mạnh lại không ức chế phát triển Vibrio spp (nhƣ chủng Ch101) Khả bảo vệ ấu trùng cá chẽm chủng vi khuẩn có khả phân hủy AHL hoặc/và ức chế Vibrio spp điều kiện in vitro phụ thuộc vào diện ấu trùng cá chẽm Khơng có chủng vi khuẩn có khả bảo vệ ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với V parahaemolyticus V alginolyticus (RPS < 60 %) Đa số chủng vi khuẩn an toàn ấu trùng cá chẽm trừ số chủng vi khuẩn T302, T303, T501, T602, Pl101 Pl606 sau 48 h khảo sát tiến hành đánh giá mức độ vô hại chủng vi khuẩn Các chủng vi khuẩn phân lập có tính đặc hiệu lồi theo nguồn gốc phân lập tiến hành đánh giá khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm, có chủng vi khuẩn phân lập từ cá chẽm có khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm ngày thứ 30, chủng vi khuẩn phân lập từ tôm sú thƣơng phẩm lại gây hại đến ấu trùng cá chẽm Các chủng vi khuẩn phân lập cá chẽm có khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm ngoại trừ chủng Ch201 Việc sử dụng hỗn hợp chủng vi khuẩn nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm hiệu so với việc sử dụng chủng vi khuẩn riêng lẻ, có sai biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng TÀI LIỆU THAM KHẢO Ali A., 2000 Probiotics in fish farming - Evaluation of a candidate bacterial mixture PhD Licentiate Thesis, Sveriges Lantbruks, Umea Avendano R E., Riquelme C E., 1999 Establishment of mixed-culture probiotics and micoralgae as food for bivalve larvae Aquaculture Research 30: 893 – 900 Baticados M C L., Lavilla-Pitogo C R., Cruz-Lacierda E R., de la Pena L D and Sunaz N A., 1990 Studies on the chemical control of luminous bacteria Vibrio harveyi and V splendidus isolated from diseased Penaeus monodon larvae and rearing water Disease of Aquatic Organisms 9: 133 – 139 185 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 Bassler B L., Greenberg E P and Steven A M., 1997 Cross-species Induction of Lumisnescence in the Quorum Sensing Bacterium Vibrio harveyi Journal of Bacteriology 197 (12): 4043 – 4045 Chang C I., Liu W Y., 2002 An evaluation of two probiotic bacterial strains, Enterococcus faecium SF68 and Bacillus toyoi, for reducing edwardsiellosis in cultured European eel, Anguilla anguilla L Journal of Fish Disease 25: 311 – 315 Chernin L S., Winson M K., Thompson J M., Haran S., Bycroft B W., Chet I., Williams P and Stewart G S A B., 1998 Chitinolytic Activity in Chromobacterium violaceum: Substrate Analysis and Regulation by Quorum sensing Journal of Bacteriology 180 (17): 4435 – 4441 Defoirdt T., Halet D.,Vervaeren H., Boon N., Van de Wiele T., Sorgeloos P., Bossier P and Verstraete W., 2006 The bacterial storage compound poly--hydroxybutyrate protects Artemia franciscana from pathogenic Vibrio campbellii Environmental microbiology Farzanfar A., 2006 The use of probiotics in shrimp aquaculture FEMS Immunol Med Microbiol 48: 149 – 158 Gomez-Gill B., Roque A and Turnbull F F., 2000 The use and selection of probiotic bacteria for use in the culture of larval aquatic organisms Aquaculture 191: 259 – 270 Grasshoff K., Ehrhardt M., Kremling K., 1999 Method of Seawater Analysis 3rd edition, Wiley, Weinheim, Germany, 420 pages Grisez L and Tan Z., 2005 Vaccine development for Asian aquaculture In Disease in Asian Aquaculture V (Eds P Walker, R Lester and M G Bondad-Reantaso) Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manilla, pp 483 – 494 Gullian M., Thompson F and Rodriguez J., 2004 Selection of probiotic bacteria and study of their immunostimulation effect in Penaeus vannamei Aquaculture 233: – 14 Johnson S C., Treasurer J W., Bravo S., Nagasawa K and Kabata Z., 2004 A review of the impact of the parasitic copepods on marine aquaculture Zoological studies 43 (2): 229 – 243 Lio-Po G D., Leano E M., Penaranda M D., Villa-Franco A U., Sombito C D and Guanzon N G., 2005 Anti-luminous Vibrio factors associated with the ―green water‖ grow-out culture of the tiger shrimp Penaeus monodon Aquaculture 250: – Ljungh A and Wadstrom T., 2000 Lactic Acid Bacteria as Probiotics Current Issues Intestinal Microbiol 7: 73 – 90 Lupp C and Ruby E G., 2005 Vibro fischeri uses two quorum sensing system for the regulation of early and late colonization factors Journal of Bacteriology 187 (11): 3620 – 3629 Moriaty D J W., 1999 Disease Control in Shrim Aquaculture with priobiotics bacteria Microbial Interactions in Aquaculture Muller – Feuga A., 2000 The role of microalgae in aquaculture: situation and trends Journal of Applied Phycology 12: 527 – 534 Parsek M R., Val D L., Hanzelka B L., Cronan J E and Greenberg E P., 1999 Acyl-homoserine lactone quorum sensing signal generation Proc Natl Acad Sci USA 96: 4360 – 4365 Ringo E., 1999 Enhanced resistance of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), against Yersinia ruckeri challenge following oral administration of Bacillus subtilis and B licheniformis (BioPlus2B) Aquaculture Research 30: 229 – 232 Swiderska A., Berndtson A K., Cha M R., Li L., Beaudoin G M J., Zhu J and Fuqua C., 2001 Inhibition of Agrobacterium tumefaciens TraR quorum sensing regulator The Journal of Biological Chemistry 276 (52): 49449 – 49458 Tinh N T N., Dierckens K., Sogerloos P and Bossier P., 2007 A review of the fuctionality of probiotics in the larviculture food chain Marine Biotechnology 10: – 12 Tinh N T N., Gunasekara A., Boon N., Dierckens K., Sogerloos P and Bossier P., 2007 N - acyl homoserine lactone-degrading microbial enrichment cultures isolated from Penaeus vannamei shrimp gut and their probiotic properties in Brachionus plicatilis cultures FEMS Microbiol Ecol 62: 45 – 53 186 Kỷ yếu hội nghị Khoa học Môi trường Công nghệ sinh học năm 2011 Tu K C and Bassler B L., 2006 Multiple small RNAs act additively to integrate sensory information and control quorum sensing in Vibrio harveyi Genes and Development 21: 221 – 233 Verschuere L., Rombaut G., Sogerloos P and Verstraete W., 2000 Probiotic Bacteria as Biological Control Agents in Aquaculture Microbiology and Molecular Biology Reviews 64 (4): 655 – 671 Vilchez R., Lemme A., Thiel V., Schulz S., Sztajer H and Wagner-Dobler I., 2007 Analysing traces of autoinducer-2 requires standardization of the Vibrio harveyi bioassay Anal Bioanal Chem 387: 489 – 496 187 ... lập có tính đặc hiệu lồi theo nguồn gốc phân lập tiến hành đánh giá khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm, có chủng vi khuẩn phân lập từ cá chẽm có khả nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm ngày... hiệu nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm điều kiện in vivo Đánh giá tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm gây nhiễm với Vibrio spp có diện chủng vi khuẩn khảo sát Thí nghiệm đƣợc thực nhằm đánh giá khả nâng. .. sung vi khuẩn khảo sát Tiến hành theo dõi tỷ lệ sống ấu trùng cá chẽm sau 24 48 sau bổ sung vi khuẩn tiến hành đánh giá tỷ lệ sống sót ấu trùng cá chẽm thời điểm Đánh giá hiệu nâng cao tỷ lệ sống