KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN I- NGUYÊN TẮC KỸ THUẬT CHUYỂN GEN II- BỘ CÔNG CỤ III- CÁC BƯỚC CỦA KỸ THUẬT CHUYÊN GEN IV- ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHUYỂN GEN I-NGUYÊN TẮC SV CHO gen VECTOR DNA TÁI TỔ HỢP CHUYỂN VÀO TB ĐÍCH BIỂU HIỆN GEN MONG MUỐN SƠ ĐỒ CHUYỂN GEN • Một số thuật ngữ: • ∙ DNA tái tổ hợp = DNA lai in vitro từ 2 DNA khác nhau (đoạn DNA người “ghép” trên DNA virus hay plasmid vi khuẩn). • ∙ Tạo dòng gene: quá trình cô lập và thu nhận nhiều bản sao của một gene hay một đoạn gene. • ∙ Dòng: một số lớn tế bào hay phân tử giống nhau sinh ra từ một tế bào hay phân tử ban đầu. • ∙ Ngân hàng (thư viện): bộ sưu tập của nhiều dòng khác nhau. • ∙ cDNA: bản sao bổ sung của mRNA (không intron, nhờ retrotranscriptase) • II. BỘ CÔNG CỤ II.1- Các loại Enzyme: enzyme giới hạn, ligase, Phosphatase alkaline, Taq polimerase… II.2- Các loại Vector: Plasmid, Phagemid, Cosmid, Nhiễm sắc thể nhân tạo II.1- CÁC LOẠI ENZYME II.1.1- RESTRICTASE ENZYME (Enzym cắt hạn chế) • ∙ Enzyme giới hạn • Cắt DNA sợi kép ở những vùng 4-6 cặp-base = vò trí giới hạn = trình tự thuận nghòch theo hướng 5’→ 3’ (RADAR). • • TÊN GỌI CÁC ENZYME GIỚI HẠN • Chữ đầu viết hoa: Tên giống vi khuẩn (ly trích enzyme) • Hai chữ kế không viết hoa: Tên loài VK • Chữ số La Mã: Thứ tự RE được phát hiện • Đôi khi có thêm chữ viết hoa sau tên loài VK là tên chủng • Ví dụ: Eco RI (Eco: Escherichia coli , chủng Ry13), Eco RV Bacterial genus species strain type Named (e.g., EcoRI) for bacterial genus, species, strain, and type. [...]...RESTRICTASE ENZYME (Enzym cắt hạn chế) MỘT SỐ CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN - HpaI cắt thẳng • EcoRI cắt so le - HindIII cắt so le - PstI cắt so le CÁCH CẮT CỦA ENZYM GIỚI HẠN ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA SẢN PHẨM CỦA CÁC ENZYME GIỚI HẠN Cohesive ends (sticky ends) EcoRI COHESIVE ENDS 5’…G 3’…CTTAAG…5’ 3’…CTTAA 5’…CTGCAG…3’ 5’…CTGCA 3’…GACGTC…5’... 3’…G Blunt ends (flush ends) HaeIII AATTC…3’ G…5’ G…3’ ACGTC…5’ BLUNT ENDS 5’…GGCC…3’ 5’…GG CC…3’ 3’…CCGG…5’ 3’…CC GG…5’ Enzym cắt tạo đầu dính Cohesive ends ( restriction enzyme) double stranded DNA digested DNA •II.1.2- ENZYME LIGASE •Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự DNA (DNA ligase) hay RNA (RNA ligase) •Ví dụ: T4 DNA ligase Enzyme ligase Xúc tác phản ứng nối hai đầu của 2 trình tự DNA . KYÕ THUAÄT DI TRUYEÀN I- NGUYÊN TẮC KỸ THUẬT CHUYỂN GEN II- BỘ CÔNG CỤ III- CÁC BƯỚC CỦA KỸ THUẬT CHUYÊN GEN IV- ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHUYỂN GEN I-NGUYÊN. GIỚI HẠN - HpaI cắt thẳng • EcoRI cắt so le - HindIII cắt so le - PstI cắt so le ( restriction enzyme) digested DNA double stranded DNA CÁCH CẮT CỦA