... Quốc Dung
Giáo trình
Công nghệ DNA tái tổ hợp
NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh
2007
Công nghệ DNA tái tổ hợp
18 1
đã có những đóng góp đáng ... nhau; 2) Cắt và nối DNA ở những
điểm đặc hiệu để tạo ra DNA tái tổ hợp (DNA mang các gen có nguồn gốc
khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen của người; 3)...
... được tinh
1 2 3 4 5
Protein dung hợp
(protein đích + GST)
GST
Protein đích
Công nghệ DNA tái tổ hợp
16 6
:
- 16 S rRNA.
-
eukaryote định vị.
- .
1 (Hình 7.8).
Vector pAS1 mang promoter ... thể.
P
10
S
10
T
BglII
NdeI
NheI
BamHI
EcoRV
NheI
EcoRV
ClaI
EcoRI 0
10 00
4000
PstI
pET-3a
(4,6 kb)
ori
3000
2000
Amp
r
P
10
Công nghệ D...
...
Công nghệ DNA tái tổ hợp
7
(
4
o
- -20
o
.
1. 2
NaCl
(mM)
Tris.HCl pH 7,5
(mM)
MgCl
2
(mM)
Dithiothreitol
(mM)
0
10
10
1
50
10
10
1
Cao
10 0
50
10
1
Riêng ... với
protein dung hợp, protein nguyên thể được tổng hợp từ đầu N của nó chứ
không phải từ đầu N của vector.
Công nghệ DNA tái tổ hợp
1
Lời nói đầu
Công nghệ DNA tái...
... c
biểu thức 1:
T
m
(
o
C) = 81, 5
o
C + 16 ,6 (log
10
M) + 0, 41 (%G + C) - 0,72 (%f ) - 500/n (1)
thể lai RNA -DNA:
T
m
(
o
C) = 79,8
o
C + 18 ,5 (log
10
M) + 0,58 (%G + C) - 11 ,8 (%G + C)
2
... screening…).
Điểm cắt
DNA polymerase I
(a)
(b)
5’
5’
5’
5’
3’
3’
3’
3’
Vết cắt
Công nghệ DNA tái tổ hợp
11 1
Hình 5.3. Hình ảnh điện di c...
... Biology. Vol 1 and 2. 5
th
ed.
John Wiley & Sons, Inc. USA.
Công nghệ DNA tái tổ hợp
10
).
C
5’ 3’
DNA polymerase
DNA
OH
+ ndNTP DNA- (
p
dN)
n
+ nPP
i
DNA
đơn/
nhóm ...
5’
p
N(
p
N)
np
N
OH
+ ssDNA
hoặc thể
lai RNA :DNA
-
làm mẫu dò .
.
.
1. E. coli
3’
5’
enzyme
Mg
2+
enzyme
Mg
2+
enzyme
Mg
2+
Công nghệ DNA tái...
... trắng-thể tái tổ hợp
Khuẩn lạc xanh-thể không tái tổ hợp
Công nghệ DNA tái tổ hợp
10 4
15 -23 kb), cosmid (45 kb) hay BAC (> ;10 0 kb).
g
(xem chương 6).
II. Tạo dòng các đoạn DNA để xây ...
cos
DNA
Đuôi
DNA
A
λ
B
Công nghệ DNA tái tổ hợp
10 3
5 .1 .
. a, b, c và d trình bày sự khác nh...
... Công nghệ DNA tái tổ hợp
75
- pMK 16 Sma Xho
amycin.
- pKC 7 pACYC 18 4
.
- pCR1 pSC 10 1 (
.
control
5
6
-
:
-
plasmid.
- (selectable marker) ... thái
Vùng hợp nhất và tái tổ
hợp (vùng đệm)
Vùng điều hòa và
miễn dịch
Vùng sao
chép DNA
Vùng phân
giải vật chủ
Vùng điều hòa
chức năng muộn
R-cos
Công nghệ DNA tái tổ hợp
83
được ... Biến nạp vector...
...
DNA thứ nhất, sau đó dùng sợi này làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA
thứ hai (tương tự như giai đoạn thứ nhất và thứ hai của quá trình tổng hợp
cDNA-xem chương 6).
Giai đoạn thứ hai. Dùng DNA ...
Đệm 10 PCR 4,5 L
) 4 L
Primer-F (10 pmol/ L) 2,5 L
Primer-R (10 pmol/ L) 2,5 L
Thêm H
2
40 L
pol:
10 2 L
Taq pol (5 units/ L) 1 L
Thêm H
2
20 L
10 .3. Bổ sung 5 L DNA...
...
mô/cơ quan.
(complementary DNA)
tổng hợp cDNA do
.
. Q
cDNA qua ba enzyme
reverse transcriptase. (2) Biến tính và c -cDNA
Công nghệ DNA tái tổ hợp
12 6
Kit khác nhau, trong đó đầu ... vector
gen
in vitro (DNA
E. coli.
- c đoạn nối (synthetic linkers) c
DNA cùng một
enzyme.
1. 1. Đuôi dA:dT
deoxyrinucleotide triphosphate -
Công nghệ DNA tái tổ hợp...
... tương t
gt 11.
- của
.
- in
vivo Bluescript plasmid
thực hiện
plasmid DNA
DNA.
Vector
nhằm
Công nghệ DNA tái tổ hợp
15 2
bacteriophage
5 10
6
.
hóa
bacte
.
u
,
gt 11, - ZAP
dephosphoryl ...
chèn cDNA
mười hai
trên
hoàn
.
hoàn
hóa
Công nghệ DNA tái tổ hợp
14 4
chỉ , trong khi vector
.
1. 1. Vector gt10
cI
2
c như
bacteriophage E.
coli E...