Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân type B lưu hành tại Việt Nam Triomune-30( or -40);Mỗi viên nén chứa: Stavudine 30 mg(or 40 mg); Lamivudine 150 mg; Nevirapine...
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân type B lưu hành tại Việt Nam Người hướng dẫn : PGS.TS Đinh Duy Kháng Sinh viên : Phạm Thu Trang Tình hình HIV trên thế giới 2009 • Ước tính đến năm 2011, Việt Nam có khoảng 311.500 người bị nhiễm bệnh. • Tại Việt Nam tính đến ngày 31/12/2010 • 183.938 người • 44.938 người • 49.477 người [...]... thành công vector biểu < /b> hiện < /b> để biểu < /b> hiện < /b> gen < /b> gp1< /b> 20 phân < /b> type < /b> B của < /b> HIV < /b> lưu hành ở Việt Nam 2 Đã biểu < /b> hiện < /b> thành công gen < /b> mã < /b> hóa < /b> protein gp1< /b> 20 ở vi khuẩn và đã tìm được điều kiện tối ưu để biểu < /b> hiện < /b> 3 Đã tinh sạch được kháng < /b> nguyên < /b> GP1< /b> 20 phân < /b> type < /b> B có độ tinh sạch Sau khi tinh sạch kháng < /b> nguyên < /b> vẫn giữ được đặc tính kháng < /b> nguyên,< /b> phản ứng đặc hiệu với kháng < /b> thể kháng < /b> HIV < /b> tự nhiên trong huyết thanh b nh... mang gen < /b> gp1< /b> 20 của < /b> virus < /b> HIV < /b> phân < /b> type < /b> B lưu hành ở Việt Nam (mẫu số 6, Quảng Ninh) được tách dòng thành công tại Phòng Vi sinh vật học phân < /b> tử - Viện CNSH - Viện KH&CN VN Các hóa < /b> chất, sinh phẩm và trang thiết b tại Phòng Vi sinh vật học phân < /b> tử - Viện CNSH - Viện KH&CN VN Phương pháp nghiên < /b> cứu < /b> • Nhân b n gen < /b> mã < /b> hóa < /b> protein gp1< /b> 2 0B của < /b> virus < /b> HIV < /b> b ng phương pháp PCR • Gắn sản phẩm PCR vào vector • Biến... plasmid vào tế b o E.coli • Cắt DNA b ng enzyme giới hạn • Xác định trình tự gen < /b> b ng máy giải trình tự gen < /b> tự động • Biểu < /b> hiện < /b> gen < /b> trong tế b o E.coli tái tổ hợp • Tinh sạch protein tái tổ hợp b ng cột ái lực Ni • Phương pháp Western Blot 2+ KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Thiết kế vector biểu < /b> hiện < /b> pET32a(+) mang gen < /b> gp1< /b> 2 0B Khuếch đại gen < /b> gp1< /b> 2 0B_ EX b ng cặp mồi biểu < /b> hiện < /b> ĐC1: Thang DNA chuẩn 1kb ĐC2: sản phẩm... gen < /b> gp1< /b> 2 0B_ EX ĐC 1: Plasmid gốc vector pET32a(+) ĐC1: Thang DNA chuẩn 1 kb ĐC 2-12: DNA plasmid có khả năng mang gen < /b> gp1< /b> 2 0B_ EX ĐC2-6: Các dòng plasmid 3, 4, 8, 10, 12 cắt b ng BamH I và Xho I ĐC7: Đối chứng (đoạn gen < /b> gp1< /b> 2 0B_ EX) Tinh sạch DNA plasmid ĐC1-3: Tương ứng với dòng plasmid tái tổ hợp số 4, 10, 12 Gen < /b> gp1< /b> 2 0B_ EX trong vector biểu < /b> hiện < /b> pET32a(+) đã được giải trình tự Kiểm tra khung đọc của < /b> gen.< /b> .. Dịch chảy qua cột Nghiên < /b> cứu < /b> khả năng phản ứng của < /b> GP1< /b> 20 tái tổ hợp với kháng < /b> thể kháng < /b> HIV < /b> trong huyết thanh b nh nhân HIV < /b> b ng Western blot Hình A: Phản ứng giữa protein tái tổ hợp gp1< /b> 2 0B với huyết thanh dương tính với HIV < /b> Hình B: Phản ứng giữa protein tái tổ hợp gp1< /b> 2 0B với huyết thanh âm tính với HIV < /b> ĐC 1: Thang protein chuẩn ĐC 2: Protein tái tổ hợp GP1< /b> 2 0B ĐC 3: Protein tái tổ hợp Thioredoxin KẾT LUẬN... nhân HIV < /b> dương tính II KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên < /b> cứu < /b> sử dụng kháng < /b> nguyên < /b> GP1< /b> 20 tái tổ hợp từ phân < /b> type < /b> B để chế tạo kit chẩn đoán HIV < /b> XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN! Đường lây HIV/< /b> AIDS tại Việt Nam 10% 3% 49% 38% Nhiễm qua đường máu Nhiễm qua đường tình dục Nhiễm qua đường mẹ-con Không rõ đường lây Vòng đời của < /b> virus < /b> HIV < /b> Các phương pháp phát hiện < /b> kháng < /b> thể • • Áp dụng - Giám sát dịch tễ - Chẩn đoán nhiễm HIV.< /b> .. Theo dõi diễn biến b nh, đánh giá hiệu quả điều trị thuốc kháng < /b> virus < /b> trong các mục đích nghiên < /b> cứu < /b> khác • Các phương pháp: - Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) - Phát hiện < /b> kháng < /b> nguyên < /b> P24 của < /b> virus < /b> trong máu Nuôi cấy từ các lympho b o để phân < /b> lập virus < /b> • Nguyên < /b> lý: Tách tế b o đơn nhân trong máu b nh nhân và nuôi cấy chung với tế b o đơn nhân của < /b> người lành đã được hoạt hóa < /b> trong môi trường... tra khung đọc của < /b> gen < /b> gp1< /b> 2 0B trong vector pET32a(+) Biểu < /b> hiện < /b> gen < /b> gp1< /b> 2 0B trong vi khuẩn E.coli chủng BL21 Star ĐC 1: Thang Protein chuẩn ĐC 2,4: Mẫu không cảm ứng ĐC 3,5: Mẫu cảm ứng b ng IPTG 1mM TM (DE3) Kiểm tra trạng thái tồn tại của < /b> protein gp1< /b> 2 0B tái tổ hợp M: Thang Protein chuẩn ĐC: Mẫu trước cảm ứng C: protein thu được ở pha cặn HT: Mẫu protein thu được ở pha nổi Ảnh hưởng của < /b> nồng độ IPTG ĐC... • • • Xác định sự nhân lên của < /b> virus < /b> b ng kỹ thuật [5] : ELISA phát hiện < /b> kháng < /b> nguyên < /b> P24 trong nước nổi môi trường nuôi cấy tế b o Dùng đồng vị phóng xạ phát hiện < /b> enzyme sao chép ngược của < /b> virus < /b> (RT) Phương pháp này dùng chủ yếu là để nghiên < /b> cứu,< /b> còn để chuẩn đoán thì ở giai đoạn mới nhiễm rất khó phân < /b> lập, vì khi huyết thanh có kháng < /b> thể kháng < /b> HIV < /b> thì việc phân < /b> lập được virus < /b> là rất hạn hữu ... Immunoadsorbent Asay) - Kỹ thuật ngưng kết vi lượng thụ động (Serodia) - Kỹ thuật xét nghiệm Western Blot -Kỹ thuật RIPA (Radioimmuno precipitation assay) Những phương pháp phát hiện < /b> trực tiếp kháng < /b> nguyên < /b> • Áp dụng - Phát hiện < /b> nhiễm HIV < /b> ở trẻ sơ sinh được sinh ra từ mẹ nhiễm HIV < /b> - Phát hiện < /b> sớm giai đoạn mới nhiễm HIV < /b> (giai đoạn cửa sổ) hoặc khi kết quả phát hiện < /b> kháng < /b> thể không rõ ràng - Theo dõi diễn biến . KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân type B lưu hành tại Việt Nam Người hướng. 12 Gen gp1 2 0B_ EX trong vector biểu hiện pET32a(+) đã được giải trình tự Kiểm tra khung đọc của gen gp1 2 0B trong vector pET32a(+) Biểu hiện gen gp1 2 0B trong
