TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN  NGUYỄN THỊ CÀ SUM ẢNH HƯỞNG CỦA DIPTEREX LÊN CÁC CHỈ TIÊU SINH HÓA CỦA CÁ TRA GIỐNG (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI TRONG ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2009 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN  NGUYỄN THỊ CÀ SUM ẢNH HƯỞNG CỦA DIPTEREX LÊN CÁC CHỈ TIÊU SINH HÓA CỦA CÁ TRA GIỐNG (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI TRONG ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs. Ts. NGUYỄN THANH PHƯƠNG Ts. HUỲNH THỊ TÚ 2009 LỜI CẢM TẠ  Em xin chân thành cảm ơn thầy PGs.Ts Nguyễn Thanh Phương, trưởng khoa Thủy Sản trường Đại Học Cần Thơ và cô Ts Huỳnh Thị Tú đã quan tâm, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho em trong suốt thời gian học tập cũng như thực hiện đề tài này. Xin chân cảm ơn cô Ts Đỗ Thị Thanh Hương, trưởng bộ môn Dinh Dưỡng và Chế Biến Thủy Sản, trường Đại Học Cần Thơ, chị Hà và chị Thùy cùng với các thầy cô và các anh chị trong bộ môn DD & CBTS đã tận tình dìu dắt, động viên và chỉ dạy cho em những kinh nghiệm quý báu trong suốt thời gian qua để thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Xin chân thành cảm ơn các quý Thầy, Cô đã dạy và truyền đạt cho em những kiến thức quý báu trong suốt khóa học. Xin chân thành cảm ơn các bạn trong tập thể lớp Bệnh Học Thủy Sản K31 và tất cả các bạn bè xung quanh đã giúp đỡ tôi trong thời gian học tập và thực hiện đề tài này. Nguyễn Thị Cà Sum TÓM TẮT Mục đích của thí nghiệm nhằm tìm hiểu sự biến đổi một số chỉ tiêu sinh hoá của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi dưới sự tác động của thuốc trừ sâu Dipterex trong điều kiện thí nghiệm. Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên và được lặp lại 3 lần với mật độ 70 con/bể 500 L với các nồng độ: không có Dipterex, 0,01ppm, 0,1ppm, 0,5pm. Các chỉ tiêu sinh hóa của cá được theo dõi là ChE, CAT, GST và LPO ở cơ, mang, gan và não tại các thời điểm 0 giờ, 6 giờ, 96 giờ, 14 ngày, 56 ngày. Kết quả cho thấy sau khi cho cá tiếp xúc với Dipterex đã làm biến động họat tính cả 4 lọai men ChE, CAT, GST và LPO ở cơ, mang, gan và não của cá tra giai đọan con giống. Dipterex tác động gây ức chế làm giảm hoạt tính của ChE có ý nghĩa thống kê ở mang và gan ở tất cả các nghiệm thức ở các thời điểm thu mẫu 6 giờ, 96 giờ, 14 ngày, 56 và không thấy có hiện tượng hồi phục sau 56 ngày. Dipterex cũng làm giảm có ý nghĩa thống kê họat tính GST ở mang và gan, CAT ở não và mang và làm tăng LPO ở gan, mang, não của cá. Khi cá tiếp xúc với Dipterex men ChE ở cá bị ức chế một cách đáng kể, điều này có thể dẫn đến các hiện tượng ức chế các hoạt động sinh học khác trong cơ thể cá. MỤC LỤC Chương I. Đặt vấn đề 1 Chương II. Lược khảo tài liệu 3 2.1. Đặc điểm sinh học của cá Tra 3 2.1.1. Phân loại 3 2.1.2. Một vài đặc điểm sinh học cá Tra 3 2.1.3. Hình thái 3 2.2. Một số chỉ tiêu sinh hóa và các tác nhân gây nên sự thay đổi của các chỉ tiêu sinh hóa 4 2.3. Sơ lược về Dipterex 6 2.3.1. Đại cương về Dipterex 6 2.3.2. Một vài tính chất của Dipterex 6 2.3.3. Ứng dụng của Dipterex 7 Chương III. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 8 3.1. Vật liệu nghiên cứu 8 3.2. Phương pháp nghiên cứu 8 3.2.1. Phương pháp bố trí thí nghiệm 8 3.2.2. Phương pháp pha hóa chất 9 3.2.3. Thời gian thu mẫu 10 3.2.4. Phương pháp thu mẫu 10 3.2.5. Phương pháp phân tích mẫu 10 Chương IV. Kết quả và thảo luận 16 4.1. Ảnh hưởng của Dipterex lên hoạt tính của Acetylcholinesterase (AChE) trong não, mang, ga, cơ của cá Tra giống 16 4.2. Ảnh hưởng của Dipterex lên hoạt tính của Lipid peroxidation (LPO) trong não, mang, ga, cơ của cá Tra giống 19 4.3. Ảnh hưởng của Dipterex lên hoạt tính của Glutathione-S- Stransferase (GST) trong mang, gan của cá Tra giống 21 4.4. Ảnh hưởng của Dipterex lên hoạt tính của Catalase (CAT) trong não, mang của cá Tra giống 22 Chương V. Kết luận và đề xuất 25 5.1. Kết luận 25 5.2. Đề xuất 25 Tài liệu tham khảo 26 Phụ lục 29 DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1. Công thức cấu tạo của Dipterex(Trần Lâm Ban – Đỗ Phổ, 1987) 6 Hình 2.2. Công thức cấu tạo của DDVP (Trần Lâm Ban – Đỗ Phổ, 1987) 7 Hình 3.3. Dipterx dùng trong thí nghiệm 8 Hình 4.4. Biến đổi của hoạt tính của ChE trong mang ở cá Tra qua các lần thu mẫu 16 Hình 4.4. Biến đổi của hoạt tính của ChE trong não gan ở cá Tra qua các lần thu mẫu 17 Hình 4.4. Biến đổi của hoạt tính của ChE trong não ở cá Tra qua các lần thu mẫu 18 Hình 4.4. Biến đổi của hoạt tính của ChE trong cơ ở cá Tra qua các lần thu mẫu 19 Hình 4.5. Biến đổi của hoạt tính của LPO trong não ở cá Tra qua các lần thu mẫu 19 Hình 4.5. Biến đổi của hoạt tính của LPO trong mang, gan ở cá Tra qua các lần thu mẫu 20 Hình 4.5. Biến đổi của hoạt tính của LPO trong gan ở cá Tra qua các lần thu mẫu 20 Hình 4.6. Biến đổi hoạt tính của GST trong mang của cá Tra qua các lần thu mẫu 21 Hình 4.6. Biến đổi hoạt tính của GST trong gan của cá Tra qua các lần thu mẫu 22 Hình 4.7. Biến đổi hoạt tính của CAT trong mang của cá Tra qua các lần thu mẫu 23 Hình 4.7. Biến đổi hoạt tính của CAT trong não của cá Tra qua các lần thu mẫu 24 DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Thời gian phân hủy 50% của Dipterex theo pH và nhiệt độ (Trần Lâm Ban – Đỗ Phổ, 1987) 7 Bảng 3.2. Tiến trình lập đường chuẩn MDA 11 Bảng 3.3 Quy trình phân tích Enym GST 12 Bảng 3.4 Quy trình phân tích Enzym Catalase 13 Bảng 3.5. Quy trình phân tích enzym AChE Bảng 3.6. Quy trình phân tích Protein 17 1 CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Xuất phát từ sự hội tụ những điều kiện tự nhiên thuận lợi, đồng bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) từ lâu không chỉ là vựa lúa lớn nhất của cả nước mà còn là khu vực có sản lượng Thủy Sản lớn. Trong những năm gần đây, do nhu cầu về thực phẩm trên thế giới tăng nhanh cùng với sự phát triển của khoa học kĩ thuật nên các hoạt động Thủy Sản cũng phát triển rất nhanh. Hiện nay Thủy Sản đã trở thành một trong những nghành kinh tế mũi nhọn, góp phần quan trọng trong tổng thu nhập của cả nước. Cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) là đối tượng nuôi có giá trị xuất khẩu quan trọng nên phong trào nuôi cá Tra ngày càng phát triển nhanh chóng. Theo Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn (2008) thì năm 2007 sản lượng cá Tra, Basa nuôi đã đạt được khoảng 1,2 triệu và kim ngạch xuất khẩu gần 1 tỉ USD. Vì sự phát triển nhanh về diện tích và gia tăng mật độ nuôi cá Tra (từ 20–30 con/m 2 lên đến 50-70 con/m 2 đối với nuôi ao) đã góp phần làm gia tăng sản lượng, tăng thu nhập, góp phần cải thiện cuộc sống cho người dân. Tuy nhiên, nghề nuôi cá Tra hiện nay gặp không ít những khó khăn: tình hình sử dụng thuốc và hóa chất cấm để trị bệnh cho cá Tra nuôi vẫn còn và rất khó kiểm soát, tình trạng môi trường bị ô nhiễm dẫn đến dịch bệnh xảy ra tràn lan, giá cả thị trường không ổn định…đã gây ảnh hưởng đến nghề nuôi cá Tra của nước ta hiện nay. Đa số người dân sử dụng thuốc và hóa chất chủ yếu là theo kinh nghiệm, ít theo sự hướng dẫn của các cán bộ khuyến ngư. Theo Nguyễn Chính (2005) thì có đến 59,5% người nuôi sử dụng thuốc theo kinh nghiệm và đặc biệt là không có người nuôi nào sử dụng hóa chất theo hướng dẫn của cán bộ thủy sản. Điều này cho thấy tâm lí chủ quan và sự thiếu hiểu biết của người dân về những ảnh hưởng của thuốc và hóa chất, đặc biệt là hóa chất độc hại đã bị cấm sử dụng trong nuôi trồng thủy sản đến sức khỏe của cá nuôi, môi trường và người tiêu dùng. Dipterex hiện nay được dùng khá phổ biến trong các ao nuôi Cá (đặc biệt là ao nuôi cá Tra) để diệt nấm, giáp xác, giun sán rất hữu hiệu mà hiện nay chưa có một loại thuốc nào có thể thay thế được. Vì thế mà người dân vẫn còn sử dụng loại thuốc này để trị bệnh cho cá trong khi đã có quyết định của Bộ Trưởng bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn vê việc ban hành danh mục thuốc bảo vệ thực vật được phép sử dụng, hạn chế sử dụng, cấm sử dụng ở Việt Nam năm 2005. Trong đó Dipterex là một trong những loại hóa chất thuộc danh mục thuốc Bảo Vệ Thực Vật cấm sử dụng. Trước khi có những khuyến cáo cũng như các quy định về việc sử dụng thuốc và hóa chất thì các nhà quản lý cần có những thông tin cơ bản về tính nghiêm trọng của việc sử dụng loại hóa chất này lên các ảnh hưởng đến sinh lý, sinh hóa của cá Tra nuôi. Tuy nhiên các nghiên cứu về ảnh hưởng của hóa chất này trên đối tượng Cá Tra còn ít. Do vậy mà đề tài “Ảnh hưởng của Dipterex lên một số chỉ tiêu sinh hóa trong cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) giống” trở nên rất thiết thực góp phần vào sự bền vững của nghề nuôi cá Tra 2 của nước ta hiện nay theo hướng bảo vệ môi trường, sản xuất ra các sản phẩm có chất lượng và vệ sinh an toàn thực phẩm. Mục tiêu đề tài Xác định sự ảnh hưởng của Dipterex lên sức khỏe của cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) giống thông qua sự thay đổi của một số chỉ tiêu sinh hóa trong cơ thể cá nhằm đánh giá mức độ độc hại của loại hóa chất này và ứng dụng trong quản lý sử dụng đúng loai hóa chất này. Nội dung đề tài: Xác định ảnh hưởng của Dipterex đến hoạt tính của một số chỉ tiêu sinh hóa: - Cholinesterase (ChE) - Lipid peroxidation (LPO) - Catalase (CAT) - Glutathion S-transferase (GST) [...]... Thị Thanh Tuyến, (2008), Ảnh hưởng của mật độ và kháng sinh đến một số chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa của cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi trong ao Luận văn tốt nghiệp cao học ngành Nuôi trồng thủy sản – Đại học Cần Thơ 26 Nguyễn Ngọc Hiền, (2007) Ảnh hưởng của mật độ và enrofloxacine lên một số chỉ tiêu sinh hoá của cá Tra (Pangasius hypophthalmus) trong điều kiện thí nghiệm Luận văn Đaih học... Biến đổi của hoạt tính của ChE trong cơ ở cá Tra qua các lần thu mẫu (các chữ cái (a,b,c,d) thể hiện sự khác biệt thống kê trong cùng một nghiệm thức, các cột có cùng một chữ cái thì khác biệt không có ý nghĩa (p . ẢNH HƯỞNG CỦA DIPTEREX LÊN CÁC CHỈ TIÊU SINH HÓA CỦA CÁ TRA GIỐNG (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI TRONG ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM . SUM ẢNH HƯỞNG CỦA DIPTEREX LÊN CÁC CHỈ TIÊU SINH HÓA CỦA CÁ TRA GIỐNG (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI TRONG ĐIỀU KIỆN THÍ NGHIỆM