Viện khoa học công nghệ quốc gia Viện công nghệ sinh học đề tài nckh cấp nhà nớc nghiên cứu công nghệ tế bào kỹ thuật thị phân tử phục vụ chọn tạo giống trồng (thuộc Chơng trình KC 04, mà số KC 04.08) đề tài nhánh nghiên cứu sử dụng công nghệ tế bào kỹ thuậtchỉ thị phân tử phục vụ chọn tạo giống trồng CNĐT: Nguyễn Thị Lạng Hà Nội - 2005 DNA marker chứng minh có tầm quan trọng lâu dài, số lượng lớn nhiều lần “isozyme marker” (Tanksley ctv 1980) Việc áp dụng DNA marker dễ dàng tương lai rẻ tiền nhờ cải tiến không ngừng nhà khoa học Về bản, chuỗi mã DNA dùng để phân biệt hai cá thể, hai dòng giống khác nhau, xem DNA marker Các DNA markers chia thành hai nhóm sau: - PCR-based: ALP, AFLP, SSR, SSCP DNA / DNA hybridization-based: RFLP, minisatellite Các markers thuộc nhóm PCR-based chia nhỏ thành: MAAP marker ngắn, có tính ngẫu nghiên: RAPD, AP-PCR DAF, AFLP amplicon đơn: ALP, SSR, SSCP Những lợi ích DNA markers so với marker hình thái isozyme marker - đo lường trực tiếp vật liệu di truyền có nhiều markers quần thể đo lường không chi phối ảnh hưởng mơi trường ảnh hưởng có tính chất phát triển Các loại DNA markers thông dụng Marker RFLP ALP AFLP RAPD DAF SSR AP-PCR SSCP MRDHV-DNA SNP Tên đầy đủ Restriction fragment length polymorphism Amplicon length polymorphism Amplified fragment length polymorphism Random amplified polymorphic DNA DNA amplification fingerprinting Simple sequence repeat (microsatellite) Arbitrary primer-PCR Single strand conformation polymorphism Moderately repeated, dispersed, and highly variable DNA (minisatellite) Single nucleotide polymorphism II.3.1 RFLP MARKER Trong DNA markers, RFLP (restriction fragment length polymorphism) marker dùng phổ biến biết nhiều Trong nhiều trường hợp, thuật ngữ RFLP marker đồng nghĩa với DNA marker Có nhiều giai đoạn để tạo chất thăm dò RFLP marker tạo thể đa hình DNA Phân lập DNA 10 IR64 / OM 1490 DS20 / Nàng thơm chợ đào OM 1490/Jamine OMCS2000/ Khao DawMali 105 OMCS2000/ Nàng thơm chợ đào IR 64/ Nàng thơm chợ đào Jamine/ OMCS2000 OMCS 2000/ KhaoDawMali 105 2 3 31 50 12.5 20 33.33 64.52 50 0 66.67 16.7 0 18 24 22 10 28 5 6.1 2.08 1.94 Một số thông tin phân tích tổ hợp lai để khai th¸c hàm lượng giàu vitamine sau : Đối với tổ hợp khai thạc từ giống OM 4393 có tỉ lệ mơ sĐo cao Có điều ngạc nhiên tỉ lệ túi phấn cho cao tổ hợp OM 4392/ OM 3536 Hình 5: Mơi trường mơ sẹo ( bên cạnh có túi phấn khơng phát triển) Bảng : Đánh gía tỉ lệ mơ sẹo phát triển tái sinh tổ hợp giống giàu vitamine Phân Tì lệ Cặp lai Số túi Phần Số mơ Phần Phần túi phấn phấn trăm mô sẹo /dĩa trăm trăm trăm sản xuất / seoû xanh (%) (%) (%) nhà bạch lưới tạng (%) OM 4392/ 480 92.00 64 3.12 17.81 48.43 9.09 OM 1490 37 OM 4392/ OM 3536 OM 4392/ OM 2031 OM 4392/ Jasmin 85 678 86.70 192 18.23 43.75 75.0 39.15 491 47.49 113 1.50 0.98 53.58 1.50 500 54 53 0.75 0.5 85.0 1.25 III.3.3.Kh nng tạo mô sẹo số môi trờng Việc thành công hay thất bại việc nuôi cấy mô cong\f tuỳ thuộc vào môi trờng, quan sát tạo mô sẹo tổ hợp lai môi trờng, Cal (tạo mô sẹo 1) CaII (tạo mô sẹo 2), kết bảng cho thấy hầu hết tổ hợp lai tạo mô sẹo hai môi trờng cấy từ yúi phấn Tuy nhiên, khả tạo mô sẹo tổ hợp lai môi trờng có khác biệt, tổ hợp lai IR64/Jámine 85 có tỷ lệ tạo mô sẹo cao 12,78% so với tổ hợp khác Mặt khác, hai môi trờng khảo sát, môi trờng CaI (N6+2 mg.L-12,4D +1 mg.L-1NAA) có tỷ lệ tạo mô sẹ trung bình 11,37% cao môi trờng CaII (N6+2 mg.L-12,4D) cã tỉ lệ 8,52% (hình 6,7) B¶ng tû lƯ tạo mô sẹo môi trờng tỉ lệ tạo mô sẹo (%) Tổ hợp Ca I Ca II OM1490/Khao10 9,89c 6,44c 12.78 11.44 9.89 IR64/Jasmine85 12,78a 9,78a 9.78 9.33 CS2000/Khao 105 11,44b 9,33b 6.44 TB 11,37 8,52 CV% 11,88 20,86 1,32 1,37 LSD 0.05 OM1490/Khao10 IR64/Jasmine 85 CS2000/Khao 105 Hình 6: Mô sẹo hình thành môi trờng CaI CaII III.3.4 ỏnh giỏ s tỏi sinh xanh tổ hợp lai loại môi trường Khi mô phôi sinh thiết lập đưa vào môi trường lỏng Tế bào non diện Những tế bào nầy xuất khơỉ đầu chọn vật liệu phôi sinh Một vài tế sản xuất polysaccharides, tế bào không thành phôi xuất xuất tạo dung dịch huyền phù Đặc biệt phải quan sát ( xem trực tiếp môi trường lỏng) Lúc nầy phải chuyển qua môi trường Phôi phôi sinh diện , xuất màu vàng nâu lợt kính hiển vi Sau trở nên đen sau vài ngày Phôi sinh khởi hành đời sống ban đầu phát triển xuất màu vàng tới tím nhạt Một số phơi khởi đầu xuất tức khắc Có thể để tuần cho mơ sống môi trường 38 Ca I Ca II lỏng.Nếu quan sát kính hiển vi số mơ màu đen mơ khơng phát triển Cây tạo trực tiếp từ phơi đơn tính đực mà không cấy chuyền Trường hợp phôi cần phải cấy chuyền sang môi trường gọi mơi trường tái sinh Mỗi loại có mơi trường tái sinh khác Thí dụ lúa môi trường tái sinh cần lượng đường thấp 20- 30 gram/ lit 2,4-D thay NAA , IBA Môi trường MS với 4mg/lit kinetin 0,5 mg/lit IAA Trong kết nghiên cứu nầy cho thấy mơ sẹo sau hình thành môi trường tuần chuyển sang loại môi trường tái sinh, Ge I ( tái sinh 1) , GeII( tái sinh 2) , GeIII ( tái sinh 3)và GeIV( tái sinh 4) Khi khảo sát tái sinh xanh bốn loại môi trường, hầu hết tế bào có khả tái sinh tạo mơ sẹo từ túi phấn có khác biệt tổ hợp lai Tất tổ hợp có thích nghi hai loại mơi trường GeI GeII Tuy nhiên so sánh nhóm mơi trường tổ hợp lai, kết bảng cho thấy tổ hợp IR64/Jasmine85 có khả tái sinh cao môi trường GeII (MS+1mg l-1 Kinetin + 0,5mg.l-1 NAA+ 2mg l-1 BA), tổ hợp lai khác có khả tái sinh tỉ lệ tạo xanh thấp hơn.( bảng 9) Bảng Khả tái sinh xanh môi trờng Số xanh tái sinh Tổ hợp Ge IV Ge I Ge II Ge III OM1490/Khao105 17 A a 23 AB a 4Ab IR64/Jasmine85 24 A ab 29 A a A bc CS2000/Khao 105 12 A a 10 B a 6Aa 119,16 104,81 106,6 LSD0.05 2,19 2,05 Täøng 53,00 62,00 18,00 17,67 20,67 6,00 LSD0.05 Täøng 89,48 1,173 49,00 108,34 1,942 67,00 1,119 31,00 14,00 TB CV% 4,67 CV% 0,69 5Ab 12,25 6Ac 16,75 3Aa 122.08 7,75 122,08 0,62 Ghi chú: A, so sánh tổ hợp lai môi trờng a, so sánh môi trờng tổ hợp lai 39 TB Sọỳ cáy 29 30 25 20 23 17 15 12 OM1490/Khao10 IR64/Jasmine 85 CS2000/Khao 105 10 10 5 Ge I Ge II Ge III Ge IV Hình 7: tái sinh môi trờng Ngoi ra, cõy xanh t kích thước khoảng 1.5-2cm tách cho nhân chồi môi trường MS bổ sung 2mg/L-1BA hay chuyển sang môi trường tạo rễ Rt (MS+ 0,5mg.l-1 NAA), rễ có chiều dài 2-3 cm chuyển sang môi trường dinh dưỡng, Yoshida, để chuẩn bị cho nhà lưới Trên hầu hết chồi tách nhân số lượng môi trường nhân chồi tạo chồi tốt, chồi 40 tạo có thân hồn chỉnh, chuyển sang mụi trng to r sau 20-30ngy (Hỡnh8) Hình 8: Cây môi trờng tái sinh Trong quỏ trỡnh tỏi sinh cõy từ túi phấn, tượng tái sinh không tổng hợp diệp lục tố, nên có màu trắng gọi bạch tạng Điều nầy khác với trình tạo đột biến tế bào soma Trên tổ hợp nuôi cấy túi phấn bạch tạng đạt tỉ lệ cao tổ hợp lai OM1490/Khao105 (60,98%), thấp tổ hợp CS2000/Khao105 (42,42%) khác biệt mức yà nghĩa 0.05 Tuy nhiên, đánh giá chung số lượng tái sinh tổ hợp, tổ hợp IR64/Jasmine85 có số lượng tái sinh 41 cao (67 cây, bảng 8) môi trường GeII (MS+1mg l-1 Kinetin + 0,5mg.l-1 NAA+ 2mg l-1 BA) Túi phấn từ tổ hợp lai dùng thí nghiệm có khả phát triển mơ sẹo mơi trường khảo sát Trong tổ hợp lai IR64/Jasmine85 tạo mơ sẹo tốt môi trường N6+ 2mg.l-1 2,4D+ 1mg.l-1 NAA Các mơ sẹo có khả tái sinh khác biệt tổ hợp lai Hai tổ hợp lai IR64/Jasmine85 OM1490/Khao105 tái sinh xanh tốt môi trường MS+ 0.5mg.l-1 NAA+ 2mg.l-1 BA MS+1mg l-1 Kinetin + 0,5mg.l-1 NAA+ 2mg l-1 BA phân tích thống kế vùng anova phân nhóm theo lsd với mức độ ý nghĩa p=0,05 Các xanh nhân chồi hoàn chỉnh tốt môi trường MS + 2mg.L-1BA tạo rễ môi trường MS+0,5mg.L-1NAA Tuy nhiên cần tiếp tục nghiên cứu biến dị trình khai thác tế bào haiploid Trồng theo dõi khả kháng sâu bệnh cấy mơ ngồi nhà lưới ngồi đồng Tuy nhiên đánh gía tiếp chất lượng dịng III.4.Đánh gía marker phân tữ 3.4 Đánh giá PCR base hàm lượng amylose Dùng microsatellite định vị gen hàm lượng amylose giúp đánh gía liên kết gen quần thể lai ,dùng marker SSR, phân tích hàm lượng marker wxF với chiều dài mã trình tự sau : 5’ctttgtctatctcaagacac-3’ wxR 5’ ttgcagatgttcttcctgatg -3’ cho thấy đa hình quần thể amylose( Lang 2004) Đánh gía độ đa hình lúa mùa cho thấy có hai band với kích thước khác Độ đa hình phân biệt hàm lượng amylose cao thấp quần thể lúa mùa ( hình9 ) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 1920 21 22 23 24 Hình :Đánh giá đa hình marker Wx phân tử 15 giống lỳa v ging cao sn Đánh gía mùi thơm thông qua kiểu gen Từ kết phân tích tiếp tục phân tích để đánh gía kiểu gen thông qua marker phân tử : Đối với mùi thơm thị phân tử với marker SSR đợc thiết kề từ Lang ctv 2004 dùng để đánh gía quần thể phân ly BC1F2 Chỉ thị phân tử SSR marker : Đối với thị phân tử nầy với RG28 F-R đợc ghi nhận hình Marker RG 28F-R tách đợc allele thơm không thơm quần thể BC F2 Kết ghi nhận cho thấy với điều tra quần thể lai độ đa hình cá thể giống khác lai so với bố mẹ khác biệt qua gen Vị trí DNA 42 quần thể chia allele nh− sau : allele ë vÞ trÝ Ir 64 750 bp vị trí DS 20 với allele vÞ trÝ 800 bp ghi nhËn M 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 M Tỉ lệ phần trăm locus đa hình đợc ghi nhận quần thể F1 Bc1F1 không ghi nhân Đối với F2 cho thấy tỉ lệ 12% đa hình nghiên gen thơm Tơng tự BC1F2 ghi nhận gen thơm có tỉ lệ 9,5% Điều nầy cho thấy phân ly theo cách phân tích tổ hợp có kết tơng tự Tài liệu tham khảo Hình 10 : Kết phân tích marker phân tử với STS marker tách quần thể BC 1F2 cặp lai IR 64/ DS 20 M: lµ marker chuÈn 1Kb băng 1: IR 64 , 2: DS20 Từ tới 32 cá thể từ BC1F2 III.4 Đánh giá suất phẩm chất dòng có triển vọng III.4.1 thành công đa so sánh quan sát ruộng với 532 dòng, chọn so sánh sơ khởi 25 dòng Từ 25 chọn lại dòng từ giống lúa (bảng 9) để so sánh đa khảo nghiệm Kết phân tích ANOVA dòng tế bào soma cho thấy phẩm chất giống đạt hàm lợng amylose trung bình, độ bạc bụng cấp Ngoại trừ giống Nàng thơm Chợ đào Bảng 10 So sánh kết số dòng từ nuôi cấy túi phấn vụ Hè thu năm 2003 Dài Hạt Hạt NS( Số dòng Cây cao Số chồi lép/bông chắc/bông %lep TL1000 gram) OM 1490 OM 3536 Jamine 85 Nàng thơm chợ đào Khao Daw Mali 105 Trung b×nh EMS cv % 111.500 7.250 29.000 50.750 117.250 13.250 29.500 71.500 113.500 11.750 29.500 79.000 162.750 23.192 22.650 129.500 31.390 23.150 172.250 31.495 22.950 27.471 33.476 38.911 113.750 12.000 142.750 23.200 31.708 113.750 113.950 8.250 28.875 78.250 10.500 29.150 69.700 119.000 38.987 23.700 145.250 31.522 23.130 26.029 31.519 35.350 5.218 5.933 23.199 28.875 69.000 32.545 4.092 792.033 1984.750 92.158 6.939 40.377 30.672 30.455 3.618 8.224 44.670 21.205 43 F-value 0.486ns 4.551* 0.102ns 0.660ns LSD 0.05 8.959 3.670 3.048 42.407 0.01 12.390 5.076 4.215 58.646 0.997ns 1.369ns 0.164ns 67.131 14.466 2.866 92.836 20.005 3.964 Bảng 11: Phân tích phẩm chất Chiều Bạcbụng Độ Stt Giống Protein dài (cấp) bền hạt gel (mm) 8,58 7.31 43 OM 1490 8,9 7.71 44 OM 3536 7,42 58 Jamine 8,75 85 7,10 0-7 50 Nàng 8,23 thơm chợ đào Khao 8,64 7,23 48 Daw Mali 105 2.351ns 10.071 13.927 Amylose Độ trở (%) hồ(Cấp) 24.1 24.2 22.5 23.5 23.1 III.2 đánh gíanăng suất phẩm chất dòng nuôi cấy túi phấn đánh gía suốt thành phần suốt tổ hợp giàu vitamine A bốn tổ hợp cho thời gian ngắn từ 81-88 ngày điều thú vị cho giống luân canh ba vụ năm Đông xuân 2003 ( bảng 11) So sánh sơ khởi dòng giàu vitamine : Kết qủa với tổ hợp đợc chọn 145 dòng , chọn dòng từ cặp lai để quan sát đánh giá kết Bảng 12: Các đặc tính hình thái dòng nuôi cấy túi phấn từ tổ hợp lai F1 Stt Cặp lai TGST (ngày) Cao (cm) Dài (cm) OM 4392/ OM 1490 84 68.6 21.03 b OM 4392/ OM 3536 81 74 20.96 b OM 4392/ OM 2031 87 79.4 20.27 b OM 4392/ Jasmin 85 88 80 23.28 a CV=5.23% α =0.01 TiÕp tục nghiên cứu suất giống đợc có suất từ aans/ha Tuy nhiên trọng lợng 1000 hạt thấp hạt nhỏ ngắn Bảng 13; Các thành phần suất dòng nuôi cÊy tói phÊn tõ tỉ hỵp lai F1 TØ lƯ lép TL1000 hạt Năng suất Stt Nguồn gốc Số bông/m2 Số hạt chắc/bông (T/ ha) OM 4392/ OM 381 a 70 b 15.66 20.58 a 4.97 b 44 1490 OM 4392/ OM 3536 OM 4392/ OM 2031 OM 4392/ Jasmin 85 368 a 73.46 b 44.62 20.38 a 5.94 a 348 ab 70.24 b 18.28 20.67 a 5.233 b 315 b 95.16 a 25.46 20.38 a 5.843 a CV=2.45% CV=15.85% CV=24.72 CV=18.40% % α =0.05 α =0.01 α =0.1 α =0.1 Ph©n tÝch phÈm chÊt cđa dòng cho thấy hàm lợng amylose từ cặp lai OM 4392/OM 3536 cho hàm lợng amylose trung bình độ bền gel trung bình Bng 14 Phõn tớch phẩm chất bốn dòng ghi nhận bảng ®é bỊn gel Amylose ®é trë (%) hå (cÊp) 26.3 3.97 Chiều dài hạt (mm) 5.31 Bạc bụng (cÊp) 8,12 2.05 5.71 50 22.3 7,54 4.09 6.28 55 25.5 8,23 2.15 5.81 1-5 37 24.1 Stt Protein Vitamine A (%) OM 4392/ OM 1490 OM 4392/ OM 3536 OM 4392/ OM 2031 OM 4392/ Jasmin 85 8,50 32 Trên bảng 15 16 cho thấy khai thác tế bào soma vài giống chọ có suất cao bình thờng nh Nàng thơm chợ đào, OM 3536, nhng ngợc lại có nhiều giống lại thấp bình thờng nh OM 1490 Phẩm chất mùi thơm nhiều giống lại nh Nàng thơm chợ Đào, Khao DawMali 105 Bảng 15: Năng suất thành phần suất giống lúa từ túi phấn tế bào soma Đông xuân 2003 Stt Tãn giäúng OM 1490( b×nh th−êng ) HC/ Bông 163 % hạt lép 12.2 TL 1000hạt 28.1 NS TÊn / 5.50** 45 10 OM 3536 ( Soma) OM 1490/ KhawD 105 Nàng thơm chợ đào (soma) JASMINE 85( Bình th−êng Jamine ( tÕ bµo soma ) IR 64 Khao DawMali 105( bình thờng) IR 64/ Nàng thơm chợ đào Nàng thơm chợ đào (bình thờng) CV% LSD 0.5 0.1 148 153 119 128 104 135 103 13.7 12.2 24.1 29.7 32.7 17.7 19.3 28.3 27.2 27.3 27.5 25.4 27.2 23.9 5.40** 5.20** 5.0** 4.50** 4.50** 4.40** 4.10* 82 128 40.8 33.5 30.2 21.8 3.60ns 3.40 7.73 16.07 21.77 19.43 8.20 11.11 1.58 0.73 0.98 10.30 0.76 1.03 Bảng 16: Phẩm chất gạo giống lúa từ soma túi phấn Stt 10 Tên giống Dài hạt (mm) Mùi thơm Bạc bụng (cấp) Độ bền gel Amylose content % 51 24.1 OM 1490( bình 7.02 0 thường ) OM 3536 ( Soma) 7.80 54 24.7 OM 1490/ KhawD 7.53 0 60 21.4 105 Nàng thơm Chợ 6.87 0-1 43 26.7 đào ( soma) JASMINE 85( Bình 7.22 40 23.4 thường 7.35 50 22.0 Jamine (tÕ bµo soma) IR 64 7.25 0 41 24.1 Khao DawMali 7.11 50 21.7 105( b×nh th−êng) 6.90 98 100 5.3 IR 64/ Nàng thơm chợ đào Nàng thơm chợ đào 6.22 90 100 6.6 (b×nh th−êng) Khảo nghiệm dịng ni cấy tế bào so ma nuôi cấy túi phấn có hai dịng : Nàng thơm chợ đào -5 ni cấy biến dị soma suất cao nhiên cứng cơm Một dòng đột biến tế bào Soma từ Jasmine 85 Đánh gía suất hai dịng đưa khảo nghiệm Giống đưa khảo nghiệm Số tt Tên giống Nguồn gốc Năng suất Địa điểm khảo nghiệm NTCD-5 Nàng thơm Chợ 6-7tấn / Trồng Viện Đào lúa Tỉnh Sóc 46 Độ trở hồ (cấp) 5 3 5 OM 5797 Hình Nuoi cay tui phấn IR64/Jasmine 85 Trăng Đang trồng Viện 9Giống nàng thơm Chợ đào -5 trồng Sóc Trăng 47 Hình 10 : Ht ging OM 5797 VI kết kiÕn nghÞ Thời gian hình thành mơ sẹo khác loại giống 4392/ OM 3536 cho tè lãû cáy sinh cao so våïi háưu hãút cạc càûp lai Túi phấn từ tổ hợp lai dùng thí nghiệm có khả phát triển mơ sẹo mơi trường khảo sát Trong tổ hợp lai IR64/Jasmine85 tạo mô sẹo tốt môi trường N6+ 2mg.l-1 2,4D+ 1mg.l-1 NAA Các mơ sẹo có khả tái sinh khác biệt tổ hợp lai Hai tổ hợp lai IR64/Jasmine85 OM1490/Khao105 tái sinh xanh tốt môi trường MS+ 0.5mg.l-1 NAA+ 2mg.l-1 BA MS+1mg l-1 Kinetin + 0,5mg.l-1 NAA+ 2mg l-1 BA.Các xanh nhân chồi hồn chỉnh tốt mơi trường MS + 2mg.L-1BA tạo rễ môi trường MS+0,5mg.L-1NAA Tuy nhiên cần tiếp tục nghiên cứu biến dị trình khai thác tế bào haiploid Trồng theo dõi khả kháng sâu bệnh cấy mơ ngồi nhà lưới ngồi đồng ( hình ) Đánh gía dịng ni cấy túi phấn ngịai đồng chọn 25 dòng tiếp tục chọn dòng sau có triển vọng để đưa so sánh quan sát làm bước tiền đề cho việc chọn giống sau nầy Môi trường cấy phải thay đổi phù hợp yếu tố di truyền theo lứa tuổi túi phấn phát triển Môi trường đầy đủ thành phần vô dinh dưỡng theo yêu cầu sinh lý Thêm vào nguyên nhân muối, vitamine, hormone thúc đẩy việc tạo thành phôi mô sẹo Cytokinins ( kinetin ) tối cần thiết để tạo mô từ hạt phấn nhiều ngoại trừ thuốc Auxin , 2,4-D gia tăng phơi lồi ngũ cốc Đối với tái sinh, cytokinin nông độ auxin thấp yêu cầu cần thiết Một số nguyên nhân dẫn đến bạch tạng sau : - Tuỳ theo giống : tần số bạch tạng thay đổi tuỳ thuộc vào giống có giống có giống nhiều - Nhiệt độ nuôi cấy : Nhiệt độ cao tỉ lệ bạch tạng cao - Tuổi mô sẹo cấy chuyền sang môi trường tái sinh Nếu dùng mô sẹo già cấy nhiều lần thường cho tỉ lệ tái 48 sinh thấp , khả tái sinh Có tỉ lệ bạch tạng tăng - Tăng lượng 2,4-D nguyên nhân gây bạch tạng Đánh giá suất giống vụ Hè Thu 2003 cho thấy giống có suất cao lại phẩím chất khơng tốt Cịn dịng có suất thấp lại phẩm chất tốt Một số dịng có gạo thơm dài ngày nhiễm sâu bệnh , cao , dễ đổ ngã Để khắc phục trường hợp nầy tiếp tục cho lai tạo lai ngược để tạo dòng đạt ba yếu tố suất cao, phẩm chất tốt kháng sâu bệnh , cứng Tóm lại có dịng quan sát đánh gía dịng OM 3405 chọn dịng có suất cao ,thơng qua ni cấy túi phấn Một dịng tạo từ nuôi cấy tế bào soma : OM 3566 có phẩm chất ngon cơm , có mùi thơm nhẹ Nàng thơm chợ đào –5 khai thác từ mô sẹo cho thấy suất cao , ngắn ngày đưa khảo nghiệm rộng nhiên giống nầy mt mựi thm Tài liệu tham khảo Ahn SW, CN Bollich and SD Tanksley 1992 RFLP tagging of a gene for aroma in rice Theor Appl Genet 87:27-32 Ayres NM, Mc Clung AM, Larkin PD, Bligh HFJ, Jones CA, Park WD 1997 Microsatellite and a single nucleotide polymorphism differentiate apparent amylose classes in an extended pedigree of US rice germ plasm Theor Appl Genet 94: 773-781 Bao.J.S, H.corke.M.Sun 2002 Microsatellites in starch- synthesizing genes in relation to starch physiochemical properties in waxy rice (O.zativa sativa L.) Theor Apply genet 105:898-905 Berner DK, BJ Hoft 1986 Inheritance of scent in America long grain rices Crop Sci 26:157-159 Cao, H., ImparI-Radosevich, J.M., guan,H., Keeling, P.L., James, M.G, and Myers, A.M.1999 Identification of soluble starch synthase activity of maize endosperm.Plant Physiol.120: 205-215 Chakravarty AK 1948 A genetic study of the botanical characters in rice Bull Bot Bengal 2:50-57 Chang TT, Li CC( 1991) Genetics and breeding In : luh BS Rice production Van Nostrand Reinhold , New York pp32-101 Dhulappanavar CV, SW Mensikai 1969 Inheritance of scent in rice Karnakata Univ J 14:125-129 Dhulappanavar CV 1976 Inheritance of scent in rice Euphytica 25:659-662 49 Dong JY, E Tsuzuki, and H Terao 2000 Inheritance of aroma in four rice cultivars (Oryza sativa L.) IRRI International Rice Research Notes 25.2.2000 Ghose RLM, WT Butany 1952 Studies on the inheritance of some characters in rice Indian J Genet Plant Breed 12:26-30 Govindewami vaì Ghose 1969: the time of harvest , moisture content and method of drying on milling quality of rice Oryza 6: 54-66 He P, LiSG, Qian Q, Ma Y Q, li J Z , wang WM, Chen Y, Zhu L H 1999 Genetic analysis of rice grain quality Theor Appl Genet 98: 502-508 IRRI 1996: Standard Evlution System international rice research Institute , Los banos, philippine Kadam BS, VK Patankar 1938 Inheritance of aroma in rice Chron Bot IV 6:496-497 Kuipers, A.G.j., jacobsen, E and Visser, r.G.f.1994 Formation and deposition of amylose in the potato tuber starch granule are affected by the reduction of granule- bound starch synthase gene expression Plant Cell 6: 43-52 Lander ES, D Botstein 1989 Mapping Mendelian factors underlying quantitative traits using RFLP linkage map Genetics 121:185-199 Nguyễn Thị lang, 2002 Nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất nông nghiÖp Nagaraju M, D Chaudhary, MJB Rao 1975 A simple technique to identify scent in rice and inheritance pattern of scent Curr Sci 44: 599 Pooni hs , Kumar, Khush GS 1992 A comprehensive model for disomically inherited metrical traits expressed in troploid tissues Heredity 69: 166-174 Reddy RP, K Sathyanarayanaiah 1980 Inheritance of aroma in rice Indian J Genet Plant Breed 40:327-329 Richharia RH, B Minsro, VA Kulkani 1965 Studies in the world genetic stock of rice IV Distribution of scent rice ORYZA 2:57-59 Sadavisam vaì Manikam 1992 Biochemical method for argicultural sciences Wiley Eastern, New Delhi ,India Shi.C.H.,J.Zhu, R.C.Zhang , G.L Chen 1997 , Genetic and heterosis analysis for cooking quality traits of indica rice in different environments Theor Appl Genet 95:294300 Seung Yeob Lee , Joong Ho Lee , tae Oh Kwon 2003 selection of salt tolerance doubled haploids in rice anther culture Plant Cell, tissue and Organ Culture 74:143-149 Sibi, M.1976 La moyion de program genetique chez les vegetaus superieurs.II Aspect experimental obtention variants par culture de Sood BG, EA Siddiq 1978 A rapid technique for scent determination in rice Indian J Genet Plant Breed 38:268-271 Tang SX, GS Khush , BO Mohanty 1991 Genetic of gel consistency in rice Indian J Genet 70(2) : 69-78 Tripathi RS, MJBK Rao 1979 Inheritance and linkage relationship of scent in rice Euphytica 28:319-323 Tsuzuki E, E Shimokawa 1990 Inheritance of aroma in rice Euphytica 46:157-159 50 Yamamori M S.fujita; K Hayakawa J Matsuki T.Yasui 2000 Genetic elimination of a starch granule protein , SGP-1 of wheat generates an altered starch with apparent high amylose Theo Appl Genet ,101:21-29 Yanagisawa.T,C.Kiribuch-Otobe, H Hirano , Y.Suzuki , M.Fujita 2003 Detection of single nucleotide polymorphism (SNP) controlling the waxy character in wheat by using a derived cleaved amplified polymorphic sequence (dCAPS) marker Theo appl genet 107:84-88 51 ... Khi mô phôi sinh thiết lập đưa vào môi trường lỏng Tế bào non diện Những tế bào nầy xuất khơỉ đầu chọn vật liệu phôi sinh Một vài tế sản xuất polysaccharides, tế bào không thành phôi xuất xuất... thermalcycler Sản phẩm PCR phân biệt nhờ điện di gel, phát nhờ phương pháp nhuộm phương pháp đánh dấu primer Kỹ thuật sử dụng theo chiến lược RAPD, DAF, AP-PCR (bảng 7-2) Kỹ thuật AFLP kỹ thuật DNA fingerprinting,... để ứng dụng kỹ thuật chọn lọc giống lúa thơm, nhờ marker phân tử (MAS) Cho đến nay, việc lai tạo giống lúa cải tiến có phẩm chất gạo thơm thành cơng, so với việc khai thác tính trạng từ giống