PHÂN LẬP GEN ĐIỀU KHIỂN OsRAP2.4B LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở LÚA Trần Tuấn Tú 1 , Cao Lệ Quyên 1 , Lê Huy Hàm 1 , Phạm Xuân Hội 1 Summary Identification OsRap2.4B involved in drought stress tolerance from rice DRE (dehydration responsive element)/CRT (C - repeat) is a cis - acting element that involves in gene expression responsive to abiotic stress in higher plants. To date, all well known DREBP transcription factors in Arabidopsis, rice, maize and other plants regulate gene expression in response to drought, high - salt and cold stresses by binding specifically to DRE/CRT. Using a target sequence of 50 nucleotides on Glutamate dehydrogenase - like protein (JRC2606) promoter containing the core sequence of DRE cis - acting element (A/GCCGAC) for yeast one - hybrid screening, we identified two transcription factors. A completely homology of OsRAP2.4A gene and another is a new sequence. The new sequence contained an ORF (Open Reading Frame) of 1017 - bp and 5’ non - coding area of 35 - bp and 3’ non - coding area of 341 - bp. Analysis of its deduced amino acid sequence showed that it contains an AP2 domain and furthermore, it belongs to the subgroup A6 of DREB subfamily, temporarily named OsRAP2.4B. Sequence alignment of OsRap2.4B homologized with DREB subfamily transcription factors from different species showed that OsRap2.4B had homology with ZmDBF, a maize transcription factor that increases drought tolerance in plant, suggesting that OsRap2.4B may function as a transcription factor involved in drought stress tolerance. Keywords: Transcription factor, DRE/CTR, OsRap2.4B, drought stress tolerance. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Dưới điều kiện bất lợi, thực vật sẽ có sự thay đổi về mặt sinh lý sinh hoá trong quá trình chống chịu điều kiện bất lợi. Việc phát hiện hàng loạt các gen đáp ứng với quá trình chống chịu điều kiện bất lợi gợi ý rằng nhiều gen trong đó là các nhân tố phiên mã (Sunkar, 2005 and Yamaguchi - Shinozaki and Shinozaki, 2007). Trong các nhân tố phiên mã này có một họ ERBFBP/AP2 được phát hiện ở nhiều thực vật bậc cao khác nhau. Ở cây cải dại, họ gen này có khoảng 145 gen khác nhau mã hoá cho các protein ERFBP/AP2 và được chia làm 3 phân nhóm dựa trên số lượng vùng ERFBP/AP2. Phân nhóm thứ nhất, phân nhóm AP2 gồm 14 gen, mỗi gen mã hoá cho một protein có chứa hai vùng ERFBP/AP2. Phân nhóm thứ hai, phân nhóm RAV có 6 gen, mỗi gen mã hoá cho protein có hai vùng bám ADN khác nhau là ERFBP/AP2 và B3. Phân nhóm cuối là phân nhóm ERFBP có 125 gen, mỗi gen mã hoá cho một protein có duy nhất một vùng ERFBP/AP2 duy nhất. Trong phân nhóm này, 121 gen có chứa một mô tuýp WLG ở giữa vùng ERFBP/AP2 (Sakuma et al., 2002). Các thành viên trong phân nhóm ERFBP có thể được chia nhỏ hơn thành hai phân họ: Phân họ DREB và phân họ các protein giống DREB dựa trên mức độ tương đồng trong trình tự axít amin của vùng bám ADN. Phân họ DREB có chứa 56 gen trong hệ gen của cây cải dại và tất cả đều có chứa một vùng ERFBP/AP2 được coi là có vai trò cốt yếu trong quá trình đáp ứng với bất lợi của môi trường. Phân họ DREB lại được chia nhỏ thành 6 nhóm nhỏ dựa trên mức độ tương đồng của vùng bám ADN. 1 Viện Di truyền Nông nghiệp. Phân họ DREB nhận biết và bám đặc hiệu với các yếu tố DRE hay các trình tự tác động gần giống DRE, trình tự lõi của yếu tố DRE là A/GCCGAC tồn tại trong hầu hết vùng promoter của các gen cảm ứng với các điều kiện bất lợi của thời tiết như hạn, mặn, nóng hay lạnh (Yamaguchi - Shinozaki and Shinozaki, 1994). Cả hai yếu tố trình tự tác động gần giống DRE là CRT (trình tự C lặp lại) và yếu tố đáp ứng nhiệt độ thấp (LTRE) đều chứa mô tuýp CCGAC đều được chứng minh có vai trò điều khiển các promoter cảm ứng nhiệt độ thấp (Baker et al., 1994; Jiang et al., 1996). Phân họ DREB còn bao gồm DREB1A - C (CBF1-3), DREB2A-b, ba nhân tố DREB1 và sáu gen liên quan đến DREB2 ở hệ gen cây cải dại đã được phân lập và các protein của chúng có mức độ tương đồng đáng kể với các vùng bám ADN bảo thủ trong các protein ERFBP/AP2 khác (Jaglo - Ottosen et al., 1998, Liu et al., 1998, Sakuma et al., 2002 and Stockinger et al., 1997). Việc biểu hiện của các gen DREB1/CBF cảm ứng với điều kiện lạnh và các sn phNm ca gen này hot hoá s biu hin ca hơn 40 gen trong vùng DREB1/CBF cho phép cây ci di không nhng chng chu lnh mà c trong iu kin hn và mn (Fowler and Thomashow, 2002; Maruyama et al., 2004). Gen DREB1/CBF cũng ưc chng minh là có chc năng trong chng chu iu kin lnh  các loài khác như  cà chua, ngô, go và lúa mỳ (Gao et al., 2002; Choi et al., 2002; Dubouzet et al., 2003; Jaglo et al., 2001; Qin et al., 2004; Shinner et al., 2005, Hsieh et al., 2002; Ito et al., 2006). N gưc li, vic biu hin ca gen DREB2A li cm ng vi iu kin hn hay nng  mui cao hơn là iu kin lnh. Vic biu hin quá ngưng ca DREB2A trong cây chuyn gen không hot hoá các gen sau nó như trong iu kin sinh trưng thông thưng gi ý rng cn mt quá trình ch bin sau phiên mã mi hot hoá ưc protein ca gen này (Liu et al., 1998). Gn ây, mt min iu hoà âm tính ưc phát hin trong vùng trung tâm ca DREB2A và vic loi b min này ã to ra dng hot hoá liên tc là DREB2ACA. Cây ci di chuyn gen biu hin quá ngưng DREB2ACA ưc chng minh tăng cưng biu hin ca nhiu gen cm ng vi iu kin bt li dn n tăng kh năng chng chu vi iu kin hn (Sakuma et al., 2006a, b). Do vai trò quan trng ca tính chng chu mn và hn, rt nhiu n lc ca các nhà khoa hc ã ưc u tư  phân lp và nghiên cu c tính ca các nhân t áp ng hn hay mn  các thc vt khác như lúa, ngô, lúa mỳ (Dubouzet et al., 2003; Shen et al., 2003, Xue and Loveridge, 2004, Qin et al., 2007). Tuy nhiên, chc năng ca các gen này trong iu kin hn vn còn chưa rõ ràng, ngoi tr gen ZmDREB2A. Không ging như DREB2A, gen ZmDREB2A to ra hai dng phiên mã khác nhau nhưng ch dng phiên mã có chc năng ưc to ra trong iu kin bt li cho thy quá trình ch bin sau phiên mã không cn thit vi gen ZmDREB2A. Thc vt chuyn gen biu hin quá ngưng gen ZmDREB2A cho thy tăng mc  biu hin ca mt s gen cm ng vi bt li hn bao gm các gen mã hoá protein LEA, các protein chng c chng sc nhit. Vic biu hin liên tc hay cm ng vi iu kin bt li ca gen ZmDREB2A dn n tăng cưng sc chng chu iu kin hn  thc vt (Qin et al., 2007). II. VT LIU VÀ PHƯƠN G PHÁP N GHIÊN CU guyên liệu thực vật và phương pháp tạo điều kiện bất lợi Các ht lúa Mc tuyn ưc   30 ± 1 0 C vi quang chu kỳ 12h chiu sáng sau khi ã ưc ngâm trong nưc  nhit  phòng qua êm và kh trùng b mt bng bt bovastin trong 15 phút ri ra sch dưi vòi nưc chy trong na gi.  cho ht ny mm, các ht lúa sau khi kh trùng b mt ưc t trên giy thm ã kh trùng vi khong cách xp x 1 cm, ri cun li ngâm trong cc thí nghim. Sau khi ht ny mm, b sung dung dch MS/2 tip tc gi  cùng iu kin sau 10 ngày s to iu kin hn bng cách nhúng tng bó cây lúa vào dung dch PEG 8000 20% vi các khong thi gian 1 gi, 4 gi, 8 gi và 24 gi. Các cây lúa sau khi x lý hn ưc thu c lá và r, x lý ngay vi nitơ lng và ct riêng r  - 80 0 C Thiết lập thư viện cDA chịu hạn ARN tng s (ARN tt) ưc tách t các cây lúa 15 ngày tui bng m tách GITC. Các ARN thông tin (mARN ) ưc làm giàu t ARN tt nh lc t sau khi ưc gn vi các mi oligo - dT ã ưc gn biotin. Thư vin cDN A ưc xây dng bng cách s dng 5 g mARN ã làm giàu gn vào vectơ Hybrid Zap 2.1 theo quy trình ca hãng Stratagen vi kít sinh tng hp thư vin cDN A HybriZAP® - 2.1 XR (http://www.stratagene.com/manuals/23561 2.pdf). Thư vin cDN A ưc kim tra nng  t 10 10 pfu/ml và ưc chia vào các ng eppendorf gi  - 80 0 C. Sau ó thư vin cDN A trong vectơ Hybrid Zap 2.1 ưc chuyn sang thư vin cDN A pAD - GAL4 2.1 s dng quy trình ct khi lưng ln trong iu kin in vivo ca hãng. Hình 1. Thiết kế trình tự đích và kết quả kiểm tra số lượng trình tự đích lặp lại trong vectơ nhân dòng pSKII ở E. coli bằng cách điện di sản phm PCR với cặp mồi T3/T7 trên gel agarose 1% Thiết kế plasmid mang trình tự đích cho sàng lọc phép lai đơn ở nấm men Chúng tôi s dng trình t ích có cha trình t DRE t trình t promoter ca gen JRC2606 (glutamate dehydrogenase - like protein) cm ng vi iu kin lnh vi mô tuýp lõi ca trt t DRE là GCCGAC như sau: AGCCAAACGCAGCCGGCCGACCTC CTCCCGTGCCTTCC TCCTCGATCCCC. Hai vectơ pHISi - 1 và pLacZi ưc s dng  mang các trình t ích lp li trong vùng MCS ca hai vectơ này. Sàng lọc thư viện bằng phương pháp phép lai đơn ở nấm men Hai vectơ thông báo pHISi - 1 và pLacZi có cha 4 trình t ích lp li liên tc ưc ct bng Xho I và co I vi tng vectơ, sau ó ưc bin np vào h gen ca nm men YM4271 (Clontech)  to thành các nm m có cha c hai vectơ thông báo. Phương pháp sàng lc phép lai ơn ưc tin hành theo quy trình ca hãng Clontech  chn ra các cá th nm cho kt qu sàng lc dương tính sau khi ã bin np tp hp vectơ pAD - GAL4 2.1 mang các cDN A ca lúa Mc tuyn. Các cá th nm men dương tính ưc tách plasmid và gii trình t cDN A trên h thng ABI 3100. III. KT QU N GHIÊN CU VÀ THO LUN 1. Phân lập các cDA mã hoá các protein tương tác với trình tự DRE trong trật tự đích lập lại ể phân lập các cDNA mã hoá cho các protein tương tác với mô tuýp DRE chúng tôi đã sử dụng phương pháp sàng lọc lai một bước ở nấm men. Trước tiên, chúng tôi tổng hợp ba cặp mồi có trình tự bổ sung ngược chiều có chứa trình tự đích. Sợi xuôi chiều của cặp thứ nhất có chứa vị trí EcoRI ở đầu 5’ sẽ gắn bổ sung với sợi ngược chiều để tạo thành phân mảnh thứ nhất. Cặp mồi thứ hai có trình tự bổ sung khi gắn lại sẽ tạo hai đầu đính gồm 10 nucleotide ở mỗi đầu 3’ cho phép phân mảnh thứ hai này lại tiếp tục tự gắn với nhau. Cặp mồi thứ 3 thì có trình tự bổ sung với nhau khi gắn lại tạo thành phân mảnh thứ ba với vị trí của enzyme SmaI (hình 1a). Về nguyên tắc, các phân mảnh 1, 2 và 3 có 10 nucleotide gối nhau nên khi cho chúng gắn lại với nhau sẽ tạo ra một trình tự có chứa ít nhất 3 trình tự lặp lại (hình 1). Sản phNm gn sau ó ưc nhân dòng trong vectơ pSKII gia hai v trí enzyme EcoRI và SmaI. Trình t nm trong vectơ pSKII  ưc kim tra bng cách in di sn phNm PCR vi cp mi c hiu ca vectơ (T3/T7) trên gel agarose 1% và tái kim tra bng máy gii trình t ABI3100. Sau ó, trình t ưc tách ra và nhân dòng vào vectơ pHISi - 1 và pLacZi bng hai v trí EcoRI và SmaI (hình 1). S lưng trình t ích lp li trong vectơ pHISi - 1 và pLacZi li ưc khng nh bng gii trình t sau ó ưc bin np vào h gen ca nm men YM4271. Bng cách này chúng tôi ã thu ưc các cá th nm m có cha hai vectơ thông báo vi 4 trình t ích lp li. Hình 2. Kiểm tra mức độ biểu hiện của gen HIS3 trên môi trường có 3AT thiếu histidine, uracine và khả năng chuyển hoá X - gal của cá thể nấm mẹ Tip ó, chúng tôi kim tra mc  biu hin cơ bn ca các gen HIS3 và LacZ trong cá th nm m bng cách cho nm m sinh trưng trên môi trưng SD thiu histidine và uracine vi các nng  3 - AT (cht c ch sn phNm ca gen HIS3) và kh năng chuyn hoá X - gal. Vi thí nghim kim tra mc  biu hin cơ bn ca HIS3 chúng tôi nhn thy cá th nm m vn sinh trưng yu  môi trưng SD/- His/- Ura có b sung 7,5 mM 3 - AT nhưng  nng  10 mM 3 - AT thì không có có khuNn lc xut hin. V mc  biu hin cơ bn ca gen LacZ chúng tôi nhn thy sau 30 phút có s chuyn mu trên giy thm có tNm IPTG và X - gal (hình 2). Các cá th nm m ưc bin np vi thư vin cDN A x lý hn ca lúa Mc tuyn trong vectơ pAD - GAL4 2.1, nu gen ích mã hoá cho nhân t phiên mã nhn ra v trí bám (DRE) và ging như mt tác nhân hot hoá phiên mã ca gen thông báo nó s cho phép cá th nm men tái t hp sinh trưng trong môi trưng có 10 mM 3 - AT và chuyn hoá X - gal nhanh hơn 30 phút. Sàng lc khong 1,5 × 106 cá th nm men tái t hp chúng tôi thu ưc 28 khuNn lc sinh trưng trên môi trưng SD/- His/- Ura/- Leu cha 10 mM 3 - AT và chuyn màu X - gal trưc 20 phút. Tip tc sàng lc vi iu kin ngt nghèo hơn (50 mM 3 - AT) thì ch còn 12 khuNn lc tip tc sinh trưng. cDN A ca 12 khuNn lc này ưc tách và gii trình t. 2. Giải trình tự và phân tích cấu trúc của OsRap2.4B  xác nh các khuNn lc dương tính này, cDN A ca chúng u ưc gii trình t trên h thng máy ABI 3100. Kt qu gii trình t cho thy có 5 khuNn lc có cDN A có trình t ging vi nhau, 4 khuNn lc khác có cDN A có trình t tương ng và phn còn li cDN A có trình t khác bit nhau. Chúng tôi ã ưa hai trình t tương ng vào ngân hàng gen và phát hin trình t cDN A ca 5 khuNn lc tương ng là OsRap2.4. Trình t cDN A còn li là mt trình t mi ưc tm gi là OsRap2.4B (hình 3). Trình t mi này có khung c m dài 1017 - bp nm sau vùng không mã hoá 5’ dài 35 - bp và tip theo là vùng không mã hoá 3’ dài 341 - bp. Trình t amino axít d oán ca trình t này có 339 axít amin, vi khi lưng phân t d oán ca protein do trình t này mã hoá khong 39 kDa có cha mt min AP2 vi 59 axít amin và mô tuýp WLG nm trong trung tâm ca min AP2 (hình 3). Hình 3. Trình tự nuceotide và trình tự axít amin dự đoán của trình tự mới phân lập OsRap2.4B  xác nh quan h ca OsRap2.4B vi siêu h các nhân t ERF/AP2  thc vt chúng tôi ã phân tích s tương ng v trình t axít amin d oán ca OsRap2.4B vi trt t axít amin ca các protein khác trong siêu h AP2 t các loài khác như ci di, lúa, ngô. Kt qu cho thy OsRap2.4B thuc phân nhóm A - 6 ca phân h DREB (hình 4). OsDREB1J A6 RAP 2.4 B Hình 4. Cây phát sinh được xây dựng bằng phần mềm CLUSTER 6.0 Ngoài ra, so sánh trình tự của OsRap2.4B với các nhân tố tương đồng nhất trong phân họ DREB ở các loài khác nhau chúng tôi nhận thấy OsRap2.4B tương đồng nhất với Rap2.4 (76%) tiếp đó là OsRap2.4A (67%) và với ZmDBF1 là 51%. Mặc dù không tương đồng hoàn toàn về mặt trật tự axít amin nhưng miền AP2 (59 axít amin) và đặc biệt là mô tuýp WLG lại được bảo tồn. Bên cạnh đó, phía trước miền AP2 là hai trình tự bảo thủ (QA/SQ và Q/LP?LMKPP/QA/S) cũng tồn tại bên cạnh một vùng C kết thúc. Những điều này cho thấy có thể OsRap2.4B là một nhân tố phiên mã (hình 5). Hình 5. So sánh trật tự axít amin của nhân tố OsRap2.4B với các nhân tố phiên mã tương đồng trong phân họ DREB T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 7 IV. KẾT LUẬN Phân họ DREBP bám với trật tự DRE hay yếu tố tác động gần giống DRE và điều hoà biểu hiện của các gen cảm ứng với điều kiện bất lợi đã được tập trung nghiên cứu về mặt phân tử. Tuy nhiên, những nghiên cứu chỉ tập trung vào DREB1, DREB2 và các gen đồng dạng (Zhang et al., 2004; Umezawa et al., 2006 và Shinozaki và Yamaguchi - Shinozaki, 2007) ngoài ra còn có các nhân tố ZmDBFs (Kizis and Pages, 2002). Chúng tôi đã xác định được một nhân tố phiên mã mới, OsRap2.4B thuộc nhóm phụ A6. Trình tự axít amin dự đoán của OsRap2.4B có chứa miền bám ADN AP2 gồm 59 axít amin và có mô tuýp WLG nằm trong trung tâm của miền là mô tuýp bảo tồn trong tất cả các nhân tố phiên mã khác trong phân họ DREB (Sakuma et al., 2002). Tuy vậy, hoạt tính bám DRE của các nhân tố phiên mã trong nhóm phụ A6 vẫn chưa được xác định ở mức độ phân tử. Tuy nhiên, ít nhất 5 nhân tố phiên mã của phân họ DREB là: DREB1,2, OsDREB1, ZmDREB1 và ZmDBF1 đã được phân lập bằng phương pháp sàng lọc một bước ở nấm men và tất cả chúng đều có miền bám DRE (Liu et al., 1998; Ping et al., 2005, Qin et al., 2004 and Kizis et al., 2002). Trong thí nghiệm này, sử dụng một tập hợp 4 trình tự đích DRE lặp lại trong sàng lọc một bước ở nấm men cho thấy trật tự OsRap2.4B có thể là một nhân tố phiên mã. Hai protein tương tác với trình tự DRE mới là DBF1 và DBF2 là thành viên của họ các nhân tố phiên mã AP2/ERFBP bám với yếu tố DRE2 và điều hoà biểu hiện của các gen cảm ứng với điều kiện bất lợi và kết quả là tăng khả năng chịu hạn ở cây chuyển gen (Kizis et al., 2002; Saleh A et al., 2006). So sánh trình tự của OsRap2.4B với các nhân tố phiên mã tương đồng trong phân họ DREB từ các loài khác nhau cho thấy OsRap2.4B tương đồng chặt với Rap2.4, OsRap2.4A và ZmDBF1, qua đó có thể nói nhân tố phiên mã OsRap2.4B có thể tương đồng về chức năng với nhân tố ZmDBF1 và tăng cường khả năng chống chịu điều kiện bất lợi của cây chuyển gen. Các nghiên cứu chi tiết về đặc tính và chức năng của nhân tố OsRap2.4B vẫn đang được tiếp tục và kết quả sẽ được công bố trong thời gian tới. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1 Baker S. S., 1994. The 5’ - region of Arabidopsis thailiana cor15a has cis - acting element that confer cold, drought and ABA regulated gene expression. Plant Mol. Biol. 24: 701 - 713. 2 Bartels D, Sunkars R., 2005. Drought and salt tolerance in plant. Critical review in plant science 24: 23 - 58. 3 Celebi - Toprak F., Behnam B., Serrano G., Kasuga M., Yamaguchi - Shinozaki K., aka H., Watanabe JA., Yamanaka S. and Watanabe K., 2005. Tolerance to salt stress of the transgenic Tetrasomic Tetraploid Potato, Solanum tuberosum cv. Desiree appears to be induced by the DREB1A gene and rd29A promoter of Arabidopsis thaliana. Breeding Sciences 55: 311 - 319. 4 Choi D. W., Rodriguez E. M. and Close T. J., 2002. Barley cbf3 gene identification, expression pattern and map location. Plant Phisiol. 129: 1781 - 1787. 5 Dubouzet JG, Sakuma Y, Ito Y, Kasuga M, Dubouzet EG, Miura S, Seki M, Shinozaki K Yamaguchi - Shinozaki K., 2003. OsDREB genes in rice, Oryza sativa L., encode transcription activators that function in drought, high salt and cold responsive gene expression. Plant Journal 33: 751 - 763. T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 8 6 Fowler S. and Thomashow M. F., 2002. Arabidopsis transcriptome profiling indicates that multible regulatory pathways are activated during cold acclimation in addition to the CBF cold response pathway. Plant cell 14: 1675 - 1680. 7 Gao M. J., Allard G., Byass L., Flanagan A. M. and Singh J., 2002. Regulation and characterization of four CBF transcription factors from Brassica napus. Plant Mol. Biol. 49: 459 - 471. 8 Hsieh T. H., Lee J. T., Yang P. T., Chiu L. H., Chargn Y. Y., Wang Y. C. and Chan M. T., 2002b. Tomato plants ectopically expressing Arabidopsis CBF1 show enhanced resistence to water deficit stress. Plant Physiol. 129: 1086 - 1094. 9 Ito Y., Katsura K., Maruyama K., Taji T., Kobayashi M., Seki M., Shinozaki K., and Yamaguchi - Shinozaki., 2006. Functional analysis of rice DREB/CBF - type transcription factors involved in cold responsive gene expression in transgenic rice. Plant Cell Physiol. 47 (1): 141 - 153. 10 Jaglo K. R., Kleff S., Amundsen K. L., Zhang X., Haake V., Zhang J. Z., Deits T. and Thomashow M. F., 2001. Components of the arabidopsis C - repeat/dehydration responsive element binding factor cold response pathway are conserved in Brassica napus and other plant species. Plant physiol. 127: 910 - 917. 11 Liu Q., Kasuga M., Sakuma Y., Abe H., Miura S., Yamaguchi - Shinozaki K and Shinozaki K., 1998. Two transcription factors, DREB1 and DREB2, with an EREBP/AP2 DNA binding domain separate two cellular signaling transduction pathways in drought - and low - temperature - responsive gene expression, respectively, in Arabidopsis. Plant Cell, 10: 1391 - 1406. 12 Qin F., Sakuma Y., Li J., Liu Q., Li YQ., Shinozaki K. and Yamaguchi - Shinozaki K., 2004. Cloning and functional analysis of a novel DREB1/CBF transcription factor involved in cold - responsive gene expression in Zea mays L. Plant Cell Physiol. 45: 1042 - 1052. 13 Qin F, Kakimoto M, Sakuma Y, Maruyama K, Osakabe Y, Tran LS, Shinozaki K, Yamaguchi - Shinozaki K., 2007. Regulation and functional analysis of ZmDREB2A in response to drought and heat stresses in Zea mays L. Plant Journal 50 (1):54 - 69. 14 Sakuma Y, Maruyama K., Okasabe Y., Qin F., Seki M., Shinozaki K. and Yamaguchi - Shinozaki K., 2006. Function analysis of an Arabidopsis transcription factor DREB2A involved in drought - responsive gene expression. The Plant Cell 18: 1292 - 1309. 15 Shinozaki K. and Yamaguchi - Shinozaki K., 2007. Gene networks involved in drought stress response and tolerance. Journal of Experimental Botany58 (2): 221 - 227. 16 Umezawa T, Fujita M, Fujita Y, Yamaguchi - Shinozaki K, Shinozaki K., 2006a. Engineering drought tolerance in plants: Discovering and tailoring genes unlock the future. Current Opinion in Biotechnology 17: 113 - 122. 17 Yamaguchi - Shinozaki K. and Shinozaki K., 1994. A novel cis - acting element in an Arabidopsis gene is involved in responsiveness to drought, low - temperature, or high - salt stress. Plant Cell 6: 251 - 264. 18 Zhang JZ, Creelman RA, Zhu JK., 2004. From laboratory to field. Using information from Arabidopsis to engineer salt, cold and drought tolerance in crops. Plant physiology 135: 615 - 621. T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 9 gười phản biện: Trần Duy Quý . PHÂN LẬP GEN ĐIỀU KHIỂN OsRAP2. 4B LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở LÚA Trần Tuấn Tú 1 , Cao Lệ Quyên 1 , Lê Huy. (CBF1-3), DREB2A-b, ba nhân tố DREB1 và sáu gen liên quan đến DREB2 ở hệ gen cây cải dại đã được phân lập và các protein của chúng có mức độ tương