Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 1 Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Bộ môn Công nghệ sinh học Lớp DH06SH Bài tiểu luận: MỘT SỐ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN VI KHUẨN LEPTOSPIRA Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Ngọc Hải Sinh viên thực hiện: Lý Sơn Tùng MSSV: 06126178 Thành phố Hồ Chí M Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 2 LỜI MỞ ĐẦU Vi sinh vật là tác nhân được rất nhiều nhà khoa học quan tâm, nghiên cứu không chỉ trước đây, hiện tại mà còn trong cả tương lai. Điều này có lẽ là do ba lí do: thứ nhất là sự đa dạng của vi sinh vật, thứ hai là những lợi ích to lớn mà chúng mang lại cho con người trong nhiều lĩnh vực, và cuối cùng chúng cũng là những tác nhân gây nhiều bệnh nguy hiểm cho con người và vật nuôi. Từ xưa con người đã biết sử dụng vi sinh vật trong việ c lên men để tạo ra nhiều món ăn có giá trị dinh dưỡng cao, và sau này còn phát triển chúng trong nhiều lĩnh vực khác như phân vi sinh, probiotic, trong xử lí chất thải,…. Những ứng dụng to lớn của vi sinh vật là không thể phủ nhận, tuy nhiên, khả năng gây bệnh của vi sinh vật cũng là một vấn đề đáng quan tâm. Các tác nhân gây bệnh có thể là vi khuẩn, virus hay kí sinh trùng,…. Virus có lẽ là tác nhân nguy hiểm nhất và các tác nhân đều để lại những hậu quả nhất định trong công tác chăn nuôi và sức khỏe con người. Nhiều kỹ thuật đã ra đời, phát triển và không ngừng hoàn thiện để có thể đáp ứng yêu cầu chẩn đoán phát hiện các nhóm vi sinh vật gây bệnh này. Trong lĩnh vực chăn nuôi, các nhà khoa học đã chú ý đến một loại xoắn khuẩn là Leptospira. Xoắn khuẩn này có khả năng gây bệnh trên động vật và có thể lây sang người. Bệnh do xoắn khuẩn gây ra còn gọi là bệnh vàng da, nó gây ảnh hưởng đến các cơ quan và có thể gây sẩy thai ở thú nuôi. Cách phòng bệnh duy nhất là tiêu hủy ổ dịch để tránh lây nhiễm. Vì vậy, cần có các kỹ thuật để phát hiện nhanh xoắn khuẩn này để tránh lây lan gây thiệt hại lớn. Trước đây, cách phát hiện Leptospira là sử dụng phương pháp nuôi cấy, sau đó kỹ thuật Microscopic agglutination test (MAT) ra đời và được sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán bệnh. Tiếp theo đó, khi khoa học phát triển, các kỹ thuật mới ra đời và được hy vọng là có thể khắc phục được nhược điểm của MAT và thay thế nó. Hai kỹ thuật được nhắc đến nhiều nhất là ELISA và khuếch đại gene PCR. Bài tiểu luận này sẽ giới thiệu qua về bệnh do xoắn khuẩn Leptospira và các kỹ thuật nuôi cấy, MAT, ELISA và PCR trong việc chẩn đoán Leptospira. Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 3 TỔNG QUAN I. Leptospira 1. Phân loại học Theo Noguchi, 1917: Giới: Monera Ngành: Spirochaetes Họ: Leptospiraceae Giống: Leptospira Các loài gồm có: L. alexanderi, L. biflexa, L. broomii, L. borgpetersenii, L. fainei, L. inadai, L. interrogans, L. kirschneri, L. licerasiae, L. meyeri, L. weilii, L. noguchii, L. santarosai, L. wolbachii, L. kmetyi, L. wolffii, L. genomospecies 1, L. genomospecies 3, L. genomospecies 4, L. genomospecies 5. Trong số đó, người ta phân ra thành các loài gây bệnh, không gây bệnh và loài trung gian. Các loài gây bệnh Leptospira interrogans Leptospira kirschneri Leptospira noguchii Leptospira alexanderi Leptospira weilii Leptospira genomospecies 1 Leptospira borgpetersenii Leptospira santarosai Leptospira kmetyi Các loài trung gian Leptospira inadai Leptospira fainei Leptospira broomii Leptospira licerasiae Leptospira wolffii Các loài không gây bệnh Leptospira biflexa Leptospira meyeri Leptospira wolbachii Leptospira genomospecies 3 Leptospira genomospecies 4 Leptospira genomospecies 5 Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 4 2. Đặc điểm sinh vật học Hình thể: rất mảnh, đường kính 0,1- 0,2µm, dài 5- 25µm, di động mạnh. Thường nhuộm theo phương pháp nhuộm thấm bạc Fontana-Tribondeau mới phát hiện được vi khuẩn, khi đó vi khuẩn nhìn thấy mảnh như sợi tóc, hai đầu cong như móc câu. Dưới kính hiển vi điện tử phóng đại khoảng x 10.000 lần mới thấy các vòng xoắn nhỏ, sát nhau. Tính chất nuôi cấy: đây là xoắn khuẩn duy nhất nuôi cấy được trong điều kiện hiếu khí. Thường nuôi trong môi trường lỏng có thêm huyết thanh động vật (thỏ) tươi (sản xuất theo Terskich hoặc Korthoff); pH 7.2- 7.5; nhiệt độ 28-30 0 C và giàu oxy. Leptospira mọc chậm, sau 6- 10 ngày mới phát triển tốt (đặc điểm nuôi cấy là làm vẩn nhẹ môi trường như khói thuốc lá). Sức đề kháng: nói chung các Leptospira có sức đề kháng yếu, song cao hơn các xoắn khuẩn khác; chết nhanh trong môi trường acid. Leptospira có thể sống tự do ở trong đất, trong nước ngọt và trong môi trường mặn (sống được hàng tháng) nhưng có ánh sáng mặt trời thì nhanh chết. Cấu tạo kháng nguyên: dựa vào cấu trúc kháng nguyên mà phân loại thì Leptospira được chia ra làm 20 nhóm, mỗi nhóm có nhiều type huyết thanh. Ở Việt Nam thường gặp 12 type huyết thanh sau: L. australis L. canicola L. autumnalis L. grippothyphosa L. bataviae L. hebdomalis L. ictero- haemorrhagiae L. ponoma L. mitis L. saxkoebing L. poi L. sejroe 3. Khả năng gây bệnh Leptospira gây bệnh xoắn khuẩn, gọi là Leptospirosis. Xoắn khuẩn có trong các loại động vật (chuột, lợn, chó, sói, nhím). Súc vật thường không có triệu chứng bệnh. Người có thể bị lây trực tiếp qua da bị xây xát, qua niêm mạc mắt mũi miệng, bộ phận sinh dục khi tiếp xúc. Người cũng có thể bị lây gián tiếp qua môi trường (đất cát, nước, rau ) bị nhiễm xoắn khuẩn do nước tiểu súc vật thải ra. Đặc điểm chung của bệnh: có thương tổn ở gan hay thận và có biến chứng ở mắt, có thể gây sẩy thai ở động vật và người. Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 5 Bệnh phổ biến khắp thế giới, nhưng có nhiều hơn ở những vùng khí hậu nóng ẩm, đất kiềm và có nhiều mặt nước. Các bệnh lí: 1) Bệnh lí ở bò thường do L. pomona và L. grippotyphosa. Đã thấy nhiều con vật có kháng thể đặc hiệu và không phát bệnh lâm sàng. 2) Bệnh lí ở chó do L. icterohaemorrhagiae. Chuột là môi giới truyền bệnh; hoặc lây từ chó sang chó. 3) Bệnh lí ở lợn do L. pomona, và cũng do L. mitis và L. icterohaemorrhagiae. Bệnh ở lợn thường tiềm ẩn, hoặc phát dưới thể giảm nhẹ. 4) Bệnh lí ở ngựa do L. grippotyphosa, L. pomona, L. canicola. 5) B ệnh lí ở người do nhiều type như L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. canicola, L. pomona gây ra (bệnh do L. pomona là tip Leptospira phổ biến ở lợn gây ra). Ổ chứa bệnh thường xuyên là các loài gậm nhấm (như chuột), chúng luôn đào thải Leptospira. Ổ chứa bệnh không thường xuyên là gia súc, trâu bò, ngựa,…. Về lâm sàng, thấy những biến loạn nặng ở màng não, ở gan, thận, và sốt cao. Leptospira vào cơ thể gây bệnh và diễn biến qua 2 giai đoạn: - Giai đoạn I: sốt cao đột ngột sau thời gian ủ bệnh 1-2 tuần, khi đó trong máu có nhiều vi khuẩn, sốt thường kéo dài từ 3 đến 8 ngày. - Giai đoạn II: sốt trở lại do các cơ quan, nhất là gan và thận bị tổn thương (biểu hiện trên lâm sàng là vàng da, xuấ t hiện albumin niệu); có thể có hội chứng màng não do thần kinh trung ương bị tổn thương; các mao mạch dãn (có thể xuất huyết) và đau cơ. Xoắn khuẩn nằm lại thận và được đào thải theo nước tiểu ra ngoài. Cơ chế sinh bệnh: Sau khi xâm nhiễm, Leptospira trong máu nhân lên mạnh mẽ và gây bại huyết sau đó chúng đến định vị ở những cơ quan ưa thích, nhất là gan, thận. Leptospira trong giai đoạn bại huy ết có thể đến cơ quan sinh dục gây xáo trộn sinh sản. 4. Đặc điểm bệnh Leptospirosis trên động vật và người Chuột là môi giới truyền bệnh chính cho các loài động vật khác và người, đặc biệt là chuột lang. Ngoài ra có thể nhiễm do nguồn nước hoặc thức ăn. a. Bệnh Leptospirose trên chó (thường xảy ra trên chó đực) (21) Dạng cấp tính: Bại huyết phát triển nhanh sau vài giờ nhiễm, sốt cao 40-41 0 C và suy nhược nặng. Có thể chia làm 2 thể: Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 6 - Thể thương hàn: biểu hiện xuất huyết trầm trọng viêm kết mạc mắt với nhũng điểm xuất huyết ở da và niêm mạc, ói ra máu và phân sậm màu có máu, thú bị mất nước rất nhanh và chết trong 24 ngày cùng với giảm thấp thân nhiệt, thường thấp hơn bình thường. - Thể hoàng đản : Chó bệnh có biểu hiện viêm kết mạc mắt, hoàng đản, vàng da khó thở tăng dần cùng với kém ăn, ói mửa, nếu không chữa trị trong giai đoạn cuối chó có sự tăng cao nhiệt độ khó thở, hơi thở hôi. Tiêu chảy đôi khi xuất huyết và những biểu hiện viêm não trước khi hắt hơi, thú chết trong khoảng 5-8 ngày mắc bệnh. Hình 1. Chó bị tiêu chảy ra máu Thể bán cấp tính và mãn tính: - Thể này tương ứng với sự phát triển hội chứng sinh urea huyết hậu quả của viêm thận mà một trong những biểu hiện là chứng tiểu nhiều, chứng khát nước rất nhiều cùng với ói mửa và tiêu chảy. Sau một thời gian hôn mê do urea huyết chó sẽ chết. - Thể thở khó có mùi urea ở miệng và xáo trộn hô hấp –viêm màng móng mắt, viêm cơ…. b. Bệnh lợn nghệ (24) Thể á lâm sàng: biểu hiện triệu chứng lâm sàng ít thấy nhưng khi xét nghiệm huyết thanh học thì phổ biến, có khi bị cả đàn nhất là lợn vỗ béo và lợn hậu bị. Thể cấp tính: lúc đầu lợn bỏ ăn, nằm một chỗ, sốt 40 – 40,5 o C, ỉa chảy nhưng không có triệu chứng của vàng da hay đái ra máu. Sau đó xuất hiện triệu chứng điển hình nặng của vàng da, đái ra máu, xuất huyết và triệu chứng thần kinh quỵ nửa thân sau, viêm màng não, phù đầu rất nặng, tỷ lệ chết cao. Thể rối loạn sinh sản cho thấy lợn bị sẩy thai, hay chết lưu thai, tỷ lệ con sơ sinh chết cao cùng với sốt, mất sữa và vàng da ở lợn nái. Sẩy thai sau khi nhiễm vi khuẩn 4 – 7 ngày. c. Bệnh trên bò (20) Thể cấp tính: Bò thường có vẻ yếu và sốt 40 – 41 0 C, uể oải, biếng ăn, sản lượng sữa giảm đột ngột và thường có xuất huyết dưới niêm mạc. Lông thú xù xì không bóng mượt, mắt lờ đờ, mệt. Niêm mạc, da vàng sẩm và tiểu ra huyết sắc tố. Trong vài trường hợp có viêm khớp hoặc viêm da hoại tử có khi viêm não, có thể sảy thai ở bò cái. Thể nhẹ: Sốt khoảng 39 – 40 0 C, giảm sản lượng sữa, biếng ăn, vàng ở da, niêm mạc, nhịp tim tăng, nước tiểu màu. Ở mi mắt, môi, dưới hàm… có hiện tượng phù thủng. Con cái dễ bị xảy thai sau khi nhiễm khoảng 1 tháng. Nếu không được chăm sóc tốt thú có thể chết do hiện tượng thiếu máu. Thể mãn tính: thường xảy ra, ít thấy triệu chứng, triệu chứng hay gặp là ỉa chảy, nước tiểu vàng hay sẫm, gây sẩy thai ở thú cái hoặc đẻ con ra yếu ớt, đẻ non hoặc có thể gây không thụ thai. Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 7 Nơi chứa nhiều vi khuẩn là thận và đường sinh dục (của đực và cái). Thú bệnh thể mãn có thể thành con mang trùng suốt đời, và bài trùng qa nước tiểu, dịch âm đạo. d. Bệnh trên người Thông tư của liên bộ y tế, bộ lao động – thương binh và xã hội, tổng liên đoàn lao động Việt Nam số 29/TT-LB (25/12/1991) đã xếp bệnh do Leptospira nghề nghiệp gây ra được bảo hiểm (18). Những công việc có thể gây bệnh: - Công việc trong các hầm mỏ, hầm hào, hang hố, cống rãnh. - Công việc trong lò sát sinh, đặc biệt là những người giết, mổ súc vật - Công việc trong các nhà máy sản xuất thịt, cá hộp, chế biến sữa và phomát. - Công việc phải tiếp xúc với súc vật như: chăn nuôi, thú y. - Công việc trong các nhà máy sản xuất bia, rượu. - Công việc trong các hàng thịt, hàng cá. - Công việc ở vùng đầm lầy, suối, ruộng, ao hồ. - Công việc trong ngành lâm nghiệp: đào mương, kênh, làm thuỷ lợi. Các nguồn lây bệnh cho người (19) Về lâm sàng, bệnh có thể chia thành 2 thể (23): Thể vàng da xuất huyết: Đây là thể nặng với các biểu hiện: sốt dao động, da sung huyết, mắt đỏ ngầu, đau cơ nặng (chủ yếu ở cơ bắp khi co bóp). Có ban xuất huyết thưa ở lưng và ngực (vào ngày thứ 6 hay thứ 7), thiếu máu huyết tán. Vàng da và niêm mạc. Một số người bị sưng đ au gan. Đa số người tiểu ít hay vô niệu. Có thể có các biến chứng: viêm màng não thanh dịch, suy thận cấp, xuất huyết đường tiêu hóa hoặc hô hấp, viêm cơ tim, rối loạn ý thức , bị sảy thai Tỷ lệ tử vong thể này cao từ 5 – 10%. Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 8 Thể không vàng da: Là thể nhẹ hơn với các biểu hiện: sốt dao động, da sung huyết, mắt đỏ ngầu, đau cơ nặng (chủ yếu ở cơ bắp chân, khi co bóp). Một số người có hạch sưng, đau, không nóng đỏ. Hội chứng vàng da và hội chứng gan không rõ. Thể này không có tử vong. 5. Phòng và chữa bệnh do Leptospira (19) Phòng bệnh: Phòng bệnh không đặc hiệu bằng cách cắt đứt dây chuyền dịch tễ như diệt chuột, phòng bệnh cho gia súc nhưng chủ yếu là phòng hộ lao động cho những đối tượng thường phải tiếp xúc với nguồn lây, các đối tượng nguy cơ như các công nhân làm việc tại các trại gia súc, công nhân vệ sinh cầu cống, làm việc trong hầm mỏ, Nói chung, để có được hiệu quả thì cần triển khai nhiều khâu với sự phối hợp đa ngành chức năng mới được; Phòng bệnh đặc hiệu bằng vaccin chết, song chỉ cho các đối tượng phải tiếp xúc với nguồn lây. Vấn đề phòng bệnh dựa trên nguyên tắc an toàn vệ sinh lao động bằng các biện pháp đơn giản như mang giày cổ cao khi lội ruộng, bùn sình. Mang thêm găng tay khi phải dùng đến tay để thao tác. Diệt chuột, vệ sinh sạch sẽ chất thải của các loại thú nuôi. Không được sử dụng nước hoặc tắm gội tại các vùng nghi ô nhiễm Leptospira. Chữa bệnh: Sử dụng kháng sinh đặc trị để điều trị Leptospira. Kháng sinh cần được điều trị sớm, đúng kháng sinh nhạy cảm với vi khuẩn và đúng liều lượng. II. Các kỹ thuật phát hiện Leptospira 1. Nuôi cấy Leptospira a. Quy trình thực hiện Lấy mẫu: Tuỳ theo từng thời kỳ hoặc giai đoạn bệnh mà có cách lấy bệnh phẩm và chẩn đoán thích hợp: • Giai đoạn I: lấy máu đem nuôi cấy hoặc tiêm truyền vào chuột lang, sau đó xác định và định danh vi khuẩn. • Giai đoạn II: Có thể lấy nước tiểu bệnh nhân, ly tâm, tiêm vào phúc mạc chuột lang non rồi lấy máu tim chuột nuôi cấy tìm vi khuẩn. Nuôi cấy (2, 11): • Môi trường: môi trường Ellinghausen, McCullough, Johnson, and Harris – EMJH có bổ sung 3% huyết thanh thỏ và 0.1% agarose trong một ống 5ml. Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 9 • Tiêm vào 2 ống môi trường nuôi cấy Leptospira: 1 ống nhận 2 giọt whole blood (máu không bị biến đổi ngoại trừ bổ sung chất chống đông tụ anticoagulant), còn ống 2 là 5 giọt. • Một mẫu xét nghiệm huyết thanh cho phép việc khảo sát huyết thanh học chống lại các kháng thể Leptospira. • Chú ý không làm lạnh mẫu xét nghiệm. Mẫu xét nghiệm phải được thực hiện và vận chuyển ở xung quanh nhiệt độ kho ảng 13 0 C. Giữ mẫu qua đêm ở 2 0 C sẽ giết chết Leptospira. • Nếu môi trường nuôi cấy đã được giữ lạnh cần ủ môi trường cho tới nhiệt độ phòng trước khi sử dụng. • Mẫu xét nghiệm tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng (tia cực tím có thể phá hủy các mô). b. Kết quả Một thí nghiệm nhằm tối ưu hóa việc nuôi cấy Leptospira đã sử dụng bốn loại phương pháp lấy mẫu khác nhau. Đó là: whole blood, surface plasma (huyết tương bề mặt), deposit from spun plasma và clotted blood (máu ngưng đọng lại) (2). Kết quả thí nghiệm cho bởi bảng sau (2): Kết quả cho thấy sử dụng whole blood vẫn cho tỉ lệ phát hiện cao (81.3%). Tuy nhiên, đối với Leptospira trong máu thường chỉ tồn tại 7-15 ngày nên việc lấy mẫu máu tốt nhất cho nuôi cấy là vào khoảng ngày thứ 5 khi nhiễm bệnh. Kết quả nuôi cấy Leptospira tại Leptospira Research Laboratory (26) Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Trang 10 c. Nhận xét Ưu điểm: thường sử dụng trong công tác nghiên cứu bệnh học phòng thí nghiệm. Nhược điểm: • Mất thời gian (khoảng 20 – 30 ngày để nhận kết quả dương tính). • Độ nhạy thấp, khả năng thành công không cao khi nuôi cấy. Sau ngày nhiễm bệnh thứ 14, hiếm khi thu được khuẩn lạc. • Có thể gây nhiễm cho người thí nghiệm. • Thường không sử dụng trong xét nghiệm bệnh. 2. Kỹ thuật Microscopic agglutination test (MAT) Được mô tả bởi Galton et al. (1965) và được sửa đổi bởi Cole et al. (1973) Kỹ thuật MAT là một phép kiểm tra đã được chứng minh và chấp nhận trong việc chuẩn đoán, phát hiện kháng thể Leptospira trong huyết thanh động vật và người. Hiện nay, đây là kỹ thuật được sử dụng thông dụng nhất trong chuẩn đoán bệnh Leptospirosis. Nguyên tắc chung: Sự ngưng kết được đọc trực tiếp dưới kính hiển vi nền tối (3). a. Quy trình thực hiện (được cho bởi Cole et al – 1973)(4) • Thiết bị chuẩn độ (microtiter equipment) gồm: đĩa vi chuẩn độ (microtitration plate), đĩa truyền (transfer plates), khay đựng đĩa truyền (transfer plate holder), nắp khay đựng (transfer plate lids), đĩa đỡ (base plate), dụng cụ làm loãng mẫu độ chính xác đến 0.025 ml, 2 vật kính. • Kháng nguyên là Leptospira sống (chứa 10 8 Leptospires/ml) được nuôi cấy trong 4 – 8 ngày ở môi trường nuôi cấy thích hợp . Hình ảnh dụng cụ của kỹ thuật MAT (3) [...]... bốn kỹ thuật đều có những ưu và nhược điểm của nó Nhưng nhìn chung, kỹ thuật PCR là có nhiều ưu vi t hơn ba kỹ thuật còn lại Kỹ thuật nuôi cấy mất nhiều thời gian trong vi c phát hiện nhưng nó lại có tầm quan trọng trong nghiên cứu bệnh học Leptospira Kỹ thuật MAT đã được sử dụng rộng rãi từ lâu với độ nhạy khá cao nhưng nó không cho phép vi c chẩn đoán nhanh Kỹ thuật ELISA và PCR cho phép chẩn đoán. .. cho kết quả âm tính trong khi chúng có kết quả dương tính ở hai kỹ thuật còn lại Cũng trong thí nghiệm này, kỹ thuật PCR được kết hợp thêm với lai phân tử (Hybridization) để làm tăng độ nhạy phát hiện của kỹ thuật PCR (8) Tóm lại, kỹ thuật PCR nhạy hơn nhiều so với kỹ thuật MAT và ELISA, và nó cũng thuận lợi hơn trong vi c chẩn đoán nhanh Leptospira, tuy nhiên MAT, ELISA và nuôi cấy tế bào có vai trò... III So sánh giữa các kỹ thuật Bệnh Leptospirosis có ảnh hưởng nguy hiểm đến người và vật nuôi, vì vậy rất nhiều người quan tâm đến nó Nhiều nghiên cứu đã được thực hiện nhằm tìm phương pháp tốt nhất cho vi c chẩn đoán xoắn khuẩn Leptospires Các kỹ thuật thông dụng hiện nay là kỹ thuật MAT, ELISA và PCR Kỹ thuật MAT đã được đưa ra, áp dụng từ 1965 và vẫn dùng cho đến ngày nay Kỹ thuật ELISA và PCR ra... đã trình bày ở trên, Leptospira là một loại xoắn khuẩn gây bệnh gọi là Leptospirosis (hay bệnh vàng da) Nguồn lây bệnh cho người và vật nuôi chủ yếu là chuột, ngoài ra thường do tiếp xúc với đất cát hoặc nguồn nước có xoắn khuẩn Cách phòng bệnh là tiêu hủy vật nuôi mang bệnh và có thể sử dụng kháng sinh thích hợp để chữa bệnh này Các kỹ thuật chẩn đoán Leptospira đưa ra trong bài tiểu luận này gồm có... Như vậy kỹ thuật ELISA nhạy hơn và phát hiện được nhóm huyết thanh Leptospira gây bệnh nhiều hơn kỹ thuật MAT Thí nghiệm công bố năm 1998 của Eliete C Romero và ctv (8) (mẫu từ dịch não tủy cerebrospinal fluid (CSF) của 103 bệnh nhân) so sánh ba kỹ thuật với nhau, cho kết quả như sau: Trang 17 Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Như vậy độ nhạy của PCR cao hơn hẳn các kỹ thuật khác, tuy nhiên một số mẫu... Clin Diagn Lab Immunol, tháng 3/2001, số 8(2), trang 349–351 26 http://leptolab.ut.ac.ir/en.htm Leptospira Research Laboratory 27 http://open-site.org/viewedit.cgi?cat=&edit_id=68748 Trang web www.google.com.vn với từ khóa: Leptospira, Leptospirosis, ELISA Leptospira, PCR Leptospira, Microscopic agglutination test, Leptospira blood culture để tìm một số hình ảnh và bài báo có liên quan Trang 21 Lý Sơn... QUAN I Leptospira 4 1 Phân loại học 4 2 Đặc điểm sinh vật học 5 3 Khả năng gây bệnh 5 4 Đặc điểm bệnh Leptospira trên động vật và người 6 5 Phòng và chữa bệnh do Leptospira 9 II Các kỹ thuật phát hiện Leptospira 9 1 Nuôi cấy 9 2 Kỹ thuật Microscopic agglutination test (MAT) 11 3 Kỹ thuật. .. tiếp Sử dụng IgM ELISA chỉ cần xét nghiệm 1 lần (1) • Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hay dương tính giả (1) 4 Kỹ thuật Polymerase chain reaction (PCR) Kỹ thuật khuếch đại gene (PCR) được Kary Mullis (giải Nobel năm 1993) phát minh trong những năm 1980 Kỹ thuật này có thể xem là một kỹ thuật phòng thí nghiệm khá đơn giản (1) Trang 14 Lý Sơn Tùng GVHD: Nguyễn Ngọc Hải Nguyên tắc chung (1): được thực... 11 3 Kỹ thuật indirect Enzyme-Linked-Immunosorbent Serologic Assay (ELISA gián tiếp) 13 4 Kỹ thuật Polymerase chain reaction (PCR) 15 III So sánh giữa các kỹ thuật 18 KẾT LUẬN 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 Chú thích: tài liệu tham khảo được đánh số và chú thích ngay sau mỗi phần trích dẫn Trang 22 ... Có nhiều kỹ thuật ELISA khác nhau được sử dụng trong chẩn đoán Leptospira Đây là quy trình thực hiện được đưa ra bởi WJ Terpstra et al (1980) và El Jalii et al (2002) (4) • • • • • • • • • • • • Phản ứng ELISA thực hiện trên một đĩa vi chuẩn (đĩa ELISA) thường gồm 96 giếng đồng đều nhau Kháng nguyên sử dụng trong ELISA là kháng nguyên đặc trưng cho loài (lipopolysaccharide) thu từ nuôi cấy Leptospira . DH06SH Bài tiểu luận: MỘT SỐ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN VI KHUẨN LEPTOSPIRA Giáo vi n hướng dẫn: Nguyễn Ngọc Hải Sinh vi n thực hiện: . phương pháp tốt nhất cho vi c chẩn đoán xoắn khuẩn Leptospires. Các kỹ thuật thông dụng hiện nay là kỹ thuật MAT, ELISA và PCR. Kỹ thuật MAT đã được đưa