Đang tải... (xem toàn văn)
Điện Di Trên Agarose gel
Ứng dụng của Điện di !" #!$ %&'()* )+,!-./ 0(12#/ 3* 4567 * 47 8.9:56 ;<= "- * >7!9 )? ;< * ( @9A42& B • C62D27 • * 4&"E) * ( @9 • FGHI;9 • FG49J)G"!B * :4IK2* L##*9. / -H:, @9"L9I 2M;2J#!$J92"$ L#N G* O"O 9"L9E !PB56Q 9 8O!94IR S#:T U- 9;VWX56 #!$!VYX Ở mọi cơ thể sinh vật, vật chất sống được cấu tạo từ các đại phân tử sinh học, trong đó quan trọng nhất là nucleic acid và protein Vì vậy việc *m hiểu, phân +ch các phân tử DNA, RNA là rất cần thiết. Khi hiểu rõ cấu trúc, đặc điểm của các đại phân tử này, chúng ta có thể kết hợp với sự phát triển các kỹ thuật, các công nghệ hiện đại để =ến hành lai tạo, chọn giống mới, sản xuất các hợp chất thứ cấp dùng trong y học, sản xuất các chất kháng sinh… IR < * 5,<294/ IZ * 4& @94!IK )+,4IR M4<#* 564G)4<7 * 47#04= :"6 * #!$56 * "$ 9 ! ;[)/ IZ )"IRJ4/ 56 - \ @9 L Nguyên tắc thực hiện F],474&K56"N )^ @94!IK* 4&56 * #0/ 456)/ IZ"_ @9<B`$"a Các phân tử âm hay dương trong một điện trường sẽ di chuyển trong gel với vận tốckhác nhau nhờ vào sự khác nhau của: •Lực điện trường tác động lên chúng(nếu các phân tử +ch điện khác nhau) •Kích thước của phân tử so với kích thước của lỗ gel •Hình dạng, độ cồng kềnh của phân tử !" !$"99!$ )U#* $" WY:#bcY): !$" #"9 !"92$)U #* $"W:#bV): 6!9 A4!!IK 3`def d"$e$"$"f"$ !#$ a !" #$%&'$()& $()& g9!$`#"9 9!$a >)"IR#03-#3hVcYYYY9 gd"2$!27 i)G:"#9$>9 '99 3$)j9"6g9"9 $56kJlg 9!gCg9"9 $ g8-!L 99!$)G4m-5n9/ 45n9!A9!#0 > '9>2o9J2$3"J 9 :3"62"IRo9!99!$4IR "6 h4&7 @999!$ h6 6-#\ -"IR 6 9IK!99!$ > '9YYpXo9 g9!$"62&#"2$!/7/4G( @999! 9!$4IR * !9[77 n2&"6:<4?J= !:<J4IR \2-789"o!9562B 4G q $()&&' 9!$$""62& -!= !2KI99!J4IR 76 )_R#99!$56IZ `= 42 4a4IR 4>ZrVYY569 4>4IR "62"7s7$"3-[ )pYgpW 9!$$""62&"7$"G (-J2&#E9* 4; JIKM4<#* .47 >)/ IZ ! )YWbcY): 8* #0 "$ 9 > )"IR564/ )* 94IR * !9) <n N 29 N I; @94! 2&4!IK >4S 56 IK4&/ R# *+,-#./0,#.*1"2**-+3 !" #$($()& &' 8* #0 > )/ IZ 6"Z `)"IR#0"Za \ 4& < 6 ,2 729)/ IZ - 4j <[ * 4& )* 9Q9 * :$" '9 * m4&99!$)* 9m4& 99!$ 9 >)U#* * 47?56IR "7 8* 75A4>J 5A4'5627 i > M2&)"IR #0j <! 99!$$"[ * 4& )* 9 45*#6*7#8 9-: ;1$()& <=>#?* ! !" Agarose Lược Khuôn gel Máy điện di @-+#$: !" Chuẩn bị agarose Đt mu DNA vo giếng Nhuộm DNA bằng EtBrQuan sát và chụp hình 8>B"799!$)* 9 / R#4< 74J"7 99!$M-!/ 2"6#$gttg99!$ >& u2--# 6 !956762& !J )SQ"6$"46m,2 /[ * m4&-# ::u:["#9$#"9 9!$`da ;.9d A' S * $v2$I"9$J #"2$!9$56wf type-II- agarosedbbnbởisulphat e 8 polysaccharides (SP),hơnn!aSPc"n#c ch$ c%c enzyme như ligase, polymerase v*RE Các đoạn DNA dung ly từ những gel như thế phải được làm sạch cẩn thận trước khi chúng được dùng như là các khuôn mẫu hoặc cơ chấtcho các enzyme naỳ Khi tăng điện thế của quá trình điện di các đoạn DNA lớn thường dịch chuyển nhanh hơn so với các đoạn nhỏ từ cực âm đến cực dương Tùy thuộc vào từng mục đích điện di khác nhau có thể sử dụng nồng độ DNA cao hoặc thấp. Thường dùng micropipeWe 20-200và đặt buồng điện di trên bàn có màu đen Quan sát sự dịch chuyển bằng màu bromophenol để biết lúc nào cần ngừng điện di. Phương pháp quan sát DNA trong agarose $","R-"6M &2 xQ9EtBr. EtBr 4IR M đê _phát hiện DNA R4Gvà RNA sợi đơn *"N @9 &245Z "$9 R 4;"6I;4-#56 >-xQ9)G 99)&2Jf!j3$56.9 * :9$ @9 "$ 9 56 #^##*6 L[ !$" ;A B**C6*#$(D-#$: !" $()&&' [...]... Làm đầy bằng glycerol Đặt trong khe một mẫu giấy loại NA-45 Điện di nhanh trở lại để Điện di nhanh trở lại để chuyển DNA từ gel vào trong dung dịch glycerol chuyển DNA từ gel vào mẫu giấy Rửa mẫu giấy và dung ly DNA trong đệm Chiết dung dị ch glycerol-DNA bằng pipette Cách 1 3 Điện di vào bẫy Tách chiết DNA bằng phenol và kết tủa Hòa tan gel trong dung dịch Rửa và kết tủa tiểu thể muối NaI (4 M) Bổ... dụng của điện Phân tích các sản phẩm PCR (ví dụ: trong chẩn đoán di truyền phân tử hoặc in dấu ditruyền ) di agarose gel Phân tách DNA hệ gen đã được cắt hạn chế trước khi thẩm tích Southern, hoặc RNAtrước khi thẩm tích Northern Ưu điểm và nhược điểm Gel được rót dễ dàng, không gây biến tính mẫu và bền vững vật lý hơn polyacrylamide Mẫu cũng dễ thu hồi Có thể bị nóng chảy trong quá trình điện di, đệm.. .Agarose gel có nhiệt độ nóng chảy thấp Cho vào trong đệm với tỷ lệ 1:1 Cắt Bổ sung muối đến nồng độ 0,5M Đoạn DNA quan 70 tâm Dung dịch gel có DNA 1 Dùng agarose có nhiệt độ nóng chảy thấp Chiết bằng phenol/chloroform Một số phương pháp thu hồi DNA agarose gel và kết tủa Agarose gel chứa bằng DNA Đoạn DNA quan tâm Cho vào đệm chiết làm nóng... chạy không ổn định Kết luận Phương pháp điện di giúp nhận biết, phân tích và tinh sạch DNA Nhờ phương pháp này mà người ta ứng dụng để phân tích giải trình tự DNA, ứng dụng trong các nghiên cứu về DNA rất hiệu quả Có nhiều loại khuôn đỡ được áp dụng cho kỹ thuật này Nhưng mỗi loại phân tử khác nhau sẽ phù hợp đối với loại khuôn đỡ khác nhau Điện di agarose gel là phương pháp tối ưu nhất đối với DNA . tử âm hay dương trong một điện trường sẽ di chuyển trong gel với vận tốckhác nhau nhờ vào sự khác nhau của: •Lực điện trường tác động lên chúng(nếu các phân tử +ch điện khác nhau) •Kích thước. 9-: ;1$()& <=>#?* ! !" Agarose Lược Khuôn gel Máy điện di @-+#$: !" Chuẩn bị agarose Đt mu DNA vo giếng Nhuộm DNA bằng EtBrQuan sát và chụp. cực dương Tùy thuộc vào từng mục đích điện di khác nhau có thể sử dụng nồng độ DNA cao hoặc thấp. Thường dùng micropipeWe 20-200và đặt buồng điện di trên bàn có màu đen Quan sát sự dịch