Trường Đại Học Nha Trang Môn: Sinh Học Thực Vật Các Phương Pháp Chuyển Gen Trực Tiếp Vào Thực Vật Lớp: 53CNSH Nhóm: IV GVHD: Phạm Ngọc Minh Quỳnh Danh sách nhóm: • Nguy n Thi H oễ ả • Hoàng Tu n L cấ ộ • D ng Đình Luânươ • Đ Th C m Nguyênỗ ị ẩ • Lâm Bích Như • Nguy n Văn Trungễ 1. Giới thiệu 2. Kĩ thuật chuyển gene trên thực vật 3. Các phương pháp chuyển gene trực tiếp 4. Một số ứng dụng và thành tựu Nội dung chính 1. Giới thiệu Có nhiều phương pháp làm biến đổi hệ gene của sinh vật, nhưng chủ yếu bằng 3 cách: ĐưaLàmLoại Khái niệm chung • Biến nạp gene ở thực vật là quá trình chuyển một hoặc một số gene ngoại lai vào trong tế bào thực vật nhằm tạo ra một tính trạng mới mà trước đó cơ thể thực vật đó không có. [...]... việc phân tích biểu hiện gene • Tái sinh tế bào trần sau chuyển gene khó khăn Chuyển gene bằng vi tiêm Khái niệm: Chuyển gene bằng vi tiêm là chuyển gene trực tiếp vào tế bào protoplast hoặc TB đơn ( chưa hình thành vỏ cứng) bằng cách sử dụng vi tiêm nhỏ, kính hiển vi và các vi thao tác Nguyên tắc • Nguyên tắc của phương pháp vi tiêm là một lượng nhỏ DNA được tiêm trực tiếp vào nhân tế bào phôi trần.. .Chuyển gene bằng súng bắn gene Súng bắn gen (Gene gun) là một thiết bị sử dụng để đưa thông tin di truyền vào tế bào, được thiết kế đầu tiên cho biến nạp DNA ngoại lai vào tế bào thực vật Nguyên lý chung của phương pháp này là sử dụng áp lực của xung khí helium để đẩy các viên đạn có kích thước nhỏ mang các gene mong muốn (các viên đạn này thường được làm bằng... riêng lẻ các tế bào vi tiêm và biến nạp được vào mọi giống cây  Nhược điểm: • Mỗi lần tiêm chỉ được một phát tiêm và chỉ với một tế bào • Cần dùng các thiết bị có độ chính xác cao và cần kỹ năng phức tạp của người sử dụng Chuyển gene qua ống phấn Khái niệm Là phương pháp chuyển không qua nuôi cấy invitro, các DNA ngoại lai được chuyển trực tiếp bằng đường ống phấn Nguyên tắc DNA ngoại lai chuyển vào cây... theo đường ống phấn, chui vào bầu nhụy cái Thời gian chuyển gene là vào lúc hạt phấn mọc qua vòi nhụy và lúc đưa tinh vào thụ tinh Thời điểm chuyển gene tốt nhất là xảy ra đúng khi quá trình thụ tinh ở noãn và cho tế bào hợp tử chưa phân chia Như vậy sự chuyển gene chỉ xảy ra ở một tế bào cái duy nhất Chuyển gene bằng kĩ thuật siêu âm Khái niệm: Dùng sóng siêu âm để chuyển gene vào tế bào trần Nguyên... nhập, gắn vào hệ gene thực vật Nuôi cấy protoplast trong môi trường chọn lọc Nuôi cấy invitro, tái sinh cây Chọn lọc cây chuyển gene Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level Ưu điểm – Phương pháp này có thể thực hiện với các mô in vivo còn nguyên vẹn – Ðoạn DNA ngoại lai được biến nạp có kích thước lớn • Nhược điểm: • Tỷ lệ các tế bào được chuyển gene còn thấp... mong muốn (các viên đạn này thường được làm bằng Au, Tungsten, titanium hoặc volfram), xuyên qua các lớp tế bào, mô để xâm nhập vào genome thực vật Ưu điểm: - Có thể chuyển gene vào nhiều loại tế bào và mô - Bắn một lần được nhiều tế bào - Quá trình chuyển gen nhanh, thao tác đơn giản - Các vector mang gene tái tổ hợp đơn giản và chỉ cần một lượng vector nhỏ Nhược điểm: • Đòi hỏi thiết bị đắt tiền... bị sốc điện • Việc tái sinh ở một số loài rất khó khăn Chuyển gene trực tiếp nhờ hóa chất Là phương pháp chuyển gene vào protoplast (tế bào trần) nhờ các chất hóa học như polyethylene glycol (PEG) hoặc canxi phosphat Nguyên tắc • Khi có sự tác động của hóa chất thì màng của protoplast bị thay đổi và protoplast có thể thu nhận DNA ngoại lai vào bên trong tế bào • Ở nồng độ cao, PEG làm ADN cần biến... phôi trần hoặc tế bào nguyên vẹn một cách cơ học dưới kính hiển vi • Phương pháp này cho phép đưa gen vào đúng vị trí mong muốn ở từng tế bào với hiệu quả tương đối cao Vi tiêm DNA vào tế bào  Ưu điểm: • Có thể tối ưu lượng DNA đưa vào tế bào • Quyết định được đưa DNA vào loại tế bào nào • Có thể đưa một cách chính xác thậm chí vào tận nhân và có thể quan sát được • Các tế bào có cấu trúc nhỏ như hạt... tượng chuyển gen • Tần số biến nạp ổn định thấp Chuyển gene bằng xung điện Khái niệm:  Là phương pháp sử dụng xung điện trong thời gian ngắn để tạo ra các lỗ trên màng tế bào trần làm cho DNA bên ngoài môi trường có thể xâm nhập vào bên trong tế bào Quy trình: Tạo dung dịch tế bào huyền phù Tạo xung điện với hiệu điện thế cao, trong thời gian ngắn Protoplast bị thủng một số chỗ DNA thâm nhập, gắn vào. .. dính lại trên màng sinh chất Sau đó, bằng cách loại bỏ PEG và xử lý nồng độ cao của Ca2+ hoặc ở độ pH cao, ADN biến nạp sẽ được chuyển nạp vào trong tế bào protoplast  Ưu điểm: • Hiệu quả chuyển gen cao, ổn định nếu quá trình biến nạp thành công • Không đỏi hỏi thiết bị đắt tiền  Nhược điểm: • Tần số chuyển gene rất thấp do không kiểm soát được quá trình chuyển gene • Dễ xảy ra hiện tượng dung hợp TB . thuật chuyển gene trên thực vật 3. Các phương pháp chuyển gene trực tiếp 4. Một số ứng dụng và thành tựu Nội dung chính 1. Giới thiệu Có nhiều phương pháp. 3. Các phương pháp chuyển gene trực tiếp • Trực • tiếp • Xung điện • Súng bắn gen • Hóa chất • Vi tiêm • Siêu âm • Ống phấn Chuyển gene bằng súng bắn gene