Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm Linh Chi Việt Nam (Ganodermalucidum) trên chuột gây suy gan thực nghiệm potx

6 1K 22
Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm Linh Chi Việt Nam (Ganodermalucidum) trên chuột gây suy gan thực nghiệm potx

Đang tải... (xem toàn văn)

Thông tin tài liệu

nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm Linh chi Việt Nam (Ganodermalucidum) trên chuột gây suy gan thực nghiệm Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan Bộ môn Dợc lý - Trờng Đại học Y Hà Nội Trên chuột cống trắng, các liều cao của paracetamol (PAR) (uống 2g/kg) và carbon tetraclorid (CCL 4 ) (uống 1,4 ml/ kg) đã làm tăng rất mạnh nồng độ transminase AST và ALT huyết thanh, làm giảm khả năng tổng hợp cholesterol và protein toàn phần của gan. Trên mô bệnh học, gan bị thoái hóa hạt, thoái hóa mỡ và xuất hiện các ổ hoại tử. Cao lỏng nấm linh chi (NLC) với liều uống 4g/ kg đã làm các thông số sinh hóa trên và các tổn thơng mô bệnh học trở về gần bình thờng. Kết quả tơng tự với liều uống 25mg/ kg Silymarin. I. Đặt vấn đề. Do đảm nhận nhiều chức phận chuyển hoá và là cửa ngõ của các chất thâm nhập vào cơ thể từ bộ máy tiêu hoá nên gan là một cơ quan dễ bị tác động nhất của các yếu tố độc hại. Theo y học cổ truyền, nấm linh chi (NLC) - Ganoderma lucidum (Leyss ex.Fr.) Krst, thuộc họ Nấm gỗ Ganodermataceae - có tác dụng bảo vệ gan chống viêm gan cấp và mạn [1]. Tuy nhiên, NLC Việt Nam hầu nh cha đợc đánh giá. Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài này nhằm tìm hiểu tác dụng bảo vệ gan của NLC Việt Nam trên chuột cống trắng đã đợc gây suy gan thực nghiệm bằng paracetamol (PAR) và carbon tetraclorid (CCL 4 ) thông qua một số chỉ tiêu sinh hóa và mô bệnh học của gan. II. Vật liệu - đối tợng và phơng pháp nghiên cứu. 1. Vật liệu: 1.1. Thuốc nghiên cứu: Nấm Linh chi Việt Nam sau khi thu hoạch đợc phơi sấy khô để cả cuống và mũ nấm. Trong nghiên cứu đợc dùng dới dạng cao lỏng có dung môi là nớc, cô đặc đến tỷ lệ 1: 2 (2ml cao lỏng chứa 1g nấm Linh chi). 1.2. Hoá chất, trang thiết bị. - Dung dịch CCl 4 , bột carboxy methyl celulose (CMC), bột PAR của Xí nghiệp Dợc phẩm Trung ơng 2), dầu olive. - Legalon 70mg (viên) của hãng Madaus A.G. (Silymarin, hoạt chất từ quả cây cúc gai - Silybum mariuanumL- Họ cúc Astaraceae). - Các loại hoá chất chuẩn để xác định nồng độ AST, ALT, Cholesterol, Protein của hãng Hospitex diagnostics. - Máy xét nghiệm sinh hoá máu, Screen master của hãng Hospitex diagnostics. 2. Đối tợng. Chuột cống trắng cả hai giống, khoẻ mạnh, Trên mô hình gây suy gan bằng PAR, dùng chuột 8 tuần tuổi (130 10g); trên mô hình gây suy gan bằng CCl 4 , dùng chuột 12 tuần tuổi (180 20g) Trong suốt thời gian nghiên cứu, chuột đợc nuôi dỡng trong cùng một điều kiện, tiêu chuẩn của phòng thí nghiệm của Bộ môn Dợc lý. 3. Phơng pháp nghiên cứu. Thực hiện trên mô hình gây nhiễm độc gan chuột bằng PAR và CCl 4 theo phơng pháp trích dẫn từ Dhawan [5]. 3.1. Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của cao lỏng NLC ở chuột cống trắng gây nhiễm độc PAR. 29 Chuột đợc chia thành 4 lô, mỗi lô 10 con. Lô 1: uống CMC 0,2g/ kg Lô 2: uống CMC 0,2g/ kg Lô 3: uống cao lỏng NLC 4g/ kg Lô 4: uống Legalon (Silymarin) 25mg/kg (liều lâm sàng) [2]. Chuột trong tất cả các lô đợc uống các thuốc trên hàng ngày, trong 8 ngày liền. Vào ngày thứ 6, chuột lô 2, 3, 4 đợc gây nhiễm độc gan bằng uống thêm paracetamol với liều 2g/kg. Ngày thứ 8 sau khi uống liều thuốc cuối cùng 4 giờ, tất cả chuột của 4 lô đều bị giết để lấy máu làm xét nghiệm chức phận gan, quan sát đại thể các tạng và kiểm tra vi thể mô bệnh học gan. 3.2. Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của CLNLC trên chuột cống trắng gây nhiễm độc Cacbon tetraclorid (CCl 4 ). Chuột đợc đợc chia thành 4 lô, mỗi lô 10 con. Lô 1: uống olive - 10ml /kg Lô 2: uống olive - 10ml/ kg Lô 3: uống cao lỏng NLC 4g/ kg Lô 4: uống Legalon (Silymarin) 25mg/ kg Chuột ở tất cả các lô đợc uống các thuốc tơng ứng trong 9 ngày. Ngày thứ 6 và thứ 8, tiêm màng bụng cho chuột ở lô 2, 3, 4 CCl 4 /olive (1:1) 1,4ml/kg. ở giờ thứ 24 sau tiêm CCl 4 lần 2 thì giết toàn bộ chuột, lấy máu làm xét nghiệm đánh giá chức năng gan, lấy gan quan sát đại thể và làm mô bệnh học để quan sát cấu trúc vi thể gan. 4. Xử lý số liệu: Kết quả nghiên cứu đợc xử lý theo phơng pháp thống kê. III. Kết quả 1. Tác dụng bảo vệ của cao lỏng NLC trên chuột gây nhiễm độc paracetamol 1.1. Trên nồng độ transaminase huyết thanh (bảng 1) Bảng 1 Lô Thuốc n AST(UI/L) M SD ALT (UI/L) M SD Chỉ số De Ritis 1 CMC 10 113,8 16,9 27,5 2,5 4,1 2 CMC + PAR 10 6136,9 2108,6 (a) 204,4 62,9 (a) 30,0 3 NLC + PAR 10 298,4 99,9 (b) 56,9 33,6 (b) 5,2 4 Silymarin + PAR 10 233,6 93,2 (b) 38,8 9,3 (b) 6,0 (a) : p < 0,01 so với (1); (b) : p < 0,001 so với (2) Khi dùng cao lỏng NLC trớc 6 ngày và cả trong thời gian cho uống paracetamol (lô 3) thì cao lỏng NLC có tác dụng ngăn cản đáng kể sự tăng AST và ALT do paracetamol gây ra. 1.2 Trên nồng độ protein và cholesterol toàn phần huyết thanh (bảng 2) Lô Thuốc dùng n Protein toàn phần (mg/100ml) Cholesterol toàn phần (mg/ 100ml) 1 CMC 10 70,2 4,4 110,5 10,8 2 CMC + PAR 10 65,6 5,5 + 78,2 8,7 ** 3 NLC + PAR 10 66,7 5,3 + 90,57 8,3 * 4 Silymarin + PAR 10 65,6 4,1 + 88,1 7,3 * (+) : p> 0,05 so với lô 1 (*) : p < 0,05; (**) : p < 0,01 so với lô 1 Nhận xét: Nồng độ của protein toàn phần ở các lô chuột đều khác nhau không có ý nghĩa thống kê so với lô chứng Nồng độ cholestorol huyết thanh cao hơn có ý nghĩa thống kê so với lô 2 là lô chuột gây viêm gan đơn thuần, nhng vẫn thấp hơn lô chứng. 1.3. Kết quả giải phẫu bệnh học gan. 30 Qua quan sát đại thể và hình ảnh vi thể gan chuột trong các lô nghiên cứu trên kính hiển vi quang học đợc trình bày trong các ảnh dới đây. 1.3.1. Chuột uống CMC và paracetamol - Đại thể: gan chuột màu đỏ thẫm, xung huyết mạnh, bờ gan không còn, bề mặt sần sùi không có độ nhẵn bóng, mật độ chắc, có nhiều hoại tử, tại đó tổ chức gan mủn. - Vi thể: Mô gan hoại tử ổ nặng chủ yếu ở quanh các tiểu thuỳ, hoại tử bắc cầu thoái hoá hạt, một số tiểu thuỳ có hoại tử: ở trung tâm, vùng hoại tử xung huyết mạnh và chảy máu, phần nhu mô gan còn lại có nhiều tế bào thoái hoá mỡ, có hiện tợng nhân đông và nhân tan, có thâm nhiễm bạch cầu đa nhân (ảnh 1). nh 1: Hình ảnh cấu trúc gan chuột nhiễm độc paracetamol (Độ phóng đại 100 lần) 1. Cả vùng hoại tử lớn 2. Thoái hoá hạt 3. Thoái hoá mỡ. 1.3.2. Chuột uống cao lỏng NLC và gây viêm gan bằng paracetamol - Đại thể: gan chuột màu đỏ, xung huyết nhẹ, bờ gan bình thờng, còn một vài ổ tổn thơng nhỏ. - Vi thể: Hình ảnh tổn thơng thoái hoá tế bào gan mức độ nhẹ, nhu mô gan gần trở lại bình thờng (ảnh 2). ảnh 2: Hình ảnh cấu trúc gan chuột cống CLNLC và gây viêm gan bằng paracetamol (độ phóng đại 200 lần). Các kết quả trên đã cho thấy cao lỏng NLC hạn chế đợc các tổn thơng giải phẫu bệnh lý về gan do paracetamol gây ra tơng đơng với silymarin. Tuy nhiên hình ảnh gan chuột trong các lô dùng thuốc điều trị (lô 3 và 4) còn một số tổn thơng nhỏ so với hình ảnh cấu trúc gan chuột trong lô chứng. 2. Tác dụng bảo vệ gan của cao lỏng NLC ở chuột nhiễm độc CCl 4 . 2.1. Trên nồng độ transaminase huyết thanh chuột cống trắng (bảng 3) Lô Thuốc n AST (UI/L) ALT (UI/L) Chỉ số De Ritis 1 Olive 8 114,5 16,3 26,7 2,5 4,3 2 CCl 4 /olive 8 313,4 47,3 (a) 79,7 14,2 (a) 3,9 3 NLC + CCl 4 /olive 8 198,0 59,5 (b) 40,8 10,0 (b) 4,9 4 Silymarin + CCl 4 /olive 8 233,4 51,7 (b) 39,7 14,5 (b) 5,9 (a) : p < 0,001 so với (1) (b) : p < 0,001 so với (2) (b) : < 0,01 so với (2) Nhận xét: Lô chuột tiêm màng bụng CCl 4 /dầu olive thì nồng độ transaminase huyết thanh tăng 2,7 lần với AST; 2,9 lần với ALT so với lô uống nớc muối sinh lý. 31 ở lô chuột gây độc bằng CCl 4 /olive có uống NLC (lô 3) thì nồng độ của transamirase huyết thanh chỉ tăng 1,7 lần với AST; 1,5 lần với ALT. ở lô chuột gây độc bằng CCl 4 /olive uống kèm silymarin thì nồng độ transaminase huyết thanh cũng chỉ tăng 2,0 lần với AST và 1,5 lần với ALT. 2.2. Trên nồng độ cholesterol và protein toàn phần huyết thanh (bảng4) Lô Thuốc n Cholesterol TP (mg %) Protein TP (mg%) p 1 Olive 8 111,4 10,0 62,0 4,4 2 Olive + CCl 4 /olive 8 95,6 7,3 57,0 4,4 < 0,05 so với 1 3 NLC + CCl 4 /olive 8 108,5 5,8 66,5 4,0 > 0,05 so với 1 4 Silymarin+ CCl 4 /olive 8 108,2 6,4 67,4 1,4 > 0,05 so với 1 Nhận xét: Các kết quả về nồng độ cholesterol toàn phần và protein toàn phần huyết thanh ở bảng 4 cho thấy ở lô gây độc gan bằng CCl 4 thì nồng độ cholesterol và protein toàn phần thấp hơn 1,2 lần so với lô chứng. Còn ở lô chuột gây độc có uống kèm NLC và Silymarin thì nồng độ cholesterol và protein toàn phần huyết thanh gần trở về bình thờng. 2.3. Kết quả giải phẫu bệnh. 2.3.1. Chuột uống olive và tiêm màng bụng cacbon tetraclorid - Đại thể: Gan chuột bạc màu hơn, có những chấm xung huyết, mặt gan không nhẵn, bờ phù nề, có nhiều tổn tơng nhu mô gan dạng hoại tử, tổ chức gan tại ổ hoại tử mủn. - Vi thể: Nhu mô gan hoại tử ổ, tế bào gan thoái hoá mỡ diện rộng rải rác có thoái hoá hạt, tổn thơng biến dạng tế bào, tế bào phình to, màng tế bào có nhiều chỗ phân tán, tổn thơng tới cả nhân tế bào, nhân đông vón lại và bắt màu kiềm mạnh, màng nhân mất, có nhiều nhân chia. 2.3.2. Chuột uống NLC và gây viêm gan bằng cacbon tetraclorid - Đại thể: Gan bạc màu mức độ vừa, mặt gan không đợc nhẵn bóng không thấy tổn thơng trên bề mặt gan. Thoái hoá mỡ màu đỏ vừa. - Vi thể: tế bào gan tơng đối bình thờng, không có tổn thơng biến dạng, không có tổn thơng nhân, bào tơng của phần lớn tế bào gan có nhiều hốc mỡ do thoái hoá mức độ vừa có hiện tợng tăng sinh mô liên kết, xen kẽ tế bào viêm đơn nhân. IV. bàn luận. Cơ chế gây tổn thơng gan bằng liều cao PAR đã đợc khẳng định là do chất chuyển hóa trung gian N- acetyl- p- benzoquinoimin (NAPQI) có tác dụng huỷ hoại tế bào gan do đợc tạo ra quá nhiều, vợt quá khả năng khử độc của glutathion, chất chống oxy hóa tự nhiên luôn có sẵn ở gan [6]. Còn cơ chế gây tổn thơng gan do CCl 4 là do chất này bị chuyển hóa ở gan dới tác dụng của Cyt P 450 tạo ra gốc tự do CCl 3 [7]. Chúng tôi sử dụng 2 chất này để gây mô hình thực nghiệm trên chuột cống [3] [5]. Trên cả 2 mô hình thực nghiệm của chúng tôi, các tế bào gan đã bị tổn thơng rất rõ cả về mặt sinh hóa (hàm lợng transaminase AST và ALT tăng cao; cholesterol và protein toàn phần giảm), cả về tổn thơng mô bệnh học. Kết quả nghiên cứu đã cho thấy tác dụng bảo vệ gan của cao lỏng NLC thông qua chỉ số transaminase ALT và AST. ở bảng 1, PAR đã làm nồng độ AST tăng tới 54 lần (6136,9 so với 113,8 UI/L) và ALT tăng gấp 7,4 lần (204,4 so với 27,5 UI/ L). Tuy nhiên, trênchuột đợc điều trị trớc bằng cao lỏng NLC 4g/ kg (lô 3 bảng 1) thì AST chỉ còn tăng 2,6 lần và ALT là 2,1 lần so với lô chứng chỉ uống NaCl 0,9%. Chỉ số De Ritis là tỉ lệ AST/ ALT bằng 30 ở lô 2 bị gây độc bằng PAR chứng tỏ tổn thơng ở mức dới tế bào rất nặng. Nhng khi đợc điều trị trớc bằng NLC hoặc silymarin thì các chỉ số 32 tơng ứng là 5,2 và 6,0, rất gần với chỉ số ở lô chứng 4,13, điều đó chứng tỏ NLC hồi phục đợc cả tổn thơng ở mức tế bào và cả tổn thơng ở mức dới tế bào. Trên chuột gây nhiễm độc bằng CCl 4 , kết quả ở bảng 3 cũng cho thấy AST tăng gấp 2,7 lần (313,4 so với 114,5UI/ L) và ALT tăng gấp 2,9 lần. Cao lỏng linh chi và cả silymarin chỉ ức chế đợc một phần sự tăng này, từ 40 - 50%. Chỉ số De Ritis ở tất cả các lô chỉ thay đổi ít. PAR và CCl 4 đều làm giảm khả năng tổng hợp cholesterol và protein toàn phần của gan (bảng 2, 4). Dịch chiết NLC đã phục hồi sự tổng hợp này trở về gần bình thờng. Về kết quả mô bệnh học cũng cho thấy dịch chiết NLC đã hạn chế rất rõ ràng tác dụng gây tổn thơng tế bào gan của PAR (ảnh 1, 2) và cả của CCl 4 . Nh vậy, dịch chiết NLC đã hầu nh có tác dụng đối lập với cơ chế gây độc của PAR và CCl 4 trên tế bào gan chuột, tuy 2 mô hình này gây mức độ tổn thơng khác nhau và cơ chế không giống nhau. Silymarin là hoạt chất flavonoid chiết ra từ quả cây cúc gai đã đợc sản xuất thành thuốc thơng phẩm dới tên Legalon để điều trị bệnh suy gan [2] [4] với cơ chế đợc coi là có tác dụng bảo vệ màng tế bào, ức chế quá trình peroxy hóa lipid, chống oxy hóa và bắt giữ gốc tự do. Trong các mô hình nghiên cứu chúng tôi đều có một lô chuột dùng silymarin để làm chuẩn so sánh. Kết quả cho thấy, trên mọi thông số theo dõi, dịch chiết NLC uống 4g/ kg có tác dụng tơng tự silymarin 25mg/ kg. Điều đó gợi ý cho chúng tôi nghĩ rằng cơ chế bảo vệ gan của NLC có thể rất gần với silymarin, và rất cần đợc nghiên cứu sâu thêm. V. Kết luận Trên mô hình chuột cống trắng đợc gây suy gan bằng paracetamol (PAR) và carbon tetraclorid (CCl 4 ), cao lỏng nấm linh chi (NLC) Việt Nam đã ngăn cản đợc rõ rệt tác dụng làm tăng AST, ALT và tác dụng làm giảm tổng hợp cholesterol, protein toàn phần của cả PAR và CCl 4 . Tác dụng bảo vệ gan của NLC còn đợc thấy rõ trên hình ảnh mô bệnh học của gan. Cơ chế tác dụng bảo vệ gan của NLC có thể tơng tự nh Silymarin. Tài liệu tham khảo 1. Đỗ Tất Lợi (1999) Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bản KH&KT, tr. 2. Đào Văn Phan (2000) Silymarin (Legalon)-đặc điểm dợc lý và các ứng dụng trong lâm sàng. Hội thảo khoa học Legalon và ứng dụng, tr. 12-15. 3. Lại Thị Vân (2003): Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan và một số tác dụng dợc lý liên quan của cây nhó đông (Psychotria morindoides hutch- Rubiaceae). Luận văn thạc sĩ y học- Trờng Đại học Y Hà Nội. 4. Bindoli, A., L. Cavallinin, N.Siliprandin (1997): Inhibitory action of Silymarin of lipid peroxide formation in Rat liver mitochondria and microsomes. Biochem. Pharmacol. 26, 2405- 9. 5. Dhawan B.N. (1997), Hepatoprotective activity of natural products axperimental evaluation. International workshop on medicinal plants their bioactivity. Screening and Evaluation Lucknow, L 15 . 6. Neal, G.E et al (1981), Specific examples of activation reaction, Toxicologie appl. Pharmacol. 6.15. 7. Slater T. F. (1984), Free- radial mechanism in tissue injury. J. Biochem, 222, 1- 15. 33 Summary Hepatoprotective effect of Vietnamese - Ganoderma lucidum (Leyss ex.Fr.) on rat with experimental liver insufficiency On the rat with experimental liver insufficiency caused by paracetamol and carbone tetrachloride, the aqueous extract of - Ganoderma lucidum (Leyss ex.Fr.) with the oral dose of 4g/ kg of body weight evidently inhibited the increase of serum AST, ALT and the decrease of serum total cholesterol, total protein. This hepatoprotective effect has also been observed in histopathologic microscopic examinations of rat's liver. Basing on these results of experiment, the authors suggest that the mechanism of hepatoprotective effect of - Ganoderma lucidum (Leyss ex.Fr.) should be similar to that of Silymarin. 34 . nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm Linh chi Việt Nam (Ganodermalucidum) trên chuột gây suy gan thực nghiệm Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan Bộ môn Dợc lý - Trờng Đại học Y Hà Nội Trên. lỏng nấm linh chi (NLC) Việt Nam đã ngăn cản đợc rõ rệt tác dụng làm tăng AST, ALT và tác dụng làm giảm tổng hợp cholesterol, protein toàn phần của cả PAR và CCl 4 . Tác dụng bảo vệ gan của. cả chuột của 4 lô đều bị giết để lấy máu làm xét nghiệm chức phận gan, quan sát đại thể các tạng và kiểm tra vi thể mô bệnh học gan. 3.2. Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của CLNLC trên chuột

Ngày đăng: 25/03/2014, 03:22

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của nấm Linh chi Việt Nam (G

    • Nguyễn Thị Mai Anh, Đào Văn Phan

      • Thuốc

      • Tài liệu tham khảo

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan