Thông tin tài liệu
Đề tài Sinh học phân tử
Đề tài Sinh học phân tử
Nguyễn Thị Xuân Thảo
Nguyễn Thị Thúy Hằng
Nguyễn Thị Mỹ Thuận
Lê Thị Diệu Anh
Phan Hoàng Yến
Mai Văn Điểu
Trần Văn Thảo
Võ Hiệp
ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG
ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG
DNA
DNA
Định lượng của các axit nucleic là
thường được thực hiện để xác định nồng
độ trung bình của DNA hoặc RNA có
mặt trong hỗn hợp.
Ứng dụng của phương pháp
định tính, định lượng DNA được
dùng nhiều nhất trong lĩnh vực y
học như để chẩn đoán các bệnh
học về di truyền
PHƯƠNG PHÁP
PHƯƠNG PHÁP
ĐO QUANG PHỔ
ĐO QUANG PHỔ
Mục đích
Nguyên tắc
hoạt động
Các yếu tố
ảnh hưởng
Mục đích
Mục đích
Xác định hàm lượng và kiểm tra
độ tinh khiết của phân tử DNA, ARN
có trong dung dịch.
Phương pháp đo quang phổ dựa
vào sự hấp thu mạnh ánh sáng tử ngoại
ở bước sóng 260nm của các base
Purine và Pyrimidine, độ hấp thụ này
tỷ lệ với nồng độ DNA.
Nguyên tắc
Nguyên tắc
Dựa vào tính chất này mà người
ta có thể xác định được hàm
lượng các nucleic acid bằng
phương pháp đo quang phổ hấp
thụ ở bước sóng 260nm (OD
260nm
–
Optical Density
260nm
).
Một đơn vị OD ở bước sóng 260nm ký
hiệu là OD
260nm
.
OD
260nm
= 50µg/ml cho một dung dịch
DNA mạch kép
OD
260nm
= 40µg/ml cho một dung dịch
DNA mạch đơn hoặc RNA
Đ h p th ánh sáng c a các baseộ ấ ụ ủ
[...]... xác định hàm lượng DNA trong dung dịch DNA mạch đôi Hàm lượng ADN (µg/ml)= 50 x OD260nm x n Trong đó : OD260nm : độ hấp thụ của dung dịch DNA ở 260 nm 50: hệ số chuyển đổi của dung dịch có nồng độ DNA sợi đôi n: hệ số pha loãng DNA mạch đơn hay ARN Hàm lượng DNA (µg/ml)= 40 x OD260nm x n Trong đó : 40: hệ số chuyển đổi của dung dịch có nồng độ DNA sợi đơn Các yếu tố ảnh hưởng đến độ hấp thụ quang. .. độ hấp thụ quang phổ Nồng độ ion Nhiệt độ PH Tạp chất protein Để đánh giá độ tinh sạch của dung dịch DNA, người ta còn đo dung dịch ở bước sóng 280nm là mức hấp thụ cực đại của protein, nhưng các protein cũng hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 260nm như các nucleic acid do đó làm sai lệch giá trị thật của nồng độ acid nucleic - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm = 1,8 – 2 thì có thể xem dịch chiết DNA là tinh sạch... chiết DNA là tinh sạch - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm > 2 thì dung dịch chiết RNA là tinh sạch, dung dịch DNA bị biến tính hoặc phân hủy - Nếu tỉ lệ OD260nm/OD280nm < 1,8 thì dung dịch DNA, ARN có lẫn tạp chất Ưu điểm: Cho kết quả nhanh, độ chính xác tương đối cao Nhược điểm: Chỉ kiểm tra được hàm lượng DNA trong mẫu tinh khiết . Thảo
Võ Hiệp
ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG
ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG
DNA
DNA
Định lượng của các axit nucleic là
thường được thực hiện để xác định nồng
độ trung. di truyền
PHƯƠNG PHÁP
PHƯƠNG PHÁP
ĐO QUANG PHỔ
ĐO QUANG PHỔ
Mục đích
Nguyên tắc
hoạt động
Các yếu tố
ảnh hưởng
Mục đích
Mục đích
Xác định hàm lượng và
Ngày đăng: 06/03/2014, 05:22
Xem thêm: KỸ THUẬT ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DNA BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ doc, KỸ THUẬT ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG DNA BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ doc