B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O TRƯ NG Đ I H C NƠNG LÂM TP H CHÍ MINH KHÓA LU N T T NGHI P KH O SÁT TÌNH TR NG NHI M CÁC LỒI VI SINH V T STAPHYLOCOCCUS SPP, PSEUDOMONAS SPP, CORYNEBACTERIUM SPP VÀ N M MEN MALASSEZIA TRÊN CHĨ B B NH VIÊM TAI NGỒI Sinh viên th c hi n : PH M VĂN HUỲNH Ngành : Thú Y L p : Thú Y 29 Niên khóa : 2003 – 2008 Tháng 09/2008 KH O SÁT TÌNH TR NG NHI M CÁC LỒI VI SINH V T STAPHYLOCOCCUS SPP, PSEUDOMONAS SPP, CORYNEBACTERIUM SPP VÀ N M MEN MALASSEZIA TRÊN CHÓ B B NH VIÊM TAI NGỒI Tác gi PH M VĂN HUỲNH Khóa lu n đư c đ trình đ đáp ng u c u c p b ng Bác s ngành Thú Y Giáo viên hư ng d n ThS NGUY N VĂN PHÁT BSTY PH M NG C BÍCH Tháng 9/2008 L I C M ƠN Trong th i gian th c t p t i B nh vi n Thú y Đ i h c Nông Lâm, th y cô khoa Chăn Nuôi Thú Y trư ng Đ i H c Nơng Lâm Thành Ph H Chí Minh v i th y cô, anh ch làm vi c t i B nh vi n Thú Y ñã t n tình giúp đ tơi th c t p t i s hoàn thành báo cáo t t nghi p Tôi xin chân thành g i l i c m ơn ñ n: Ban giám hi u trư ng Đ i H c Nông Lâm Thành Ph H Chí Minh th y khoa Chăn Ni Thú Y gi ng d y cho tơi nh ng ki n th c q báu, giúp đ tơi th i gian h c t p t i trư ng Th y giáo ThS Nguy n Văn Phát ñã t n tình ch d n, giúp ñ t o ñi u ki n s v t ch t cho su t th i gian th c t p hoàn thành báo cáo t t nghi p ThS Nguy n Th Thu Năm, BSTY Ph m Ng c Bích, BSTY Nguy n Th Thanh Trúc t n tình ch d n, t o ñi u ki n giúp ñ nh ng ngày th c t p t i s hồn thành đ tài t t nghi p Anh ch em b n bè làm vi c th c t p t i B nh vi n Thú Y giúp đ tơi su t q trình th c t p TPHCM, tháng 08 năm 2008 Sinh viên th c t p Ph m Văn Huỳnh TÓM T T Kh o sát ñư c ti n hành t i phòng vi sinh B nh vi n Thú Y Đ i h c Nông Lâm TP.HCM th i gian t" tháng 2/2008 ñ n 6/2008 ñ kh o sát tình tr ng nhi m lồi vi sinh v t Staphylococcus spp, Pseudomonas spp, Corynebacterium spp n m men Malassezia chó b b nh viêm tai ngồi Kh o sát đư c ti n hành 30 m u d ch tai viêm Các m u b nh ph#m ñư c nhu$m ñơn, xem tươi, ñ m vi sinh v t (cho ñi m 1+, 2+, 3+, 4+), đư c ni c y, th sinh hố đ phân l p vi khu#n, n m Th kháng sinh ñ vi khu#n phân l p ñư c Qua q trình kh o sát chúng tơi thu ñư c nh ng k t qu sau: T l m c ñ$ b nh ca b nh kh o sát nh%, trung bình, n&ng, r t n&ng l n lư t 16,7%, 23,3%, 36,7%, 23,3% Chó b viêm tai m c đ$ nh% th p nh t chi m 16,7%.T l b nh gi ng n$i, ngo i l n lư t 6,7% 93,3%.T l ñ c nhi m b nh 1:1 Chó m'c b nh đ$ tu(i ng TE l TCng s= 30 100% Malassezia 16 53,33% T l nhi m n m men 53,33% Các chó có th b nhi m n m men trư ng h p vi khu#n nhi u n m men H m$t s trư ng h p chó b nhi m n m men v i s lư ng r t l n, có th n m men nguyên nhân gây b nh H trư ng h p bi u hi n lâm sàng th hi n chó chó ng a d d$i, hay l'c ñ u, tai #m t, d ch ti t nhày có màu đen có mùi chua Trên nh ng chó li u pháp u tr ph i dùng thu c kháng n m k t h p v i vi c làm v sinh tai đ nh kỳ cho chó Chương K T LU N VÀ Đ NGH 5.1 K T LU N Sau th i gian th c hi n ñ tài “Kh o sát tình tr ng nhi m loài vi sinh v t Staphylococcus spp, Pseudomonas spp, Corynebacterium spp n m men Malassezia chó b b nh viêm tai ngồi” chúng tơi rút k t lu n sau: Gi ng chó ngo i m'c b nh nhi u gi ng n$i Tu(i c=a chó có nh hư ng t i b nh, tu(i l n kh m'c b nh cao S lư ng vi sinh tai l n m c đ$ viêm n&ng ngư c l i T l nhi m c u khu#n ca b nh viêm tai vi khu#n nhi u nh t thư ng k t h p v i nhi u vi khu#n khác lo i kháng sinh mà Staphylococcus spp nh y c m nh t amoxicillinclavulanic acid, gentamicin, norfloxacin lo i thu c kháng sinh mà Pseudomonas spp nh y c m nh t norfloxacin, tobramycin lo i kháng sinh mà Corynebacterium spp nh y c m nh t cephalexin, gentamicin vancomycin N m men m$t nguyên nhân ñáng ý gây b nh viêm tai ngồi chó 5.2 Đ NGH Xác đ nh xác nguyên nhân gây b nh viêm tai cho chó t" có bi n pháp ch a tr hi u qu nh t Đ i v i chó b viêm tai nguyên nhân vi sinh v t ngồi vi c dùng thu c ph i k t h p v sinh cho chó b ng thu c r a tai ho&c dung d ch có tính sát trùng Dùng thu c kháng sinh ch a tr ph i tuỳ theo lo i vi khu#n nguyên nhân gây b nh mà ta l a ch n thu c cho phù h p - Đ i v i nguyên nhân Staphylococcus spp nên l a ch n lo i thu c ñi u tr hi u qu amoxicillin-clavulanic acid, gentamycin, norfloxacin - Đ i v i nguyên nhân gây nhi m Pseudomonas spp nên l a lo i thu c hi u qu norfloxacin, tobramycin, - Đ i v i nguyên nhân gây nhi m Corynebacterium spp thu c hi u qu cephalexin, gentamycin vancomycin - Đ i v i ngun nhân n m men Malassezia pachydermatis nên v sinh tai chó th t k , đ khơ v sinh đ nh kỳ, ngồi có th dùng thêm thu c kháng n m ñ di t n m men TÀI LI U THAM KH O TI NG VI T Bruce Fogle, 2007 Các v n đ v tai Chăm sóc chó t i nhà (Saigonbook biên d ch) Nhà xu t b n Đà NQng, trang 74-77 Tr n Văn Chính, 2007 Giáo trình Th ng kê sinh h c Giáo trình chuyên ngành khoa Chăn nuôi Thý Y, Đ i h c Nơng Lâm TP H Chí Minh Nguy n Ng c H i, Tơ Minh Châu, 2004 Giáo trình vi sinh v t h c thú y Giáo trình chuyên ngành khoa Chăn nuôi Thú Y, Đ i h c Nơng Lâm TP H Chí Minh Nguy n Tuy t H ng, 2006 Kh o sát b nh chó đ n khám t i B nh vi n thú y Petcare Tp H Chí Minh Lu n văn t t nghi p Bác sĩ thú y, Đ i h c Nơng Lâm Tp H Chí Minh, Vi t Nam Hồng Cơng Minh, 2005 Kh o sát b nh tai, da m t chó t i Tr m Thú Y qu n Lu n văn t t nghi p Bác sĩ thú y, Đ i h c Nơng Lâm Tp H Chí Minh, Vi t Nam Phan T n Phong, 2005 Kh o sát b nh chó đ n khám t i Tr m Thú Y qu n Lu n văn t t nghi p Bác sĩ thú y, Đ i h c Nơng Lâm Tp H Chí Minh, Vi t Nam Royal Canine, 2007 V sinh tai C#m nang ni d y chó Tài li u dành cho khách hàng, trang 14 NƯ5C NGOÀI August J R., 1986 Diseases of the ear canal The Complete Manual of Ear Care Yardley, PA, Veterinary Learning systems, pp 37-51 Carlotti D N., 2002 Otitis Virbac, specialities for veterinary dermatology Griffin C E., Song M D., 1998 Management of otitis externa Advances in Veterinary Dermatology 3: 369-375 Manolis N S., Rania F., Leonidas S L., and Alexander F K., 2007 Aetiology of canine otitis externa: a retrospective study of100 cases Juornal compilation 2007 ESVD and ACVD 18; 341-347 Quinn P J., Carter M E., Markey B K., Carter G R., 1994 Clinical veterinary microbiology Grafos S.A Arte Sobre Papel Ecole Nationale Veterinaire d’Alfor, 2003 Ablation artielle du conduit auditif externe.www.vetalfort.fr/consult/chir/txt/ablation%20partielle%du%20CAE/index.html www.answers.com/topic/malassezia-1 www3.unileon.es/personal/wwdmvjrl/dermatopatias/malassezia.htm PH L C Phương pháp kháng sinh ñA Phương pháp kháng sinh đ nh m m)c đích tìm s nh y c m c=a vi sinh v t ñ i v i lo i kháng sinh, hay xác ñ nh lư ng t i thi u c=a ch t kháng sinh có th ngăn c n s phát tri n c=a vi sinh v t Phương pháp r t quan tr ng vi c ch n lo i kháng sinh thích h p u tr Có phương pháp th c hi n kháng sinh ñ : Phương pháp khoanh gi y kháng sinh khu ch tán (Antibiotic Disc Diffusion Method) c=a Kerby – Bauer phương pháp pha loãng kháng sinh mơi trư ng lEng Trong phương pháp khoanh gi y kháng sinh khu ch tán thông d)ng Phương pháp ñĩa gi y kháng sinh khu ch tán a Nguyên t'c Kháng sinh ñư c t#m vào khoanh gi y ti t trùng v i hàm lư ng nh t ñ nh Khi ñư c ñ&t lên b m&t mơi trư ng th ch đĩa đ&c bi t (môi trư ng Muller – Hinton), kháng sinh sF khu ch tán xung quanh ngăn c n không cho vi sinh v t m c, t o nên vịng vơ khu#n (trong trư ng h p vi sinh v t nh y c m v i lo i kháng sinh ñư c th ) b V t li u môi trư ng b.1 Môi trư ng: Là môi trư ng mà h u h t vi sinh v t ñ u phát tri n ñư c ch t kháng sinh có th khu ch tán d dàng môi trư ng Môi trư ng th ch ñĩa Muller – Hinton (MHA: Muller – Hinton Agar), Trypticase - Soy – Agar (TSA) hay Nutrient Agar (NA) B dày c=a mơi trư ng th ch đĩa kho ng 4mm (kho ng 25 ml) Môi trư ng ñã chu#n b n u chưa s d)ng ph i b o qu n t= l nh không ngày Đ i v i m$t s vi khu#n khó m c c n b( sung thêm 5% máu hay vitamin… b.2 V t li u: + Khoanh gi y t#m kháng sinh lo i: Ampiciline, Peniciline,… + Nư c mu i sinh lý vô trùng 0,9% + Vi khu#n ki m đ nh đư c ni c y vi khu#n có n ng đ$ tương đương 108 VK / ml + Đ$ ñ)c chu#n Mac – Farland 0,5% 370C / 24 gi ñ chu#n b huy n d ch + Thư c ño mm + Tăm vô trùng + Peince (k%p g'p) b ng inox Chu#n b huy n d ch vi khu#n có n ng ñ$ tương ñương 108 VK / ml: Cho vào ng nghi m ti t trùng kho ng ml nư c mu i sinh lý vô trùng Dùng que c y vịng, b ng thao tác vơ trùng, l y m$t vi khu#n ki m đ nh (chú ý ch nên l y th t vi khu#n) cho vào, l'c ñ u ñ thu ñư c huy n d ch vi khu#n ñ ng nh t Vi khu#n ñư c s d)ng ñ ki m ñ nh ph i vi khu#n cịn non, khơng q 24 gi ni c y Sau đo đ$ đ)c c=a huy n d ch v i ñ$ ñ)c chu#n Mac – Farland 0,5% (ñ$ ñ)c chu#n Mac – Farland 0,5 ñư c pha b ng cách l y 0,5ml dung d ch BaCl2 0,048M pha ñ u v i 99,5ml dung d ch H2SO4 0,18M, sau phân dung d ch vào ng nghi m th=y tinh su t) Vi c ño ñ$ ñ)c ñư c th c hi n b ng cách so ñ$ ñ)c c=a ng nghi m n n t gi y tr'ng có kO v ch đen s m N u ng huy n d ch vi khu#n ñ)c ng Mac – Farland 0,5 nhE thêm nư c mu i sinh lý vô trùng vào ng nghi m huy n d ch vi khu#n cho ñ n ñ$ ñ)c c=a ng Ngư c l i n u ng huy n d ch vi khu#n nh t cho thêm vi khu#n vào c Th c hi n C y huy n d ch theo phương pháp đ( láng b m&t B ng thao tác vơ trùng, ñ( huy n d ch vi khu#n ñã ñư c chu#n b sQn lên b m&t c=a dĩa mơi trư ng Sau nghiêng nh% đĩa đ ph n huy n d ch dư t) l i m$t góc dùng pipette vơ trùng rút bE h t ph n huy n d ch dư Sau ñã th c hi n xong vi c c y vi khu#n lên đĩa mơi trư ng, ñ yên ñĩa t" – phút trư c g'n nh ng ñĩa gi y t#m kháng sinh lên b m&t mơi trư ng G'n đĩa gi y t#m kháng sinh lên b m&t môi trư ng: Chu#n b sQn m$t t gi y có vF m$t hình trịn có đư ng kính b ng đư ng kính c=a đáy đĩa mơi trư ng, đư ng trịn có đánh d u v trí đ đ&t ñĩa gi y t#m kháng sinh Đ&t ñĩa môi trư ng vào v trí c=a hình trịn đư c vF, b ng thao tác vơ trùng, đ t k%p g'p ng n l a ñèn c n, dùng k%p g'p g'p l y m$t ñĩa gi y t#m kháng sinh đ&t lên v trí đánh d u Chú ý n nh% ñ ñĩa gi y t#m kháng sinh ti p xúc ch&t v i b m&t môi trư ng Ti p t)c th c hi n thao tác v i t t c lo i kháng sinh c n th Thông thư ng, mGi đĩa mơi trư ng có đư ng kính 90 mm ngư i ta có th đ&t đĩa gi y t#m kháng sinh (1 trung tâm xung quanh) Kho ng cách t" tâm gi a ñĩa gi y t#m kháng sinh ñư c ñ&t k khơng đư c nhE 24 mm Đ đĩa mơi trư ng có đ&t đĩa gi y t#m kháng sinh nhi t đ$ phịng kho ng 30 phút cho kháng sinh khu ch tán d dàng Sau ñó ñ&t ñĩa t= m nhi t ñ$ 370C – 24 gi Đ c k t qu d Đánh giá k t qu Đo đư ng kính vịng vơ khu#n (ph m vi vi khu#n khơng m c ñư c xung quanh ñĩa gi y t#m kháng sinh) xu t hi n ñĩa D a đư ng kính vịng vơ khu#n đo đư c so v i vịng vơ khu#n chu#n đư c qui đ nh cho mGi lo i kháng sinh ñ ñánh giá kh nh y c m c=a vi khu#n ñ i v i kháng sinh theo m c ñ$: nh y, trung gian, đ kháng Cây phân nhóm vi sinh v t (Theo: Quinn, 1994) COCCI Oxidative Cat.+/Ox.- Micrococcus spp Fermentati Cat.+/Ox.- Staphylococcus spp Fermentativ Cat.-/Ox.- Streptococcus spp Unreactive Cat.+/Ox.- Rhodococcus equi Oxidati Cat.+/Ox.- Nocardia asteroides Bacillus spp* (some) Fermentati Cat.+/Ox.- Actinomyces viscosus Bacillus spp* (some) Corynebacterium spp Listeria spp* GRAM – POSITIVE BACTERIA Fermentati Cat.-/Ox.- Unreactive Cat.+/Ox.- Actinomyces spp** (most) Actinomyces pyogenes Erysipelothrix spp Clostridium spp**/* Eubacterium spp** Lactobacillus spp Rhodococcus equi COCCI (coccobacilli) No growth on MacConkey Oxidative Cat.+/Ox.+ Neisseria spp Brahamella spp Growth on MacConkey Oxidative or Unreactive Cat.+/Ox.- Acinetobacter spp Oxidative Cat.+/Ox.+ Flavobacterium spp Fermentative Cat.+/Ox.+ Pasteurella spp(most) Unreactive Cat.+/Ox.+ Brucella spp Haemophilus spp Pasteurella anatipestifer Taylorella equigenitalis Unreactive Cat.±/Ox.+ Moraxella spp Campylobacter spp Unreactive Cat.+/Ox.- Francisella tularensis GRAM NEGATIVE BACTERIA No growth on MacConkey Oxidative Cat.+/Ox.+ RODS Pseudomonas spp*.(most) Aeromonas spp* Fermentative Pasteurella haemolytica Cat.+/Ox.+ Plesiomonas spp Growth on MacConkey Fermentative Cat.±/Ox.± Actinobacillus spp Fermentative Cat.+/Ox.- Enterobacteriaceae Pasteurella caballi Unreactive Cat.+/Ox.+ Bordetella spp.* Alcaligenes spp.* Chi-Square Test: T l nhi m lo i vi khu n tai viêm nhiem 23 12.67 k nhiem 17.33 Total 30 10 12.67 20 17.33 30 12.67 25 17.33 30 Total 38 52 90 Chi-Sq = 8.430 0.561 4.640 DF = 2, P-Value + 6.160 + + 0.410 + + 3.391 = 23.593 = 0.000 Chú thích: sta pseudo coryne Chi-Square Test: T l nhi m b nh theo gi ng benh 28 15.00 k 15.00 Total 30 2 15.00 28 15.00 30 Total 30 30 60 Chi-Sq = 11.267 + 11.267 + 11.267 + 11.267 = 45.067 DF = 1, P-Value = 0.000 Chú thích: Ngo i N i Chi-Square Test: T l nhi m b nh theo gi i tính benh 15 15.00 k 15 15.00 Total 30 15 15.00 15 15.00 30 Total 30 30 60 Chi-Sq = 0.000 + 0.000 + 0.000 + 0.000 = 0.000 DF = 1, P-Value = 1.000 Chú thích: Đ c Cái Chi-Square Test: T l nhi m b nh theo nhóm tu i benh 10.00 k 26 20.00 Total 30 11 10.00 19 20.00 30 15 10.00 15 20.00 30 Total 30 60 90 Chi-Sq = 3.600 0.100 2.500 DF = 2, P-Value + 1.800 + + 0.050 + + 1.250 = 9.300 = 0.010 Chú thích: 24 tháng Chi-Square Test: T l nhi m b nh theo d ng loa tai benh k Total 17 15.00 13 15.00 30 13 15.00 17 15.00 30 Total 30 30 60 Chi-Sq = 0.267 + 0.267 + 0.267 + 0.267 = 1.067 DF = 1, P-Value = 0.302 Chú thích: C p Đ ng Phân tích tương quan h%ng gi!a ñi4m vi sinh ñi4m lâm sàng Đi m lâm sàng Nh% Trung bình N&ng R t n&ng Đi m vi 1+ 0 sinh 2+ 3 3+ 0 4+ Đ&t:- Đi m lâm sàng bi n X - Đi m vi sinh bi n Y Có R1 = (1+2+3+4+5)/5 = R2 = (6+7+8+9+10+11+12)/7 = R3 = (13+14+…+23)/11 = 18 R4 = (24+25+…+30)/7 = 27 R1+ = (1+2+3+4+5)/5 = R2+ = (6+7+8+9+10+11)/6 = 8,5 R3+ = (12+13)/2 = 12,5 R4+ = (14+15+…+30)/17 = 22 d2 = (RX-RY)2 6∑ d RTN = = 0,665 n ( n − 1) R0,05 = 0,317 (v i n = 30-2 = 28) R0,01 = 0,462 (Tr n Văn Chính, 2007 Giáo trình Th ng kê sinh h c, ph) l)c 17.) K t lu n: RTN > R0,01 có s tương quan r t có ý nghĩa v i P < 0,01 ... kh o sát tình tr ng nhi m lồi vi sinh v t Staphylococcus spp, Pseudomonas spp, Corynebacterium spp n m men Malassezia chó b b nh vi? ?m tai ngồi Kh o sát đư c ti n hành 30 m u d ch tai vi? ?m Các. ..KH O SÁT TÌNH TR NG NHI M CÁC LỒI VI SINH V T STAPHYLOCOCCUS SPP, PSEUDOMONAS SPP, CORYNEBACTERIUM SPP VÀ N M MEN MALASSEZIA TRÊN CHÓ B B NH VI? ?M TAI NGỒI Tác gi PH M VĂN... n hành đ tài “Kh$o sát tình tr%ng nhi&m lồi vi sinh v't Staphylococcus spp, Pseudomonas spp, Corynebacterium spp n(m men Malassezia chó b) b nh vi? ?m tai ngồi” 1.2 M C ĐÍCH VÀ U C U 1.2.1 M*c